漳州市中醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)（如ELISA、分子生物學(xué)）操作考核一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20題）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，用于封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)最常用的物質(zhì)是？A.牛血清白蛋白（BSA）B.胰島素C.鏈霉親和素D.辣根過氧化物酶2.在ELISA雙抗體夾心法中，固相載體包被的是？A.抗體B.抗原C.生物素標(biāo)記的抗體D.辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體3.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，PCR反應(yīng)體系中通常不包含？A.DNA模板B.引物C.DNA聚合酶D.蛋白酶K4.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，用于轉(zhuǎn)移蛋白的膜材料最常用的是？A.濾紙B.涂蠟?zāi).PVDF膜D.硝酸纖維素膜5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)儀主要用于檢測哪種信號？A.磷光信號B.熒光信號C.化學(xué)發(fā)光信號D.酶活性信號6.PCR反應(yīng)中，退火溫度的設(shè)定主要依據(jù)？A.DNA模板長度B.引物長度C.引物Tm值D.DNA聚合酶種類7.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，用于檢測蛋白條帶最常用的二抗是？A.辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgGB.堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗人IgGC.熒光標(biāo)記的驢抗羊IgGD.生物素標(biāo)記的雞抗兔IgG8.ELISA實(shí)驗(yàn)中，終止液常用的種類是？A.HCl溶液B.NaOH溶液C.氨水溶液D.甲醇溶液9.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，瓊脂糖凝膠電泳主要用于分離？A.蛋白質(zhì)B.RNAC.DNAD.脂質(zhì)10.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，封閉液常用的成分是？A.脫脂奶粉B.雞蛋清C.蛋白質(zhì)A/GD.甘油二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共10題）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常見的干擾因素包括？A.非特異性結(jié)合B.抗原抗體反應(yīng)不完全C.酶標(biāo)儀漂移D.終止液濃度不當(dāng)2.PCR反應(yīng)體系中，引物設(shè)計(jì)需要注意哪些原則？A.Tm值在55-65℃B.避免引物二聚體形成C.引物間無交叉互補(bǔ)D.引物長度在18-25bp3.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，蛋白轉(zhuǎn)移步驟的關(guān)鍵參數(shù)包括？A.電壓B.電流C.轉(zhuǎn)移時間D.濕度4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的酶標(biāo)記物包括？A.辣根過氧化物酶B.堿性磷酸酶C.熒光素D.生物素5.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物常用的檢測方法包括？A.瓊脂糖凝膠電泳B.毛細(xì)管電泳C.沉淀法D.數(shù)字PCR6.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，抗體孵育步驟需要注意哪些事項(xiàng)？A.溫度控制在4℃B.孵育時間通常為1-2小時C.使用封閉液封閉非特異性位點(diǎn)D.抗體濃度需優(yōu)化7.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常見的質(zhì)控措施包括？A.設(shè)置空白對照B.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線C.使用陽性對照和陰性對照D.重復(fù)實(shí)驗(yàn)至少三次8.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，DNA提取常用的方法包括？A.離心法B.苯酚-氯仿法C.柱層法D.鹽析法9.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，化學(xué)發(fā)光檢測的優(yōu)勢包括？A.靈敏度高B.成本低廉C.信號穩(wěn)定D.可長期保存10.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常見的誤差來源包括？A.加樣誤差B.溫度波動C.試劑污染D.酶標(biāo)板不潔凈三、判斷題（每題2分，共10題）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉液濃度越高越好。（×）2.PCR反應(yīng)中，DNA模板濃度越高越好。（×）3.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，蛋白轉(zhuǎn)移完成后可直接進(jìn)行封閉。（×）4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，終止液顏色變黃后即可停止反應(yīng)。（√）5.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，瓊脂糖凝膠電泳適用于分離RNA和DNA。（√）6.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，二抗需與一抗特異性結(jié)合。（√）7.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)儀檢測信號時需預(yù)熱30分鐘。（√）8.PCR反應(yīng)中，退火溫度越高越好。（×）9.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，化學(xué)發(fā)光信號可通過曝光膠片檢測。（√）10.ELISA實(shí)驗(yàn)中，所有樣本均需設(shè)置空白對照。（√）四、簡答題（每題5分，共5題）1.簡述ELISA雙抗體夾心法的原理及其優(yōu)點(diǎn)。2.簡述PCR反應(yīng)體系中各成分的作用。3.簡述WesternBlot實(shí)驗(yàn)中蛋白條帶出現(xiàn)模糊的原因及解決方法。4.簡述ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的質(zhì)控措施及其意義。5.簡述分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中DNA提取的基本步驟。五、操作題（每題10分，共2題）1.請簡述ELISA四步法實(shí)驗(yàn)的基本步驟及其注意事項(xiàng)。2.請簡述PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化方法及其常見問題及解決策略。答案與解析一、單項(xiàng)選擇題答案與解析1.A解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)最常用的物質(zhì)是牛血清白蛋白（BSA），其可覆蓋固相載體的非特異性位點(diǎn)，防止其他物質(zhì)結(jié)合。2.B解析：雙抗體夾心法中，固相載體包被的是抗原，而檢測抗體與抗原結(jié)合后，再加入酶標(biāo)抗體進(jìn)行檢測。3.D解析：PCR反應(yīng)體系中通常不包含蛋白酶K，蛋白酶K主要用于DNA提取或WesternBlot實(shí)驗(yàn)中蛋白的酶解。4.C解析：WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，PVDF膜和硝酸纖維素膜均可用于蛋白轉(zhuǎn)移，但PVDF膜更常用，因其蛋白結(jié)合能力強(qiáng)。5.D解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)儀主要用于檢測辣根過氧化物酶等酶的活性信號，通過顯色反應(yīng)進(jìn)行定量。6.C解析：PCR反應(yīng)中，退火溫度主要依據(jù)引物的Tm值設(shè)定，通常引物Tm值在55-65℃之間。7.A解析：WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG是最常用的二抗，因其靈敏度高且特異性強(qiáng)。8.B解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，終止液常用NaOH溶液或HCl溶液，使酶反應(yīng)終止并顯色。9.C解析：瓊脂糖凝膠電泳主要用于分離DNA，因其對DNA片段的分辨率高且操作簡便。10.A解析：WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，封閉液常用脫脂奶粉，因其可封閉非特異性位點(diǎn)且成本較低。二、多項(xiàng)選擇題答案與解析1.A,B,C,D解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，非特異性結(jié)合、抗原抗體反應(yīng)不完全、酶標(biāo)儀漂移、終止液濃度不當(dāng)均可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。2.A,B,C,D解析：PCR引物設(shè)計(jì)需考慮Tm值、避免二聚體形成、無交叉互補(bǔ)、長度適宜等原則，以保證擴(kuò)增效率。3.A,B,C,D解析：WesternBlot蛋白轉(zhuǎn)移步驟需控制電壓、電流、時間和濕度，以確保蛋白有效轉(zhuǎn)移至膜上。4.A,B,C,D解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的酶標(biāo)記物包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、熒光素和生物素等。5.A,B,C,D解析：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可通過瓊脂糖凝膠電泳、毛細(xì)管電泳、沉淀法和數(shù)字PCR等方法檢測。6.B,C,D解析：WesternBlot抗體孵育步驟需注意孵育時間、封閉非特異性位點(diǎn)及抗體濃度優(yōu)化，溫度通常為室溫或4℃。7.A,B,C,D解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，質(zhì)控措施包括設(shè)置空白對照、標(biāo)準(zhǔn)曲線、陽性對照和陰性對照，并重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次以上。8.B,C,D解析：DNA提取常用苯酚-氯仿法、柱層法和鹽析法，離心法主要用于分離細(xì)胞器。9.A,C,D解析：化學(xué)發(fā)光檢測靈敏度高、信號穩(wěn)定且可長期保存，但成本較高。10.A,B,C,D解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，加樣誤差、溫度波動、試劑污染和酶標(biāo)板不潔凈均可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。三、判斷題答案與解析1.×解析：封閉液濃度過高可能導(dǎo)致背景過高，適宜濃度即可。2.×解析：DNA模板濃度過高可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，適宜濃度即可。3.×解析：蛋白轉(zhuǎn)移完成后需清洗膜，再進(jìn)行封閉。4.√解析：終止液使酶反應(yīng)終止后，顏色變黃即可停止反應(yīng)。5.√解析：瓊脂糖凝膠電泳適用于分離RNA和DNA，因其對核酸片段的分辨率高。6.√解析：二抗需與一抗特異性結(jié)合，才能檢測目標(biāo)蛋白。7.√解析：酶標(biāo)儀檢測信號前需預(yù)熱30分鐘，以確保檢測穩(wěn)定。8.×解析：退火溫度過高可能導(dǎo)致引物結(jié)合不充分，影響擴(kuò)增效率。9.√解析：化學(xué)發(fā)光信號可通過曝光膠片檢測，或使用成像系統(tǒng)檢測。10.√解析：所有樣本均需設(shè)置空白對照，以排除本底干擾。四、簡答題答案與解析1.ELISA雙抗體夾心法的原理及其優(yōu)點(diǎn)原理：雙抗體夾心法通過固相載體包被抗原，加入抗體與抗原結(jié)合，再加入酶標(biāo)抗體，最終通過酶顯色反應(yīng)進(jìn)行定量。優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高等，適用于復(fù)雜樣本中目標(biāo)蛋白的檢測。2.PCR反應(yīng)體系中各成分的作用-DNA模板：提供擴(kuò)增模板。-引物：特異性結(jié)合DNA模板，延伸DNA鏈。-DNA聚合酶：催化DNA鏈延伸。-dNTPs：提供合成DNA的原料。-緩沖液：提供適宜的pH和離子環(huán)境。-金屬離子：如Mg2?，參與DNA聚合酶活性。3.WesternBlot蛋白條帶模糊的原因及解決方法原因：蛋白轉(zhuǎn)移不充分、抗體濃度不當(dāng)、電泳條件不適宜等。解決方法：優(yōu)化蛋白轉(zhuǎn)移條件、調(diào)整抗體濃度、控制電泳參數(shù)等。4.ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的質(zhì)控措施及其意義質(zhì)控措施：設(shè)置空白對照、標(biāo)準(zhǔn)曲線、陽性對照和陰性對照，重復(fù)實(shí)驗(yàn)。意義：排除本底干擾、確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。5.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中DNA提取的基本步驟-細(xì)胞裂解：破壞細(xì)胞膜，釋放DNA。-蛋白質(zhì)去除：使用苯酚-氯仿或蛋白酶K去除蛋白質(zhì)。-DNA沉淀：加入乙醇或異丙醇，沉淀DNA。-洗滌和溶解：洗滌DNA沉淀，用TE緩沖液溶解DNA。五、操作題答案與解析1.ELISA四步法實(shí)驗(yàn)的基本步驟及其注意事項(xiàng)步驟：①固相包被：將抗原包被于固相載體。②加樣：加入樣本和標(biāo)準(zhǔn)品。③結(jié)合：加入酶標(biāo)抗體。④顯色：加入底物，酶顯色后用酶標(biāo)儀檢測。注意事項(xiàng)：-包被濃度需優(yōu)化。-封閉非特