演講人：日期:病理技術(shù)組織切片CATALOGUE目錄01樣本處理規(guī)范02切片制備技術(shù)03染色方法與選擇04質(zhì)量控制要點05設(shè)備與材料管理06應(yīng)用與發(fā)展方向01樣本處理規(guī)范組織采集與固定選用適當(dāng)?shù)牟杉ぞ吆图夹g(shù)，確保組織的完整性和代表性。采集方法確保采集的組織量足夠滿足制片和診斷需求。采集量根據(jù)病變部位和診斷需求，選擇恰當(dāng)?shù)慕M織部位進(jìn)行采集。采集部位010302選擇合適的固定液和固定時間，確保組織形態(tài)和抗原性的保存。固定方法04脫水與透明流程脫水劑根據(jù)組織類型和厚度，確定適當(dāng)?shù)拿撍畷r間，確保組織完全脫水。脫水時間透明劑透明時間選用高濃度的乙醇或其他脫水劑，逐步去除組織中的水分。用透明劑如二甲苯等替代脫水劑，使組織變得透明，便于后續(xù)浸蠟和切片。根據(jù)透明劑種類和組織大小，確定透明時間，避免過度透明導(dǎo)致組織變硬。包埋與修塊標(biāo)準(zhǔn)包埋劑選擇適當(dāng)?shù)陌駝?，如石蠟、樹脂等，確保組織的穩(wěn)定性和切片性。01包埋溫度控制包埋溫度，避免溫度過高導(dǎo)致組織收縮或過低導(dǎo)致切片困難。02修塊要求將包埋好的組織塊修整成規(guī)則的形狀和大小，確保切片的質(zhì)量和厚度均勻一致。03修塊工具選用鋒利的刀具或刮刀進(jìn)行修塊，避免撕裂或損傷組織。0402切片制備技術(shù)切片機操作要領(lǐng)切片后處理及時清理切片機和切片刀上的殘留物，保持切片機的清潔和衛(wèi)生。切片操作將組織塊固定在切片機上，調(diào)節(jié)切片厚度和切片速度，平穩(wěn)地推動切片機進(jìn)行切片。切片前準(zhǔn)備檢查切片機各部分是否完好，清潔切片刀和刀架，選擇合適的切片角度。切片厚度控制要求切片均勻性確保切片厚度均勻一致，避免出現(xiàn)厚薄不均的情況。03根據(jù)需要，可選擇薄切片或厚切片，但需注意切片過薄或過厚可能影響染色效果和觀察效果。02薄切片和厚切片常規(guī)切片厚度根據(jù)不同組織類型和染色要求，選擇適當(dāng)?shù)那衅穸?，常?guī)切片厚度為4-6微米。01防皺防脫片處理防皺處理在切片過程中，避免切片過度拉伸或擠壓，可采用防皺紙或?qū)Ｓ梅腊櫮頊p少切片皺紋。防脫片處理在染色前，可使用粘附劑或?qū)Ｓ每酒瑱C將切片牢固地粘附在載玻片上，防止染色過程中切片脫落。染色后處理染色后，及時用中性樹膠或封片膠封固，避免切片受潮或脫落。03染色方法與選擇常規(guī)HE染色步驟將處理好的組織塊放在切片機上切成薄片，通常厚度為4-6微米。切片制備染色脫水封片將組織樣本固定、脫水、透明、浸蠟等處理，使組織塊能夠切片。將切片放入蘇木素液中染色，使細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，再放入伊紅液中染色，使細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)紅色。將染色后的切片放入梯度酒精中脫水，最后用二甲苯透明，封上中性樹膠。樣本處理特殊染色適用場景革蘭氏染色用于檢測抗酸桿菌，如結(jié)核分枝桿菌，呈現(xiàn)紅色桿菌?？顾崛旧茹y染色PAS染色用于鑒別細(xì)菌的種類，革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。用于檢測嗜銀細(xì)胞，如網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)嗜銀顆粒呈現(xiàn)黑色。用于檢測組織中的糖類，如糖原、黏多糖等，呈現(xiàn)紫紅色。使用熱修復(fù)或酶修復(fù)等方法，使組織中的抗原充分暴露?？乖迯?fù)加入特異性抗體，與組織中的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。孵育一抗使用封閉液封閉組織中的非特異性位點，減少非特異性染色。封閉非特異性位點010302免疫組化染色流程加入與一抗結(jié)合的二抗，形成抗原-抗體-二抗復(fù)合物，增強信號。孵育二抗加入顯色劑，使復(fù)合物呈現(xiàn)顏色，再用復(fù)染液進(jìn)行復(fù)染，使組織背景著色。顯色與復(fù)染040504質(zhì)量控制要點切片完整性評估切片完整性檢查切片是否完整，有無破碎、缺失或折疊等現(xiàn)象。切片厚度評估切片厚度是否均勻，是否符合病理診斷要求。組織結(jié)構(gòu)觀察切片中組織結(jié)構(gòu)是否清晰，有無變形或失真現(xiàn)象。染色效果驗證標(biāo)準(zhǔn)觀察切片染色后組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)等是否清晰可見。染色清晰度根據(jù)病理診斷需求，選擇適當(dāng)?shù)娜旧珓┻M(jìn)行染色。染色劑選擇評估切片染色是否均勻，有無深淺不一或染色不均的現(xiàn)象。染色均勻性常見問題解決方案切片不完整檢查切片過程中是否有折疊、破裂等情況，調(diào)整切片方法或重新切片。01染色不佳檢查染色劑是否過期、染色時間是否過長或過短，調(diào)整染色方法或重新染色。02切片厚度不均檢查切片設(shè)備是否穩(wěn)定，調(diào)整切片厚度或重新切片。0305設(shè)備與材料管理切片機維護(hù)規(guī)范潤滑切片機定期為切片機添加潤滑油，保證其正常運轉(zhuǎn)。03每次使用后，及時清理切片機上的殘留物，保持設(shè)備清潔。02清潔切片機定期檢查切片機檢查切片機的各項功能是否正常，包括刀片的鋒利度、切片厚度是否均勻等。01刀具清潔保養(yǎng)方法清洗刀具將清洗后的刀具放入消毒液中浸泡一定時間，殺滅細(xì)菌。消毒刀具干燥刀具涂抹保護(hù)劑使用專業(yè)的清洗劑清洗刀具，去除表面的組織殘留和污漬。將消毒后的刀具晾干或用干凈的紗布擦干，避免殘留水分。在刀具表面涂抹一層保護(hù)劑，防止氧化和腐蝕。試劑耗材儲存條件分類儲存不同類型的試劑耗材應(yīng)分類儲存，避免混淆和污染。溫濕度控制儲存環(huán)境的溫度和濕度應(yīng)適宜，避免試劑耗材受潮或變質(zhì)。避光儲存某些試劑耗材對光敏感，應(yīng)避光儲存，以免失效。06應(yīng)用與發(fā)展方向臨床診斷核心應(yīng)用病理組織切片將病變組織切成薄片，通過顯微鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)，輔助醫(yī)生做出準(zhǔn)確診斷。01細(xì)胞學(xué)檢查通過采集體液、分泌物等樣本，制作成涂片或薄膜，觀察細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量，判斷疾病的性質(zhì)和程度。02術(shù)中快速冰凍切片在手術(shù)過程中，快速制作冰凍切片，用于確定病變的性質(zhì)和范圍，為手術(shù)方案的制定提供依據(jù)。03科研領(lǐng)域延伸場景病理學(xué)研究利用組織切片技術(shù)，研究疾病的病因、發(fā)病機制和病理變化過程，為疾病的治療和預(yù)防提供理論基礎(chǔ)。藥物研發(fā)通過組織切片技術(shù)，觀察藥物對細(xì)胞和組織的作用和影響，為藥物的篩選和研發(fā)提供實驗依據(jù)。生物學(xué)研究利用組織切片技術(shù)，研究生物體的組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)和功能，為生物學(xué)研究提供重要手段。自動化技術(shù)新趨勢數(shù)字化切片掃描將組織切片數(shù)字化，通過計算機進(jìn)行圖像分析