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II

DB21/T3924—2024

歐美楊組培育苗技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了歐美楊組培育苗的環(huán)境及器具滅菌、培養(yǎng)基制備、外植體選擇及處理、初代培養(yǎng)、繼

代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗、室內(nèi)移栽與管理、大田移栽與管理和病蟲害防治等技術(shù)要求。

本文件主要適用于歐美楊組培育苗。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T8321.10農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則（十）

LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

LY/T2280林木種苗生產(chǎn)經(jīng)營檔案

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

歐美楊Populus×euramericana（Dode）Guinier

指歐洲黑楊與美洲黑楊的雜交品種及品種間優(yōu)良雜種，又稱歐美楊無性系。

3.2

外植體explant

用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體。

4環(huán)境及器具滅菌

4.1培養(yǎng)室滅菌

用消毒液（75%酒精等）對地面、組培架等室內(nèi)設(shè)施進(jìn)行消毒。

4.2超凈工作臺(tái)滅菌

打開工作臺(tái)通風(fēng)系統(tǒng)，用75%酒精棉擦拭臺(tái)面，再用75%酒精噴灑內(nèi)部空間，關(guān)閉玻璃罩，紫外燈

照射25min～35min，關(guān)閉紫外燈30min后進(jìn)入工作。

4.3接種室滅菌

接種室內(nèi)噴灑75%酒精，紫外燈照射25min～35min，關(guān)閉紫外燈30min后進(jìn)入工作。

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4.4器具滅菌

將剪刀、鑷子等接種器具清洗干凈，用報(bào)紙包好，放于耐高溫濕熱滅菌袋中，121℃高壓滅菌30min。

使用前在超凈工作臺(tái)內(nèi)用酒精燈外焰灼燒30s，或用接種器具滅菌器直接滅菌。

5培養(yǎng)基制備

5.1基本培養(yǎng)基

MS培養(yǎng)基，配方見附錄A。

5.2培養(yǎng)基配制、滅菌及保存

按LY/T1882有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

6外植體選擇及處理

6.1外植體選擇

歐美楊萌動(dòng)前，選擇無病蟲害、生長健壯1年生嫩枝，切枝水培，待芽展葉后，剪取萌發(fā)伸展長度

在1cm以上的幼葉和葉柄，用流水沖洗1min左右。

6.2外植體處理

在無菌條件下，外植體用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%升汞溶液浸泡5min，再用無菌蒸餾

水沖洗3次，取出后瀝干水分備用。

7初代培養(yǎng)

7.1初代培養(yǎng)基

初代培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L～0.1mg/L+蔗糖20.0g/L+瓊脂6.0g/L，

pH6.5。

7.2接種

在超凈工作臺(tái)內(nèi)，葉片用無菌剪刀剪掉葉子邊緣并在葉片中間與葉脈平行處剪開1～3個(gè)裂口，用

無菌鑷子夾取平鋪于初代培養(yǎng)基中，每瓶接種3～4個(gè)；葉柄用無菌剪刀剪掉兩端，接種方法同葉片。

7.3培養(yǎng)條件

在溫度25℃±1℃、光照強(qiáng)度2000Lux、光照12h/d～16h/d的培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

8繼代培養(yǎng)

8.1繼代培養(yǎng)基

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繼代培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA0.3mg/L～0.5mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖25.0g/L+瓊脂

6.0g/L，pH6.5。

8.2接種

初代培養(yǎng)愈傷組織大于1cm2或不定芽大于5個(gè)時(shí)進(jìn)行繼代培養(yǎng)。將愈傷組織（含不定芽）剪成2～3

塊轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基中。

8.3培養(yǎng)條件

培養(yǎng)條件同7.3。

9生根培養(yǎng)

9.1生根培養(yǎng)基

生根培養(yǎng)基配方為：1/2MS+IBA0.3mg/L～0.4mg/L+蔗糖20.0g/L+瓊脂6.0g/L，pH6.0。

9.2接種

繼代培養(yǎng)不定芽長度≥2.0cm時(shí)進(jìn)行生根培養(yǎng)。選取健壯不定芽，用無菌剪刀剪去下端的葉片，并

在培養(yǎng)基上方剪下主莖，用無菌鑷子夾出插入生根培養(yǎng)基中，插入深度1cm，每瓶接種3個(gè)。

9.3培養(yǎng)條件

培養(yǎng)條件同7.3。

10煉苗

選取苗高≥4cm、根長1cm～2cm、不定根5個(gè)以上的生根培養(yǎng)瓶，將瓶蓋打開，室內(nèi)放置2d～3d。

11室內(nèi)移栽與管理

11.1室內(nèi)移栽

選擇根系發(fā)達(dá)、苗高≥4cm的組培苗，用鑷子輕輕從煉苗培養(yǎng)基中拔出，用清水洗去附著在根部

的培養(yǎng)基，剪去較長的根系，室內(nèi)移栽到塑料營養(yǎng)杯中，營養(yǎng)杯規(guī)格上口徑8cm、底徑6cm、杯深12

cm。使根系在營養(yǎng)杯中均勻分布，并與基質(zhì)緊密接觸，基質(zhì)裝到營養(yǎng)杯口下1cm處?；|(zhì)為腐殖土、

大田土、河沙按2﹕1﹕1比例混合均勻，經(jīng)121℃高壓滅菌30min。

11.2管理

移栽完立即澆透水，并搭建塑料拱棚保持拱棚內(nèi)溫度25℃～30℃、空氣濕度80%～95%、土壤濕

度50%～60%。5d～7d后去掉拱棚，適時(shí)澆水。待苗高≥10cm時(shí)，轉(zhuǎn)移至室外培養(yǎng)，定期澆水。

12大田移栽與管理

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當(dāng)苗高≥15cm時(shí)，選擇陰天或傍晚進(jìn)行移栽，移栽前7d大田灌足底水，去掉營養(yǎng)杯，帶基質(zhì)栽植

于大田，株行距20cm×50cm，栽完立即澆水。

移栽后根據(jù)土壤墑情適時(shí)澆水，保持土壤濕度不低于40%。每隔15d除草一次，定期松土，保持土

壤通透性。

13病蟲害防治

歐美楊組培育苗病蟲害種類和防治措施見附錄B，農(nóng)藥使用符合GB/T8321.10有關(guān)規(guī)定。

14檔案管理

按LY/T2280有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

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附錄A

（資料性）

MS培養(yǎng)基配方

MS培養(yǎng)基配方參照表A.1執(zhí)行。

表A.1MS培養(yǎng)基配方

成分母液濃度培養(yǎng)基母液培養(yǎng)基劑量

類型

名稱分子式（g/L）用量（mL）（mg/L）

硝酸銨NH4NO333.0001650.000

硝酸鉀KNO338.0001900.000

大量元素

磷酸二氫鉀KH2PO43.40050.000170.000

（20倍）

硫酸鎂MgSO4·7H2O7.400370.000

氯化鈣CaCl2·2H2O8.800440.000

硫酸錳MnSO4·H2O3.38016.900

硫酸鋅ZnSO4·7H2O1.7208.600

硼酸H3BO31.2406.200

微量元素

碘化鉀KI0.1665.0000.830

（200倍）

鉬酸鈉NaMoO4·2H2O0.0500.250

氯化鈷CoCl2·6H2O0.0050.025

硫酸銅CuSO4·5H2O0.0050.025

鐵鹽硫酸亞鐵FeSO4·7H2O5.56027.800

5.000

（200倍）乙二胺四乙酸鈉Na2-EDTA·2H2O7.46037.300

肌醇20.000100.000

鹽酸硫胺素0.0200.100

有機(jī)物

鹽酸吡哆素0.1005.0000.500

（200倍）

煙酸0.1000.500

甘氨酸0.4002.000

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附錄B

（資料性）

歐美楊組培育苗病蟲害種類及防治措施

歐美楊組培育苗病蟲害種類及防治措施參照表B.1執(zhí)行。

表B.1歐美楊組培育苗病蟲害種類及防治措施

病蟲害種類防治措施

1．組培苗移栽基質(zhì)使用前先滅菌，并用0.1%高錳酸鉀水溶液進(jìn)行消毒。

基腐病

2．發(fā)病時(shí)要適當(dāng)減少濕度，加強(qiáng)通風(fēng)，并用3%甲霜·噁霉靈800倍液進(jìn)行灌根。

用70%甲基硫菌靈1000倍液～1200倍液或50%多菌靈500倍液～800倍液噴施2次～3

立枯病

次，每次間隔7d～9d。

用20%滅蚜松可濕性粉劑1000倍液～1500倍液、10%吡蟲啉4000倍液～6000倍液交替

蚜蟲