實(shí)驗(yàn)八維生素C的提取及定量測定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)維生素C的重要性質(zhì)。2、掌握2,6-二氯酚靛酚法測定維生素C的原理和方法。3、熟悉、掌握微量定量法的基本操作技術(shù)。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素C/L-抗壞血酸(ascorbicacid)多羥基，內(nèi)酯；酸性；易被氧化：中、堿性，熱，光，重金屬破壞

L-抗壞血酸脫氫抗壞血酸*若脫氫維生素C進(jìn)一步氧化，則失去活性富含維生素C量高的食物（毫克/100克食物)

酸棗——830-1170

獼猴桃——568

棗——549

辣椒——185

山楂——89

柿子椒——89

菜花——88

金花菜——85

苦瓜——84

雪里紅——83

豌豆苗——53

油菜——51

橙——49

柚——41

檸檬——40

柑橘——34

水蘿卜——34

大白菜——19

西紅柿——12芥菜頭——80

青蒜——77

來源

新鮮水果及蔬菜:橙類、番茄、辣椒

2,6-二氯酚靛酚

——氧化還原指示劑維生素C屬于水溶性，具有很強(qiáng)的還原性，易被氧化成脫氫維生素C維生素C具有很強(qiáng)的還原性，在中性和微酸性環(huán)境中，能將染料2，6-二氯酚靛酚（氧化型）還原成無色的（還原型）的2，6-二氯酚靛酚，同時(shí)被氧化成脫氫維生素C。當(dāng)樣品中的維生素C全部被氧化后，再滴入的2，6-二氯酚靛酚就不再被還原脫色而呈玫瑰色。溶液由無色變?yōu)槲⒓t色時(shí)即表示溶液中的維生素C剛好全部被氧化，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)。從滴定時(shí)2，6-二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以計(jì)算出被檢物質(zhì)中還原型維生素C的含量。二、實(shí)驗(yàn)原理計(jì)算公式：VA為滴定樣品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL數(shù)；VB為滴定空白對照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL數(shù)；S為1mL2，6-二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的mg數(shù)；W為10mL樣品提取液中含樣品的g數(shù)。三、器材研缽移液管10mL50ml容量瓶50ml錐形瓶微量滴定管漏斗紗布濾紙藥物天平刻度吸管三、試劑和材料綠豆芽2%草酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液操作步驟1.提取：稱取新鮮樣品約20g，置于研缽中，加入15ml2%草酸溶液研磨成漿狀，殘?jiān)俅窝心?，一同轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，加草酸定容。2.過濾：提取液充分混勻后，過濾。3.樣品滴定：準(zhǔn)確吸取濾液10ml于50ml的錐形瓶中，立即用標(biāo)定過的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至終點(diǎn)，粉紅色，15秒不褪色。記錄所用染料的毫升數(shù)（重復(fù)測定2～3次）。4.空白滴定：準(zhǔn)確吸取2%的草酸10ml于50ml的錐形瓶中，立即用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至終點(diǎn)，粉紅色，15秒不褪色。記錄所用染料的毫升數(shù)（重復(fù)測定2～3次）。5.標(biāo)準(zhǔn)液滴定準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液5mL，置于50mL錐形瓶中，用微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡紅色，并保持15s不褪色，即達(dá)終點(diǎn)。由所用染料的體積計(jì)算出1ml染料相當(dāng)于多少毫克抗壞血酸（取5mL2%草酸作空白對照，按同樣方法滴定）。6.計(jì)算計(jì)算公式：VA為滴定樣品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL數(shù)；VB為滴定空白對照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL數(shù)；S為1mL2，6-二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的mg數(shù)；W為10mL樣品提取液中含樣品的g數(shù)。注意事項(xiàng)(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物泡沫太多，可加數(shù)滴丁醇或辛醇消泡。(2)整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程要迅速，防止樣品中還原型抗壞血酸被氧化。滴定過程一般不超過2min，滴定所用染料不應(yīng)小于1mL或大于4mL。如果樣品含維生素C太高或太低，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。(3)提取的漿狀物如不易過濾，也可進(jìn)行離心，留取上清液進(jìn)行滴定。思考題為什么維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液要用新鮮配制的？為準(zhǔn)確測得維生素C的含量，實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意那些操作步驟？需要配置的藥品

0.1%2，6-二氯酚靛酚：2L將0.25g2，6-二氯酚靛酚溶于300mL含有0.21g碳酸氫鈉的熱水中（加熱），冷卻后加水稀釋至1000mL，貯于棕色瓶中冷藏(4℃)，約可保存一周。需要配置的藥品

2%草酸溶液配置3L標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液：200ml標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液(1mg/mL)：準(zhǔn)確稱取100mg（0.1g）純抗壞血酸（應(yīng)