實驗動物學滅菌操作規(guī)定一、實驗動物學滅菌操作概述

實驗動物學滅菌操作是保障實驗動物健康、防止交叉感染和確保實驗結(jié)果準確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。規(guī)范的滅菌操作能夠有效殺滅或去除實驗動物環(huán)境中存在的病原微生物，降低實驗風險。本規(guī)定旨在明確滅菌操作的標準流程、注意事項及適用范圍，確保各項操作符合生物安全要求。

二、滅菌操作的基本原則

（一）標準化操作流程

1.所有滅菌操作必須遵循既定的標準化流程，確保每一步驟的準確執(zhí)行。

2.操作人員需經(jīng)過專業(yè)培訓，熟悉滅菌設備的使用方法和注意事項。

3.滅菌前需對物品進行預處理，如清潔、干燥，以提高滅菌效果。

（二）分類處理原則

1.根據(jù)物品類型（如器械、耗材、環(huán)境表面等）選擇合適的滅菌方法。

2.高風險物品（如手術(shù)器械）需采用更嚴格的滅菌標準。

3.低風險物品可適當簡化滅菌流程，但仍需確保病原微生物被有效控制。

（三）環(huán)境控制要求

1.滅菌操作應在潔凈環(huán)境中進行，避免外界污染。

2.滅菌區(qū)域需定期消毒，并保持相對密閉。

3.操作前后需使用消毒劑對工作臺面和設備進行清潔。

三、常用滅菌方法及操作規(guī)范

（一）物理滅菌法

1.高溫高壓滅菌（Autoclave）

(1)設備準備：檢查高壓滅菌鍋的壓力表、溫度計是否正常，確保蒸汽循環(huán)通暢。

(2)物品裝載：將物品均勻放置在滅菌鍋內(nèi)，避免過度堆疊，確保蒸汽穿透。

(3)參數(shù)設置：根據(jù)物品類型設定滅菌溫度（通常121℃）、壓力（1.05kg/cm2）和時間（15-30分鐘）。

(4)操作步驟：關(guān)閉鍋蓋，啟動滅菌程序，滅菌完成后自然冷卻或使用專用排氣閥減壓。

(5)驗證方法：使用生物指示劑（如嗜熱脂肪芽孢）驗證滅菌效果，確保滅菌參數(shù)達標。

2.干熱滅菌（HotAirOven）

(1)設備準備：檢查干熱滅菌箱的溫度均勻性，確保無死角。

(2)物品裝載：將物品平鋪在滅菌箱內(nèi)，避免遮擋加熱元件。

(3)參數(shù)設置：設定滅菌溫度（160-180℃）和時間（2-4小時）。

(4)操作步驟：關(guān)閉箱門，啟動滅菌程序，滅菌完成后待溫度降至安全范圍后取出物品。

(5)驗證方法：使用化學指示劑或生物指示劑進行效果驗證。

（二）化學滅菌法

1.伽馬射線滅菌

(1)設備準備：檢查伽馬射線滅菌腔的輻射劑量計是否校準。

(2)物品裝載：將物品放入專用滅菌袋，確保密封性。

(3)參數(shù)設置：根據(jù)物品類型設定輻射劑量（通常25-50kGy）。

(4)操作步驟：將滅菌袋放入滅菌腔，啟動輻射程序，滅菌完成后取出物品。

(5)驗證方法：使用生物指示劑驗證輻射劑量是否達到滅菌標準。

2.化學氣體滅菌（如環(huán)氧乙烷）

(1)設備準備：檢查環(huán)氧乙烷滅菌器的真空系統(tǒng)、氣體濃度監(jiān)測儀是否正常。

(2)物品裝載：將物品放入專用滅菌袋，避免水分殘留。

(3)參數(shù)設置：設定滅菌程序（通常包括預處理、滅菌、解吸、通風階段）。

(4)操作步驟：關(guān)閉艙門，啟動滅菌程序，滅菌完成后進行充分通風，確保氣體完全排出。

(5)驗證方法：使用生物指示劑驗證滅菌效果，并檢測殘留氣體濃度是否低于安全限值。

（三）環(huán)境表面滅菌

1.濕法消毒

(1)消毒劑選擇：使用70%-80%的酒精或含氯消毒劑（如0.1%-0.5%次氯酸鈉溶液）。

(2)操作步驟：用浸濕消毒劑的拖布或噴霧器擦拭表面，確保覆蓋均勻。

(3)等待時間：根據(jù)消毒劑說明，確保作用時間（通常15-30分鐘）。

(4)清潔處理：消毒后用清水擦拭，去除殘留消毒劑。

2.干法消毒

(1)消毒劑選擇：使用過氧化氫蒸汽或二氧化氯氣體。

(2)操作步驟：按照設備說明進行氣體熏蒸，確保密閉環(huán)境。

(3)等待時間：根據(jù)消毒劑濃度和溫度，通常需要30-60分鐘。

(4)通風處理：消毒完成后充分通風，確保殘留氣體散盡。

四、滅菌效果的驗證

（一）生物指示劑驗證

1.常用指示劑：使用嗜熱脂肪芽孢（如sporesof*Bacillusstearothermophilus*）。

2.操作方法：將指示劑與待滅菌物品一同滅菌，培養(yǎng)后觀察是否無菌生長。

3.陽性對照：同時設置未滅菌的指示劑作為陽性對照，確保實驗有效性。

（二）化學指示劑驗證

1.常用指示劑：使用包含變色物質(zhì)的化學指示卡或標簽。

2.驗證標準：根據(jù)指示劑的變色情況判斷是否達到滅菌條件（如高溫高壓下的黃色變黑）。

（三）環(huán)境監(jiān)測

1.空氣菌落數(shù)：使用settleplates或airsamplingmethods檢測滅菌區(qū)域空氣中的微生物數(shù)量。

2.拉取樣本：在滅菌前后對環(huán)境表面（如工作臺、設備）進行菌落計數(shù)，確保滅菌效果。

五、操作記錄與安全管理

（一）操作記錄

1.每次滅菌操作需填寫記錄表，包括滅菌日期、物品名稱、滅菌方法、參數(shù)設置、驗證結(jié)果等。

2.記錄表需由操作人員和審核人員簽字，存檔備查。

（二）安全管理

1.操作人員需佩戴個人防護裝備（如手套、口罩、防護服）。

2.化學滅菌劑需遠離火源，避免接觸皮膚和眼睛。

3.滅菌后的物品需標記清楚，避免混淆。

（三）應急處理

1.如發(fā)現(xiàn)滅菌失敗，需立即隔離受影響的物品，并分析原因重新滅菌。

2.化學消毒劑泄漏時，需使用吸水材料清理，并加強通風。

六、總結(jié)

規(guī)范的滅菌操作是實驗動物學研究的基石，必須嚴格執(zhí)行標準流程，確保滅菌效果。操作人員需持續(xù)接受培訓，提高安全意識和技能水平。通過科學的管理和驗證，可有效降低微生物風險，保障實驗的順利進行。

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**（續(xù)前）**

五、操作記錄與安全管理

（一）操作記錄

1.**記錄要素的詳細說明**：

*記錄表應包含但不限于以下詳細信息：

***基本信息**：記錄編號、創(chuàng)建日期、操作人員姓名及資質(zhì)（如適用）、審核人員姓名及日期。

***物品信息**：滅菌物品的詳細描述（如“手術(shù)器械包-XX號”、“動物籠具批次-YYYYMMDD”、“特定實驗耗材-種類及數(shù)量”）、物品來源（如“科室A”、“采購批次”）、物品狀態(tài)（如“全新”、“使用后”）、待滅菌物品的總件數(shù)或總重量。

***滅菌設備信息**：使用的滅菌設備型號、編號、所在位置。

***滅菌參數(shù)**：明確具體的滅菌方法（如“高壓蒸汽滅菌”、“干熱滅菌”、“環(huán)氧乙烷滅菌”、“UV紫外線消毒”）、設置的溫度（例如，高壓滅菌121°C、干熱160°C）、壓力（例如，高壓滅菌15psi/1.05kg/cm2）、時間（例如，高壓滅菌15分鐘、干熱2小時）、氣體濃度與時間（如環(huán)氧乙烷500-800g/m3，循環(huán)時間60分鐘）、紫外線照射時間（例如，30分鐘，功率密度XXμW/cm2）。

***預處理信息**：物品滅菌前的處理方法（如“清洗”、“干燥”、“打包”、“抽真空”）。

***裝載信息**：簡述物品在設備內(nèi)的裝載方式（如“堆疊方式”、“放置位置”、“是否使用滅菌架”）。

***監(jiān)測與驗證**：

*生物指示劑的使用：指示劑類型（如嗜熱脂肪芽孢*Bacillusstearothermophilus*）、品牌、批號、放置位置（如包裹中央、堆疊頂層）、滅菌后是否及時取出并放入無菌容器、培養(yǎng)條件（溫度、時間）、培養(yǎng)結(jié)果（無菌/有菌）、陽性對照結(jié)果（必須無菌生長）。

*化學指示劑的使用：指示劑類型、品牌、批號、放置位置（如包裹內(nèi)、設備腔內(nèi)關(guān)鍵位置）、顏色變化是否符合預期（如指示卡從黃色變?yōu)楹谏?棕色）。

*環(huán)境監(jiān)測（如適用）：空氣沉降菌/空氣采樣檢測的結(jié)果（菌落數(shù)CFU/m3或CFU/皿）、采樣時間、采樣位置、方法。

***結(jié)果與結(jié)論**：明確記錄本次滅菌是否成功（Pass/Fail），簡述失敗原因（如“生物指示劑有菌生長”、“參數(shù)偏離”）。物品當前狀態(tài)（如“待發(fā)放”、“已使用”）。

***記錄規(guī)范**：

*記錄必須清晰、準確、及時填寫，嚴禁潦草或涂改。如需修改，應劃線簽名注明。

*所有記錄均需電子化存檔或使用標準化表格，便于查閱和管理。

*記錄保存期限應遵循實驗室的質(zhì)量管理體系要求，通常建議至少保存3年。

（二）安全管理

1.**個人防護裝備（PPE）要求**：

***標準配置**：所有參與滅菌操作的人員，在接觸待滅菌物品、化學消毒劑、操作滅菌設備（尤其是內(nèi)部）時，必須佩戴至少包括一次性手套、防護眼鏡或面罩、實驗服/工作服。

***特殊場景**：如操作高壓蒸汽滅菌鍋時，需注意蒸汽噴濺風險，可考慮佩戴防水圍裙或使用蒸汽屏；處理化學消毒劑時，若存在腐蝕性或刺激性，應佩戴耐化學品的防護手套和長袖工作服。

***佩戴規(guī)范**：PPE需在操作前穿戴整齊，操作結(jié)束后按照規(guī)定程序進行清洗、消毒并廢棄。

2.**化學消毒劑/滅菌劑安全操作**：

***儲存**：所有化學消毒劑和滅菌劑（如酒精、過氧化氫、環(huán)氧乙烷、含氯消毒劑等）必須儲存在陰涼、干燥、通風良好、原包裝完好的指定區(qū)域。不同種類、不同濃度的消毒劑應分區(qū)存放，避免混淆。嚴禁與易燃物、強氧化劑、食品等混合存放。

***標識**：儲存區(qū)域和容器必須有清晰、規(guī)范的標識，注明品名、濃度、危險性提示（如腐蝕性、刺激性）、生產(chǎn)日期、有效期、操作注意事項。

***取用**：取用化學消毒劑時，應使用專用的量取工具（如量筒、移液器），避免直接接觸。操作應在通風櫥內(nèi)進行，尤其是在配制或使用高濃度、揮發(fā)性強的消毒劑時。

***使用**：嚴格按照說明書或操作規(guī)程使用，確保正確的濃度和作用時間。注意避免消毒劑接觸皮膚、眼睛和呼吸道黏膜。使用后，容器應蓋緊，妥善處理廢棄包裝物。

***泄漏處理**：一旦發(fā)生泄漏，應立即根據(jù)化學品的性質(zhì)采取相應措施。例如，對于液體，可用吸水材料（如吸附棉）小心吸收；對于氣體，應加強通風。穿戴適當?shù)姆雷o裝備進行處理。處理后的廢棄物需作為特殊廢物進行處置。

3.**物理滅菌設備安全操作**：

***高壓蒸汽滅菌鍋**：

***操作前**：檢查鍋體清潔度、安全閥是否在有效期且校準合格、壓力表和溫度表是否正常。確認門鎖緊裝置功能完好。排空滅菌鍋內(nèi)的冷凝水。

***操作中**：嚴格遵守加壓和泄壓程序。嚴禁在壓力下強行開門。操作人員不得將頭或身體伸入正在運行或壓力未完全釋放的滅菌鍋內(nèi)。注意高溫蒸汽燙傷風險。

***操作后**：待壓力自動降至零后，方可緩慢開門。取出物品時注意高溫。

***干熱滅菌箱**：

***操作前**：檢查箱體溫度均勻性（可使用多個溫度計進行驗證）。確保門密封良好。清潔箱內(nèi)。

***操作中**：將物品平鋪放置，避免遮擋加熱元件和通風口。關(guān)緊門，啟動程序。操作人員應避免頻繁開關(guān)門，以免影響溫度穩(wěn)定。

***操作后**：待溫度降至安全水平后（通常不能立即開門，特別是高溫長時間滅菌后），方可打開。取出物品時注意高溫。

***伽馬射線滅菌室**：

***操作前**：確認輻射源狀態(tài)正常，劑量計校準有效。檢查屏蔽門功能。

***操作中**：嚴格遵守輻射安全規(guī)程，操作人員在非操作時段必須遠離控制室和屏蔽門區(qū)域。使用專用工具搬運裝有物品的容器。注意輻射屏蔽和劑量監(jiān)測。

***操作后**：記錄每次輻照的劑量和運行參數(shù)。

***化學氣體滅菌器（如環(huán)氧乙烷）**：

***操作前**：檢查真空系統(tǒng)、壓力傳感器、氣體濃度監(jiān)測儀等是否正常工作且在有效期內(nèi)。確保裝載艙清潔。

***操作中**：嚴格按照程序進行預處理、充氣（環(huán)氧乙烷）、循環(huán)、解吸、通風。操作人員在充氣和解吸階段必須佩戴合適的呼吸防護裝置（如自給式空氣呼吸器或長管呼吸器），并盡量在通風良好的區(qū)域或操作間內(nèi)進行。嚴禁在未充分通風的區(qū)域進入。

***操作后**：確認殘留氣體濃度低于安全限值（如使用專門的檢測儀或指示卡）后方可取出物品。物品在投入使用前，根據(jù)要求可能需要等待更長時間以確保完全無害化。

4.**物品管理安全**：

***標識**：所有待滅菌和已滅菌的物品必須進行清晰、耐久、可追溯的標識。例如，使用不同顏色標簽區(qū)分待滅菌/已滅菌，或使用條形碼/二維碼記錄關(guān)鍵信息。滅菌后的物品應明確標注滅菌日期、滅菌批次、滅菌方法等。

***隔離**：未經(jīng)驗證或滅菌失敗的物品必須與合格物品嚴格隔離，并進行標識，直至問題解決并重新驗證合格。

***搬運**：搬運熱燙物品（如剛出高壓鍋的器械包）時，應使用專用工具（如器械車、夾鉗），防止燙傷。搬運化學滅菌后的物品時，注意可能存在的殘留氣體或化學物質(zhì)遷移風險。

（三）應急處理

1.**滅菌失敗處理**：

***發(fā)現(xiàn)**：通過生物指示劑培養(yǎng)結(jié)果或其他監(jiān)測手段（如參數(shù)偏離、化學指示劑異常）發(fā)現(xiàn)滅菌失敗時，應立即停止發(fā)放或使用相關(guān)批次物品。

***隔離**：將所有相關(guān)批次物品（包括同批次裝載的其他物品）進行隔離存放，貼上“滅菌失敗”標識。

***分析**：操作負責人或技術(shù)負責人需立即分析失敗原因，可能包括參數(shù)設置錯誤、設備故障、裝載不當、物品預處理不充分、生物/化學指示劑失效等。

***措施**：根據(jù)分析結(jié)果，可能需要對設備進行維護/校準、重新培訓操作人員、改進裝載方法、對所有受影響物品進行重新滅菌，并重新進行效果驗證。所有失敗情況及處理措施均需詳細記錄。

2.**意外暴露處理**：

***化學暴露**：如不慎接觸化學消毒劑導致皮膚或眼睛刺激/灼傷，應立即用大量流動清水沖洗（眼睛沖洗至少15分鐘，皮膚沖洗至少5分鐘），脫去被污染的衣物，并立即尋求醫(yī)療幫助。根據(jù)情況涂抹適當藥膏（遵醫(yī)囑）。如吸入氣體導致不適，應迅速移至空氣新鮮處，必要時進行心肺復蘇。

***物理暴露**：如被高溫物品燙傷，應立即用流動冷水沖洗傷處15-20分鐘，避免使用冰塊。小面積可用無菌紗布覆蓋，大面積或嚴重燙傷需立即就醫(yī)。如被輻射意外照射，應立即脫離輻射源，記錄受照劑量（如有條件），并報告給相關(guān)部門，尋求醫(yī)學評估。

3.**泄漏處理**：參照化學消毒劑/滅菌劑安全操作中的泄漏處理部分。確保所有參與處理的人員都了解風險并采取了適當?shù)姆雷o措施。事后需評估風險，必要時調(diào)整操作規(guī)程或設備維護計劃。

六、操作人員培訓與職責

（一）培訓要求

1.**培訓對象**：所有直接參與實驗動物相關(guān)滅菌操作的人員，包括實驗技術(shù)人員、動物飼養(yǎng)員、清潔人員等。

2.**培訓內(nèi)容**：

*滅菌原理及重要性（對實驗動物健康和實驗結(jié)果的影響）。

*實驗動物環(huán)境中常見微生物及其危害。

*所使用滅菌方法（物理、化學）的原理、設備操作、參數(shù)設置依據(jù)。

*物品的正確預處理方法（清洗、包裝、干燥）。

*滅菌效果的驗證方法（生物指示劑、化學指示劑、環(huán)境監(jiān)測）及結(jié)果判讀。

*個人防護裝備的正確選擇和使用。

*化學消毒劑/滅菌劑的安全操作規(guī)程及應急處理。

*滅菌操作記錄的規(guī)范填寫。

*實驗室生物安全通用規(guī)則及滅菌相關(guān)的特定要求。

3.**培訓方式**：結(jié)合理論講解、設備操作演示、實際操作練習、案例分析等多種方式進行。鼓勵使用標準化操作程序（SOP）手冊。

4.**培訓評估**：培訓結(jié)束后需進行考核，確保人員掌握必要的知識和技能?？己撕细裾叻娇缮蠉?。培訓記錄需存檔。

5.**持續(xù)培訓**：應定期（如每年一次）進行復訓和更新培訓，特別是當設備更新、規(guī)程變更或出現(xiàn)相關(guān)事件后。

（二）人員職責

1.**操作人員職責**：

*嚴格遵守本規(guī)定及相關(guān)SOP，按標準流程執(zhí)行滅菌操作。

*正確使用和維護所負責的滅菌設備。

*確保待滅菌物品的預處理符合要求。

*準確設置滅菌參數(shù)，并監(jiān)控操作過程。

*按要求進行滅菌效果驗證，并準確記錄。

*正確穿戴和使用PPE。

*及時發(fā)現(xiàn)并報告操作中出現(xiàn)的異常情況或設備故障。

*負責自己操作產(chǎn)生的記錄的準確性和完整性。

2.**監(jiān)督/審核人員職責**：

*定期檢查滅菌操作規(guī)程的執(zhí)行情況。

*抽查滅菌記錄，確保記錄規(guī)范、數(shù)據(jù)準確。

*對滅菌效果（特別是生物指示劑結(jié)果）進行審核。

*評估操作人員的技能水平。

*對設備維護和校準提出建議。

*處理滅菌相關(guān)的投訴或質(zhì)疑。

3.**設備維護人員職責**：

*負責滅菌設備的日常清潔、保養(yǎng)和定期校準（特別是溫度、壓力、時間控制器、安全閥、指示系統(tǒng)等）。

*確保設備處于良好的工作狀態(tài)，及時報修故障設備。

*保留設備的校準證書和維護記錄。

七、環(huán)境與設施要求

（一）滅菌區(qū)域布局

1.**獨立區(qū)域**：滅菌操作應盡可能設置在相對獨立、封閉或半封閉的區(qū)域，減少與動物活動區(qū)域的交叉。區(qū)域邊界應有明確標識。

2.**功能分區(qū)**：內(nèi)部應合理分區(qū)，包括物品清潔區(qū)、包裝區(qū)、裝載區(qū)、滅菌區(qū)、冷卻區(qū)（如需）、物品存儲區(qū)、廢棄物處理區(qū)等。各區(qū)域應按流程順序布局，減少往返和交叉污染風險。

3.**流程順暢**：布局設計應便于物品按“清潔-包裝-裝載-滅菌-冷卻（如需）-存儲/發(fā)放”的流程單向流動。

（二）設施條件

1.**清潔度**：滅菌區(qū)域應保持高度清潔，地面、墻壁、天花板應易于清潔和消毒。定期進行消毒（如使用紫外線或化學消毒劑）。

2.**通風與溫濕度**：區(qū)域應有良好的通風系統(tǒng)，保持空氣流通。溫濕度應適宜，避免影響物品儲存和