ICS65.020.20

CCSB16

DB2305

雙鴨山市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB2305/T027—2024

玉米抗大斑病抗性篩選及鑒定技術(shù)規(guī)程

2024-08-30發(fā)布2024-09-30實(shí)施

雙鴨山市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB2305/T027—2024

前??言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由雙鴨山市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院佳木斯分院、蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院、寶清縣小城子鎮(zhèn)鄉(xiāng)村

振興發(fā)展服務(wù)中心、寶清縣朝陽鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心。

本文件主要起草人：高雪冬、顧鑫、于昌紅、畢永彬、丁俊杰、李燦東、劉俊剛、劉偉、楊曉

賀、姚亮亮、張茂明、王自杰、張家智、李志民、李增杰、孟慶英、朱寶國、靳曉春、王雪潔、邱

磊。

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玉米大斑病抗性篩選及鑒定技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了玉米大斑病抗性篩選及鑒定技術(shù)的術(shù)語和定義、病菌準(zhǔn)備、種植、接種鑒定、抗

性評價及篩選、田間檔案的要求。

本文件適用于玉米大斑病的田間篩選及鑒定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于

本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB4404.1糧食作物種子第1部分:禾谷類

NY/T1248.1玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第1部分:大斑病

DB23/T017玉米生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

NY/T1248.1界定的及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

玉米大斑病

玉米大斑病是以葉部產(chǎn)生大型病斑癥狀為主的玉米病害，又稱葉斑病、條斑病、枯葉病等，主

要發(fā)生在東北、華北春玉米區(qū)和西南地區(qū)海拔較高、氣溫較低的山區(qū)。當(dāng)外界溫度在20～25℃左右，

相對濕度90%以上利于大斑病的發(fā)展。

3.2

病圃

在玉米大斑病常年發(fā)生較重區(qū)域選擇作為玉米大斑病抗性鑒定的地塊。

3.3

人工接種

在適宜條件下,通過人為接種的方式將人工培養(yǎng)或收集的病原物置于植物適當(dāng)部位并使之發(fā)病

的過程。

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3.4

投芯接種

將帶菌高粱粒投入玉米大喇叭口心葉中進(jìn)行接種。

4病菌準(zhǔn)備

4.1病菌采集

4.1.1采樣地點(diǎn)選擇

選擇在雙鴨山市玉米大斑病高發(fā)區(qū)采集具有典型大斑病癥狀的發(fā)病植株，以便獲取具有代表性

的病害樣本。

4.1.2樣本采集

將上年采集的典型大斑病病葉夾在標(biāo)本夾常溫陰干保存，以確保樣本的純凈性和有效性。

4.1.3樣本處理

將帶有大斑病的葉片剪成3～4cm長段，用自來水沖洗，以便后續(xù)的病原菌分離和培養(yǎng)。

4.2病菌制備

4.2.1病原菌分離

通過組織分離法或單孢分離法從發(fā)病植株葉片的典型病斑上分離大斑病病原物，然后進(jìn)行分離

物純化，經(jīng)致病性測定后，在低溫-80℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

通過稀釋培養(yǎng)法和平板對峙法從采集的樣本中分離出具有拮抗活性的微生物菌株。具體方法是

取典型病斑小塊，置于75%的酒精中浸泡2s～3s，取出后置于質(zhì)量體積比為1%的次氯酸鈉中浸泡2

min～3min，再經(jīng)無菌水換洗，曬干后轉(zhuǎn)移至PDA平板培養(yǎng)基中，置于25℃～27℃環(huán)境中，黑暗

培養(yǎng)3d后挑取病原菌至試管中保存。

4.2.2菌株鑒定

依據(jù)柯赫氏法則進(jìn)行致病力測定，確定其為玉米大斑病病病原菌的菌株,對分離出的菌株進(jìn)行形

態(tài)學(xué)、生理生化特征和分子生物學(xué)鑒定進(jìn)行屬種鑒定,從比例占絕對優(yōu)勢的病原菌中選取致病力較強(qiáng)

的菌株作為接種的目標(biāo)菌株。

4.2.3菌株培養(yǎng)

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在PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水，用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮霉菌孢子，將孢

子懸液置于250mL錐形瓶內(nèi)，然后注入40mL洗脫液。錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10?！?/p>

15粒與孢子混合，放入水浴振蕩器中不斷振蕩，使成團(tuán)的孢子散開。然后用單層棉紗布過濾以除去

菌絲。將其裝入滅菌離心管中，用離心機(jī)分離沉淀孢子，去除上清液。再加入40mL洗脫液，重復(fù)

離心操作3次。最后，制成濃度為(0.8～1.2)x106spores/mL的霉菌孢子懸液。如果需要精確計(jì)數(shù)，

可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液，并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用，如果不

在當(dāng)天使用，應(yīng)在3℃至7℃保存，并盡量在4d內(nèi)使用。

5種植

5.1病圃選擇

應(yīng)選擇光照充足、地勢平坦、耕層深厚，肥力較高，保水保肥性能好，排灌良好的地塊。

5.2田間設(shè)計(jì)

將獲得的玉米現(xiàn)有推廣品種及玉米自交系隨機(jī)排列種植，每隔50份材料設(shè)置1組已知抗病、感

病對照材料,對照選用玉米自交系K10(高抗)、118(高感)。鑒定設(shè)計(jì)符合NY/T1248.1標(biāo)準(zhǔn)。

玉米材料采用雙行區(qū)種植，小區(qū)行長4m，行距0.68m，植株密度為5000株/667m2。

5.3播種

耕層5cm～10cm地溫穩(wěn)定通過7℃～8℃，土壤含水量25%～30%適時播種，也可根據(jù)當(dāng)年

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)氣候條件適當(dāng)調(diào)整播種期。播種時期符合DB23/T017標(biāo)準(zhǔn)。

所種植種子不進(jìn)行任何處理，播種方式采用人工播種，播種距離調(diào)整到19.6cm，每穴播2粒，

出苗后每穴保留1株健康的植株。種子符合GB4404.1標(biāo)準(zhǔn)。

5.4田間管理

田間管理及蟲草害防治與大田生產(chǎn)相同，田間管理過程中不使用對大斑病有防治作用的藥劑，

生產(chǎn)過程符合DB23/T017標(biāo)準(zhǔn)。

6接種鑒定

6.1接種時期

大喇叭口期

6.2接種方法

6.2.1采用菌液灌心葉的方法進(jìn)行接種，于多云天傍晚接種，接種后8小時內(nèi)避免高溫及強(qiáng)降雨，

以防病菌失活及被沖刷流失，每株灌5ml～10ml。如果被沖刷，需要在第二天繼續(xù)如此操作。

6.2.2將接種過的高梁粒放入植株心葉中，每株接種5粒~10粒，每個品種至少接種10株。接種

后24h內(nèi)可以人工輔助噴施清水，提高植株心葉內(nèi)的濕度，增加病菌侵染成功的幾率。

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6.3接種管理

在接種圃中鋪設(shè)噴帶的灌溉設(shè)施，每天噴水10min～20min，保持土壤中含充足水分，土壤濕

度不低于90%。

6.4病情調(diào)查

玉米抽絲期后25d進(jìn)行田間調(diào)查。抗性評價標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表１玉米大斑病病情分級

葉片病害級別癥狀描述

0級葉片上無病斑

1級穗位以下的葉片有零星病斑或葉片上無病斑，病斑占葉片面積≤5%

3級穗位上部葉片有零星病斑，穗位下部葉片上有少量病斑，病斑占葉片面積的6%～10%

5級穗位上部有少量病斑，穗位下部葉片上有較多病斑，病斑占葉片面積的11%～30%

7級穗位下部葉片或穗位上部葉片上有大量病斑，病斑相連，占葉片面積的31%～70%

9級全株葉片基本為病斑覆蓋，葉片枯死

6.5計(jì)算公式

通過對玉米鑒定材料群體中個體植株發(fā)病程度的綜合計(jì)算,確定各鑒定材料的病情指數(shù)。病情指

數(shù)采用公式1計(jì)算，得到的值采用四舍五入法保留小數(shù)點(diǎn)后2位有效數(shù)字。

(各級代表值各級病葉數(shù))

病情指數(shù)()

調(diào)查總?cè)~數(shù)9

∑×

??=×100

7抗性評價及篩選×

7.1鑒定有效性判定

感病對照品種達(dá)到高感程度時，該批次鑒定有效。

7.2抗性評價

表2玉米對大斑病抗病性評價分級

葉片病害級別病情指數(shù)（DI）抗病性評價

1級≤10高抗(HR)

3級10<DI≤30抗病(R)

5級30<DI≤50中抗(MR)

7級50<DI≤70感病(S)

9級DI>70高感(HS)