Q/LB.□XXXXX-XXXXICSFORMTEXT?????CCSFORMTEXT點擊此處添加CCS號甘肅省地方標準DBFORMTEXT62/T2528.3—2025 代替DB62/T2528.3—20144FORMTEXT動物疫病監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集FORMTEXTThespecificationofanimalepidemicsurveillance

Part3:Sampling2025-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布2025-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施FORMTEXT甘肅省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布62STYLEREF標準文件_文件編號DB62/T2528.3—2025STYLEREF標準文件_文件編號DB62/T2528.3—2025前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB62/T2528.3—2014《動物疫病監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集》,本文件與DB62/T2528.3-2014相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——更改了規(guī)范性引用文件；——增加了術(shù)語和定義“血清”、“實驗室診斷”、“血清學(xué)試驗”、“排泄物”、“人畜共患病”和“無害化處理”；——更改了術(shù)語和定義“樣品”和“病料”內(nèi)容；——增加了術(shù)語和定義“監(jiān)測”；——增加了“采樣原則”相關(guān)內(nèi)容；——更改了“采樣要求”相關(guān)內(nèi)容；——增加了器具和試劑中的“采樣器具滅菌處理”相關(guān)要求；——更改了“試劑”相關(guān)內(nèi)容；——更改“離心方法”為“血清樣品處理”；——更改了“血清要求”相關(guān)要求；——將附錄C并入附錄A；——將附錄D更改為附錄C，并增加了飼養(yǎng)方式、樣品送檢部門、檢測項目等相關(guān)內(nèi)容；——將附錄E更改為附錄D，并增加了檢測項目的內(nèi)容。本文件由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實施。本文件由甘肅省動物衛(wèi)生標準化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：甘肅省動物疫病預(yù)防控制中心、榆中縣動物疫病預(yù)防控制中心、禮縣城關(guān)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站、民勤縣畜牧獸醫(yī)工作站。本文件主要起草人：豆玲、鄭紅飛、趙雯、牛瓊、郭勝、楊子昊、宋建國、楊成虎、孫明。本文件及其所替代文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2014年首次發(fā)布為DB62/T2528.3—2014；——本次為第一次修訂。本文件由甘肅省動物疫病預(yù)防控制中心解釋。動物疫病監(jiān)測規(guī)范第3部分:樣品采集范圍本文件規(guī)定了動物疫病監(jiān)測樣品的采集技術(shù)。本文件適用于動物疫病病原學(xué)和血清學(xué)監(jiān)測所需樣品的采集、保存和運輸工作。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB10213一次性使用醫(yī)用橡膠檢查手套GB/T18635動物防疫基本術(shù)語GB19082醫(yī)用一次性防護服GB19083醫(yī)用防護口罩技術(shù)要求NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范NY/T561動物炭疽診斷技術(shù)NY/T767高致病性禽流感消毒技術(shù)規(guī)范YY/T1642醫(yī)用一次性防護帽術(shù)語和定義GB/T18635界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1樣品sample取自動物或環(huán)境，擬通過檢驗反映動物個體、群體或環(huán)境有關(guān)狀況的材料或物品。3.2病料specimen來自患病或可疑患病動物的被（待）檢樣品。示例：全血、血清、棉拭子、分泌液、組織和臟器等。3.3監(jiān)測monitor是指調(diào)查動物群體中某種疫病或病原的流行情況。3.4血清學(xué)試驗serologicaltest借助抗體在體外（與抗原）的種種血清學(xué)反應(yīng)進行的各種檢查。3.5排泄物excreta-動物體排出的廢物，如糞尿、嘔吐物等，有時也包括排到體外的分泌物（如鼻涕等），是病原體污染環(huán)境的重要媒介。3.6人畜共患病zoonosis在脊椎動物和人之間自然傳播和相互感染的疾病。采樣原則4.1先排除后采樣凡發(fā)現(xiàn)急性死亡的動物，若懷疑患有炭疽時，不得解剖。應(yīng)先按NY/T561中的規(guī)定采集血樣，進行血液抹片鏡檢。確定不是炭疽后，方可解剖采樣。4.2合理選擇采樣方法4.2.1應(yīng)根據(jù)采樣的目的、內(nèi)容和要求合理選擇樣品采集的種類、數(shù)量、部位與抽樣方法。4.2.2實驗室診斷樣品，應(yīng)選擇癥狀典型或病變明顯或有患病征兆的畜禽、疑似污染物和排泄物等。4.3采樣時限采集死亡動物的病料，應(yīng)于動物死亡后2h內(nèi)采集。無法完成時，夏天不得超過6h，冬天不得超過24h。4.4無菌操作采樣所用刀、剪、鑷子、器皿、注射器、針頭等采樣用具應(yīng)事先嚴格滅菌，確保每種樣品單獨采集。4.5減少應(yīng)激和損害活體動物采樣時，應(yīng)避免過度刺激或損害動物，也應(yīng)避免對采樣人員造成危害。4.6生物安全防護采樣人員應(yīng)嚴格遵守生物安全操作的相關(guān)規(guī)定，嚴防人獸共患病感染；同時，應(yīng)做好環(huán)境消毒以及動物或組織的無害化處理，避免污染環(huán)境，防止疫病傳播。采樣前的準備5.1采樣要求──根據(jù)監(jiān)測目的，采集不同類型和不同數(shù)量的樣品；──采樣人員必須是獸醫(yī)專業(yè)技術(shù)人員，熟悉動物防疫的有關(guān)法律規(guī)定，熟練掌握采樣工作程序、采樣操作技術(shù)、采樣器具的使用，掌握正確的釆樣方法；──采樣前應(yīng)做好個人防護。5.2器具和試劑5.2.1器具5.2.1.1血清學(xué)監(jiān)測樣品采集器具采樣箱、鑷子、75％酒精棉球、一次性注射器（采血器）、真空采血管、樣品容器（如塑料離心管、生物安全自封袋等）。5.2.1.2病原學(xué)監(jiān)測樣品采集器具無菌棉簽、剪刀、鑷子、采樣探杯、扁桃體采集器、穿刺針、離心管盒或樣品凍存盒（1.5mL、5mL離心管專用）等。5.2.1.3冷藏容器冷藏箱、生物冰袋。5.2.1.4采樣器具滅菌處理a）手術(shù)刀、剪刀、鑷子、穿刺針等用具經(jīng)高壓蒸汽（103.43kPa）或煮沸滅菌30min，臨用時用75%酒精擦拭或進行火焰滅菌處理；b）器皿（玻璃器具、陶制等）應(yīng)經(jīng)高壓蒸汽（103.43kPa）30min或經(jīng)160℃干烤2h滅菌；或置于1%～2%碳酸氫鈉水溶液中煮沸10min～15min，用無菌紗布擦干，無菌保存?zhèn)溆?；c）注射器和針頭可使用一次性針頭和注射器。5.2.2試劑應(yīng)根據(jù)所采樣品的種類和要求，準備不同類型的樣品保存液，并適量分裝。保存液配置詳見附錄A。5.3記錄和防護材料5.3.1記錄材料自粘防水標簽、簽字筆、防水記號筆、采樣記錄表、記錄本、不同規(guī)格生物安全自封塑料袋等。5.3.2防護材料符合GB19083技術(shù)要求的醫(yī)用防護口罩、符合GB10213技術(shù)要求的醫(yī)用橡膠手套、符合GB19082技術(shù)要求的防護服、符合GB19083技術(shù)要求的防護口罩、符合YY/T1642技術(shù)要求的防護帽等。樣品采集6.1基本要求采樣時應(yīng)按NY/T767規(guī)定的方法做好消毒工作，同種動物采樣應(yīng)先到養(yǎng)殖場，后到散養(yǎng)戶。采樣過程要注意無菌操作，避免交叉污染。采樣后的手套、防護服、口罩、防護帽、包裝袋等廢棄物應(yīng)進行無害化處理。6.2血清學(xué)監(jiān)測樣品的采集6.2.1禽血樣品的采集6.2.1.1雛禽心臟采血手持采血針，平行頸椎從胸前口插入回抽見有回血時，即把注射器活塞向外拉使血液流入注射器。每只采集全血1.5mL～2.5mL。用消毒棉球按壓止血。6.2.1.2成年禽心臟采血6.2.1.2.1側(cè)臥保定采血助手抓住禽兩翅及兩腿，右側(cè)臥保定，在手指觸心搏動明顯處，或胸骨脊前端至背部下凹處連線的1/2處消毒，垂直或稍向前方刺入2cm～3cm，回抽見有回血時，即把注射器活塞向外抽使血液流入注射器。采集體積和消毒方法同6.2.1.1。6.2.1.2.2仰臥保定采血胸骨朝上，用手指壓離嗉囊，露出胸前口，用裝有長針頭的注射器，將針頭沿其鎖骨俯角刺入，順著體中線方向水平穿行，直到刺入心臟。采集體積和消毒方法同6.2.1.1。6.2.1.3翅靜脈采血在翅下靜脈處消毒，手持注射器，將注射器針頭從無血管處向翅靜脈叢剌入，見有血液回流，即把注射器活塞向外拉使血液流入注射器。采集體積和消毒方法同6.2.1.1。6.2.2豬血樣品的采集6.2.2.1耳緣靜脈采血站立保定，用力在耳根捏壓靜脈的近心端。手指輕彈耳緣后，用酒精棉球反復(fù)涂擦耳靜脈使血管怒張，將針頭斜面朝上，呈15°角沿血管刺入，見有血液回流，緩慢抽取所需量血液或接入真空采血管。每頭采集全血3mL～5mL。用消毒棉球按壓止血。6.2.2.2前腔靜脈采血6.2.2.2.1站立保定采血將豬的頭頸斜上拉至仰起，偏向一側(cè)，選擇頸部最低凹處，從右側(cè)向心臟方向刺入，回抽見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血管。采集體積和消毒方法同6.2.2.1。6.2.2.2.2仰臥保定采血把豬的前肢向后方拉直，針頭穿刺部位在胸骨端與耳基部連線上胸骨端旁開2cm的凹陷處，向后內(nèi)方與地面呈60℃角刺入2cm～3cm，當進入約2cm時可一邊剌入一邊回抽針管內(nèi)芯，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血管。采集體積和消毒方法同6.2.2.1。6.2.3牛、羊血樣品的采集6.2.3.1牛、羊頸靜脈采血將動物保定，稍抬頭頸，于頸靜脈溝上1/3與中1/3交界部剪毛消毒，一手拇指按壓采血部位下方頸靜脈溝血管，促使頸靜脈怒張，另一手執(zhí)針頭，與皮膚呈45°角由下向上方剌入血管，血液順器壁流入容器內(nèi)，防止氣泡產(chǎn)生。待血量達到要求后（3mL～5mL），拔下針頭，用消毒棉球按壓針眼，輕按止血。6.2.3.2牛尾靜脈采血將牛尾向上提起，在離尾根10cm左右（第4、5尾椎骨交界處）中點凹陷處，先用酒精棉球消毒，然后將采血針頭垂直刺入（約1cm深），見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血管。采集體積和消毒方法同6.2.2.1。6.2.3.3乳房靜脈采血奶牛、奶山羊可選乳房靜脈采血，在乳房基部前側(cè)消毒隆起的乳房靜脈，針頭以10°～15°向后肢方向快速刺入，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血管。采集體積和消毒方法同6.2.2.1。6.2.4血清樣品的處理全血樣品采集完畢后，不應(yīng)立即放入冰盒中，應(yīng)在室溫下（20℃）傾斜30°放置2h～4h（防止暴曬），環(huán)境溫度較低時可在恒溫培養(yǎng)箱20℃～37℃放置1h，待全血凝固并析出血清后，用移液器吸出注入1.5mL或5mL離心管，必要時可低速離心（1000g離心10min～15min）分離出血清。做病毒中和試驗的血清和抗體檢測的血清應(yīng)避免使用化學(xué)防腐劑（如疊氮鈉、硼酸等）。若需長時間保存，可將血清分裝置于-20℃以下保存，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。6.2.5樣品編號按照附錄B規(guī)定的方法編號。6.2.6血清要求無溶血、無腐敗、清亮，體積滿足留樣和檢測要求。6.3病原學(xué)檢測樣品的采集6.3.1采樣方法6.3.1.1禽咽喉拭子、鼻腔拭子和肛/泄殖腔拭子采集取無菌棉簽，插入畜禽咽喉頭、鼻腔2cm～3cm處或泄殖腔輕輕擦拭轉(zhuǎn)動2～3圈，取出，立即浸入保存液（見附錄A）中，密封低溫保存。6.3.1.2羽髓采集拔取羽髓豐滿的翅羽或身上其他部位大羽，將含有羽髓的羽根部分分別剪下收集于小試管內(nèi)，于每管內(nèi)滴加蒸餾水2～3滴（羽髓豐滿時也可不加），用玻璃棒將羽根擠壓于試管底，使羽髓浸出液流至管口，用滴管將其吸出。6.3.1.3豬扁桃體樣品釆集從活體豬采取扁桃體樣品時，將待采樣豬只站立保定，將扁桃體采樣槍的采樣鉤緊靠扁桃體，快速扣動扳機取出扁桃體組織，放入消毒的離心管中，標記后冷藏送檢。6.3.1.4豬鼻腔拭子、咽拭子采集用滅菌棉簽蘸取豬鼻腔、咽喉分泌物，快速將拭子浸入保存液（見附錄A.2）中，密封、標記低溫保存。6.3.1.5豬肛拭子采集用滅菌棉簽插入肛門采集其內(nèi)容物和分泌物，快速將拭子浸入保存液（見附錄A.3）中，密封低溫保存。6.3.1.6牛、羊等咽食道分泌物（O-P液）樣品采集被檢動物在采前禁食（可飲少量水）12h，防止胃內(nèi)容物反流污染O-P液。采樣探杯在使用前應(yīng)在塑料桶盛裝的0.2%檸檬酸或1%～2%氫氧化鈉溶液中浸泡消毒5min，采樣前用接近動物體溫的清水沖洗探杯后使用，每采一頭/只動物樣品，探杯須按前述方法進行消毒和清洗。站立保定被采樣動物，將探杯經(jīng)口隨吞咽動作送入食道上部10cm～15cm處，來回抽動2～3次，將探杯拉出。取8mL～10mLO-P液，倒入含有等量0.5%水解乳蛋白/Earle’液（見附錄A.5）或磷酸鹽緩沖液(0.04mol/L、pH7.4)的滅菌廣口瓶中，充分搖勻加蓋封口，放冷藏箱及時送檢，不能及時送檢時，應(yīng)置于-30℃冷凍保存。6.3.1.7糞便樣品釆集6.3.1.7.1用于病毒檢驗糞便樣品分離病毒的糞便必須新鮮。少量采集時，用滅菌的棉簽從直腸深處或泄殖腔黏膜上蘸取糞便，并立即投入滅菌的試管內(nèi)密封，或在試管內(nèi)加入少量pH7.4的保存液（見附錄A.3）再密封。需采集較多量的糞便時，可將動物肛門周圍消毒后，用器械或用戴乳膠手套的手伸入直腸內(nèi)取糞便，也可用壓舌板插入直腸，輕輕用力下壓，刺激排糞，收集糞便。所收集的糞便應(yīng)裝入滅菌的容器，密封并貼上標簽，立即以冷藏狀態(tài)或經(jīng)冷凍送往實驗室。6.3.1.7.2用于細菌檢驗的糞便樣品采集用于細菌檢驗的糞便樣品，應(yīng)在動物使用抗菌藥物之前，從直腸或泄殖腔內(nèi)采集新鮮糞便。方法與供病毒檢驗的方法相同。糞便樣品較少時，可投入無菌緩沖鹽水或肉湯試管內(nèi)；較多量的糞便則可裝入滅菌容器內(nèi)，粘貼標簽后冷藏送實驗室。6.3.1.7.2用于寄生蟲檢驗的糞便樣品采集用于寄生蟲檢驗的糞便樣品，選擇新排出的糞便或戴PE手套直接從直腸內(nèi)采集，以保持蟲體或蟲體節(jié)片及蟲卵的固有形態(tài)，一般寄生蟲檢驗所用糞便量較多，需采取10g～30g新鮮糞便，大動物一般不少于60g，并應(yīng)從糞便的內(nèi)外各層采取。糞便樣品應(yīng)冷藏不凍結(jié)狀態(tài)保存。6.3.1.8血涂片制備用剪毛剪剪去家畜耳尖牛毛，針頭刺破耳尖，擠取一滴耳尖靜脈血于載玻片上，用推片將血液推成薄血涂片，并迅速晾干。6.3.2樣品編號按照附錄B規(guī)定的方法編號。6.4采樣記錄表的填寫樣品信息詳見附錄C，逐項填寫。所有表格填寫之前須仔細閱讀表格及下方的相關(guān)備注或填表說明。所填信息應(yīng)做到內(nèi)容完整、字跡清晰、整齊規(guī)范，不應(yīng)使用省略或簡易符號替代，不應(yīng)隨意對表格進行合并或刪除。送樣時，應(yīng)將采樣記錄表（附錄C）、匯總表電子版（附錄D）隨樣品一起送到實驗室。6.5包裝要求同一采樣點的同一類樣品應(yīng)置于同一個自封塑料袋中，用記號筆在自封袋外注明采樣點名稱、份數(shù)、編號范圍等信息。同一市縣區(qū)的樣品，按監(jiān)測疫病的種類集中于同一自封塑料袋中，在自封袋外應(yīng)注明縣區(qū)名稱、監(jiān)測疫病的種類、采樣點數(shù)量和樣品總數(shù)等信息。7樣品保存和運輸7.1樣品保存要求按照NY/T541中規(guī)定的要求進行。7.2樣品運輸?shù)臏囟纫髽悠窇?yīng)在特定的溫度下運輸：──若在4h內(nèi)送到省級實驗室，應(yīng)只用冰袋冷藏運輸；──超過4h，要作冷凍處理。應(yīng)先將樣品置于-30℃冷凍，然后再在保溫箱內(nèi)加冰袋運輸，凍結(jié)的樣品必須在24h內(nèi)送到；──24h不能送到省級實驗室，需要在運輸過程中保持-20℃以下。

附錄A（資料性附錄）A.1pH7.2，0.01mol/LPBS緩沖液的配制pH7.2，0.01mol/LPBS緩沖液的配制方法如下：a)配制25×PB：稱量2.74g磷酸氫二鈉和0.79g磷酸二氫鈉加蒸餾水至100mL。b)配制1×PBS：量取40mL25×PB，加入8.5g氯化鈉，加蒸餾水至1000mL。c)用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)pH至7.2。d)滅菌或過濾。e)PBS一經(jīng)使用，于4℃保存不超過3周。A.2pH7.4，0.01mol/LPBS緩沖液的配制pH7.4，0.01mol/LPBS緩沖液的配制方法如下：a)磷酸二氫鉀(KH2PO4)：0.27gb)磷酸氫二鈉(Na2HPO4)/12水磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)：1.42g/3.58gc)氯化鈉(NaCl)：8.00gd)氯化鉀(KCl)：0.20ge)配制方法：加去離子水約800mL，充分攪拌溶解。然后，用HCl溶液或NaOH溶液調(diào)pH至7.4，最后定容到1L。高溫高壓滅菌后室溫保存。A.3棉拭子用抗生素PBS（病毒保存液）的配制取A.2PBS液，喉拭子、鼻拭子和咽拭子用PBS液中加入青霉素(2000IU/mL)、鏈霉素(2mg/mL)、丁胺卡那霉素(1000IU/mL)、制霉菌素(1000IU/mL)；取A.1PBS液，糞便、肛拭子和泄殖腔拭子所用的PBS中，抗生素濃度應(yīng)提高5倍。A.4棉拭子保存管的制作采樣前將棉拭子用抗菌素PBS分裝至1.5mL帶蓋塑料離心管，每管中加A1PBS1mL。A.50.5%水解乳蛋白/Earle’的配制a)氯化鈉（NaCI）：6.8gb)氯化鉀（KCI）：0.4gc)氯化鈣（CaCI2）：0.2gd)硫酸鎂（MgSO4·7H2O）：0.2ge)磷酸二氫鈉（NaH2PO4）H2O：0.14gf)葡萄糖：1.0gg)10%酚紅：2.0mLh)水解乳白蛋白：5.0g加雙蒸水(ddH2O)至1000.0mL按配方稱取各成分并逐個溶解，最后加雙蒸水至1000mL。過濾除菌，或69kPa高壓蒸汽滅菌15min。室溫或4℃保存。

附