AbMole小講堂丨即用型Tribromoethanol（阿佛?。┰诳蒲袆?dòng)物實(shí)驗(yàn)中的作用麻醉機(jī)理與配制方案Tribromoethanol（三溴乙醇，AbMole，M5358）是一種在科研領(lǐng)域具有重要應(yīng)用的化合物，尤其在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉中發(fā)揮著重要的作用。Tribromoethanol（阿佛?。┑淖饔脵C(jī)制主要涉及對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制。研究表明，Tribromoethanol（CASNo.：75-80-9）通過結(jié)合γ-氨基丁酸A型受體（GABAA受體）的跨膜結(jié)構(gòu)域（TMD）并增強(qiáng)GABAA的活性來發(fā)揮麻醉功能[1]。GABA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，增強(qiáng)其功能可降低神經(jīng)元的興奮性，從而產(chǎn)生劑量依賴性的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛效果。此外，Tribromoethanol還可激活TASK-3鉀通道并調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞膜電位，從而產(chǎn)生麻醉效果[2]。在小鼠和大鼠等嚙齒動(dòng)物模型中，Tribromoethanol（阿佛?。┏Ｍㄟ^腹腔注射給藥，劑量范圍從125mg/kg至500mg/kg[3-5]。麻醉起效時(shí)間＜5min，維持時(shí)間在30~50min范圍內(nèi)。Tribromoethanol的準(zhǔn)確溶解與規(guī)范配制是其成功應(yīng)用于科研實(shí)踐的關(guān)鍵前提。Tribromoethanol（三溴乙醇，AbMole，M14641）一般在實(shí)驗(yàn)中常用的濃度為1.25％或2.5％。以2.5％的濃度為例：首先將三溴乙醇粉末以1:1（w/v）的比例溶解于叔戊醇中，充分震蕩后得到澄清透明母液。此儲(chǔ)液需立即經(jīng)0.22μM濾膜進(jìn)行過濾除菌，以降低后續(xù)腹腔注射可能引發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹膜炎的風(fēng)險(xiǎn)。隨后，將上述母液按1:40的比例用無菌生理鹽水稀釋，即可得到濃度為2.5%的工作液。整個(gè)配制過程需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則。由于配制好的工作液對(duì)光和空氣極為敏感，見光易分解，因此必須用鋁箔包裹或置于棕色瓶中，在2-8°C條件下避光保存。在使用前，需將溶液恢復(fù)至室溫并確保完全溶解、無結(jié)晶；正式實(shí)驗(yàn)前強(qiáng)烈建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定最佳劑量。例如，對(duì)于小鼠，2.5%工作液的Tribromoethanol常用腹腔注射劑量為15-20μL/g體重，但考慮到小鼠周齡、建模方式、小鼠種系的差異，應(yīng)圍繞推薦用量設(shè)置梯度實(shí)驗(yàn)。上述流程，是Tribromoethanol發(fā)揮麻醉效應(yīng)的關(guān)鍵因素。此外，還有無菌即用型阿佛?。═ribromoethanolforreadyuse，M5358，AbMole）可直接用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腹腔注射，無需上述復(fù)雜的配制程序。對(duì)于即用型阿佛丁，一般推薦麻醉劑量小鼠按30μl/g計(jì)算，大鼠按25ml/kg計(jì)算。同樣，麻醉劑量根據(jù)不同品系、不同周齡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)略有差異，可提前按照20~30μl/g從低劑量開始進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定最終麻醉劑量。適量無菌分裝后，2-8℃避光可保存1年或于室溫存放不超過3個(gè)月。如出現(xiàn)結(jié)晶，待恢復(fù)室溫（可于30℃下）全部溶解后再使用。范例詳解StemCellResTher.2025Sep26;16(1):511.山東省干細(xì)胞工程技術(shù)研究中心的科研團(tuán)隊(duì)在上述論文中發(fā)現(xiàn)了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）可通過抑制鐵死亡修復(fù)順鉑（CDDP，cisplatinum）誘導(dǎo)的小鼠血-睪屏障（BTB）損傷并恢復(fù)生殖功能。實(shí)驗(yàn)中給小鼠腹腔注射CDDP后，出現(xiàn)睪丸組織形態(tài)異常、生精細(xì)胞排列紊亂、精子數(shù)量和活力下降，BTB通透性增加且相關(guān)蛋白表達(dá)下調(diào)，同時(shí)鐵死亡相關(guān)指標(biāo)異常，而CDDP處理后24小時(shí)尾靜脈注射hUC-MSCs可逆轉(zhuǎn)上述損傷，鐵死亡抑制劑Fer-1也能模擬此效果，體外受精實(shí)驗(yàn)顯示hUC-MSCs處理組胚胎形成率恢復(fù)正常。在上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的操作中，科研人員使用了由AbMole提供的即用型2,2,2-Tribromoethanol（阿佛丁，AbMole，M2223）/products/tribromoethanol-for-ready-use.html，作為動(dòng)物的麻醉劑。即在實(shí)驗(yàn)第14天用于小鼠麻醉，劑量為240mg/kg（腹腔注射），三溴乙醇既能減少小鼠痛苦、符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理，又能保障順利解剖采集睪丸、附睪和精子樣本，避免組織損傷，對(duì)后續(xù)組織學(xué)分析、蛋白檢測(cè)、精子質(zhì)量檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的采集有重要意義[6]。EvansbluepermeabilityassayforBTBintegrity.BluefluorescenceindicatesDAPI-stainednuclei,whileredfluorescencecorrespondstoEvansbluestaining參考文獻(xiàn)及鳴謝[1]Q.Chen,M.M.Wells,T.S.Tillman,etal.,StructuralBasisofAlcoholInhibitionofthePentamericLigand-GatedIonChannelELIC,Structure(London,England:1993)25(1)(2017)180-187.[2]A.Luethy,J.D.Boghosian,R.Srikantha,etal.,HalogenatedEther,Alcohol,andAlkaneAnestheticsActivateTASK-3TandemPorePotassiumChannelsLikelythroughaCommonMechanism,Molecularpharmacology91(6)(2017)620-629.[3]RobertEMeyer,RichardE%JLabanimalFish,Areviewoftribromoethanolanesthesiaforproductionofgeneticallyengineeredmiceandrats,34(10)(2005)47-52.[4]WilliamAHill,JacquelynTTubbs,ChristopherLCarter,etal.,RepeatedadministrationoftribromoethanolinC57BL/6NHsdmice,52(2)(2013)176-179.[5]ArleneMcDowell,JessicaA.Fothergill,AzeemKhan,etal.,Acyclodextrinformulationtoimproveuseoftheanesthetictribromoethanol(Avertin?),JournalofPharmacyandBioalliedSciences6(1)(2014).[6]X.Liu,X.Wang,X.Zhang,etal.,Humanumbilicalcordmesenchymal