1醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測(cè)試方法1范圍本文件描述了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測(cè)試方法。本文件適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))潔凈廠房、潔凈實(shí)驗(yàn)室等的沉降菌測(cè)試。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。中華人民共和國(guó)藥典2025年版四部3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。沉降菌settlingmicrobe通過(guò)被動(dòng)式采樣法收集到的懸浮在空氣中的活微生物。3.2靜態(tài)at-rest潔凈室或潔凈區(qū)建成且設(shè)備就位,按議定的方式運(yùn)行,但無(wú)人員在場(chǎng)的狀態(tài)。[來(lái)源:GB/T25915.1—2021,3.3.2]3.3動(dòng)態(tài)operational潔凈室或潔凈區(qū)設(shè)施按議定方式運(yùn)行,且有規(guī)定數(shù)量的人員按議定方式工作的狀態(tài)。[來(lái)源:GB/T25915.1—2021,3.3.3]4人員要求潔凈室(區(qū))的測(cè)試人員應(yīng)接受衛(wèi)生和微生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)等相關(guān)專業(yè)知識(shí)的培訓(xùn),應(yīng)使測(cè)試活動(dòng)對(duì)潔凈室(區(qū))的干預(yù)降至最低。5主要儀器設(shè)備培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器等,應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)。6培養(yǎng)基一般選擇胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA),必要時(shí)可加入適宜的中和劑。當(dāng)監(jiān)測(cè)結(jié)果有疑似真菌或2考慮季節(jié)因素影響時(shí),可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)。應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典2025年版四部》9203相關(guān)要求。7測(cè)試條件潔凈室(區(qū))確認(rèn)時(shí),應(yīng)在靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種占用狀態(tài)進(jìn)行測(cè)試。潔凈室(區(qū))常規(guī)監(jiān)測(cè)時(shí),應(yīng)在動(dòng)態(tài)條件下測(cè)試。對(duì)單向流潔凈室(區(qū))進(jìn)行靜態(tài)測(cè)試時(shí),宜在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10min后開始,對(duì)非單向流潔凈室(區(qū))進(jìn)行靜態(tài)測(cè)試時(shí),宜在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30min后開始。8測(cè)試方法8.1確定采樣點(diǎn)在進(jìn)行潔凈室(區(qū))確認(rèn)及監(jiān)測(cè)時(shí),應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定采樣點(diǎn)數(shù)目及位置(含水平及垂直位置)。宜選擇合適的風(fēng)險(xiǎn)管理工具,如故障模式效應(yīng)分析(FMEA)、危害分析關(guān)鍵控制點(diǎn)(HACCP)等。在通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定采樣點(diǎn)時(shí),應(yīng)同時(shí)滿足表1最少采樣點(diǎn)數(shù)目的要求。表1潔凈室(區(qū))沉降菌最少采樣點(diǎn)數(shù)目潔凈室(區(qū))面積m2最少采樣點(diǎn)數(shù)目NL≤84>8~285>28~526>52~687>68~1048>104~1489>148~23210>232~43611>436~100012>1000按公式(1)NL(1)式中:NL—最少樣點(diǎn)數(shù)目,帶小數(shù)時(shí)向上進(jìn)位取整數(shù);A—待測(cè)潔凈室(區(qū))的面積,單位為平方米(m2)。注:潔凈室(區(qū))面積在1000m2以上時(shí),最少采樣點(diǎn)數(shù)目是在GB/T16293—2025中浮游菌最少采樣點(diǎn)數(shù)目的基礎(chǔ)上增加3個(gè)采樣點(diǎn)確定的,以增加空間覆蓋,使數(shù)據(jù)更具代表性。38.2采樣步驟8.2.1按設(shè)定的采樣點(diǎn)放置采樣培養(yǎng)皿。打開培養(yǎng)皿蓋,使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。采樣培養(yǎng)皿盡量避開回風(fēng)口。8.2.2對(duì)動(dòng)態(tài)潔凈室(區(qū))進(jìn)行測(cè)試時(shí),ISO5級(jí)、A級(jí)、B級(jí)以及100級(jí)潔凈室(區(qū))宜在整個(gè)操作期間采樣,其他潔凈級(jí)別應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定采樣時(shí)間。對(duì)靜態(tài)潔凈室(區(qū))進(jìn)行測(cè)試時(shí),采樣時(shí)間宜與動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)采樣時(shí)間一致。8.2.3采用經(jīng)確定的單個(gè)培養(yǎng)皿的暴露時(shí)間進(jìn)行暴露采樣。必要時(shí),可使用多個(gè)培養(yǎng)皿連續(xù)暴露采樣以達(dá)到規(guī)定的采樣時(shí)間。注:采樣培養(yǎng)皿的暴露時(shí)間是沉降菌測(cè)試方法的重要參數(shù)。相較于浮游菌和表面微生物測(cè)試,用于沉降菌測(cè)試的采樣培養(yǎng)皿需要較長(zhǎng)的暴露時(shí)間。放置在高氣流、湍流、高溫或低濕條件下的采樣培養(yǎng)皿可能會(huì)變干或以其他方式改變其特性,如溶解氣體、pH變化或培養(yǎng)基某些成分變質(zhì)等,從而使先前沉降或新捕獲的微生物死亡。必要時(shí)對(duì)采樣培養(yǎng)皿在特定使用條件下的暴露時(shí)間進(jìn)行研究,以證明暴露操作不對(duì)所用培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力產(chǎn)生任何負(fù)面影響。暴露時(shí)間一般不大于4h。8.2.4取同批次制備的培養(yǎng)皿作為陰性對(duì)照,與采樣培養(yǎng)皿同法操作但不進(jìn)行暴露采樣,培養(yǎng)后陰性對(duì)照培養(yǎng)皿應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng),否則測(cè)試無(wú)效。8.3培養(yǎng)計(jì)數(shù)8.3.1采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿倒置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。8.3.2對(duì)于環(huán)境微生物種群不確定的情況,可在20℃~25℃培養(yǎng)3d~5d后再轉(zhuǎn)移至30℃~35℃培養(yǎng)2d~3d,或先在30℃~35℃培養(yǎng)2d~3d后再轉(zhuǎn)移至20℃~25℃培養(yǎng)3d~5d。當(dāng)采用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)時(shí),培養(yǎng)溫度為20℃~25℃,時(shí)間為5d~7d。宜根據(jù)環(huán)境污染微生物歷史數(shù)據(jù)及種群特性調(diào)整培養(yǎng)方案。8.3.3用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊,可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。9試驗(yàn)報(bào)告如適用,測(cè)試報(bào)告應(yīng)至少包含以下內(nèi)容:a)測(cè)試潔凈室(區(qū))名稱、地址;b)測(cè)試潔凈室(區(qū))占用狀態(tài);c)測(cè)試潔凈室(