ICS65.020.99

CCSB39

12

天津市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB12/T1066—2021

光合細(xì)菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

Technicalregulationforproductionofphotosyntheticbacteria

2021-08-16發(fā)布2021-09-16實施

天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布

DB12/T1066—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由天津市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會提出并歸口。

本文件起草單位：天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院。

本文件主要起草人：張峰峰、謝鳳行、周可、趙瓊、李瑞環(huán)、趙玉潔、孫海波、王姝、張越、高晶

琳、張新建。

I

DB12/T1066—2021

光合細(xì)菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了光合細(xì)菌生產(chǎn)中所涉及的生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)備要求、生產(chǎn)技術(shù)流程、質(zhì)量檢測及儲存。

本文件適用于光合細(xì)菌生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB/T38579生物產(chǎn)品中光合細(xì)菌測定

NY/T527光合細(xì)菌菌劑

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

光合細(xì)菌菌劑inoculantofphotosyntheticbacteria

以沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、深紅紅螺菌（Rhodospirillumrubrum）、莢膜紅細(xì)

菌（Rhodobactercapsulatus）、球形紅細(xì)菌（Rhodobactersphaeroides）等為菌種，采用有機(jī)、無機(jī)原料，

經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制成的活菌制品。

3.2

原菌種theoriginalstrain

由單菌落分離純化，并在固體穿刺培養(yǎng)基上繁殖保存的菌種。

3.3

液體菌種theliquidstrain

原菌種在平板培養(yǎng)基上活化，挑取單菌落接種至裝有滅菌液體培養(yǎng)基的透明容器中，厭氧光照培養(yǎng)

的菌種。

4生產(chǎn)用水和設(shè)施設(shè)備

4.1生產(chǎn)用水

生產(chǎn)用水應(yīng)符合地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB5749中水質(zhì)要求。

4.2設(shè)施設(shè)備

4.2.1菌種保藏室

放置冰箱、冰柜，保存原菌種的房間。

1

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4.2.2菌種培養(yǎng)室

進(jìn)行培養(yǎng)基的配制和菌種的保種、培養(yǎng)及檢查等操作的房間。配有恒溫光照培養(yǎng)箱、pH計、電子天

平（精度0.01g）、分光光度計、光學(xué)顯微鏡（1000×）、照度計（精度0.1lx）、超凈工作臺、高壓

蒸汽滅菌鍋等。

4.2.3規(guī)模生產(chǎn)車間

進(jìn)行菌劑規(guī)模生產(chǎn)。配有光照設(shè)備和不同容量的透明發(fā)酵容器等。

5生產(chǎn)技術(shù)流程

5.1生產(chǎn)流程

生產(chǎn)流程應(yīng)按附錄A執(zhí)行。

5.2菌種質(zhì)量

用于發(fā)酵的菌種應(yīng)有菌種鑒定報告或菌株來源相關(guān)信息。

發(fā)酵之前需檢測菌種的有效活菌數(shù)和純度，不能有雜菌污染，菌數(shù)≥1×109CFU/mL，有效活菌數(shù)的

檢測應(yīng)按照GB/T38579中8.3要求操作。

5.3培養(yǎng)基

光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基配方見附錄B。保種固體培養(yǎng)基和計數(shù)培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基加入20g/L瓊脂粉。

5.4滅菌消毒

保種固體培養(yǎng)基、生產(chǎn)液體菌種培養(yǎng)基以及計數(shù)培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，滅菌條件為121℃～

125℃，0.1MPa～0.15MPa，滅菌20min～30min。

規(guī)模發(fā)酵容器用10mg/L～20mg/L高錳酸鉀溶液或有效氯濃度為0.1‰～0.3‰次氯酸鈉溶液等消毒

劑浸泡12h～24h，消毒后，用清水洗凈，檢查無雜藻雜物后，加水和培養(yǎng)基。也可加入水和培養(yǎng)基后

進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌條件為121℃～125℃，0.1MPa～0.15MPa，滅菌20min～30min。

5.5液體菌種培養(yǎng)

5.5.1容器

容器為200mL～500mL透明玻璃瓶，可高壓蒸汽滅菌。

5.5.2培養(yǎng)條件

從穿刺培養(yǎng)基接種原菌種到液體培養(yǎng)基中，光照強(qiáng)度4000lx～5000lx，光照周期14L:10D，培

養(yǎng)溫度25℃～35℃，靜置培養(yǎng)7d～10d。

5.5.3質(zhì)量檢測

配制計數(shù)培養(yǎng)基，利用平板涂布法測定菌數(shù)及雜菌率，按照GB/T38579中8.3要求操作。

菌數(shù)≥1×109CFU/mL，雜菌率＜0.1‰，即為合格菌種。

5.6規(guī)模發(fā)酵

5.6.1容器

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容器容積控制在0.5m3～2m3，高度≤40cm。可選用透光性強(qiáng)的塑料桶、塑料袋、玻璃缸等適合的

發(fā)酵容器。

5.6.2接種量

按發(fā)酵體積的10%～20%接種液體菌種。

5.6.3光照強(qiáng)度

光照強(qiáng)度5000lx～50000lx。

5.6.4溫度

發(fā)酵溫度20℃～40℃，最適發(fā)酵溫度25℃～35℃。

5.6.5發(fā)酵方式

光合細(xì)菌規(guī)模發(fā)酵應(yīng)密閉、厭氧。

5.6.6發(fā)酵周期

最適條件下，一個發(fā)酵周期為7d～10d。

5.7生長監(jiān)測

每天檢測菌液密度，采用血球計數(shù)板法或光密度法測定菌體細(xì)胞密度。

5.8污染控制

生產(chǎn)過程中，應(yīng)避免污染。定期檢查光合細(xì)菌的生長狀況，保持發(fā)酵容器內(nèi)的衛(wèi)生，如發(fā)現(xiàn)有藻類

或其它雜菌污染，應(yīng)終止培養(yǎng)，清洗消毒，重新接種。

5.9質(zhì)量檢測

產(chǎn)品指標(biāo)應(yīng)符合NY/T527中4.2的規(guī)定。

5.10發(fā)酵后處理

菌劑發(fā)酵完畢直接分裝，也可用沸石粉、凹凸棒土等載體吸附，載體的雜菌率≤1.0×104CFU/g。

6生產(chǎn)記錄

6.1生產(chǎn)、加工過程記錄

應(yīng)記載菌種來源、發(fā)酵日期、培養(yǎng)時間、灌裝日期、菌液顏色、菌數(shù)、發(fā)酵溫度、pH值等。

6.2培養(yǎng)基采購使用記錄

應(yīng)記載培養(yǎng)基進(jìn)貨日期、名稱、規(guī)格、批號、數(shù)量、供貨商、索證情況、保質(zhì)期限、驗收人記錄、

培養(yǎng)基使用量等。

6.3記錄保存

生產(chǎn)記錄應(yīng)保存不少于2年。

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7儲存

菌劑產(chǎn)品應(yīng)貯存在通風(fēng)、干燥、清潔的倉庫，倉庫內(nèi)無有害氣體、易燃易爆物品及有腐蝕性的化學(xué)

物品，遠(yuǎn)離熱源。

4

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

光合細(xì)菌生產(chǎn)流程

光合細(xì)菌生產(chǎn)流程見圖A.1。

圖A.1光合細(xì)菌生產(chǎn)流程圖

5

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B

B

附錄B

（資料性）

光合細(xì)菌培養(yǎng)基

光合細(xì)菌培養(yǎng)基配方如下：

——CH3COONa3.0g；

——NH4Cl1.0g；

——NaCl1.0g；

——MgSO40.2g；

——KH2PO40.5g；

——K2HPO40.5g；

——CaCl20.05g；

——酵母膏0.5g；

——微量元素溶液1mL；

——水1000mL。

其中，微量元素溶液組成為：

——EDTA-2Na2g；

——FeSO4·7H2O0.2g；

——MnC12·4H2O0.1g；

——H