ICS71.100.10Y42DB37化妝品中a-羥基酸的測定高效液相色譜法山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB37/T3030—2017本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省化工標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院、山東省食品藥品檢驗研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張娟、霍艷敏、劉桂亮、張艷俠、鄭紅、公丕學(xué)、盧蘭香、別梅。工DB37/T3030—2017化妝品中α-羥基酸的測定高效液相色譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高效液相色譜測定化妝品中酒石酸、乙醇酸、蘋果酸、乳酸和檸檬酸五種α-羥基酸的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于護(hù)膚膏霜、洗面奶(膏)、潤膚乳液、化妝水等化妝品中酒石酸、乙醇酸、蘋果酸、乳酸和檸檬酸五種α-羥基酸的測定。本標(biāo)準(zhǔn)檢出限：酒石酸0.1g/kg、乙醇酸0.1g/kg、蘋果酸0.1g/kg、乳酸0.12g/kg、檸檬酸0.12g/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法試樣用水超聲提取，經(jīng)正己烷萃取除雜質(zhì)，以高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，以保留時間定性，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水，其它試劑和材料主要包括：a)甲醇：色譜純；b)正己烷；c)磷酸二氫銨；d)磷酸：優(yōu)級純；e)0.1mol/L磷酸二氫銨緩沖溶液：稱取11.503g磷酸二氫銨于1000mL燒杯，加水950mL,溶解，用磷酸調(diào)pH至2.45,轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶，用水定容；f)標(biāo)準(zhǔn)品：DL-酒石酸(CAS:133-37-9)、乙醇酸(CAS:79-14-1)、DL-蘋果酸(CAS:6915-15-7)、乳酸(CAS:50-21-5)、檸檬酸(CAS:77-92-9),純度≥99.0%;g)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：分別準(zhǔn)確稱取100mg(精確至0.1mg)酒石酸、乙醇酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸于100.00mL容量瓶中，用水溶解，定容，配成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，4℃保存，可使用3個月；h)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：將標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制成200μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水依次稀釋成20μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用前配制；i)微孔濾膜：水相，孔徑0.45μm。DB37/T3030—201725儀器和設(shè)備儀器和設(shè)備主要包括：a)高效液相色譜儀：具二極管陣列檢測器或紫外檢測器；b)天平：感量0.01g、0.1mg;c)渦旋混合器；d)超聲波清洗器；e)離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min;f)pH計：精度0.01。6分析步驟6.1試樣的處理準(zhǔn)確稱取混勻試樣2g(精確至0.01g)于25mL具塞刻度管中，加入15mL水，渦旋混合1min,超聲提取15min,用水定容，混勻、靜置，取10mL上清液轉(zhuǎn)入50mL具塞離心管中，加入10mL正己烷萃取除雜質(zhì)，在10000r/min離心5min,棄去正己烷層，水相再用5mL正己烷萃取一次，重復(fù)上述操作，水相經(jīng)微孔濾膜過濾，供高效液相色譜測定。6.2液相色譜參考條件色譜參考條件：a)色譜柱：AtlantisT3C18250mm×4.6mm(i,d),5μm,或性能相當(dāng)者；b)流動相：0.1mol/L磷酸二氫銨緩沖溶液；c)流速：0.8mL/min;d)柱溫：35℃;e)進(jìn)樣量：50μL;f)檢測波長：紫外檢測器檢測波長設(shè)為214nm。標(biāo)樣譜圖見附錄A。6.3測定將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照濃度由低到高的順序進(jìn)樣測定，以各組分峰面積對其濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣經(jīng)測定，以各組分保留時間定性，外表法定量。經(jīng)測定超出標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后再進(jìn)樣分析。6.4結(jié)果計算6.4.1試樣中每種組分的含量按式(1)計算：式中：Wi——試樣中某種組分的含量，單位為克每千克(g/kg);C——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中該組分的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣溶液的體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。6.4.2計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。3在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。4DB37/T3030—2017(資料性附錄)a-羥基酸標(biāo)樣的色譜圖0.0500.0400.0300.0200.0100.0002——乙醇酸；4——乳酸；5——檸檬酸；6——L-蘋果酸。2.00