ICS67.050

CCSX04

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T2783—2022

食用向日葵抗列當(dāng)生理小種

溫室鑒定技術(shù)規(guī)程

StandardprotocolfortheidentificationofOrobancheresistancein

confectionsunflowerusinginoculationmethodingreenhouses

2022-08-30發(fā)布2022-09-30實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T2783—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC20）歸口。

本文件起草單位：三瑞農(nóng)業(yè)科技股份有限公司提出、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)、巴彥淖爾市產(chǎn)品質(zhì)量計(jì)量檢

測(cè)中心（巴彥淖爾市天賦河套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)研究中心）、內(nèi)蒙古自治區(qū)質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化研究院。

本文件主要起草人：JIUHUANFENG(馮九煥)、魏志恒、劉劼、張鍵、李新、卞偉勛、賈向春、黃勇、

張文兵、李昊佼、常敏、安燕珂、張之為、涂偉偉、靳曉梅。

I

DB15/T2783—2022

食用向日葵抗列當(dāng)生理小種溫室鑒定技術(shù)規(guī)程

1范圍

件規(guī)定了食用向日葵抗列當(dāng)生理小種溫室鑒定技術(shù)的術(shù)語和定義、設(shè)備和材料、抗性鑒定流程及步

驟等。

本文件適用于溫室盆栽條件下食用向日葵品種對(duì)不同生理小種列當(dāng)?shù)目剐澡b定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB4407.2經(jīng)濟(jì)作物種子第2部分：油料類

GB/T15063復(fù)合肥料

NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則

SN/T1144列當(dāng)屬檢疫鑒定方法

3術(shù)語和定義

SN/T1144界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

向日葵列當(dāng)OrobanchecumanaWallr.

專性寄生于向日葵根部，莖不分枝、花序疏松狀、花冠呈藍(lán)紫色的一種全寄生列當(dāng)。本文件中的列

當(dāng)特指向日葵列當(dāng)。

生理小種physiologicalrace

病原物種內(nèi)的一個(gè)分類單元，一種病原物的某個(gè)生理小種僅與該病原物寄主植物的某個(gè)或少數(shù)品

種發(fā)生相互作用。

列當(dāng)生理小種的鑒別寄主（鑒別系）differentiallines

含有不同列當(dāng)抗性基因，能夠鑒別列當(dāng)不同生理小種的向日葵品種或品系。

滅活inactivation

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DB15/T2783—2022

用高溫高壓方法殺滅試驗(yàn)所用的土壤中或器具（如塑料營(yíng)養(yǎng)缽，篩網(wǎng)）上的列當(dāng)種子、植物種子、

害蟲（及蟲卵）、病菌、病毒等生物的處理方法。

4設(shè)備和材料

本試驗(yàn)宜選用以下設(shè)備：

a)滅菌鍋(熱水罐)：設(shè)計(jì)溫度147℃；容積1.37m3，最高允許工作壓力：0.3MPa；

b)加厚塑料營(yíng)養(yǎng)缽：規(guī)格φ27.5cm×25cm（耐高溫高壓滅菌）；

c)不銹鋼微量藥勺：勺頭直徑約0.6cm；

d)篩網(wǎng)：孔徑0.18mm～0.25mm；

e)微量離心管：2mL。

5抗性鑒定流程及步驟

向日葵抗列當(dāng)生理小種鑒定流程

向日葵抗列當(dāng)生理小種鑒定流程見圖1。

列當(dāng)純化向日葵抗性鑒定

列當(dāng)采集培養(yǎng)土準(zhǔn)備培養(yǎng)土準(zhǔn)備

列當(dāng)篩選列當(dāng)接種純化列當(dāng)接種

鑒別系種植供試向日葵種植

生生理小種判定列當(dāng)統(tǒng)計(jì)分析

理

小已知生理小種列當(dāng)收獲

種接種向日葵抗列當(dāng)生理小種判定

驗(yàn)

證無抗性鑒別系

已知生理小種列當(dāng)擴(kuò)繁

圖1向日葵抗列當(dāng)生理小種鑒定流程

列當(dāng)采集

選擇全國(guó)向日葵列當(dāng)發(fā)生嚴(yán)重地區(qū)的地塊，采集植株生長(zhǎng)健壯、完全成熟的列當(dāng)，并單株收獲裝入

牛皮紙袋中，每一地塊采集30個(gè)單株。采集的列當(dāng)要充分晾曬干燥。

列當(dāng)清選

將列當(dāng)蒴果壓碎后過篩網(wǎng)（直徑0.18mm～0.25mm）去除雜質(zhì)，過篩后的列當(dāng)種子裝入2mL微量離

心管中。篩選不同列當(dāng)樣品時(shí)應(yīng)更換一次性手套和篩網(wǎng)。用過的篩網(wǎng)滅活后可重復(fù)使用。

培養(yǎng)土準(zhǔn)備

培養(yǎng)土由大田耕層土﹕細(xì)沙﹕基質(zhì)﹕珍珠巖=1﹕1﹕1﹕0.2體積比混合而成。裝入加厚塑料營(yíng)養(yǎng)缽

（φ27.5cm×25cm）至五分之四高度。大田耕層土與塑料營(yíng)養(yǎng)缽均需高溫高壓滅活（滅活溫度：121℃；

時(shí)間：20min），避免列當(dāng)種子污染；或使用未被列當(dāng)污染的大田耕層土。

2

DB15/T2783—2022

列當(dāng)接種

在加厚塑料營(yíng)養(yǎng)缽的土中心位置挖約5cm深的凹坑，用不銹鋼微量藥勺（勺頭直徑約0.6cm）取列

當(dāng)種子一勺（約10mg）放入凹坑中，用四周土與列當(dāng)種子充分?jǐn)嚢杌靹?；或把列?dāng)種子倒入自封袋，

加適量土顛倒混勻，倒入凹坑中，用四周土鋪平。澆透水。

向日葵種植與管理

向日葵種植與管理采用以下方法：

a)供試品種：樣品純度符合GB4407.2規(guī)定；

b)播種與定苗：將向日葵種子播種于塑料營(yíng)養(yǎng)缽中心位置，深度約2cm處，每盆2粒，待長(zhǎng)至

四葉期保留1株；

c)溫室管理：常規(guī)條件下管理，最適溫度25℃（最低15℃，最高30℃）、相對(duì)濕度約40%、

光照強(qiáng)度約3000Lux，光照時(shí)間14h/d左右；

d)水肥管理：澆水應(yīng)一次性澆透，不宜太頻繁。應(yīng)避免土壤濕度處于持續(xù)水飽和狀態(tài)下，否則將

會(huì)導(dǎo)致列當(dāng)種子無法萌發(fā)或列當(dāng)芽浸水壞死?，F(xiàn)蕾期前后施加適當(dāng)水溶肥粉劑（總養(yǎng)分大于等

于60%，N:P:K=1:1:1，每盆施3g）,確保向日葵正常生長(zhǎng)。肥料使用應(yīng)符合GB/T15063和

NY/T496規(guī)定。

列當(dāng)純化

5.7.1標(biāo)準(zhǔn)鑒別系品種選擇選用附錄A中抗不同生理小種列當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)鑒別系，品種純度應(yīng)符合GB

4407.2規(guī)定。

5.7.2列當(dāng)純化方法見附錄B。

列當(dāng)寄生情況調(diào)查

5.8.1將已純化的不同生理小種（D、E、F、F＋）列當(dāng)各接種最少20盆，接種方法見5.4。

5.8.2將待測(cè)向日葵品種按不同生理小種列當(dāng)各種植10盆。同時(shí)各生理小種分別種植高感品系（如

B117、SH361）10盆作為對(duì)照，以驗(yàn)證列當(dāng)種子活力。依照5.5進(jìn)行待測(cè)向日葵品種的種植與管理。

5.8.3通?，F(xiàn)蕾后期列當(dāng)即陸續(xù)出土（約出苗后45d）。于向日葵開花后期（約70d～80d），統(tǒng)計(jì)

每盆出土列當(dāng)數(shù)目并記錄，然后剪除列當(dāng)莖稈進(jìn)行無害化處理。

5.8.4向日葵種植完成后，培養(yǎng)土、加厚塑料營(yíng)養(yǎng)缽均應(yīng)進(jìn)行滅活處理。

向日葵品種抗性評(píng)價(jià)

向日葵品種對(duì)不同列當(dāng)生理小種的抗性按照表1判定，表述如下：

a)感生理小種D：在D、E、F、F＋小種上均寄生；

b)抗生理小種D：在D小種上未長(zhǎng)，在E、F、F＋小種上均寄生；

c)抗生理小種E：在D、E小種上均未長(zhǎng)，在F、F＋小種上均寄生；

d)抗生理小種F：在D、E、F小種上均未長(zhǎng)，在F＋小種上寄生。

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表1向日葵品種對(duì)不同列當(dāng)生理小種的抗性判定標(biāo)準(zhǔn)

純化的向日葵列當(dāng)

待測(cè)向日葵品種抗性結(jié)果

D小種E小種F小種F+小種

品種1長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)感D

品種2未長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)抗D

品種3未長(zhǎng)未長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)抗E

品種4未長(zhǎng)未長(zhǎng)未長(zhǎng)長(zhǎng)抗F

注1：實(shí)際試驗(yàn)中，針對(duì)接種某一列當(dāng)生理小種（如，E小種）的品種，若有弱小的“零星”列當(dāng)發(fā)生，且AD≤0.3，

則判定為抗性品種；若0.3＜AD＜1.0，需重新鑒定。

注2：寄生程度(AD)=寄生的列當(dāng)數(shù)量/向日葵植株總數(shù)

4

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

國(guó)際通用抗列當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)鑒別系

表A.1規(guī)定了國(guó)際通用抗列當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)鑒別系。

表A.1國(guó)際通用抗列當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)鑒別系

生理小種標(biāo)準(zhǔn)鑒別系抗性基因參考文獻(xiàn)

高感B117、AD-66－[1]

A71NCAI01、KruglikA-41Or1[1]

BJdanov8281Or2[1]

C1532、1589、RecordOr3[1]

DS-1358、1506Or4[1]

EP-1380、NR5、1507Or5[1]，[2]

FP96、LC1093Or5,or6,or7[3]，[4]

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B

B

附錄B

（規(guī)范性）

列當(dāng)生理小種純化

B.1列當(dāng)生理小種鑒定

B.1.1培養(yǎng)土準(zhǔn)備見5.3。

B.1.2將采集的單株列當(dāng)種子依次接種于表B.1中向日葵標(biāo)準(zhǔn)鑒別系，目前國(guó)際上通用的列當(dāng)生理小

種的向日葵標(biāo)準(zhǔn)鑒別系及其抗性反應(yīng)見附錄A。每個(gè)鑒別系接種5盆，列當(dāng)接種見5.4，種植與管理見5.

5。

B.1.3根據(jù)列當(dāng)寄生情況，判定該單株列當(dāng)?shù)募?jí)別，將每組最高級(jí)別鑒別系上寄生的列當(dāng)混合收獲，

相應(yīng)低級(jí)別列當(dāng)即可于未成熟前剪除，減少傳播。具體如下：

a)生理小種D：1532寄生，S1358、1507和P96均未長(zhǎng)，收獲1532寄生的列當(dāng)；

b)生理小種E：1532和S1358寄生，1507和P96均未長(zhǎng)，收獲S1358寄生的列當(dāng)；

c)生理小種F：1532、S1358和1507寄生，P96未長(zhǎng)，收獲1507寄生列當(dāng)；

d)生理小種F+:1532、S1358、1507、P96均寄生，收獲P96上寄生的列當(dāng)。

B.1.4試驗(yàn)完成后，培養(yǎng)土、加厚塑料營(yíng)養(yǎng)缽均應(yīng)進(jìn)行滅活處理。

表B.1向日葵標(biāo)準(zhǔn)鑒別系對(duì)不同生理小種列當(dāng)?shù)姆磻?yīng)

向日葵鑒別寄主（系）

列當(dāng)生理小種

1532（抗C）S1358（抗D）1507（抗E）P96（抗F）

D小種長(zhǎng)未長(zhǎng)未長(zhǎng)未長(zhǎng)

E小種長(zhǎng)長(zhǎng)未長(zhǎng)未長(zhǎng)

F小種長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)未長(zhǎng)

F+小種長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)

B.2純化列當(dāng)擴(kuò)繁

鑒于上述鑒別系上收獲的列當(dāng)種子量較少，將收獲的已知級(jí)別的列當(dāng)種子依次接種到無抗性鑒別

系上（如B117）進(jìn)行擴(kuò)繁，每個(gè)生理小種接種10盆。

B.3擴(kuò)繁列當(dāng)驗(yàn)證

將擴(kuò)繁的列當(dāng)種子利用鑒別系重新進(jìn)行二次接種鑒定（重復(fù)B.1）核驗(yàn)其準(zhǔn)確性。成熟后收獲的列

當(dāng)即為純化的特定生理小種列當(dāng)，4℃下可保存5～10年，用于向日葵品種抗列當(dāng)鑒定。

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參考文獻(xiàn)

[1]Vranceanu,AV，TudorVA，StoenescuFM，Pirv