2024年5月臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)習(xí)題與答案一、單項(xiàng)選擇題1.以下哪種核酸分子在基因表達(dá)過(guò)程中起模板作用？A.tRNAB.mRNAC.rRNAD.miRNA答案：B。解析：mRNA即信使RNA，在基因表達(dá)過(guò)程中以DNA為模板轉(zhuǎn)錄而來(lái)，作為蛋白質(zhì)合成的模板，攜帶遺傳信息指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。tRNA主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸；rRNA是核糖體的組成成分；miRNA主要參與基因表達(dá)的調(diào)控。2.聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）中，引物的作用是？A.提供模板B.激活Taq酶C.引導(dǎo)DNA合成的起始D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：C。解析：引物是一小段單鏈DNA或RNA，它能與模板DNA特定區(qū)域互補(bǔ)結(jié)合，為DNA聚合酶提供起始合成的3'OH末端，引導(dǎo)DNA合成的起始。模板是待擴(kuò)增的DNA分子；Taq酶是一種耐熱的DNA聚合酶，不需要引物激活；引物主要作用并非穩(wěn)定反應(yīng)體系。3.用于檢測(cè)DNA甲基化的方法是？A.RTPCRB.Southern印跡C.亞硫酸氫鹽測(cè)序D.Western印跡答案：C。解析：亞硫酸氫鹽測(cè)序是檢測(cè)DNA甲基化的經(jīng)典方法，亞硫酸氫鹽能將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，通過(guò)測(cè)序可判斷哪些胞嘧啶發(fā)生了甲基化。RTPCR用于檢測(cè)RNA的表達(dá)水平；Southern印跡用于檢測(cè)DNA；Western印跡用于檢測(cè)蛋白質(zhì)。4.基因芯片技術(shù)的原理是基于？A.核酸分子雜交B.蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)相互作用C.抗原抗體反應(yīng)D.酶促反應(yīng)答案：A。解析：基因芯片技術(shù)是將大量已知序列的核酸片段固定在固相支持物上，與標(biāo)記的樣品核酸進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)來(lái)分析樣品中核酸的序列和表達(dá)情況，其原理基于核酸分子雜交。蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)相互作用主要用于研究蛋白質(zhì)間的關(guān)系；抗原抗體反應(yīng)是免疫檢測(cè)的基礎(chǔ)；酶促反應(yīng)在很多生物檢測(cè)中都有應(yīng)用，但不是基因芯片的原理。5.以下哪種技術(shù)可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)與DNA的相互作用？A.EMSAB.FISHC.qPCRD.ELISA答案：A。解析：電泳遷移率變動(dòng)分析（EMSA）是檢測(cè)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的常用技術(shù)，蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合后形成的復(fù)合物在電泳中的遷移率會(huì)發(fā)生改變，通過(guò)與未結(jié)合的DNA遷移率對(duì)比來(lái)判斷相互作用。熒光原位雜交（FISH）用于檢測(cè)染色體上特定核酸序列的位置；qPCR用于定量檢測(cè)核酸；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）用于檢測(cè)抗原或抗體。二、多項(xiàng)選擇題1.臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)中常用的核酸提取方法有？A.酚氯仿抽提法B.硅膠膜吸附法C.磁珠法D.堿裂解法答案：ABC。解析：酚氯仿抽提法是經(jīng)典的核酸提取方法，利用酚和氯仿的變性作用去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；硅膠膜吸附法是基于核酸在高鹽低pH條件下能吸附到硅膠膜上，在低鹽高pH條件下洗脫的原理；磁珠法是利用磁珠表面的功能基團(tuán)與核酸特異性結(jié)合，通過(guò)磁場(chǎng)分離核酸。堿裂解法主要用于質(zhì)粒DNA的提取，不是通用的核酸提取方法。2.熒光定量PCR的常用方法有？A.SYBRGreen法B.TaqMan探針?lè)–.MolecularBeacon法D.Scorpions法答案：ABCD。解析：SYBRGreen法是利用SYBRGreen熒光染料能與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)來(lái)定量PCR產(chǎn)物；TaqMan探針?lè)ㄊ抢镁哂袩晒鈽?biāo)記的特異性探針，在PCR過(guò)程中被Taq酶切割產(chǎn)生熒光信號(hào)；MolecularBeacon法是一種發(fā)夾結(jié)構(gòu)的熒光探針，與靶序列雜交后熒光信號(hào)增強(qiáng)；Scorpions法是將引物和探針結(jié)合在一起，在PCR過(guò)程中產(chǎn)生熒光信號(hào)，這些都是熒光定量PCR的常用方法。3.基因治療的策略包括？A.基因置換B.基因增補(bǔ)C.基因沉默D.自殺基因治療答案：ABCD。解析：基因置換是用正?；蛱鎿Q致病基因；基因增補(bǔ)是將正?；?qū)牖颊呒?xì)胞，以補(bǔ)償缺陷基因的功能；基因沉默是通過(guò)抑制基因的表達(dá)來(lái)治療疾病，如RNA干擾技術(shù)；自殺基因治療是將自殺基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，使其產(chǎn)生特定的酶，將無(wú)毒的前體藥物轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)，殺死腫瘤細(xì)胞。4.以下關(guān)于二代測(cè)序技術(shù)特點(diǎn)的描述，正確的有？A.高通量B.低成本C.短讀長(zhǎng)D.可以同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行測(cè)序答案：ABCD。解析：二代測(cè)序技術(shù)具有高通量的特點(diǎn)，能夠在一次測(cè)序反應(yīng)中同時(shí)對(duì)大量的DNA片段進(jìn)行測(cè)序；相比一代測(cè)序技術(shù)，成本大幅降低；讀長(zhǎng)相對(duì)較短，一般在幾百個(gè)堿基左右；還可以通過(guò)對(duì)不同樣本進(jìn)行不同的標(biāo)簽標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣本的同時(shí)測(cè)序。5.分子診斷實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制包括？A.分析前質(zhì)量控制B.分析中質(zhì)量控制C.分析后質(zhì)量控制D.人員培訓(xùn)與管理答案：ABCD。解析：分析前質(zhì)量控制主要包括樣本的采集、運(yùn)輸和保存等環(huán)節(jié)，確保樣本的質(zhì)量；分析中質(zhì)量控制涵蓋實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的各種質(zhì)量保證措施，如試劑質(zhì)量、儀器校準(zhǔn)等；分析后質(zhì)量控制包括結(jié)果的審核、報(bào)告的發(fā)放等；人員培訓(xùn)與管理也是質(zhì)量控制的重要方面，確保操作人員具備專業(yè)知識(shí)和技能，能正確進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。三、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本原理和主要步驟。PCR技術(shù)的基本原理是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的過(guò)程，在體外通過(guò)酶促反應(yīng)有選擇地大量擴(kuò)增特定的DNA片段。主要步驟包括：（1）變性：將反應(yīng)體系加熱至9495℃，使雙鏈DNA解旋成為單鏈，為引物與模板的結(jié)合提供條件。（2）退火：將溫度降低至引物的退火溫度（一般為5065℃），引物與單鏈模板DNA的特定互補(bǔ)序列結(jié)合。（3）延伸：將溫度升高至72℃，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，從引物的3'OH末端開(kāi)始，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈。以上三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán)，經(jīng)過(guò)多次循環(huán)后，目的DNA片段得到大量擴(kuò)增。2.簡(jiǎn)述核酸分子雜交的基本原理和常見(jiàn)類型。核酸分子雜交的基本原理是具有互補(bǔ)序列的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度、離子強(qiáng)度等），通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)形成雙鏈雜交分子。常見(jiàn)類型包括：（1）Southern印跡：用于檢測(cè)DNA，先將DNA進(jìn)行酶切、電泳分離，然后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交。（2）Northern印跡：用于檢測(cè)RNA，原理與Southern印跡類似，只是檢測(cè)的對(duì)象是RNA。（3）斑點(diǎn)雜交：將核酸樣品直接點(diǎn)樣在固相支持物上，然后與探針雜交，可用于核酸的定性和半定量分析。（4）原位雜交：在組織切片、細(xì)胞涂片等原位進(jìn)行核酸雜交，可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列的存在和分布。（5）熒光原位雜交（FISH）：用熒光標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行原位雜交，結(jié)合熒光顯微鏡觀察，可用于染色體上特定核酸序列的定位和檢測(cè)。3.簡(jiǎn)述熒光定量PCR中Ct值的含義和應(yīng)用。Ct值即循環(huán)閾值，是指在熒光定量PCR反應(yīng)中，熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。Ct值的應(yīng)用主要有：（1）定量分析：在一定范圍內(nèi)，Ct值與模板DNA的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系。通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的Ct值與拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)繪制曲線），可以根據(jù)樣品的Ct值計(jì)算出樣品中模板DNA的起始拷貝數(shù)。（2）判斷擴(kuò)增效率：如果擴(kuò)增效率接近100%，在不同起始模板量的情況下，Ct值的差值會(huì)符合理論值。通過(guò)比較不同樣品的Ct值變化，可以評(píng)估擴(kuò)增效率是否正常。（3）質(zhì)量控制：Ct值可以反映反應(yīng)體系的質(zhì)量和模板的質(zhì)量。如果Ct值過(guò)高，可能提示模板濃度過(guò)低、反應(yīng)體系存在抑制物等問(wèn)題；如果Ct值過(guò)低，可能存在污染等情況。四、論述題1.論述分子診斷技術(shù)在腫瘤診斷和治療中的應(yīng)用。分子診斷技術(shù)在腫瘤診斷和治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：（1）腫瘤的早期診斷：基因突變檢測(cè)：許多腫瘤的發(fā)生與特定基因的突變有關(guān)，如肺癌中的EGFR基因突變、乳腺癌中的BRCA1/2基因突變等。通過(guò)檢測(cè)這些基因突變，可以在腫瘤早期進(jìn)行篩查和診斷，有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤，提高治療效果。微小殘留病檢測(cè)：在腫瘤治療后，分子診斷技術(shù)可以檢測(cè)血液或組織中極少量的腫瘤細(xì)胞，即微小殘留病。這對(duì)于判斷腫瘤的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和指導(dǎo)后續(xù)治療具有重要意義。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)：除了傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物，分子診斷技術(shù)還可以檢測(cè)腫瘤相關(guān)的核酸標(biāo)志物，如循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）、循環(huán)腫瘤RNA（ctRNA）等。這些標(biāo)志物可以在血液中檢測(cè)到，具有無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)的優(yōu)點(diǎn)，可用于腫瘤的早期診斷和監(jiān)測(cè)。（2）腫瘤的分類和分型：基因表達(dá)譜分析：通過(guò)基因芯片或二代測(cè)序技術(shù)，可以分析腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)譜，將腫瘤進(jìn)行更精確的分類和分型。不同類型和亞型的腫瘤在治療方案和預(yù)后上可能存在差異，準(zhǔn)確的分類和分型有助于制定個(gè)性化的治療方案。染色體異常檢測(cè)：腫瘤細(xì)胞常伴有染色體的異常，如染色體易位、缺失、擴(kuò)增等。分子診斷技術(shù)可以檢測(cè)這些染色體異常，幫助確定腫瘤的起源和生物學(xué)行為。（3）腫瘤的治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估：治療反應(yīng)監(jiān)測(cè)：在腫瘤治療過(guò)程中，通過(guò)檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)變化或基因突變狀態(tài)，可以評(píng)估治療效果。例如，在靶向治療中，檢測(cè)靶點(diǎn)基因的突變情況可以判斷患者是否對(duì)靶向藥物敏感。預(yù)后評(píng)估：某些基因的表達(dá)水平或基因突變狀態(tài)與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。通過(guò)分子診斷技術(shù)檢測(cè)這些指標(biāo)，可以對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行評(píng)估，為臨床治療決策提供參考。（4）腫瘤的個(gè)性化治療：靶向治療：分子診斷技術(shù)可以檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中的特定靶點(diǎn)，如基因突變、蛋白表達(dá)異常等，為靶向治療藥物的選擇提供依據(jù)。例如，對(duì)于EGFR基因突變陽(yáng)性的肺癌患者，可以選擇EGFR靶向治療藥物，提高治療的針對(duì)性和有效性。免疫治療：分子診斷技術(shù)可以檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的免疫相關(guān)標(biāo)志物，如PDL1表達(dá)水平、微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)等，幫助篩選適合免疫治療的患者，提高免疫治療的療效。2.論述臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量保證體系。臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量保證體系是確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的關(guān)鍵，涵蓋分析前、分析中和分析后三個(gè)階段。（1）分析前質(zhì)量保證：人員培訓(xùn)：操作人員應(yīng)接受專業(yè)的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)，熟悉實(shí)驗(yàn)原理、操作流程和質(zhì)量控制要求，具備良好的職業(yè)道德和責(zé)任心。樣本采集：根據(jù)不同的檢測(cè)項(xiàng)目，選擇合適的樣本類型（如血液、組織、尿液等），并嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行采集。采集過(guò)程中要注意避免污染，確保樣本的質(zhì)量。樣本運(yùn)輸和保存：樣本應(yīng)在合適的條件下運(yùn)輸和保存，以保證核酸的穩(wěn)定性。例如，血液樣本一般需要在低溫下運(yùn)輸和保存，避免核酸降解。申請(qǐng)單填寫(xiě)：申請(qǐng)單應(yīng)詳細(xì)填寫(xiě)患者的基本信息、臨床診斷、檢測(cè)項(xiàng)目等，為檢驗(yàn)人員提供準(zhǔn)確的信息，便于結(jié)果的分析和解釋。（2）分析中質(zhì)量保證：試劑和耗材管理：選擇質(zhì)量可靠的試劑和耗材，并按照規(guī)定的條件儲(chǔ)存和使用。定期對(duì)試劑進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，確保試劑的有效性。儀器設(shè)備管理：對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行定期的校準(zhǔn)、維護(hù)和保養(yǎng)，確保儀器的性能穩(wěn)定。每次使用前要檢查儀器的運(yùn)行狀態(tài)，記錄儀器的使用情況。室內(nèi)質(zhì)量控制：在日常檢測(cè)中，應(yīng)使用質(zhì)量控制品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，監(jiān)控檢測(cè)過(guò)程的準(zhǔn)確性和精密度。通過(guò)繪制質(zhì)量控制圖，及時(shí)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)過(guò)程中的異常情況，并采取相應(yīng)的措施進(jìn)行糾正。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)：參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)，與其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對(duì)，評(píng)估本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)水平。對(duì)于室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果不滿意的項(xiàng)目，要進(jìn)行原因分析和整改。操作過(guò)程規(guī)范：操作人員應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，避免人為誤差。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要注意防止交叉污染，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。（3）分析后質(zhì)量保證：結(jié)果審核：檢驗(yàn)人員完成檢測(cè)后，要對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行認(rèn)真審核，包括結(jié)果的準(zhǔn)確性、合理