《細(xì)胞生物學(xué)》題庫(kù)參照答案

第三章細(xì)胞生物學(xué)研究措施

一、名詞解釋

1.辨別率(resolution)：辨別率是指能辨別出的相鄰兩個(gè)物點(diǎn)間最小距離的能力，這種距

離稱(chēng)為辨別距離。辨別距離越小，辨別率越高。一般規(guī)定：顯微鏡或人眼在25cm明視距離

處，能清晰地辨別被檢物體細(xì)微構(gòu)造最小間隔的能力，稱(chēng)為辨別率。人眼的辨別率是100

um;光學(xué)顯微鏡的最大辨別率是0.2umo

2.熒光(門(mén)uorescence)：分子由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，由于電子躍遷而由被激發(fā)分子發(fā)射的光。

物質(zhì)通過(guò)紫外線(xiàn)照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種狀況，第?種是自發(fā)熒光，如葉綠素、血

紅素等經(jīng)紫外線(xiàn)照射后，能發(fā)出紅色的熒光，稱(chēng)為自發(fā)熒光;第二種是誘發(fā)熒光，即物體經(jīng)

熒光染料染色后再通過(guò)紫外線(xiàn)照射發(fā)出熒光，稱(chēng)為誘發(fā)熒光。

3.熒光顯微鏡(Fluorescencemicroscope)：以紫外線(xiàn)為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)

出熒光，然后在顯微鏡下觀(guān)測(cè)物體日勺形狀及其所在位置熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)口勺

吸取、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。

4.相差顯微鏡(Phasecontrastmicroscope)：相差顯微鏡是荷蘭科學(xué)家Zermike于1935

年發(fā)明的，用于觀(guān)測(cè)未染色標(biāo)本的顯微鏡?；罴?xì)胞和未染色的生物標(biāo)本，因細(xì)胞各部維微構(gòu)

造的折射率和厚度的不一樣，光波通過(guò)時(shí)，波長(zhǎng)和振幅并不發(fā)生變化，僅相位發(fā)牛.變化(振

幅差)，這種振幅差人眼無(wú)法觀(guān)測(cè)。而相差顯微鏡通過(guò)變化這種相位差，并運(yùn)用光的衍射和

干涉現(xiàn)象，把相差變?yōu)檎穹顏?lái)觀(guān)測(cè)活細(xì)胞和未染色日勺標(biāo)本。相差顯微鏡和?般品微鏡日勺區(qū)

別是:用環(huán)狀光闌替代可變光闌，用帶相板的物鏡替代一般物鏡，并帶有一種合軸用的望遠(yuǎn)

鏡。

相差顯微鏡具有兩個(gè)其他顯微鏡所不具有日勺功能:①將直射H勺光(視野中背景光)與經(jīng)物

體衍射口勺光分開(kāi);②將大概二分之一口勺波長(zhǎng)從相位中除去，使之不能發(fā)生相互作用，從而引

起強(qiáng)度的變化。

5.放射自顯影(autoradiography)：放射自顯影的原理是運(yùn)用放射性同位素所發(fā)射出來(lái)的帶

電離子(a或B粒子)作用于感光材料的鹵化銀晶體，從而產(chǎn)生潛影，這種潛影可用顯影液

顯示，成為可見(jiàn)的“像”，因此，它是運(yùn)用鹵化銀乳膠顯像檢查和測(cè)量放射性的一種措施。

放射性核素的原子不停衰變，當(dāng)衰變掉二分之一時(shí)所需要的時(shí)間稱(chēng)為半衰期。多種放射

性核素H勺半衰期長(zhǎng)短不一?樣(表)，在自顯影試驗(yàn)中多選月半衰期較長(zhǎng)者。對(duì)于半衰期較短的

核素，應(yīng)選用較快的樣品制備措施，所用劑量也應(yīng)加大。

6.掃描電子顯微鏡(scanningelectronmicroscopy,SEM)：掃描電子顯微鏡是1965年發(fā)

明的J較現(xiàn)代日勺細(xì)胞生物學(xué)研究工具，重要是運(yùn)用二次電子信號(hào)成像來(lái)觀(guān)測(cè)樣品口勺表面形態(tài)，

即用極狹窄的電子束去掃描樣品，通過(guò)電子束與樣品口勺相互作用產(chǎn)生多種效應(yīng)，其中重要是

樣品的二次電子發(fā)射。二次電子可以產(chǎn)生樣品表面放大的形貌像，這個(gè)像是在樣品被掃描時(shí)

準(zhǔn)時(shí)序建立起來(lái)H勺，雖然用逐點(diǎn)成像FI勺措施獲得放大像。

7.掃描透射電子顯微鏡(scanningIransmissionelectronmicroscopy,STEM)：既有透射

電子顯微鏡又有掃描電子顯微鏡的顯微鏡。象SEM一樣，STEM用電子束在樣品II勺表面掃描,

但又象TEM,通過(guò)電了?穿透樣品成像。STEM可以獲得TEM所不能獲得的某些有關(guān)樣品的特殊

信息。STEM技術(shù)規(guī)定較高,要非常高口勺真空度，并且電子學(xué)系統(tǒng)比TEM和SEM都要復(fù)雜。

8.高壓電子顯微鏡(high-voltageelectronmicroscopy,HVEM)：同透射電子顯微鏡基本

相似，只是電壓尤其高。TEM使用的加速電壓是50?lOOkV,而HVEM使用口勺電壓是200-

lOOOkVo由于電壓高，就會(huì)大大減少導(dǎo)致染色體畸變的可能，因此，可以用較厚的細(xì)胞切片

研究細(xì)胞的構(gòu)造，切片的厚度最大可達(dá)1um,相稱(chēng)于一般TEM樣品厚度日勺10倍。

9.負(fù)染色(negativestainning)：用重金屬鹽(如磷鴇酸鈉、醋酸鈾等)對(duì)鋪展在載網(wǎng)上口勺

樣品進(jìn)行染色，使整個(gè)載網(wǎng)都鋪上一層重金屬鹽，而有凸出顆粒的地方則沒(méi)有染料沉積。由

于電子密度高的重金屬鹽包埋了樣品中低電子密度的背景，增強(qiáng)了背景散射電子的能力以提

高反差，這樣，在圖像中背景是黑暗的，而未被包埋H勺樣品顆粒則透明光亮，這種染色稱(chēng)為

負(fù)染技術(shù)。負(fù)染色是只染背景而不染樣品，與光學(xué)顯微鏡樣品的染色恰好相反。

10.鑄型技術(shù)(shadowcasting)：鑄型技術(shù)是電子顯微鏡中一-種重要口勺增強(qiáng)背景和待觀(guān)測(cè)樣

品反差的措施?；具^(guò)程包括：①將樣品置于云母的表面，然后干燥;②在真空裝置中將樣

品鍍上一層重金屬(金或鋁金)，噴鍍時(shí)的加熱絲具有一定的角度;③將樣品鍍上一層碳原子,

以增加鑄型的強(qiáng)度和穩(wěn)定性;④將鑄型置「酸池中，破壞樣品，只留下金屬鑄型;⑤將鑄型漂

洗后置「載網(wǎng)上進(jìn)行電子顯微鏡觀(guān)測(cè)。

11.掃描隧道顯微鏡(scanningtunnelingmicroscope,STM)：掃描隧道顯微鏡使用電子學(xué)

的措施，用一種金屬針尖在在樣品表面掃描。當(dāng)針尖和樣品表面距離很近時(shí)(Inm如下)，針

尖和樣品表面之間會(huì)產(chǎn)生電壓。當(dāng)針尖沿X和Y方向在樣品表面掃描時(shí)，就會(huì)在針尖和樣品

表面第一層電子之間產(chǎn)生電子隧道。該顯微鏡設(shè)計(jì)的沿Z字形掃描，可保持電流的恒定。

因此，針尖的移動(dòng)是隧道電流的作用，并且可以反應(yīng)在熒光幕上。持續(xù)的掃描可以建立起原

子級(jí)辨別率的表面像。

12.酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(enzymecytochemistry)：將細(xì)胞內(nèi)的酶與底物相互作用，再將酸反

應(yīng)的產(chǎn)物作為反應(yīng)物質(zhì)，在的日勺作用部位進(jìn)行捕捉，使其在顯微鏡下具有可見(jiàn)性。這種在疇

作用下產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物，經(jīng)捕捉反應(yīng)來(lái)間接證明酶定位的反應(yīng)稱(chēng)為隨日勺細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。

酶口勺細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)包括兩個(gè)反應(yīng)：第一反應(yīng)是酹作用「底物的反應(yīng)，稱(chēng)酹反應(yīng)，形成

的產(chǎn)物稱(chēng)為初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物;第二反應(yīng)是捕捉劑與初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物的作用，稱(chēng)捕捉反應(yīng)，產(chǎn)生最

終反應(yīng)產(chǎn)物：

I-----------酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)--------------------1

I酶+條件初級(jí)捕捉劑I

底物---------------------反應(yīng)產(chǎn)物------------------最終反應(yīng)產(chǎn)物

（酶反應(yīng)）（捕捉反應(yīng)）

13.免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence）：將免疫學(xué)措施（抗原抗體特異結(jié)合）與熒光標(biāo)識(shí)技

術(shù)結(jié)合起來(lái)研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的措施。由于熒光素所發(fā)日勺熒光可在熒光顯微鏡

下檢出，從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定位。

14.免疫電鏡（immunoclcctronmicroscopy）：將抗體進(jìn)行特殊標(biāo)識(shí)后用電子顯微鏡觀(guān)測(cè)免

疫反應(yīng)的成果。根據(jù)標(biāo)識(shí)措施H勺不一樣，分為免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫的標(biāo)技術(shù)和免疫膠體

金技術(shù)。如免疫鐵蛋白技術(shù)是將含鐵蛋白通過(guò)一種低分子量的雙功能試劑與抗體結(jié)合，成為

一種雙分子復(fù)合物,它既俁留抗體H勺免疫活性,又具有電鏡下可見(jiàn)的高電子密度鐵離子美鍵，

因此用鐵蛋白標(biāo)識(shí)的抗體可通過(guò)電鏡免疫化學(xué)的措施在電鏡下定位細(xì)胞中的抗原。由于某些

固定技術(shù)（如鉞酸固定）對(duì)抗體抗原的結(jié)合有干擾，因此應(yīng)采取較為溫和的樣品制備措施。

15.染色體分選（chromosomesorting）：用流式細(xì)胞計(jì)分選特定的染色體，基本過(guò)程與細(xì)胞

分選相似。不一樣的是，要用帶有熒光標(biāo)識(shí)的DNA探針同特異染色體結(jié)合，使待分選的染色

體帶上標(biāo)識(shí)。在染色體分選中，使用的探針是同所感愛(ài)好染色體互補(bǔ)的寡聚核甘酸，這種探

針也可同熒光染料偶聯(lián)。將結(jié)合有熒光染料的探針同染色體一起溫育，使探針同特異染色體

雜交，形成穩(wěn)定的雜交體，這樣染色體就被帶上了熒光標(biāo)識(shí)，稀釋后送入流式細(xì)胞計(jì)的流室,

然后與細(xì)胞分選過(guò)程一樣將特異H勺染色體分選出來(lái)。

16.顯微分光光度術(shù)(microspectrophotometry)：將顯微鏡技術(shù)與分光光度計(jì)結(jié)合起來(lái)H勺技

術(shù)。它以物質(zhì)分子的光吸取、熒光發(fā)射和光反射特性作為測(cè)定基礎(chǔ)，可用來(lái)分析生物樣品

細(xì)微構(gòu)造中的化學(xué)成分，同步進(jìn)行定位、定性和定量。

17.顯微熒光光度術(shù)(microfluoromeli'y)：運(yùn)用顯微分光光度計(jì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)原有能發(fā)光的物質(zhì)

或?qū)?xì)胞內(nèi)多種化學(xué)成分用不?樣的熒光經(jīng)熒光探針標(biāo)識(shí)后進(jìn)行定位、定性和定量地測(cè)定，

稱(chēng)為顯微熒光光度術(shù)，也稱(chēng)細(xì)胞熒光光度術(shù)(cytofluorometry)。它是一種微觀(guān)而敏捷的措

施，對(duì)于研究細(xì)胞的構(gòu)造、功能及其變化具有重要意義。

18核磁共振技術(shù)(nuclearmagneticresonance,NUR)：核磁共振技術(shù)可以直接研究溶液

和活細(xì)胞中相對(duì)分子質(zhì)量較小(20,000道爾頓如下)口勺蛋白質(zhì)、核酸以及其他分子的構(gòu)造，

而不損傷細(xì)胞。

核磁共振的基本原理是：原子核有自旋運(yùn)動(dòng)，在恒定口勺磁場(chǎng)中，自旋的原子核將繞外

加磁場(chǎng)作回旋轉(zhuǎn)動(dòng)，叫進(jìn)動(dòng)(precession)。進(jìn)動(dòng)有一定的頻率，它與所加磁場(chǎng)的強(qiáng)度成正

比。如在此基礎(chǔ)上再加一種固定頻率的電磁波，并調(diào)整外加磁場(chǎng)的強(qiáng)度，使進(jìn)動(dòng)頻率與電

磁波頻率相似。這時(shí)原子咳進(jìn)動(dòng)與電磁波產(chǎn)生共振，叫核磁共振。核磁共振時(shí)，原子核吸

取電磁波的J能量，記錄下的吸取曲線(xiàn)就是核磁共振譜(則R-spectrum)。由于不一樣分子中

原子核日勺化學(xué)環(huán)境不一樣，將會(huì)有不一樣的共振頻率，產(chǎn)生不一樣的I共振譜。記錄這種波

譜即可判斷該原子在分子中所處日勺位置及相對(duì)數(shù)目，用以進(jìn)行定后分析及分子量日勺測(cè)定，

并對(duì)有機(jī)化合物進(jìn)行構(gòu)造分析

19.細(xì)胞工程技術(shù)(cellengineering)：細(xì)胞工程技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)口勺交叉領(lǐng)域，

重要運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)的原理和措施，結(jié)合工程學(xué)的技術(shù)手段，按照人們預(yù)先H勺設(shè)計(jì)，有計(jì)劃

地變化或發(fā)明細(xì)胞遺傳性的技術(shù)。包括體外大量培養(yǎng)和繁殖細(xì)胞，或獲得細(xì)胞產(chǎn)品、或運(yùn)用

細(xì)胞體自身。重要內(nèi)容包括：細(xì)胞融合、細(xì)胞生物反應(yīng)器、染色體轉(zhuǎn)移、細(xì)胞器移植、基因

轉(zhuǎn)移、細(xì)胞及組織培養(yǎng)。

20.原代培養(yǎng)(primaryculture)：原代培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即

進(jìn)行培養(yǎng)。因此，較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本

性質(zhì)，假如是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，一般把第一代至第十代以?xún)?nèi)的培養(yǎng)

細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)，最常用口勺原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。

21.愈傷組織(callus,culli)：植物受創(chuàng)傷后，在傷面新生日勺組織稱(chēng)為愈傷組織。其原因

是由于受創(chuàng)傷H勺刺激后，傷面附近的生活組織恢復(fù)了分裂機(jī)能，加速增生而將傷面愈合。在

植物組織培養(yǎng)中H勺愈傷組織是指植物細(xì)胞在組織培養(yǎng)過(guò)程中形成的無(wú)一定構(gòu)造H勺組織團(tuán)塊，

在合適的條件下，愈傷組織可再分化，形成芽、根，再生成植株。

22.細(xì)胞融合(cellfusion)：在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個(gè)不一樣基因型H勺細(xì)胞或原生質(zhì)體

融合形成一種雜種細(xì)胞?；具^(guò)程包括細(xì)胞融合形成異核體(helerokacpn)、異核體通過(guò)細(xì)

胞有絲分裂進(jìn)行核融合、最終形成單核的雜種細(xì)胞。

23.單克隆抗體技術(shù)(monoclonalantibodytechnique)：1975年英國(guó)科學(xué)家Milstein和

Kohler所發(fā)明，并獲得1984年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。它是符產(chǎn)生抗體日勺單個(gè)B淋巴細(xì)胞同腫瘤

細(xì)胞雜交，獲得既能產(chǎn)生抗體，又能無(wú)限增殖將雜種細(xì)胞，并以此生產(chǎn)抗體的技術(shù)。其原

理是：B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但在體外不能進(jìn)行無(wú)限分裂；而瘤細(xì)胞雖然可以在體外

進(jìn)行無(wú)限傳代，但不能產(chǎn)生抗體。將這兩種細(xì)胞融合后得到的J雜交瘤細(xì)胞具有兩種親本細(xì)

胞的特性。

24.顯微操作術(shù)(micromanipulation)：在顯微鏡下，用顯微操作裝置對(duì)細(xì)胞進(jìn)行解剖手術(shù)

和微量注射的技術(shù)屬顯微操作技術(shù)。顯微操作儀是在顯微鏡下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯微操作的裝置，

可用于細(xì)胞核移植、基因注入、染色體微切和胚胎切割等手術(shù)。

25.差速離心(differenlialcentrifugation)：重要是采取逐漸提高離心速度的措施分離

不一樣大小的細(xì)胞器。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮

在上清液中。搜集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類(lèi)推，

到達(dá)分離不一樣大小顆粒的目的。

26.等密度離心(isodcnsitycentrifugation)：等密度離心分離樣品重要是根據(jù)被分離樣

品的密度。在這種離心分離措施中，要用介質(zhì)產(chǎn)生一種密度梯度，這種密度梯度覆蓋了待

分離物質(zhì)的密度，這樣，通過(guò)離心使不一樣密度的顆粒懸浮到對(duì)應(yīng)的介質(zhì)密度區(qū)。在這種梯

度離心中，顆粒的密度是影響最終位置的惟一原因，因此用這種措施分離顆粒，重要是根據(jù)

被分離顆粒H勺密度差異。只要被分離顆粒間的密度差異不小于1%就可用此法分離。

蔗糖或者甘油(它們的最大密度是1.3g/cn?)一般可用于分離膜結(jié)合的細(xì)胞器，如高爾基

體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體和線(xiàn)粒體。在等密度梯度離心中蔗糖或甘油的梯度的作用與移動(dòng)區(qū)帶離

心中梯度原理是不一樣的，在移動(dòng)區(qū)帶離心中梯度的惟一目的是減少樣品的擴(kuò)散，雖然是

在離心管H勺底部，顆粒日勺密度也比介質(zhì)大。相反，在等密度梯度離心中，使用的密度是足以

制止顆粒移動(dòng)日勺密度，當(dāng)顆粒到達(dá)與自身密度相似H勺密度區(qū)時(shí)就會(huì)停留在該區(qū)域。

離心分離密度不小于L3g/cn?的I樣品，如DNA、RNA,需要使用密度比蔗糖和甘油大H勺

介質(zhì)。重金屬鹽氯化鈉(CsCl)是目前使用的最佳小J離心介質(zhì)，它在離心場(chǎng)中可自行調(diào)整形成

濃度梯度，并能保持穩(wěn)定。在氯化鈉形成艮I密度梯度中，離心管頂部的密度為：L65g/cm\

底部為：1.75g/cni\因?yàn)镈NA的密度是1.70g/cm\會(huì)停留在離心管的中部。

27.層析分離技術(shù)(chromatography)：根據(jù)蛋白質(zhì)H勺形態(tài)、大小和電荷的不一樣而設(shè)計(jì)H勺物

理分離措施。多種不一樣為層析措施都波及共同的基本恃點(diǎn):有一種固定相和流動(dòng)相，當(dāng)?shù)?/p>

白質(zhì)混合溶液(流動(dòng)相)通過(guò)裝有珠狀或基質(zhì)材料11勺管或柱(固定相)時(shí)，由于混合物中各組份

在物理化學(xué)性質(zhì)(如吸引力、溶解度、分子的形狀與大小、分子的電荷性與親和力)等方面的

差異使各組分在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分派而得以分開(kāi)。流動(dòng)相的流動(dòng)取決于引力和壓力，

而不需要電流。用層析法可以純化得到非變性歐I、天然狀態(tài)的蛋白質(zhì)。層析的措施諸多，其

中凝膠過(guò)濾層析、離子互換層析、親和層析等是目前最常用的層析措施。

28.凝膠過(guò)濾層析(gelfiltrationchromatography)：凝膠過(guò)濾層析法乂稱(chēng)排阻層析或分

子篩措施，重要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化。層析柱中口勺

填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀構(gòu)造物質(zhì)，多是交聯(lián)FI勺聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類(lèi)物質(zhì)，使蛋白

質(zhì)混合物中H勺物質(zhì)按分子大小H勺不一樣進(jìn)行分離。

29.親和層析(affinitychromatography)：將具有特殊構(gòu)造的親和分子制成固相吸附劑放

置在層析柱中，當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過(guò)層析柱時(shí)，與吸附劑具有親和能力II勺蛋白質(zhì)就

會(huì)被吸附而滯留在層析柱中。那些沒(méi)有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附，直接流出，從而與被

分離的蛋白質(zhì)分開(kāi)，然后選用合適的洗脫液，變化結(jié)合條件將被結(jié)合日勺蛋白質(zhì)洗脫卜來(lái),

這種分離純化蛋白質(zhì)的措施稱(chēng)為親和層析。

在生物分子中有些分子的特定構(gòu)造部位可以同其他分子相互識(shí)別并結(jié)合，如酶與底物H勺

識(shí)別結(jié)合、受體與配體的:只別結(jié)合、抗體與抗原H勺識(shí)別結(jié)合，這種結(jié)合既是特異的，乂是可

逆的，變化條件可以使這種結(jié)合解除。生物分子間的這種結(jié)合能力稱(chēng)為親和力。親和層析

就是根據(jù)這樣的I原理設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)分離純化措施。

30.基因工程(geneengineering)：基因工程是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和

微生物學(xué)的現(xiàn)代措施為手段，將不一樣來(lái)源口勺基因(DNA分子)，按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體

外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以變化生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生

產(chǎn)新產(chǎn)品?；蚬こ碳夹g(shù)為基因的構(gòu)造和功能的研究提供了有力的手段。

31.基因克隆(genecloning)：是70年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)具有革命性的研究技術(shù)，可概括

為：分、切、連、轉(zhuǎn)、選。“分”是指分離制備合格日勺待澡作H勺DNA,包括作為運(yùn)載體時(shí)DNA

和欲克隆日勺目日勺DNA；“切”是指用序列特異日勺限制性?xún)?nèi)切酶切開(kāi)載體DNA,或者切出目口勺基

因；“連”是指用DNA連接酶將目的DNA同載體DNA連接起來(lái)，形成重組的DNA分子；“轉(zhuǎn)”

是指通過(guò)特殊H勺措施將重組的DNA分子送入宿主細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制和擴(kuò)增；“選”則是從宿主

群體中挑選出攜帶有重組DNA分子的個(gè)體?；蚬こ碳夹g(shù)的兩個(gè)最基本的特點(diǎn)是分子水平上

的操作和細(xì)胞水平上的體現(xiàn)，而分子水平上H勺操作即是體外重組的過(guò)程，實(shí)際上是運(yùn)用工具

酶對(duì)DNA分子進(jìn)行“外科手術(shù)

32.基因敲除(geneknockout)：是指一種有功能II勺基因通過(guò)基因工程措施完全被剔除的人

工突變技術(shù)。人為時(shí)將小鼠日勺某?種有功能R勺基因完全缺失的技術(shù)就稱(chēng)為基因敲除技術(shù)。這

項(xiàng)技術(shù)是MarrioCapecchi于八十年代末在Utah大學(xué)發(fā)展起來(lái)的。試驗(yàn)的動(dòng)物一般是小鼠,

被敲除了功能基因的小鼠就稱(chēng)為敲除小鼠(knockoutmice)?；蚯贸夹g(shù)已成功地應(yīng)用于

幾種遺傳病口勺研究，還可用于研究特定基因日勺細(xì)胞生物學(xué)活性以及研究發(fā)育調(diào)控口勺基因作用

等，因此是研究基因功能的一項(xiàng)非常有用的技術(shù)?；蚯贸且惶捉M合技術(shù)，包括基因重:

組、細(xì)胞分離培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因等

33.核體(karyoplast)：細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞松弛素處理后，排出帶有少許細(xì)胞質(zhì)，并包有一層細(xì)

胞膜的細(xì)胞核。

34.胞質(zhì)體(cytoplast):細(xì)胞經(jīng)處理排核后剩余『、J包有細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)部分。

35.細(xì)胞MJ培養(yǎng)(cellculture)：在體外模擬體內(nèi)H勺生理環(huán)境，培養(yǎng)從機(jī)體取下的細(xì)胞，并

使之生存和生長(zhǎng)口勺技術(shù)。

36.貼壁生長(zhǎng)：分散的細(xì)胞懸液在培養(yǎng)瓶中很快(兒卜分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi))就貼附在瓶壁上，

稱(chēng)為細(xì)胞貼壁。

37.接觸克制(contactinhibition)：正常細(xì)胞生長(zhǎng)到彼此相互接觸,其運(yùn)動(dòng)和分裂活動(dòng)

都將停止的現(xiàn)象。

38.群體培養(yǎng)(massculture)：將具有一定數(shù)量的細(xì)胞懸液置干培養(yǎng)瓶中.讓細(xì)胞貼壁生

長(zhǎng)，匯合后生成單層細(xì)胞。

39.克隆培養(yǎng)(clonalculture)：將高度稀釋日勺細(xì)胞懸液置于游離日勺培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞貼壁

后彼此距離較遠(yuǎn)，通過(guò)生長(zhǎng)增殖，每個(gè)細(xì)胞形成一種生長(zhǎng)集落。

40.原代培養(yǎng)(primaryculture)：直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器宜后立即進(jìn)行的培養(yǎng)。

有人將1T0代的細(xì)胞培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。

41.繼代培養(yǎng)(subculture)：在體外培養(yǎng)的條件下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行的持續(xù)傳代培養(yǎng)

42.單層細(xì)胞培養(yǎng)：分散成原球形的細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展并開(kāi)始有絲分裂，逐漸形成致

密的細(xì)胞單層，這種培養(yǎng)方式稱(chēng)單層細(xì)胞培養(yǎng)。

43.轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)：為制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計(jì)的措施，使用大容量的圓培養(yǎng)瓶，在培養(yǎng)過(guò)程中不停

的轉(zhuǎn)動(dòng)，使培養(yǎng)細(xì)胞一直處在懸浮狀態(tài)之中而不貼壁。

44.原代細(xì)胞(primarycell)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。

45.傳代細(xì)胞(subculturecell):適應(yīng)在體外培養(yǎng)的條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞。

46.細(xì)胞株(cellstrain):通過(guò)選擇法或克隆日勺措施從原代培養(yǎng)日勺細(xì)胞群中篩選出日勺具有特

定性質(zhì)或標(biāo)志口勺細(xì)胞群，在培養(yǎng)過(guò)程中其特性一直保持不變。

47.細(xì)胞系(cellline):在培養(yǎng)條件卜.可進(jìn)行無(wú)限分裂的細(xì)胞群。

48.轉(zhuǎn)化：正常細(xì)胞在某種因子時(shí)作用卜.發(fā)生突變而具有癌性日勺細(xì)胞。

培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型：原代細(xì)胞和繼代細(xì)胞；細(xì)胞株和細(xì)胞系；

細(xì)胞培養(yǎng)物的名稱(chēng)：克隆、外植體和愈傷組織

49.克隆(clone)：山單一祖先通過(guò)無(wú)性繁殖產(chǎn)生H勺遺傳性一致的I后裔群體。

50.外植體(explant):取自成體或胚胎，用于體外培養(yǎng)的組織和細(xì)胞群

二、填空題

1.物質(zhì)通過(guò)紫外線(xiàn)照射后發(fā)出熒光H勺現(xiàn)象可分為兩種狀況，第一種是自發(fā)熒光,如葉綠素、

血紅素等經(jīng)紫外線(xiàn)照射后，能發(fā)出紅色的熒光:第二種是誘發(fā)熒光,即物體經(jīng)熒光染料染色

后再通過(guò)紫外線(xiàn)照射發(fā)出熒光。

2.寫(xiě)出一種細(xì)胞融合的J物理性措施也融合技術(shù),舉出化學(xué)融合所需H勺兩種化學(xué)物質(zhì)滅活H勺仙

臺(tái)病毒和聚乙二醉，PEG。

3.染色體DNA的三種功能元件為著絲粒,端粒,復(fù)制起點(diǎn)。異染色質(zhì)可分為構(gòu)成型異染色

質(zhì)，兼型異染色質(zhì)

4定量的細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)有顯微分光光咬分析,遺式細(xì)胞儀等。寫(xiě)出兩種特殊顯微鏡H勺名

稱(chēng)，如熒光顯微鏡，掃描隧道顯微鏡，相差顯微鏡。

5.自發(fā)熒光是指生物體內(nèi)有些物質(zhì)受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出的熒光。寫(xiě)出五種自身熒光

物質(zhì)：FAD>FMN、NADH、木質(zhì)素、嚇眼。

三、選擇題

1.通過(guò)選擇性或克隆形式從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群體稱(chēng)

作B。

A.CellLineB.CellStrainC.CellLibraryD.Others

2.研究DNA在細(xì)胞中的代謝，常用的同位素標(biāo)識(shí)物有D。

A.14C-戊糖B.32P-磷酸C.15N-鳥(niǎo)噂吟D.3H-胸腺嗓嚏

3.細(xì)胞融合的）誘導(dǎo)劑重要有A°

A.PEG（聚乙二醇）B.TMV（煙草花葉病）病毒

C.亞硝酸-誘變劑D.PHV（植物凝集素）-外圍培養(yǎng)

4.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)B<1

A.可用來(lái)研究細(xì)胞生理和細(xì)胞多種功能

B.首先用胰蛋白酹將動(dòng)物或植物組織進(jìn)行酶解，游離出單細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)

C.用小牛血清配制的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

D.培養(yǎng)過(guò)程可用一般光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀(guān)測(cè)

5.在雜交瘤技術(shù)中，B。

A.B淋巴細(xì)胞與B淋巴瘤細(xì)胞融合，目的是克制瘤細(xì)胞無(wú)限生長(zhǎng)

B.在培養(yǎng)基中加入氨基喋吟可選出雜交細(xì)胞

C.氨基喋吟可克制瘤細(xì)胞口勺蛋白質(zhì)合成

D.氨基喋吟能導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞無(wú)限分裂

6.光鏡同電鏡比較，下列各項(xiàng)中，D是不對(duì)日勺的。

A.電鏡用的是電子束，而不是可見(jiàn)光

B.電鏡樣品要在真空中觀(guān)測(cè)，而不是暴露在空氣中

C.電鏡和光鏡的樣品都需要用化學(xué)染料染色

I).用于電鏡的標(biāo)本要徹底脫水，光鏡則不必

7.在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中要用C來(lái)進(jìn)行觀(guān)測(cè)。

A.相差顯微鏡B.熒光顯微鏡C.倒置顯微鏡D.一般光學(xué)顯微鏡

8.在遞增細(xì)胞勻漿液11勺離心轉(zhuǎn)速過(guò)程中最先沉淀下來(lái)的是_￡_。

A.核糖體B.線(xiàn)粒體C.未破碎的D.微粒體細(xì)胞核

9.單個(gè)植物細(xì)胞在體外通過(guò)誘導(dǎo)并培養(yǎng)成為完整的植物小植株H勺試驗(yàn)最佳地證明了

D。

A.細(xì)胞是構(gòu)成有機(jī)體日勺基本單位

B.一切有機(jī)體均來(lái)自于細(xì)抱

C.細(xì)胞是有機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ)

D.細(xì)胞具有遺傳的全能性

10.顯微鏡的辨別率與下列哪一項(xiàng)無(wú)關(guān)？D

A.光源的波長(zhǎng)入B.物鏡的鏡口角。C.介質(zhì)的折射率nD.放大倍數(shù)

四、問(wèn)答題

1.動(dòng)物體細(xì)胞克隆有什么意義?

答：動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)口勺成功對(duì)生命科學(xué)的J發(fā)展具有重要的I推動(dòng)作用，不僅證明了動(dòng)

物依J體細(xì)胞具有全能性，而且有巨大日勺應(yīng)用前景。例如結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)藥物。目前諸

多藥物如胰島素?、生長(zhǎng)激素、表皮生長(zhǎng)因子等都是動(dòng)物細(xì)胞體內(nèi)正常的代謝物，某些病人由

于產(chǎn)生這些物質(zhì)H勺功能發(fā)生缺陷，導(dǎo)致了對(duì)應(yīng)疾病H勺發(fā)生，目前H勺治療措施就是給這些病人

注射此類(lèi)藥物。由于此類(lèi)藥物自身是來(lái)自動(dòng)物的某些臟器，制備這種藥物就需要大量的動(dòng)物

提供臟器，因此成本就很高，假如通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)把對(duì)應(yīng)U勺基因轉(zhuǎn)入到哺乳動(dòng)物，讓動(dòng)物的

乳汁生產(chǎn)具有療效的蛋白質(zhì)就會(huì)降低成本，再結(jié)合動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)，將這種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物

大量無(wú)性繁殖克隆，就可以大大提高產(chǎn)量，大幅度降低成本，同步也保證了所轉(zhuǎn)基因的穩(wěn)定。

該項(xiàng)技術(shù)也可以生產(chǎn)供動(dòng)物自身和人類(lèi)器官移植口勺動(dòng)物，處理器官捐贈(zèng)長(zhǎng)期缺乏的問(wèn)題。

此外，動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)在基因構(gòu)造和功能、基因治療、遺傳病及人類(lèi)衰老等歐I研究方面

都具有巨大的潛力。

2.〃么是細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)注意哪些問(wèn)題？

答：在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從機(jī)體中取出的細(xì)胞，并使之生存和生長(zhǎng)的技術(shù)

為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究措施中最有價(jià)值的技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)可

以獲得大量U勺細(xì)胞，也可通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)研究細(xì)胞U勺運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞I向信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝

等。細(xì)胞培養(yǎng)的突出特點(diǎn)是在離體條件下觀(guān)測(cè)和研究細(xì)胞生命活動(dòng)的規(guī)律.培養(yǎng)中的細(xì)胞不

受體內(nèi)復(fù)雜環(huán)境H勺影響，人為變化培養(yǎng)條件（如物理、化學(xué)、生物等外界原因的變化）即可進(jìn)

一步觀(guān)測(cè)細(xì)胞在單原因或多原因日勺影響下冏生理功能變化。然而，細(xì)胞在體外環(huán)境日勺局限性,

又使細(xì)胞的形態(tài)與功能不能與體內(nèi)的同類(lèi)細(xì)胞完全等同.

體外培養(yǎng)細(xì)胞必需注意三個(gè)環(huán)節(jié)：物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)、生存環(huán)境和廢物的排除。

體外培養(yǎng)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)是由培養(yǎng)基提供的。培養(yǎng)基一般具有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氨基酸、

維生素和微最元素。一般培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)基是合成培養(yǎng)基，它具有細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)

成分，不過(guò)在使用合成培養(yǎng)基時(shí)需要添加某些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清為

主。這是因?yàn)檠逯芯哂卸喾N促細(xì)胞生長(zhǎng)因子和某些生物活性物質(zhì)。

由于血清中具有某些不明成分，對(duì)于特殊目的細(xì)胞培養(yǎng)是不利歐I。為此，研窕人員正在

探索無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞的條件，并已經(jīng)獲得某峻進(jìn)展。由于機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)一般需要不一樣

的細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)整，因此在無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)仍然需要添加必要的因子，包括：促細(xì)胞生長(zhǎng)因

子(如EGF)、促貼附物(如層粘連蛋白)和其他活性物質(zhì)(如轉(zhuǎn)鐵蛋白)。無(wú)血清培養(yǎng)排除了有

血清培養(yǎng)時(shí)血清中不明原為的干擾，使試驗(yàn)成果愈加可靠。

體外細(xì)胞培養(yǎng)必需模擬體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境。環(huán)境原因重要是指：無(wú)菌環(huán)境、合適H勺溫

度、一定的滲透壓和氣體環(huán)境。氣體重要有兩種：02和CO2。后者對(duì)于維持細(xì)胞培養(yǎng)液時(shí)

酸堿度十分重要。

活體內(nèi)生長(zhǎng)的細(xì)胞所產(chǎn)生的代謝物和廢物通過(guò)一定的系統(tǒng)進(jìn)行運(yùn)用和排除。體外培養(yǎng)細(xì)

胞產(chǎn)生H勺代謝物和廢物積累在培養(yǎng)液中，因此定期更換培養(yǎng)液，對(duì)于體外細(xì)胞培養(yǎng)也是至關(guān)

重要的。

3.什么是細(xì)胞系和細(xì)胞枕？

答：原代培養(yǎng)物經(jīng)初次傳代成功后即為細(xì)胞系(cellline),由原先存在于原代培養(yǎng)物中

的細(xì)胞世系所構(gòu)成。假如不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱(chēng)為有限細(xì)胞系(finitecell

line),如可以持續(xù)培養(yǎng)，則稱(chēng)為持續(xù)細(xì)胞系(continuouscellline),培