DBS520232017食品安全地方標準食品中13種水溶性合成著色劑的測定本標準規(guī)定了食品中檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅、喹啉黃、專利藍V、酸性藍74和靛藍等13種水溶性合成著色劑的高效液相色譜測定方法。本標準適用于各類食品中上述13種水溶性合成著色劑的測定。本標準的第一法為高效液相色譜二極管陣列檢測器法，第二法為高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。第一法適用于食品中檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅、喹啉黃、專利藍V、酸性藍74和靛藍的測定；第二法適用于食品中檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅、喹啉黃、專利藍V、酸性藍74和靛藍的確證和定量分析。本標準的方法檢出限為：檸檬黃0.5mg/kg，新紅0.5mg/kg，莧菜紅0.5mg/kg，胭脂紅0.5mg/kg，日落黃0.5mg/kg，誘惑紅0.5mg/kg，亮藍0.5mg/kg，酸性紅0.5mg/kg，赤蘚紅0.5mg/kg，喹啉黃0.5mg/kg，專利藍V0.5mg/kg，酸性藍740.5mg/kg，靛藍0.5mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T5009.1食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分總則GB/T27404實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測3原理3.1第一法高效液相色譜二極管陣列檢測器法試樣中的水溶性合成著色劑經(jīng)甲醇水溶液提取，固相萃取柱凈化，濃縮后用高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。3.2第二法高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法試樣中的水溶性合成著色劑經(jīng)甲醇水溶液提取，固相萃取柱凈化，濃縮后用高效液相色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜檢測，外標法定量。4試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。4.1試劑4.1.1甲醇（CH?OH）：色譜純。4.1.2乙腈（CH?CN）：色譜純。4.1.3乙酸銨（CH?COONH?）：色譜純。4.1.4甲酸（HCOOH）：色譜純。4.1.5氨水（NH?·H?O）：質(zhì)量分數(shù)25%~28%。4.1.6乙酸（CH?COOH）：色譜純。4.2標準品4.2.1檸檬黃（C??H?N?Na?O?S?）：純度≥95%。4.2.2新紅（C??H??N?Na?O?S?）：純度≥95%。4.2.3莧菜紅（C??H??N?Na?O??S?）：純度≥95%。4.2.4胭脂紅（C??H??N?Na?O??S?）：純度≥95%。4.2.5日落黃（C??H??N?Na?O?S?）：純度≥95%。4.2.6誘惑紅（C??H??N?Na?O?S?）：純度≥95%。4.2.7亮藍（C??H??N?Na?O?S?）：純度≥95%。4.2.8酸性紅（C??H??N?NaO?S）：純度≥95%。4.2.9赤蘚紅（C??H?I?Na?O?）：純度≥95%。4.2.10喹啉黃（C??H?NNa?O?S?）：純度≥95%。4.2.11專利藍V（C??H??N?NaO?S?）：純度≥95%。4.2.12酸性藍74（C??H??N?Na?O?S?）：純度≥95%。4.2.13靛藍（C??H?N?Na?O?S?）：純度≥95%。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器。5.2高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。5.3分析天平：感量0.1mg和0.01mg。5.4離心機：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。5.5旋渦混合器。5.6超聲波清洗器。5.7氮吹儀。5.8固相萃取裝置。5.9有相濾膜：0.22μm。5.10pH計：精度±0.02。5.11容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL。5.12移液器：100μL、200μL、500μL、1000μL。6試樣制備與保存6.1試樣制備6.1.1液體試樣：搖勻后直接取樣或稀釋后取樣。6.1.2半固體試樣：均質(zhì)后取樣。6.1.3固體試樣：粉碎后過20目篩，混勻后取樣。6.2試樣保存7分析步驟7.1提取稱取5.0g（精確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入20mL甲醇水（1:1，v/v）溶液，渦旋混勻2min，超聲提取20min，以4000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中。殘渣重復(fù)提取一次，合并上清液。7.2凈化7.2.1將提取液通過已活化的HLB固相萃取柱（200mg，6mL），流速控制在1mL/min~2mL/min。7.2.2用5mL甲醇水（1:9，v/v）溶液淋洗，棄去淋洗液。7.2.3用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液。7.2.4將洗脫液在40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL甲醇水（1:1，v/v）溶液溶解殘渣，過0.22μm有機濾膜，供高效液相色譜測定。7.3儀器條件7.3.1第一法高效液相色譜條件7.3.1.1色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）或等效柱。7.3.1.2流動相：A為0.02mol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸），B為乙腈。7.3.1.3梯度洗脫程序：0min，5%B；5min，15%B；10min，25%B；15min，35%B；20min，50%B；25min，5%B；30min，5%B。7.3.1.4流速：1.0mL/min。7.3.1.5柱溫：30℃。7.3.1.6進樣量：10μL。7.3.1.7檢測波長：254nm、420nm、620nm。7.3.2第二法高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件7.3.2.1色譜柱：C18柱（100mm×2.1mm，1.7μm）或等效柱。7.3.2.2流動相：A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈。7.3.2.3梯度洗脫程序：0min，5%B；2min，15%B；5min，25%B；8min，35%B；10min，50%B；12min，5%B；15min，5%B。7.3.2.4流速：0.3mL/min。7.3.2.5柱溫：40℃。7.3.2.6進樣量：5μL。7.3.2.7離子源：電噴霧離子源（ESI）。7.3.2.8掃描方式：正離子掃描。7.3.2.9檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。7.3.2.10霧化氣、碰撞氣等參數(shù)根據(jù)儀器型號進行優(yōu)化。7.4標準曲線的制備7.5測定取7.2處理后的試樣溶液和標準工作溶液，在相同條件下進行測定，保留時間定性，峰面積外標法定量。8結(jié)果計算試樣中水溶性合成著色劑的含量按式（1）計算：X=(c×V)/m式中：X——試樣中水溶性合成著色劑的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c——從標準曲線上查出的試樣溶液中水溶性合成著色劑的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。10回收率本方法的添加回收率范圍為85%~110%。11質(zhì)量控制11.1每批試樣分析時應(yīng)同時進行空白試