2025年臨床基因擴(kuò)增試題及答案一、選擇題（每題2分，共40分）1.以下哪種核酸擴(kuò)增技術(shù)屬于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)？()A.PCRB.RT-PCRC.LAMPD.qPCR答案：C解析：PCR、RT-PCR、qPCR都需要在不同溫度間循環(huán)來實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增，而LAMP（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)）是在恒溫條件下進(jìn)行核酸擴(kuò)增，屬于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。2.臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的空氣流向應(yīng)該是()A.污染區(qū)→半污染區(qū)→清潔區(qū)B.清潔區(qū)→半污染區(qū)→污染區(qū)C.半污染區(qū)→污染區(qū)→清潔區(qū)D.半污染區(qū)→清潔區(qū)→污染區(qū)答案：B解析：為防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染，空氣應(yīng)從清潔程度高的區(qū)域流向清潔程度低的區(qū)域，即從清潔區(qū)流向半污染區(qū)，再流向污染區(qū)。3.進(jìn)行基因擴(kuò)增時(shí)，引物的作用是()A.提供模板B.提供擴(kuò)增所需的酶C.引導(dǎo)DNA聚合酶起始合成DNAD.增加反應(yīng)的穩(wěn)定性答案：C解析：引物是一小段單鏈DNA或RNA，它能與模板DNA特定區(qū)域結(jié)合，引導(dǎo)DNA聚合酶在引物的3’端起始合成新的DNA鏈。4.以下關(guān)于熒光定量PCR技術(shù)的描述，錯(cuò)誤的是()A.可以實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的定量檢測B.不需要對(duì)照品C.常用的熒光標(biāo)記方法有SYBRGreenI法和TaqMan探針法D.具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)答案：B解析：熒光定量PCR技術(shù)需要使用對(duì)照品來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中核酸的定量檢測。5.臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)不包括以下哪個(gè)區(qū)域？()A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本處理區(qū)C.細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)D.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)答案：C解析：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室通常分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)不屬于基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)分區(qū)。6.在PCR反應(yīng)中，dNTP的作用是()A.提供能量B.提供合成DNA的原料C.激活DNA聚合酶D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：B解析：dNTP（脫氧核苷三磷酸）是合成DNA的原料，在DNA聚合酶的作用下，dNTP中的脫氧核苷酸被依次添加到新合成的DNA鏈上。7.以下哪種物質(zhì)可以抑制PCR反應(yīng)？()A.鎂離子B.模板DNAC.肝素D.引物答案：C解析：肝素是一種抗凝劑，它可以與DNA結(jié)合，抑制DNA聚合酶的活性，從而抑制PCR反應(yīng)。鎂離子是DNA聚合酶的激活劑，模板DNA和引物是PCR反應(yīng)必需的成分。8.基因擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測方法不包括()A.凝膠電泳B.測序C.免疫印跡D.熒光定量檢測答案：C解析：免疫印跡主要用于檢測蛋白質(zhì)，而凝膠電泳、測序和熒光定量檢測都可用于基因擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測。9.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制不包括()A.室內(nèi)質(zhì)量控制B.室間質(zhì)量評(píng)價(jià)C.人員資質(zhì)審核D.儀器設(shè)備的維護(hù)答案：C解析：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制包括室內(nèi)質(zhì)量控制、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)以及儀器設(shè)備的維護(hù)等，人員資質(zhì)審核是實(shí)驗(yàn)室管理的一部分，但不屬于質(zhì)量控制的范疇。10.在RT-PCR中，“RT”代表的是()A.Real-TimeB.ReverseTranscriptionC.RapidTestD.RelativeThreshold答案：B解析：RT-PCR即逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，“RT”代表ReverseTranscription（逆轉(zhuǎn)錄），是將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。11.以下關(guān)于基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室生物安全的描述，錯(cuò)誤的是()A.實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)穿戴工作服、手套、口罩等防護(hù)用品B.實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)按照醫(yī)療廢棄物的處理要求進(jìn)行處理C.實(shí)驗(yàn)室可以不設(shè)置生物安全柜D.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期進(jìn)行消毒和清潔答案：C解析：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室涉及生物樣本的處理，為防止生物污染和保護(hù)工作人員安全，必須設(shè)置生物安全柜。12.基因擴(kuò)增反應(yīng)中，退火溫度的設(shè)定主要取決于()A.引物的長度B.引物的GC含量C.模板DNA的濃度D.DNA聚合酶的活性答案：B解析：引物的GC含量決定了引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性，退火溫度主要根據(jù)引物的GC含量來設(shè)定，以保證引物能特異性地與模板結(jié)合。13.以下哪種技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)單個(gè)細(xì)胞的基因分析？()A.常規(guī)PCRB.單細(xì)胞測序技術(shù)C.熒光定量PCRD.多重PCR答案：B解析：單細(xì)胞測序技術(shù)可以對(duì)單個(gè)細(xì)胞的基因組、轉(zhuǎn)錄組等進(jìn)行分析，而常規(guī)PCR、熒光定量PCR和多重PCR通常是對(duì)大量細(xì)胞的混合樣本進(jìn)行檢測。14.臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫度和濕度要求一般為()A.溫度18-26℃，濕度30%-70%B.溫度20-28℃，濕度20%-60%C.溫度16-24℃，濕度40%-80%D.溫度22-30℃，濕度10%-50%答案：A解析：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫度一般要求在18-26℃，濕度在30%-70%，這樣的環(huán)境條件有利于保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和儀器設(shè)備的正常運(yùn)行。15.在PCR反應(yīng)體系中，DNA聚合酶的作用是()A.解開DNA雙鏈B.合成新的DNA鏈C.連接DNA片段D.切割DNA答案：B解析：DNA聚合酶能以模板DNA為指導(dǎo)，將dNTP依次添加到引物的3’端，合成新的DNA鏈。16.以下哪種疾病可以通過基因擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行診斷？()A.高血壓B.糖尿病C.乙型肝炎D.胃潰瘍答案：C解析：基因擴(kuò)增技術(shù)可用于檢測病原體的核酸，乙型肝炎是由乙肝病毒感染引起的，可通過檢測乙肝病毒的核酸進(jìn)行診斷。高血壓、糖尿病和胃潰瘍的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，基因擴(kuò)增技術(shù)一般不用于其直接診斷。17.基因擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果出現(xiàn)非特異性條帶，可能的原因不包括()A.引物特異性差B.退火溫度過低C.模板DNA濃度過高D.反應(yīng)體系中dNTP濃度過低答案：D解析：引物特異性差、退火溫度過低、模板DNA濃度過高等都可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，從而出現(xiàn)非特異性條帶。而反應(yīng)體系中dNTP濃度過低可能會(huì)影響擴(kuò)增效率，但一般不會(huì)導(dǎo)致非特異性條帶的出現(xiàn)。18.臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備定期校準(zhǔn)的目的是()A.提高儀器的使用壽命B.保證儀器的準(zhǔn)確性和可靠性C.降低儀器的故障率D.減少儀器的維修成本答案：B解析：定期校準(zhǔn)儀器設(shè)備可以保證其測量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，從而確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。19.以下關(guān)于核酸提取的描述，錯(cuò)誤的是()A.核酸提取的目的是獲得純凈的核酸B.不同的樣本類型需要采用不同的核酸提取方法C.核酸提取過程中不需要考慮防止核酸的降解D.常用的核酸提取方法有酚-氯仿法、硅膠膜吸附法等答案：C解析：核酸提取過程中需要嚴(yán)格防止核酸的降解，因?yàn)楹怂崛菀资艿胶怂崦傅纫蛩氐挠绊懚到?，從而影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。20.在熒光定量PCR中，Ct值的含義是()A.循環(huán)閾值B.熒光強(qiáng)度C.擴(kuò)增效率D.模板濃度答案：A解析：Ct值即循環(huán)閾值，是指在熒光定量PCR反應(yīng)中，熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，它與模板DNA的起始濃度呈反比。二、填空題（每題2分，共20分）1.臨床基因擴(kuò)增技術(shù)主要包括_______擴(kuò)增技術(shù)和_______擴(kuò)增技術(shù)。答案：核酸；等溫2.基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的四個(gè)主要工作區(qū)域應(yīng)_______，且在不同區(qū)域使用_______的工作服、工作鞋、手套和口罩等。答案：嚴(yán)格分隔；專用3.PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟是_______、_______和_______。答案：變性；退火；延伸4.核酸提取的主要步驟包括_______、_______、_______和_______。答案：樣本處理；核酸釋放；核酸分離；核酸純化5.熒光定量PCR常用的熒光標(biāo)記方法有_______法和_______法。答案：SYBRGreenI；TaqMan探針6.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的室內(nèi)質(zhì)量控制主要包括_______、_______和_______等方面。答案：試劑質(zhì)量控制；標(biāo)本質(zhì)量控制；擴(kuò)增過程質(zhì)量控制7.基因擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測方法主要有_______、_______、_______和_______等。答案：凝膠電泳；測序；熒光定量檢測；雜交檢測8.在PCR反應(yīng)體系中，常用的DNA聚合酶有_______和_______等。答案：TaqDNA聚合酶；PfuDNA聚合酶9.臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)措施包括_______、_______、_______和_______等。答案：個(gè)人防護(hù)；實(shí)驗(yàn)室布局和設(shè)施；廢棄物處理；生物安全培訓(xùn)10.基因擴(kuò)增技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用主要包括_______、_______、_______和_______等方面。答案：病原體檢測；遺傳病診斷；腫瘤基因檢測；藥物基因組學(xué)檢測三、判斷題（每題2分，共20分）1.臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室可以不進(jìn)行分區(qū)設(shè)置。()答案：×解析：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室必須進(jìn)行分區(qū)設(shè)置，以防止交叉污染，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.PCR反應(yīng)中，引物的濃度越高，擴(kuò)增效果越好。()答案：×解析：引物濃度過高可能會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，影響擴(kuò)增效果，引物濃度需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行優(yōu)化。3.核酸提取過程中，只要獲得核酸就可以，不需要考慮其純度和完整性。()答案：×解析：核酸的純度和完整性會(huì)影響后續(xù)的基因擴(kuò)增和檢測結(jié)果，因此在核酸提取過程中需要保證核酸的純度和完整性。4.熒光定量PCR技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的絕對(duì)定量和相對(duì)定量。()答案：√解析：熒光定量PCR技術(shù)通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的絕對(duì)定量，通過比較不同樣本之間的Ct值可以實(shí)現(xiàn)相對(duì)定量。5.臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的工作人員不需要進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)。()答案：×解析：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，掌握相關(guān)的技術(shù)和知識(shí)，才能保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和安全性。6.基因擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳檢測中，條帶越亮表示擴(kuò)增產(chǎn)物的量越多。()答案：√解析：在凝膠電泳中，條帶的亮度與擴(kuò)增產(chǎn)物的量成正比，條帶越亮表示擴(kuò)增產(chǎn)物的量越多。7.等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)不需要溫度循環(huán)，因此可以在常溫下進(jìn)行。()答案：×解析：等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)雖然不需要像PCR那樣進(jìn)行溫度循環(huán)，但一般需要在特定的恒溫條件下進(jìn)行，而不是常溫。8.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)是由實(shí)驗(yàn)室自行組織的。()答案：×解析：室間質(zhì)量評(píng)價(jià)是由權(quán)威機(jī)構(gòu)組織的，用于評(píng)估實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，不是由實(shí)驗(yàn)室自行組織的。9.在PCR反應(yīng)中，模板DNA的量越多，擴(kuò)增效果越好。()答案：×解析：模板DNA量過多可能會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)體系中雜質(zhì)增多，影響擴(kuò)增效果，模板DNA的量需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行優(yōu)化。10.基因擴(kuò)增技術(shù)只能用于疾病的診斷，不能用于疾病的治療監(jiān)測。()答案：×解析：基因擴(kuò)增技術(shù)不僅可以用于疾病的診斷，還可以用于疾病的治療監(jiān)測，如監(jiān)測病原體的清除情況、腫瘤的復(fù)發(fā)等。四、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)設(shè)置及各區(qū)域的主要功能。(1).試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要功能是進(jìn)行試劑的準(zhǔn)備和分裝。該區(qū)域要求環(huán)境清潔，避免受到核酸污染，所有用于基因擴(kuò)增的試劑，如引物、dNTP、DNA聚合酶等都在此區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)備和配制，并分裝成小份保存，以防止試劑的交叉污染。(2).標(biāo)本處理區(qū)：負(fù)責(zé)臨床標(biāo)本的接收、處理和核酸提取。臨床采集的各種標(biāo)本，如血液、組織等在此區(qū)域進(jìn)行前處理，然后提取其中的核酸。該區(qū)域需要嚴(yán)格的生物安全防護(hù)措施，以防止標(biāo)本中的病原體對(duì)工作人員造成感染。(3).擴(kuò)增區(qū)：進(jìn)行核酸的擴(kuò)增反應(yīng)。將提取的核酸模板與準(zhǔn)備好的試劑混合，放入PCR儀等擴(kuò)增設(shè)備中進(jìn)行擴(kuò)增。此區(qū)域應(yīng)避免擴(kuò)增產(chǎn)物的溢出，防止對(duì)其他區(qū)域造成污染。(4).擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測和分析。常用的檢測方法有凝膠電泳、測序、熒光定量檢測等。該區(qū)域存在大量的擴(kuò)增產(chǎn)物，是最容易造成污染的區(qū)域，因此需要與其他區(qū)域嚴(yán)格分隔。2.請(qǐng)闡述熒光定量PCR技術(shù)的原理和應(yīng)用。原理：熒光定量PCR技術(shù)是在常規(guī)PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上加入了熒光標(biāo)記物。在PCR反應(yīng)過程中，熒光標(biāo)記物會(huì)隨著DNA的擴(kuò)增而產(chǎn)生熒光信號(hào)，熒光信號(hào)的強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的量成正比。通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)的變化，可以得到Ct值（循環(huán)閾值），Ct值與模板DNA的起始濃度呈反比。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以對(duì)樣本中核酸的起始濃度進(jìn)行定量分析。應(yīng)用：(1).病原體檢測：可用于檢測各種病原體，如病毒、細(xì)菌、真菌等的核酸，實(shí)現(xiàn)對(duì)感染性疾病的早期診斷和病情監(jiān)測。例如，檢測乙肝病毒、艾