消滅易錯(cuò)生物技術(shù)與生物工程的科學(xué)前沿易錯(cuò)

題組一發(fā)酵工程

1．酵母菌是一種單細(xì)胞真菌，與人類生活息息相關(guān)。轉(zhuǎn)基因啤酒酵母用于生產(chǎn)乙肝疫苗。耐

高糖的面包酵母(從自然界酵母種群篩選獲得)能利用面團(tuán)中的糖類等營養(yǎng)物質(zhì)發(fā)酵產(chǎn)生CO2，

使面包松軟可口；此外，面包酵母含有豐富的氨基酸、維生素和微量元素等，能夠增加食品的

營養(yǎng)價(jià)值。下列相關(guān)說法錯(cuò)誤的是()

A．酵母菌細(xì)胞呼吸產(chǎn)生CO2的場所有細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和線粒體

B．通過選擇培養(yǎng)、基因工程育種可獲得優(yōu)良性狀的酵母菌種

C．做面包、饅頭，釀酒等，都是利用酵母菌的無氧呼吸原理

D．酵母菌細(xì)胞富含蛋白質(zhì)、維生素等，可以用作飼料添加劑

易錯(cuò)分析：酵母菌是兼性厭氧單細(xì)胞真菌，在發(fā)酵工程中運(yùn)用廣泛，做面包、饅頭等，是

利用酵母菌有氧呼吸產(chǎn)生大量二氧化碳，釀酒則是利用酵母菌的無氧呼吸原理。

2．我國具有悠久的釀酒文化和歷史。《天工開物》中有“古來曲造酒，蘗造醴”的記載，“曲”指

由谷物培養(yǎng)微生物所制成的發(fā)酵劑，“蘗”指發(fā)芽的谷物，“醴”指甜酒。古人在冬季釀酒時(shí)，常

將谷物封存在陶器中并埋藏于地下進(jìn)行保溫。下列敘述錯(cuò)誤的是()

A．釀酒過程中密封的主要目的是避免雜菌污染，從而提高酒的品質(zhì)

B．“曲”中含有大量的酵母菌，溫度是影響酵母菌生長的重要因素

C．“造醴”時(shí)選擇“蘗”的原因是發(fā)芽的谷物會(huì)釋放更多的淀粉酶

D．“蘗造醴”時(shí)大部分糖的分解和代謝物的生成都在發(fā)酵階段完成

3．某研究小組采用濾膜法(如圖)對冰激凌中大腸桿菌數(shù)量是否超標(biāo)進(jìn)行檢測。已知飲用水標(biāo)準(zhǔn)

為1000mL自來水中大腸桿菌菌落數(shù)不能超過3個(gè)(37℃培養(yǎng)48h)。下列敘述不合理的是()

A．該實(shí)驗(yàn)不需要對冰激凌原液進(jìn)行梯度稀釋

B．實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)增設(shè)一組接種無菌水的組別作為對照

C．稀釋涂布平板法不可用于測定冰激凌中大腸桿菌數(shù)目

D．伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基

4．農(nóng)桿菌是植物基因工程中常用到的一種細(xì)菌，下表為用來培養(yǎng)農(nóng)桿菌的LB培養(yǎng)基配方，

下圖是對培養(yǎng)的農(nóng)桿菌進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)的過程。下列敘述錯(cuò)誤的是()

蛋白胨10.0g

酵母浸粉5.0g

NaCl10.0g

蒸餾水1L

配制完成后，將pH調(diào)至7.0

注：酵母浸粉以酵母為原料，經(jīng)自溶、酶解、濃縮、干燥等工藝制成。

A．上述LB培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，一般對細(xì)菌無選擇作用

B．圖中所用接種方法為稀釋涂布平板法

C．蛋白胨和酵母浸粉可以給農(nóng)桿菌提供碳源和氮源

D．若b、c、d中菌落數(shù)分別為48、57、60，則a中農(nóng)桿菌約為5.5×107個(gè)

5．西鳳酒是中國四大名酒之一，其歷史悠久，品質(zhì)上乘。據(jù)了解，西鳳酒是以土窖池為發(fā)酵

容器，而多年反復(fù)利用的窖池內(nèi)壁的窖泥中含有多種與釀酒有關(guān)的微生物。下列敘述錯(cuò)誤的是

()

A．西鳳酒的釀造是以釀酒酵母為主的多種微生物共同作用下完成的

B．窖池中的各種微生物會(huì)形成相對穩(wěn)定的體系，從而不容易被雜菌污染

C．釀酒原料多以高粱、大麥等為主，經(jīng)發(fā)酵形成的酒糟中可分離出產(chǎn)淀粉酶的微生物

D．若對分離出的釀酒酵母做擴(kuò)大培養(yǎng)，則需在二氧化碳或氮?dú)猸h(huán)境中進(jìn)行

易錯(cuò)分析：擴(kuò)大培養(yǎng)的目的是獲得更多酵母菌，與無氧呼吸相比，細(xì)胞有氧呼吸產(chǎn)生的能

量更多，更能滿足酵母菌大量繁殖時(shí)的需求，更需要有氧環(huán)境。

6．影印接種法是一種用于研究微生物抗藥性和篩選突變體的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。為檢測某種氨基酸缺

陷型菌株，實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)過程如圖所示，其中基本培養(yǎng)基中缺乏某種氨基酸，而完全培養(yǎng)基

中含有該種氨基酸。下列敘述正確的是()

A．影印接種法和稀釋涂布平板法相似，每個(gè)菌落都由單個(gè)菌體發(fā)育而來

B．過程②培養(yǎng)時(shí)絲絨布先轉(zhuǎn)印至完全培養(yǎng)基上再轉(zhuǎn)印到基本培養(yǎng)基上

C．應(yīng)從完全培養(yǎng)基上挑選出氨基酸缺陷型菌株用于后續(xù)的培養(yǎng)和研究

D．實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對培養(yǎng)皿進(jìn)行消毒處理后即可再次使用或者廢棄

7．飲用被細(xì)菌污染的水后，細(xì)菌在消化道內(nèi)會(huì)繁殖并產(chǎn)生毒素，引起急性腸胃炎。某同學(xué)利

用圖1所示方法，檢測飲用水的細(xì)菌含量，圖2為不同稀釋度下得到的平板。下列相關(guān)敘述不

正確的是()

A．配制圖1所示固體培養(yǎng)基時(shí)，需要先調(diào)整到適宜的pH，再分裝、滅菌

B．圖1中①～③三個(gè)培養(yǎng)皿菌落數(shù)的平均值乘稀釋倍數(shù)即為樣品中細(xì)菌數(shù)

C．圖2是稀釋涂布平板法的結(jié)果，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目要少

D．圖2所示的平板中，a和c的計(jì)數(shù)結(jié)果不適合用于計(jì)算樣品中的細(xì)菌數(shù)

8．如圖表示從土壤中分離出能分解石油的微生物的實(shí)驗(yàn)操作過程：在某地土壤中取樣后，經(jīng)

過多次稀釋，將稀釋液接種到培養(yǎng)基上，經(jīng)過一定條件培養(yǎng)后，在培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)①②③④⑤五

個(gè)菌落及透明圈。下列敘述錯(cuò)誤的是()

A．實(shí)驗(yàn)所用的土壤樣本應(yīng)選自常被石油污染的土壤

B．通過稀釋涂布平板法接種的微生物已被稀釋104倍

C．該實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分中唯一碳源來自石油

D．圖示五個(gè)菌落中，菌落⑤產(chǎn)生的酶分解石油的能力最強(qiáng)

9．生物興趣小組設(shè)計(jì)了一個(gè)利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實(shí)驗(yàn)。其主要步驟是：先將粉

碎的作物秸稈堆放在底部有小孔的托盤中，噴水浸潤、接種菌T，培養(yǎng)一段時(shí)間后(清水淋洗

時(shí)菌T不會(huì)流失)，在裝有淋洗液的瓶中接種酵母菌，進(jìn)行乙醇發(fā)酵。下列說法正確的是()

A．菌T可產(chǎn)生分解纖維素的酶，其分解產(chǎn)物是酵母菌的碳源

B．為了不破壞淋洗液中的營養(yǎng)物質(zhì)，對淋洗液進(jìn)行巴氏消毒

C．為提高發(fā)酵的乙醇產(chǎn)量，需始終保持發(fā)酵瓶處于密閉狀態(tài)

D．發(fā)酵后，產(chǎn)生的乙醇使溴麝香草酚藍(lán)溶液由藍(lán)變綠再變黃

10．某研究小組為研究“使用公筷對餐后菜品細(xì)菌數(shù)量的影響”，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：①配制培養(yǎng)

基并進(jìn)行滅菌處理；②設(shè)置對照組和實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行相關(guān)操作；③適宜條件培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各

組平板上菌落的平均數(shù)。下列敘述正確的是()

A．①過程所使用的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基

B．②過程中采用平板劃線法進(jìn)行接種

C．在培養(yǎng)基上進(jìn)行計(jì)數(shù)后所得菌落數(shù)少于實(shí)際活菌數(shù)

D．使用公筷可以防止傳染病的原理是切斷細(xì)菌的傳染源

11．谷氨酸是生產(chǎn)谷氨酸鈉(味精)的原料，運(yùn)用發(fā)酵工程生產(chǎn)谷氨酸需要用到谷氨酸棒狀桿菌，

下圖1是利用玉米淀粉作為材料制備谷氨酸的流程圖。圖2是細(xì)菌的增長曲線圖，其中階段3

表示穩(wěn)定期，是代謝產(chǎn)物(如谷氨酸)大量積累的時(shí)期。下列敘述錯(cuò)誤的是()

A．谷氨酸棒狀桿菌與醋酸菌的代謝類型相同

B．培養(yǎng)谷氨酸棒狀桿菌和其他所有微生物時(shí)均需要添加維生素B

C．發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是接種菌種之后的發(fā)酵過程

D．在穩(wěn)定期添加營養(yǎng)物質(zhì)、流出發(fā)酵液有助于提高谷氨酸產(chǎn)量

12．某科研團(tuán)隊(duì)在熱帶雨林土壤中分離獲得了高效分解纖維素的細(xì)菌，為探究影響其纖維素酶

活性的條件，設(shè)計(jì)了如表所示的實(shí)驗(yàn)。下列敘述錯(cuò)誤的是()

試管底物和試劑實(shí)驗(yàn)條件

1纖維素+2mL纖維素酶溶液30℃水??；pH=7

2纖維素+2mL纖維素酶溶液①______；pH=3

3纖維素+2mL纖維素酶溶液0℃水??；pH=②______

A．若試管1和試管2形成對比實(shí)驗(yàn)，則①為30℃水浴處理

B．實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試管1中的纖維素含量可能最低

C．試管3中纖維素酶的空間結(jié)構(gòu)在低溫條件下遭到破壞

D．可增加設(shè)置其他溫度和pH的試管以完善該實(shí)驗(yàn)

13．谷氨酰胺酶(PG酶)是一種催化L-β-谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨的酶，能增大蛋白質(zhì)的

溶解性，提高食品工業(yè)中蛋白質(zhì)的利用率。研究人員利用谷氨酰胺-甘氨酸(谷氨酰胺-甘氨酸遇

熱易分解)為唯一氮源從土壤中篩選產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，實(shí)驗(yàn)過程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的

是()

A．該實(shí)驗(yàn)不僅篩選出了產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，并且還對其進(jìn)行了計(jì)數(shù)

B．金黃桿菌在培養(yǎng)基Ⅰ和Ⅲ中的生長速度高于在培養(yǎng)基Ⅱ的生長速度

C．培養(yǎng)基Ⅰ~Ⅲ中的氮源相同，三種培養(yǎng)基都是選擇培養(yǎng)基

D．PG酶的活性可以用單位時(shí)間內(nèi)催化L-β-谷氨酰胺水解生成氨的數(shù)量來表示

14．柑橘酸腐病是由白地霉引起的柑橘貯藏期常見的病害之一?？咕氖且环N抑菌活性強(qiáng)、無

環(huán)境污染的生物多肽，目前已用于多種農(nóng)業(yè)病菌的防治。研究人員研究了抗菌肽對白地霉的抑

菌效果，并且對其作用機(jī)制進(jìn)行了探究?；卮鹣铝袉栴}：

利用基因工程合成抗菌肽時(shí)，基本流程為：克隆目的基因→導(dǎo)入枯草桿菌→篩選菌種→誘導(dǎo)抗

菌肽表達(dá)→分離純化→功能研究。

(1)白地霉從柑橘中獲得其生長繁殖所需的水、無機(jī)鹽、和等營養(yǎng)物質(zhì)。

(2)為研究抗菌肽對白地霉的抑菌效果，現(xiàn)用無菌打孔器在果實(shí)相同部位打孔，每個(gè)打孔

處接種相同體積的處理液，比較15天后的病斑直徑。各組處理及結(jié)果見表。

組別12345

接種一定體抗菌肽溶液與病先加入抗菌肽溶抗菌肽溶液與病原

接種處理

積的病原菌原菌孢子懸浮液液，2h后接種病原X菌孢子懸浮液混合，

方式

孢子懸浮液混合后直接接種菌孢子懸浮液培養(yǎng)2h后接種

15天后

病斑直徑41.313.929.328.711.2

/mm

表中數(shù)據(jù)表明抗菌肽對白地霉有一定的抑菌效果，且抑菌效果與抗菌肽、病原菌孢子懸浮

液接種順序有關(guān)，表中X為。與第2組相比，第5組抑菌效果更好的可能原因

是。

(3)一般情況下，電導(dǎo)率和離子濃度呈正相關(guān)，通過測量溶液電導(dǎo)率可以反映出溶液中離

子濃度的大小。研究人員將白地霉孢子與抗菌肽在無菌水中混合，測定電導(dǎo)率，培養(yǎng)一段時(shí)間

后，再次測定電導(dǎo)率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電導(dǎo)率明顯升高，據(jù)此推測抗菌肽抑制白地霉孢子的作用機(jī)制

可能是。

15．為調(diào)查某地人工湖的水質(zhì)狀況，科研小組進(jìn)行了該湖水樣中的細(xì)菌培養(yǎng)、分離及計(jì)數(shù)等工

作?；卮鹣铝袉栴}：

(1)在細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中能同時(shí)提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白胨”“葡萄糖”

或“NaNO3”)。通常，制備培養(yǎng)基時(shí)要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，其原因

是。

(2)通常采用法檢測水樣中細(xì)菌含量。在接種前應(yīng)隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行

培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是。

(3)在進(jìn)行樣品稀釋時(shí)，取10g水樣，加稀釋得到101倍稀釋液，再從中吸取(操

作過程)得到102倍稀釋液，依次類推獲得105倍稀釋液，在該稀釋液倍數(shù)下，取3個(gè)平板分別

接種樣品溶液0.1mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長出的菌落數(shù)分別是156、178、191，則每克

樣品中的細(xì)菌數(shù)量為個(gè)。

(4)科研人員將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分

進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。主要原因可能

是。(寫出2點(diǎn)即可)

題組二基因工程

1．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)敘述錯(cuò)誤的是()

A．PCR過程中模板DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變

B．PCR擴(kuò)增時(shí)需通過離心將各組分集中在微量離心管的底部

C．制備瓊脂糖凝膠時(shí)，需待凝膠溶液稍冷卻后加入適量的核酸染料混勻

D．可通過在紫外燈下觀察DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來評價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果

易錯(cuò)分析：PCR的原理：利用DNA半保留復(fù)制原理，因此新合成的兩個(gè)DNA分子中，一條

鏈?zhǔn)桥f的而另外一條鏈?zhǔn)切碌摹?/p>

2．據(jù)研究，W基因在植物發(fā)育和逆境應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。研究人員將W基因的啟動(dòng)

子(PW)與GUS基因相連，構(gòu)建擬南芥PW-GUS融合植株(GUS為報(bào)告基因，其表達(dá)產(chǎn)物可催

化無色底物變藍(lán))，用無色底物處理擬南芥幼苗的根，探究W基因在擬南芥缺鐵脅迫中的表達(dá)

水平，下列敘述錯(cuò)．誤．的是()

A．?dāng)U增W基因啟動(dòng)子需2種引物，并在引物3'端加入酶切位點(diǎn)

B．PW和GUS基因進(jìn)行雙酶切后，可通過T4DNA連接酶連接

C．培養(yǎng)擬南芥無菌苗的MS固體培養(yǎng)基需要用高壓蒸汽滅菌法滅菌

D．通過觀察根藍(lán)色深淺確認(rèn)W基因在擬南芥缺鐵脅迫中的表達(dá)水平

3．?dāng)?shù)字PCR技術(shù)被稱為第三代PCR,在核酸定量檢測中具有突出優(yōu)勢。該技術(shù)通過將一個(gè)樣

本稀釋分成幾十至幾萬份，并分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分

子(DNA模板)，在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)束后對各個(gè)反應(yīng)單

元的熒光信號進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算初始樣品中靶標(biāo)分子的拷貝數(shù)。據(jù)此分析，下列說法正確

的是()

A．?dāng)?shù)字PCR技術(shù)僅適用于樣本中目標(biāo)分子含量較高的材料

B．?dāng)?shù)字PCR技術(shù)遵循的基本原理是DNA的邊解旋邊復(fù)制

C．每個(gè)單元中加入等量的4種核糖核苷酸溶液作為擴(kuò)增原料

D．每個(gè)單元中目標(biāo)分子的兩條子鏈合成都是從5'端向3'端延伸

4．“篩選”是生物技術(shù)與工程中常用的技術(shù)手段。下列敘述錯(cuò)誤的是()

A．胚胎移植前，需對通過體外受精或其他方式得到的胚胎進(jìn)行質(zhì)量篩選

B．制備單克隆抗體時(shí)，需從分子水平篩選能產(chǎn)生多種抗體的雜交瘤細(xì)胞

C．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時(shí)，需從分子水平及個(gè)體水平進(jìn)行篩選

D．發(fā)酵生產(chǎn)中，性狀優(yōu)良的菌種可以從自然界中篩選

5．蝦青素可由β-胡蘿卜素在β-胡蘿卜素酮化酶(BKT)和β-胡蘿卜素羥化酶(CRTR-B)的作用下轉(zhuǎn)

化而來，具有抗衰老、增強(qiáng)免疫等功能。杜氏鹽藻是單細(xì)胞浮游植物，生長快，易培養(yǎng)，能大

量合成β-胡蘿卜素?？蒲腥藛T利用“無縫克隆技術(shù)”(如圖1)構(gòu)建含BKT基因和CRTR-B基因的

表達(dá)載體(如圖2，3)，導(dǎo)入杜氏鹽藻，以實(shí)現(xiàn)蝦青素的工廠化生產(chǎn)，回答下列問題。

(1)獲取目的基因：紅球藻是天然蝦青素的重要來源，提取紅球藻的總DNA為，設(shè)計(jì)

特異性引物擴(kuò)增BKT基因和CRTR-B基因，此過程需要(至少寫兩種)。

(2)構(gòu)建轉(zhuǎn)化載體：

①PCR獲取抗除草劑基因過程中，為確保基因兩端具有所需同源序列，需在引物的一端

添加對應(yīng)的同源序列。若將來需要將抗除草劑基因能夠從重組質(zhì)粒中切除，還需要在基因兩側(cè)

加入限制酶識(shí)別序列，則擴(kuò)增抗除草劑基因時(shí)，設(shè)計(jì)的引物序列(5,→3,)為。

A．抗除草劑基因部分序列＋限制酶識(shí)別序列＋同源序列

B．同源序列＋抗除草劑基因部分序列＋限制酶識(shí)別序列

C．同源序列＋限制酶識(shí)別序列＋抗除草劑基因部分序列

②科研人員利用“無縫克隆技術(shù)”同時(shí)將BKT基因和CRTR-B基因插入質(zhì)粒，形成的重組

質(zhì)粒對應(yīng)部位如圖2所示，推測此過程擴(kuò)增CRTR-B基因所用的引物為。

③最終形成的重組質(zhì)粒如圖3所示，其中atpA啟動(dòng)子和psbA啟動(dòng)子均為杜氏鹽藻葉綠體

啟動(dòng)子，選用內(nèi)源性啟動(dòng)子的目的是。

(3)準(zhǔn)備受體細(xì)胞：選取初始杜氏鹽藻涂布到杜氏鹽藻固體培養(yǎng)基進(jìn)行第一次培養(yǎng)，一段

時(shí)間后，挑取生長良好的單藻落到杜氏鹽藻液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。期間可取藻液滴入血細(xì)胞

計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，第二次培養(yǎng)的目的是。

(4)目的基因?qū)爰跋嚓P(guān)檢測：采用基因槍法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入杜氏鹽藻葉綠體，一段時(shí)間

后，先用含的培養(yǎng)基初篩已轉(zhuǎn)化的杜氏鹽藻，然后采用技術(shù)檢測是否成功轉(zhuǎn)錄出β-

胡蘿卜素酮化酶和β-胡蘿卜素羥化酶的mRNA。

(5)葉綠體轉(zhuǎn)化是植物基因工程的新熱點(diǎn)，葉綠體的諸多特點(diǎn)為葉綠體轉(zhuǎn)化提供優(yōu)勢，如

葉綠體基因組小，功能清晰，使基因操作方便；葉綠體具有自我復(fù)制功能，一個(gè)植物細(xì)胞可含

有多個(gè)葉綠體，每個(gè)葉綠體中含有多個(gè)基因組，可大大提高；另外，葉綠體基因位于細(xì)

胞質(zhì)中，可有效避免。

6．科研人員利用圖1所示材料構(gòu)建重組質(zhì)粒并導(dǎo)入大腸桿菌，以期獲得能監(jiān)測生物組織或環(huán)

境中四環(huán)素水平的“報(bào)警器”。限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下表。TetR基因是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基

因，GFp基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因，Ampr為氨芐青霉素抗性基因，ori為復(fù)制原點(diǎn)。請回答下

列問題：

限制酶EcoRⅠXbaⅠSpeⅠBamHⅠ

識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

(1)使用工具酶拼接DNA片段1和2，拼接后的片段連接處部分序列為5＇3＇(寫出6

個(gè)堿基)，TetR基因和GFP基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈(“是”或“不是”)該拼接DNM的同一條鏈。

(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，選擇對質(zhì)粒和拼接的DNA片段進(jìn)行酶切，在DNA連接酶的作

用下恢復(fù)鍵。再根據(jù)的結(jié)果判斷重組質(zhì)粒的大小是否符合預(yù)期。

(3)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入經(jīng)理的大腸桿菌后，在含的固體培養(yǎng)基中篩選出工程菌。

(4)工程菌監(jiān)測四環(huán)素的原理如圖2，當(dāng)環(huán)境中含四環(huán)素時(shí)，該大腸桿菌工程菌(能/不

能)發(fā)出熒光，其原因是。

7．細(xì)菌中的蛋白激酶Y感受外界刺激后，利用ATP將特異性底物A蛋白磷酸化，改變A蛋

白的活性從而應(yīng)答外界刺激，調(diào)控細(xì)菌的生長。研究者將Y基因(編碼蛋白激酶Y)與GFP基因

(編碼綠色熒光蛋白)拼接成Y-GFP融合基因(Y-GFP基因)，導(dǎo)入載體，并表達(dá)出融合蛋白(Y-GFP

蛋白)，以分析蛋白激酶Y的功能，實(shí)驗(yàn)過程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}。

(1)Y基因含有735個(gè)堿基對(bp)，其編碼的肽鏈含有個(gè)氨基酸。通過PCR分別

擴(kuò)增Y基因與GFP基因，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有(填標(biāo)號)。

a．模板b．引物c．DNA聚合酶d．反應(yīng)緩沖液

(2)構(gòu)建Y基因與GFP基因的融合基因時(shí)，應(yīng)將Y基因中編碼終止密碼子的序列刪除，理

由是。

(3)據(jù)圖步驟一分析，為確保Y-GFP基因插入載體后完整表達(dá)，在構(gòu)建重組基因表達(dá)載體

時(shí)不能選擇EcoRI限制酶，理由是。

(4)為檢測Y-GFP蛋白的激酶活性，用Y-GFP蛋白、A蛋白和ATP組合實(shí)驗(yàn)，四組實(shí)驗(yàn)的

條件及電泳結(jié)果如圖步驟二所示。磷酸化的A蛋白可被磷酸化抗體特異性識(shí)別。若Y-GFP蛋

白有激酶活性，則后續(xù)實(shí)驗(yàn)用磷酸化抗體檢測，能從電泳條帶檢測到信號的是泳道

(從泳道①-④中選填序號)，從Y-GFP蛋白功能角度分析，理由是，利用表達(dá)

的具有綠色熒光的Y-GFP蛋白還可開展的實(shí)驗(yàn)有(答出1個(gè)即可)。

8．石油進(jìn)入土壤后，會(huì)破壞土結(jié)構(gòu)，分散土粒，使土壤的透水性降低，而且石油中的有毒物

質(zhì)能通過農(nóng)作物進(jìn)入食物鏈，最終危害人類。為解決石油污染問題，某科研小組從被石油污染

較嚴(yán)重的土壤中分離出了高效分解石油的細(xì)菌操作過程如圖1所示。欲將高效分解石油的目的

基因?qū)氪竽c桿菌中。目的基因(轉(zhuǎn)錄時(shí)以乙鏈為模板)和運(yùn)載體質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)如圖2所示，LacZ

基因編碼產(chǎn)生的酶可以催化無色的X-gal分解產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落為白

色。不同限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示?；卮鹣铝袉栴}：

限制酶BamHⅠEcoRⅠMfeⅠKpnⅠHindⅢ

識(shí)別序列和切割位點(diǎn)G↓GATTCG↓AATTCC↓AATTGGGTAC↓CA↓AGCTT

(1)圖1中過程②配制培養(yǎng)基時(shí)，向培養(yǎng)基中加入的唯一碳源是。

(2)將石油污染過的土壤樣品進(jìn)行圖1中過程④的操作，目的是。

(3)根據(jù)題干提供的信息，在構(gòu)建重組質(zhì)粒前，應(yīng)選擇限制酶分別對質(zhì)粒和目的基

因進(jìn)行切割，依據(jù)是。

(4)若用EcoRⅠ和MfeⅠ對按上述要求構(gòu)建好的一個(gè)重組質(zhì)粒進(jìn)行完全酶切，會(huì)切成個(gè)

片段。

(5)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌后，接種到添加了等成分的培養(yǎng)基上，若呈現(xiàn)色

的菌落，即為含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落。

9．某自花傳粉植物的藥物P的合成依次受染色體上顯性基因A、B、D控制。研究人員通過

基因工程構(gòu)建含質(zhì)粒-A-B-D的大腸桿菌生產(chǎn)藥物P，下圖為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，其中

代表氨芐青霉素抗性基因，表示四環(huán)素抗性基因。引物1序列為

RR'

Am，p引物2序列為Tet。限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)5(從?G左GT向CT右AG均AC為CTAGG?)

'''''

3為KpnⅠ()、5?XbGaGⅠC(CATGGGG)T、TCBCam?H3Ⅰ()、NcoⅠ()?；駼和D轉(zhuǎn)錄的5?！?

↓↓↓↓

分別是aG鏈GT和ACd?鏈。根據(jù)T所CT學(xué)AG知A識(shí)回答下列G問GA題TC：CCCATGG

(1)PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，引物的作用是。常采用來鑒定PCR的產(chǎn)物。

(2)為保證A基因正確連接到質(zhì)粒上，需利用PCR1對A基因進(jìn)行改造，所用引物1和引

物2上分別含有酶的識(shí)別序列，則據(jù)圖判斷A基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈可能是。一個(gè)A

基因經(jīng)過4輪循環(huán)后，得到的子代DNA分子中，只含有1種引物的DNA分子所占的比例

為。

(3)為了實(shí)現(xiàn)圖中B基因和D基因的重疊延伸，PCR2和PCR3過程中需要分別在引物

的端添加互補(bǔ)序列。過程②復(fù)性過程中會(huì)形成多種雜交雙鏈，其中能延伸得到B-D融合基因

'

的5為圖中(填字母)雜交形成的DNA。

(4)為保證B-D融合基因與質(zhì)粒-A按圖中方式連接，需要在引物3和引物5中分別添加限

制酶的識(shí)別序列。若篩選導(dǎo)入基因A-B-D的大腸桿菌，可將大腸桿菌依次放在含有氨芐

青霉素、四環(huán)素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選的大腸桿菌即為目的菌。

題組三細(xì)胞工程與胚胎工程

1．細(xì)胞培養(yǎng)人造肉是指在特定的培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)基中利用動(dòng)物干細(xì)胞培養(yǎng)出來的動(dòng)物肉。

這種肉和真正的肉類有很多相似之處，目前尚處于研究階段?？蒲腥藛T使用豬肌肉干細(xì)胞，成

功研發(fā)出了我國第一塊細(xì)胞培養(yǎng)人造肉。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()

A．培養(yǎng)豬肌肉干細(xì)胞時(shí)使用液體培養(yǎng)基，通常需加入血清等天然成分

B．在培養(yǎng)豬肌肉干細(xì)胞時(shí)需要在95%空氣和5%CO2的混合氣體培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

C．用于傳代培養(yǎng)的細(xì)胞都需要用胰蛋白酶等處理后再用離心法收集

D．幼齡動(dòng)物的肌肉干細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，可用于培養(yǎng)人造肉

易錯(cuò)分析：傳代培養(yǎng)指的是將分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮

培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集；貼壁細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，

然后再用離心法收集。之后，將收集的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)。

2．動(dòng)物體細(xì)胞融合后染色體核型不穩(wěn)定，來自某一方的染色體往往隨機(jī)丟失一至多條這種現(xiàn)

象常應(yīng)用于基因的定位。在甲型流感單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細(xì)胞在克隆化培養(yǎng)過程

中來自B淋巴細(xì)胞的染色體往往出現(xiàn)隨機(jī)丟失現(xiàn)象。下列敘述正確的是()

A．注射甲型流感疫苗后，應(yīng)立即從相關(guān)動(dòng)物的脾臟中獲得B淋巴細(xì)胞

B．雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時(shí)可使用胰蛋白酶處理

C．若雜交瘤細(xì)胞丟失某染色體后不能分泌單克隆抗體，則該基因位于該染色體上

D．利用抗體檢測篩選的雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)將具有持續(xù)產(chǎn)生甲型流感抗體的能力

3．天山雪蓮是我國特有瀕危物種，含有黃酮類等多種次生代謝物，具有多種醫(yī)療功效。研究

人員通過植物細(xì)胞工程技術(shù)對天山雪蓮進(jìn)行了開發(fā)、利用。下列敘述錯(cuò)誤的是()

A．可取雪蓮的愈傷組織在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)其長出芽和根，進(jìn)而發(fā)育成完整植株

B．植物組織培養(yǎng)不同階段的培養(yǎng)基中植物激素的濃度及比例有所不同

C．利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖雪蓮不受季節(jié)、氣候等自然因素的限制

D．利用雪蓮任何部位的細(xì)胞進(jìn)行植物細(xì)胞培養(yǎng)均可持續(xù)獲得黃酮類物質(zhì)

4．下列有關(guān)細(xì)胞工程技術(shù)的敘述正確的是()

A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中加入血清的培養(yǎng)基需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B．大量制備一種單克隆抗體需要大量的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞

C．核移植中的“去核”是指去除卵母細(xì)胞中的紡錘體-染色體復(fù)合物

D．受體母畜對移入子宮的外來胚胎會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

5．我國科學(xué)家利用體細(xì)胞核移植技術(shù)成功克隆了瀕臨滅絕的某地方牛種。下列敘述錯(cuò)誤的是

()

A．從該牛種耳上取的體細(xì)胞培養(yǎng)室需在合成培養(yǎng)基中加入血清

B．從牛卵巢中采集的卵母細(xì)胞需要在體外培養(yǎng)至MⅡ期

C．代孕母牛為重構(gòu)胚發(fā)育提供空間和營養(yǎng)，不會(huì)影響犢牛的遺傳物質(zhì)

D．胚胎移植前需要對供體牛與受體牛進(jìn)行同期發(fā)情處理

易錯(cuò)分析：體細(xì)胞核移植技術(shù)中，通常不需要對供體進(jìn)行同期發(fā)處理。

6．科學(xué)家用蝸牛提取液處理煙草葉片和擬南芥根得到原生質(zhì)體，兩種原生質(zhì)體經(jīng)PEG處理后

篩選出雜種細(xì)胞，其分裂產(chǎn)生的愈傷組織經(jīng)誘導(dǎo)形成再生植株。經(jīng)鑒定，再生植株同時(shí)表現(xiàn)出

煙草和擬南芥的部分性狀。下列敘述錯(cuò)誤的是()

A．蝸牛提取液具有纖維素酶和果膠酶活性，可去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體

B．利用PEG處理可提高細(xì)胞膜的流動(dòng)性，從而促進(jìn)兩種原生質(zhì)體的融合

C．用較高濃度的細(xì)胞分裂素處理雜種細(xì)胞產(chǎn)生的愈傷組織，有利于根的分化

D．雜種細(xì)胞誘導(dǎo)形成具有雙親部分性狀的再生植株是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果

7．我國已將利妥昔單抗、重組人凝血因子Ⅷ、重組人生長激素等多款生物藥納入藥品集中

大量采購。利妥昔單抗主要用于治療多種淋巴癌，下列有關(guān)單克隆抗體制備的敘述，正確的是

()

A．制備單克隆抗體時(shí)要用到骨髓瘤細(xì)胞，是因?yàn)槠淠軣o限增殖

B．細(xì)胞融合結(jié)束后，兩兩融合的細(xì)胞都能在選擇培養(yǎng)基上存活

C．利妥昔單抗能準(zhǔn)確識(shí)別抗原，只能用于淋巴癌的治療，不能用于淋巴癌的診斷

D．給小鼠反復(fù)注射淋巴癌細(xì)胞，從小鼠血清中分離出的抗體為利妥昔單抗

8．科研人員研究了不同濃度的聚乙二醇(PEG)對沙打旺和紫花苜蓿原生質(zhì)體融合率的影響，實(shí)

驗(yàn)結(jié)果如圖，虛線代表最高融合率，異源融合率是指不同種的原生質(zhì)體發(fā)生融合的概率，已知

PEG濃度較高時(shí)對細(xì)胞有毒害作用。下列敘述錯(cuò)．誤．的是()

A．PEG融合法還可用于誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合

B．不同種的原生質(zhì)體的融合依賴于細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性

C．據(jù)圖可知，不同PEG濃度下同源融合率均大于異源融合率

D．PEG濃度為35%時(shí)誘導(dǎo)紫花苜蓿與沙打旺原生質(zhì)體融合的效果最好

9．成體組織細(xì)胞能夠被用于兩種不同意義的“克隆”，具體流程如圖所示。下列有關(guān)克隆的敘

述正確的是()

A．圖中含“紡錘體”的細(xì)胞為MⅡ期卵母細(xì)胞，圖中代孕母體不需要處理即可植入胚胎

B．經(jīng)“細(xì)胞融合”形成的重組細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)僅來自成年母體的卵母細(xì)胞

C．圖中“早期胚胎”內(nèi)部的空腔為囊胚腔，圖中兩種“克隆”均需要胚胎移植過程

D．圖中成體組織細(xì)胞需要培養(yǎng)，在培養(yǎng)前可用機(jī)械方法或用胰蛋白酶處理一段時(shí)間

10．隨著動(dòng)物細(xì)胞工程和胚胎工程的迅猛發(fā)展，用引進(jìn)的良種奶牛大量、快速繁殖滿足了我國

對奶類的大量需求。下圖表示畜牧業(yè)生產(chǎn)上培育某種優(yōu)良種牛的兩種方法，相關(guān)分析錯(cuò)誤的是

()

A．通過方法I、Ⅱ培育優(yōu)良種牛E和F的本質(zhì)都是有性生殖

B．方法I中B牛的卵子需培育到MⅡ期才具備與精子受精的能力

C．在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙觀察到兩個(gè)極體可作為受精的標(biāo)志

D．方法I、Ⅱ獲得的胚胎通常需培養(yǎng)至囊胚階段再移植入D牛的子宮內(nèi)

11．胚胎工程技術(shù)的應(yīng)用為優(yōu)良牲畜的大量繁殖提供了有效的解決辦法，如奶?；铙w采卵—體

外胚胎生產(chǎn)(OPU-IVP)技術(shù)，該技術(shù)流程如圖。已知雄性奶牛Y染色體上有一段雄性特異的高

度重復(fù)序列，依據(jù)該重復(fù)序列設(shè)計(jì)引物，建立了用于奶牛胚胎性別鑒定的PCR體系(SRY-PCR)。

下列敘述錯(cuò)誤的是()

A．體外受精后，在透明帶和卵細(xì)胞膜間觀察到兩個(gè)極體說明受精成功

B．活體采卵前誘導(dǎo)母牛超數(shù)排卵所注射的激素只能作用于特定細(xì)胞

C．取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行SRY-PCR，應(yīng)選擇結(jié)果為陽性的胚胎進(jìn)行移植

D．受體母牛不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，所以移植前不需要進(jìn)行免疫檢查

12．生物技術(shù)的進(jìn)步在給人類帶來福祉的同時(shí)，也引起人們對它安全性及倫理問題的關(guān)注。下

列敘述正確的是()

A．證明轉(zhuǎn)基因食品安全比證明其不安全更容易

B．可用口味、顏色指標(biāo)判斷是否是轉(zhuǎn)基因作物

C．不允許、不接受進(jìn)行任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)

D．在特殊情況下可利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造致病菌

13．[多選]駱駝蓬分布在干旱和半干旱地區(qū)，能防風(fēng)固沙。駱駝蓬合成的多種生物堿具有抗腫

瘤作用?？蒲腥藛T利用駱駝蓬下胚軸進(jìn)行育苗和生物堿提取，過程如下圖。下列說法錯(cuò)誤的是

()

A．下胚軸切段需依次用酒精和次氯酸鈉進(jìn)行消毒處理

B．除培養(yǎng)基中植物激素比例不同外，進(jìn)行過程①③的其他條件相同

C．由無毒下胚軸經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的駱駝蓬無毒幼苗可抵抗病毒的侵染

D．在①②③過程中利用PEG處理培養(yǎng)物，可以獲得染色體數(shù)加倍的駱駝蓬

14．[多選]華西牛是我國育種專家培育的具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的專門化肉牛新品種，打破了

我國肉牛種源嚴(yán)重依賴進(jìn)口的局面?？蒲腥藛T在生產(chǎn)中采取胚胎工程的手段實(shí)現(xiàn)了華西牛的快

速繁育。下列敘述正確的是()

A．采集的華西牛精子需要進(jìn)行獲能處理后在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液中完成受精

B．可以采用孕激素對華西牛母牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理，以發(fā)揮其繁殖潛力

C．受體母牛需健康且具有正常的繁殖能力，胚胎移植前需要對其進(jìn)行同期發(fā)情處理

D．犢牛的遺傳性狀由華西牛公牛及母牛決定，不受受體母牛的影響

15．“人造精子”是一種可替代精子使卵細(xì)胞“受精”的單倍體胚胎干細(xì)胞?？茖W(xué)家將某種動(dòng)物單

倍體胚胎干細(xì)胞注射到卵細(xì)胞中成功培育出健康的該種動(dòng)物。該技術(shù)不僅為動(dòng)物模型的獲得提

供了新手段，同時(shí)也為動(dòng)物生殖、遺傳與發(fā)育調(diào)控機(jī)理研究提供了新思路。右圖是科研人員利

用胚胎操作技術(shù)，通過兩種方式獲得重組細(xì)胞，進(jìn)而培育出該種動(dòng)物“人造精子”的流程。請回

答下列問題：

(1)方式一成功獲得“人造精子”的關(guān)鍵操作是及時(shí)去除的細(xì)胞核。

(2)方式二中選擇卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因是卵母細(xì)胞具有(答兩點(diǎn))的優(yōu)點(diǎn)，

操作中注入完整的精子而非精子的細(xì)胞核，原因是。

(3)目前，構(gòu)建成功的該動(dòng)物單倍體胚胎干細(xì)胞系，均為性染色為X染色體的細(xì)胞系，無

法獲得性染色體為Y的單倍體胚胎干細(xì)胞系，這與該生物Y染色體比X染色體短小有關(guān)。據(jù)

此推測可能的原因是。若將成功構(gòu)建的“人造精子”與卵細(xì)胞結(jié)合繁殖正常的二

倍體動(dòng)物，該動(dòng)物的性別是。

16．生命孕育的過程是神奇和復(fù)雜的，包括受精卵的形成和胚胎發(fā)育。回答下列問題：

(1)在受精過程中，為保證1個(gè)卵母細(xì)胞只結(jié)合1個(gè)精子，卵細(xì)胞會(huì)發(fā)生相關(guān)生理反應(yīng)，

發(fā)生這些生理反應(yīng)的結(jié)構(gòu)依次為、。

(2)受精卵形成后即在(填“卵巢”“輸卵管”或“子宮”)內(nèi)進(jìn)行有絲分裂，這一階段在

透明帶內(nèi)進(jìn)行，細(xì)胞只分裂不生長，胚胎體積，以確保胚胎順利從受精場所適時(shí)輸出。

隨后，透明帶破裂、胚胎從中伸展出來繼續(xù)發(fā)育，這一過程稱為。

(3)胚胎發(fā)育時(shí)，母體通過形成透明纖維層，防止胚胎細(xì)胞植入過深而損傷子宮內(nèi)膜；胚

胎的胎盤細(xì)胞則分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG)，抑制母體淋巴細(xì)胞的活動(dòng)；此后胎兒為了獲

得更多的養(yǎng)料，還會(huì)導(dǎo)致母體的血壓升高，促進(jìn)更多血液流入子宮，以獲得更多的營養(yǎng)。

①胎盤是由囊胚的發(fā)育而成的。

②母體對胎兒不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，由題分析，其原因可能是。

③HCG可通過腎小球從尿液中排出。用抗HCG單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，

在妊娠第8天就可以通過檢查尿液作出診斷。請簡述利用從經(jīng)HCG免疫的小鼠體內(nèi)采集的B

淋巴細(xì)胞(簡稱B淋巴細(xì)胞)、小鼠骨髓瘤細(xì)胞制備抗HCG單克隆抗體的主要流程：(用

箭頭和文字表示)。

題組四生物與技術(shù)與工程綜合

1．(2024·北京·高考真題)啤酒經(jīng)酵母菌發(fā)酵釀制而成。生產(chǎn)中，需從密閉的發(fā)酵罐中采集酵母

菌用于再發(fā)酵，而直接開罐采集的傳統(tǒng)方式會(huì)損失一些占比很低的獨(dú)特菌種。研究者探究了不

同氧氣含量下酵母菌的生長繁殖及相關(guān)調(diào)控，以優(yōu)化采集條件。

(1)酵母菌是兼性厭氧微生物，在密閉發(fā)酵罐中會(huì)產(chǎn)生和CO2。有氧培養(yǎng)時(shí)，酵

母菌增殖速度明顯快于無氧培養(yǎng)，原因是酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，產(chǎn)生大量。

(2)本實(shí)驗(yàn)中，采集是指取樣并培養(yǎng)4天。在不同的氣體條件下從發(fā)酵罐中采集酵母菌，

統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)(圖甲)。由結(jié)果可知，有利于保留占比很低菌種的采集條件是。

(3)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，采集酵母菌時(shí)O2濃度的陡然變化會(huì)導(dǎo)致部分菌體死亡。研究

者推測，酵母菌接觸O2的最初階段，細(xì)胞產(chǎn)生的過氧化氫(H2O2)濃度會(huì)持續(xù)上升，使酵母菌受

損。已知H2O2能擴(kuò)散進(jìn)出細(xì)胞。研究者在無氧條件下從發(fā)酵罐中取出酵母菌，分別接種至含

不同濃度H2O2的培養(yǎng)基上，無氧培養(yǎng)后得到如圖乙所示結(jié)果。請判斷該實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裢耆C實(shí)上

述推測，并說明理由。

(4)上述推測經(jīng)證實(shí)后，研究者在有氧條件下從發(fā)酵罐中取樣并分為兩組，A組菌液直接

滴加到H2O2溶液中，無氣泡產(chǎn)生；B組菌液有氧培養(yǎng)4天后，取與A組活菌數(shù)相同的菌液，

滴加到H2O2溶液中，出現(xiàn)明顯氣泡。結(jié)果說明，酵母菌可通過產(chǎn)生以抵抗H2O2的

傷害。

2．嵌合抗原受體-T細(xì)胞(CAR-T細(xì)胞)療法在人類腫瘤治療中取得了重要突破。CAR-T細(xì)胞療

法是將CAR基因?qū)隩細(xì)胞成為CAR-T細(xì)胞，通過CAR蛋白上的scFv肽鏈(小肽不足以發(fā)

揮抗原作用，但能發(fā)揮抗體識(shí)別作用)特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞膜上的抗原，并通過CAR蛋白上的

其它肽鏈結(jié)構(gòu)激活CAR-T細(xì)胞繼而殺傷腫瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉栴}：

(1)獲得含有scFv肽鏈的單克隆抗體，流程如圖。

①圖中通過驅(qū)動(dòng)細(xì)胞和測試細(xì)胞反復(fù)免疫小鼠產(chǎn)生抗體的過程屬于(填“細(xì)胞”或

“體液”)免疫，參與該過程的免疫細(xì)胞來源于小鼠骨髓。實(shí)驗(yàn)小鼠機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的

過程中，輔助性T細(xì)胞的主要作用是。該實(shí)驗(yàn)最適用于篩選(填標(biāo)號)。

A．大鼠肝細(xì)胞區(qū)別于兔肝細(xì)胞特殊抗原的抗體

B．正常細(xì)胞區(qū)別于感染HIV細(xì)胞內(nèi)特殊抗原的抗體

C．衰老神經(jīng)細(xì)胞區(qū)別于正常神經(jīng)細(xì)胞抗原的抗體

②取第二組小鼠分離脾細(xì)胞，加入誘導(dǎo)脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合。

(2)CAR基因的構(gòu)建，流程如下圖。

在設(shè)計(jì)添加CAR基因兩端限制酶識(shí)別序列并與表達(dá)載體正確連接的過程中，必須考慮的

有_________(填標(biāo)號)。

A．PCR使用的上、下游引物需含限制酶識(shí)別序列

B．CAR基因內(nèi)可以含有引物所含限制酶識(shí)別序列

C．限制酶識(shí)別序列需位于載體啟動(dòng)子、復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因內(nèi)

D．上、下游引物所含限制酶識(shí)別序列不同

E．CAR基因插入載體位點(diǎn)需位于啟動(dòng)子下游

(3)從免疫學(xué)角度分析，如果用高特異性抗體DNA直接構(gòu)建CAR基因，再通過載體導(dǎo)入

T細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)，不但會(huì)使治療效果大幅降低，同時(shí)還會(huì)。

3．研究人員利用基因編輯技術(shù)和體細(xì)胞克隆技術(shù)成功獲得了載脂蛋白E(ApoE)基因和低密度

脂蛋白受體(LDLR)基因雙敲除(即兩個(gè)基因都失活)的五指山小型豬，該小型豬在飼喂普通飼料

的情況下會(huì)出現(xiàn)高血脂，并能自發(fā)產(chǎn)生明顯的動(dòng)脈粥樣硬化(AS)，為后繼研究提供了重要的

AS動(dòng)物模型。

回答下列問題：

(1)基因編輯載體構(gòu)建。從中獲取豬的ApoE和LDLR基因序列，設(shè)計(jì)相應(yīng)引物，人

工合成。將pX458質(zhì)粒酶切后電泳，加樣孔在極一端，上樣緩沖液中需要加入少許，

它遷移速度較快，在其遷移出凝膠前停止