2025年度衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)資格考試[病理學(xué)技術(shù)]復(fù)習(xí)題及答案1.簡(jiǎn)述組織固定的主要生物學(xué)目的及10%中性緩沖福爾馬林的適用范圍。組織固定的核心目的包括：①抑制組織細(xì)胞自溶與細(xì)菌腐敗，保持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性；②凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、酶類），防止其擴(kuò)散流失；③增強(qiáng)細(xì)胞成分對(duì)染色劑的親和力，便于后續(xù)染色。10%中性緩沖福爾馬林（pH7.2-7.4）適用于大多數(shù)組織標(biāo)本的固定，尤其對(duì)淋巴造血系統(tǒng)、胃腸道黏膜、內(nèi)分泌腺體等軟組織保存效果良好，可較好保留抗原性，適合免疫組化預(yù)處理。2.石蠟切片制備中，脫水不徹底會(huì)導(dǎo)致哪些常見(jiàn)問(wèn)題？請(qǐng)列舉3項(xiàng)關(guān)鍵解決措施。脫水不徹底的典型問(wèn)題：①組織透明不充分（二甲苯無(wú)法完全滲透），包埋時(shí)石蠟難以浸入，導(dǎo)致切片出現(xiàn)空洞或裂隙；②切片時(shí)組織易脆裂，無(wú)法形成連續(xù)完整的蠟帶；③染色時(shí)染料滲透不均，出現(xiàn)局部著色淺或空白區(qū)。解決措施：①嚴(yán)格按梯度乙醇脫水（70%→80%→90%→95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ），每級(jí)時(shí)間依組織厚度調(diào)整（一般1-3小時(shí)）；②對(duì)致密組織（如纖維瘢痕、骨組織脫鈣后）延長(zhǎng)高濃度乙醇時(shí)間；③脫水后增加無(wú)水乙醇與透明劑（如二甲苯）的過(guò)渡步驟（如1:1混合液30分鐘），確保充分置換。3.簡(jiǎn)述HE染色中“分化”步驟的操作原理及過(guò)分化的補(bǔ)救方法。分化是指用酸性溶液（如1%鹽酸乙醇）處理已染色的組織，溶去細(xì)胞核內(nèi)過(guò)多結(jié)合的蘇木精，使核結(jié)構(gòu)（如染色質(zhì)、核仁）清晰顯示的過(guò)程。其原理是蘇木精與鋁離子形成的有色絡(luò)合物（藍(lán)紫色）可被酸解離，未與細(xì)胞核結(jié)合的多余染料被洗脫。若過(guò)分化（核著色過(guò)淺），補(bǔ)救方法為：①將切片重新浸入蘇木精染液1-2分鐘（需稀釋至原濃度的1/3-1/2，避免過(guò)染）；②或用稀氨水（0.5%碳酸氫鈉溶液）返藍(lán)后，直接補(bǔ)染伊紅前短暫復(fù)染蘇木精（30秒內(nèi)），再嚴(yán)格控制分化時(shí)間。4.列舉3種常用于顯示膠原纖維的特殊染色方法，并說(shuō)明各自的染色結(jié)果。①M(fèi)asson三色染色：膠原纖維呈藍(lán)色（苯胺藍(lán)或亮綠），肌纖維、紅細(xì)胞呈紅色（酸性品紅），胞核呈藍(lán)黑色；②VanGieson染色：膠原纖維呈紅色（苦味酸-酸性品紅混合液），肌纖維呈黃色（苦味酸），胞核呈棕黑色；③天狼星紅染色：在偏振光顯微鏡下，Ⅰ型膠原纖維呈強(qiáng)雙折光的紅色或黃色，Ⅲ型膠原呈弱雙折光的綠色。5.免疫組織化學(xué)染色中，“內(nèi)源性生物素”干擾可能導(dǎo)致的假陽(yáng)性表現(xiàn)是什么？如何排除？?jī)?nèi)源性生物素主要存在于肝、腎、脾等組織的細(xì)胞（如肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞）及巨噬細(xì)胞中，若使用鏈霉親和素-生物素（SABC）法，未阻斷的內(nèi)源性生物素會(huì)與鏈霉親和素結(jié)合，導(dǎo)致非特異性顯色（表現(xiàn)為胞質(zhì)或胞膜出現(xiàn)與目標(biāo)抗原無(wú)關(guān)的棕黃色顆粒）。排除方法：①預(yù)處理切片時(shí)，用0.01%～0.1%的卵白素（avidin）溶液孵育10分鐘，封閉內(nèi)源性生物素；②或改用非生物素檢測(cè)系統(tǒng)（如EnVision法）；③對(duì)肝、腎等易干擾組織，提前查閱抗體說(shuō)明書，確認(rèn)檢測(cè)系統(tǒng)是否需生物素阻斷步驟。6.脫落細(xì)胞涂片制作中，“推片法”與“涂抹法”的適用場(chǎng)景及質(zhì)量要求有何不同？推片法適用于較稀薄的標(biāo)本（如胸腹水、尿液）：將載玻片一端接觸標(biāo)本液滴，以30°～45°角勻速向前推動(dòng)，形成薄而均勻的涂片（厚度以可透見(jiàn)報(bào)紙字跡為宜）。涂抹法適用于黏稠標(biāo)本（如痰液、宮頸刮取物）：用竹簽或細(xì)胞刷將標(biāo)本在載玻片上向一個(gè)方向輕輕涂抹，避免反復(fù)摩擦導(dǎo)致細(xì)胞變形。質(zhì)量要求均為：涂片面積2cm×2cm，細(xì)胞分布均勻無(wú)堆積，背景清晰無(wú)雜質(zhì)，干燥及時(shí)（防細(xì)胞自溶）。7.液基薄層細(xì)胞學(xué)（TCT）相比傳統(tǒng)涂片的主要技術(shù)優(yōu)勢(shì)有哪些？至少列舉4項(xiàng)。①細(xì)胞富集：通過(guò)液基保存液收集標(biāo)本，去除黏液、血液等干擾成分，提高有效細(xì)胞比例；②分布均勻：自動(dòng)制片儀將細(xì)胞均勻鋪展成單層，減少重疊；③背景清晰：保存液可溶解紅細(xì)胞、炎細(xì)胞碎片，降低閱片干擾；④可長(zhǎng)期保存：液基標(biāo)本在4℃下可保存6周，便于復(fù)查或補(bǔ)做免疫細(xì)胞化學(xué)；⑤自動(dòng)化程度高：減少人工操作誤差，提高制片重復(fù)性。8.透射電鏡樣品制備中，“雙固定”的具體操作及意義是什么？雙固定指先用戊二醛固定，再用鋨酸固定的兩步法。操作：①2.5%戊二醛（0.1mol/LPBS緩沖，pH7.2-7.4）4℃固定2-4小時(shí)，預(yù)固定細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；②0.1mol/LPBS漂洗3次（每次10分鐘）；③1%鋨酸（同緩沖液）4℃固定1-2小時(shí)，進(jìn)一步固定膜性結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞膜、線粒體膜）并增強(qiáng)電子密度。意義：戊二醛主要固定蛋白質(zhì)（通過(guò)醛基與氨基交聯(lián)），但對(duì)脂類固定弱；鋨酸可與脂類結(jié)合（形成鋨黑），二者互補(bǔ)，全面保存細(xì)胞內(nèi)各種成分（如細(xì)胞器、細(xì)胞連接）的超微結(jié)構(gòu)。9.簡(jiǎn)述冰凍切片制片中“組織發(fā)脆”的可能原因及解決方法?？赡茉颍孩俳M織含水量過(guò)高（如新鮮腦組織未稍晾干），冰凍時(shí)形成大冰晶破壞結(jié)構(gòu)；②冷凍溫度過(guò)低（-30℃以下），導(dǎo)致組織過(guò)度硬化；③切片機(jī)刀架與組織塊角度不當(dāng)（角度過(guò)小或過(guò)大），切片時(shí)阻力增加。解決方法：①取材后用濾紙吸去表面水分，或涂少量OCT包埋劑（減少冰晶）；②調(diào)整冷凍溫度（一般-18℃～-22℃，脂肪組織可稍低至-25℃）；③檢查切片刀角度（通常15°～25°），確保刀刃與組織塊表面平行；④對(duì)脂肪組織等易脆標(biāo)本，可先在-10℃預(yù)冷2分鐘，再降至工作溫度。10.實(shí)驗(yàn)室生物安全管理中，針對(duì)病理學(xué)技術(shù)操作的一級(jí)生物安全防護(hù)措施包括哪些？①人員防護(hù)：操作時(shí)穿戴一次性手套、實(shí)驗(yàn)室白大衣，接觸體液/組織時(shí)加戴防護(hù)眼鏡；②環(huán)境管理：保持實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)良好，生物安全柜（BSC）每次使用前開(kāi)機(jī)運(yùn)行10分鐘，使用后用75%乙醇擦拭；③銳器處理：切片刀、蓋玻片等銳器放入專用防刺破容器，禁止徒手分揀；④標(biāo)本管理：所有組織標(biāo)本需標(biāo)注“生物危害”，廢棄標(biāo)本經(jīng)高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘）后按醫(yī)療廢物處理；⑤應(yīng)急處理：若發(fā)生標(biāo)本潑濺，立即用含有效氯5000mg/L的消毒液覆蓋污染區(qū)30分鐘，再用吸水紙清除。11.案例分析：某實(shí)驗(yàn)室常規(guī)石蠟切片HE染色后，出現(xiàn)“細(xì)胞核著色深、胞質(zhì)著色淺”的異常結(jié)果，可能的原因有哪些？請(qǐng)列出排查步驟。可能原因：①蘇木精染液過(guò)濃或染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；②分化步驟不充分（鹽酸乙醇作用時(shí)間不足）；③伊紅染液濃度過(guò)低或染色時(shí)間過(guò)短；④切片脫蠟不徹底（二甲苯殘留導(dǎo)致染料滲透障礙）。排查步驟：①檢查蘇木精使用時(shí)間（一般3個(gè)月需更換），用已知正常切片做平行試驗(yàn)（若正常切片也核深染，提示染液?jiǎn)栴}）；②計(jì)時(shí)分化步驟（正常應(yīng)10-30秒），延長(zhǎng)分化時(shí)間后觀察是否改善；③測(cè)試伊紅染液（用正常切片縮短蘇木精時(shí)間，若胞質(zhì)仍淺，提示伊紅需調(diào)整濃度或更換）；④取一片異常切片重新脫蠟（二甲苯Ⅰ5分鐘→二甲苯Ⅱ5分鐘），再重新染色，若結(jié)果改善則為脫蠟不徹底。12.簡(jiǎn)述免疫組化結(jié)果判讀中“陽(yáng)性對(duì)照”與“陰性對(duì)照”的設(shè)置意義及具體操作。陽(yáng)性對(duì)照：使用已知含目標(biāo)抗原的組織（如檢測(cè)CK7時(shí)用正常乳腺組織）作為對(duì)照，若陽(yáng)性對(duì)照無(wú)顯色，提示檢測(cè)系統(tǒng)（抗體、試劑、操作）存在問(wèn)題（如抗體失效、孵育時(shí)間不足），實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可信。操作：將陽(yáng)性對(duì)照組織與待測(cè)標(biāo)本同步處理（同批染色、相同條件）。陰性對(duì)照：使用不含目標(biāo)抗原的組織（如檢測(cè)CD3時(shí)用正常乳腺組織）或省略一抗（用PBS替代），若陰性對(duì)照出現(xiàn)顯色，提示非特異性染色（如內(nèi)源性過(guò)氧化物酶未阻斷、二抗交叉反應(yīng)）。操作：陰性對(duì)照與待測(cè)標(biāo)本在同一批次中完成，除一抗外其余步驟一致。13.電子顯微鏡樣品包埋時(shí)，“滲透”步驟的目的及操作要點(diǎn)是什么？滲透的目的是使包埋劑（如環(huán)氧樹脂）充分置換組織內(nèi)的脫水劑（丙酮），確保包埋劑均勻滲入細(xì)胞間隙及細(xì)胞器內(nèi)部，固化后形成均勻、硬度適宜的包埋塊。操作要點(diǎn)：①梯度滲透：從低濃度包埋劑/丙酮混合液（1:1）開(kāi)始，逐步過(guò)渡到純包埋劑（1:1→2:1→純包埋劑，每級(jí)2-4小時(shí)）；②緩慢攪拌（用磁力攪拌器），促進(jìn)包埋劑滲透；③對(duì)致密組織（如腎小球、神經(jīng)組織）延長(zhǎng)滲透時(shí)間（可過(guò)夜）；④避免氣泡產(chǎn)生（滲透過(guò)程在真空干燥器中進(jìn)行，抽氣10分鐘/次，重復(fù)2-3次）。14.簡(jiǎn)述細(xì)胞病理學(xué)中“挖空細(xì)胞”的形態(tài)特征及其病理學(xué)意義。挖空細(xì)胞（koilocyte）是HPV感染的特征性細(xì)胞，形態(tài)特征：①細(xì)胞體積增大，核周出現(xiàn)空暈（挖空區(qū)），空暈邊緣細(xì)胞漿濃縮（呈環(huán)狀）；②細(xì)胞核增大（約為正常上皮細(xì)胞核的2-3倍），深染，可見(jiàn)雙核或多核；③核膜不規(guī)則（鋸齒狀），染色質(zhì)分布不均（粗顆粒狀）。病理學(xué)意義：挖空細(xì)胞的存在提示可能存在HPV感染（尤其是高危型HPV16、18型），需結(jié)合HPV檢測(cè)或組織學(xué)活檢進(jìn)一步判斷是否為宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）或早期宮頸癌。15.實(shí)驗(yàn)室檔案管理中，病理學(xué)技術(shù)相關(guān)記錄應(yīng)包括哪些核心內(nèi)容？①標(biāo)本處理記錄：接收時(shí)間、標(biāo)本類型、固定液種類及體積（固定液:組織=5:1）、脫水/透明/包埋的具體時(shí)間與試劑濃度；②染色記錄：HE/特殊染色/免疫組化的染液配置時(shí)間、批號(hào)、染色時(shí)間、操作人員；③質(zhì)量控制記錄：切片合格率（如每張切片斷裂≤2處）、染色滿意度（核漿對(duì)比清晰率）、免疫組化對(duì)照結(jié)果（陽(yáng)性/陰性對(duì)照是否符合要求）；④設(shè)備維護(hù)記錄：切片機(jī)刀片更換時(shí)間、恒溫箱溫度校準(zhǔn)記錄、生物安全柜濾膜更換日期；⑤人員培訓(xùn)記錄：技術(shù)人員參加病理技術(shù)規(guī)范培訓(xùn)的時(shí)間、考核成績(jī)。16.案例分析：某實(shí)驗(yàn)室制作骨組織切片時(shí)，脫鈣后切片出現(xiàn)“組織發(fā)酥、易破碎”，可能的原因有哪些？如何優(yōu)化脫鈣流程？可能原因：①脫鈣過(guò)度（酸處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)），導(dǎo)致骨基質(zhì)膠原嚴(yán)重破壞；②脫鈣液選擇不當(dāng)（如用強(qiáng)酸鹽酸而非弱酸甲酸-檸檬酸混合液），對(duì)組織損傷大；③脫鈣后中和不徹底（殘留酸液繼續(xù)破壞組織）；④脫水前未充分水洗（酸液殘留影響脫水效果）。優(yōu)化流程：①選擇溫和脫鈣液（如5%甲酸+10%福爾馬林混合液），兼顧脫鈣與固定；②定時(shí)檢測(cè)脫鈣程度（用針刺法：針尖可刺入骨皮質(zhì)即停止）；③脫鈣后用0.1mol/LPBS（pH7.4）漂洗6-8小時(shí)（每2小時(shí)換液），中和殘留酸；④脫水時(shí)延長(zhǎng)70%乙醇時(shí)間（4-6小時(shí)），避免過(guò)度收縮；⑤包埋前用45℃溫石蠟預(yù)浸（2小時(shí)），增強(qiáng)組織韌性。17.簡(jiǎn)述熒光免疫組織化學(xué)染色的主要注意事項(xiàng)。①避光操作：熒光素（如FITC、TRITC）易受光照分解，染色后切片需用鋁箔包裹，顯微鏡觀察時(shí)縮短光照時(shí)間（每次不超過(guò)5分鐘）；②防淬滅：封片時(shí)使用含抗熒光淬滅劑的封片劑（如甘油-對(duì)苯二胺溶液）；③抗體濃度：熒光抗體需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳稀釋度（過(guò)高易導(dǎo)致非特異性熒光，過(guò)低則信號(hào)弱）；④對(duì)照設(shè)置：除常規(guī)陽(yáng)性/陰性對(duì)照外，需設(shè)置自發(fā)熒光對(duì)照（未加一抗的標(biāo)本，觀察組織自身熒光強(qiáng)度）；⑤結(jié)果記錄：用熒光顯微鏡配備的CCD相機(jī)及時(shí)拍照，避免熒光衰減影響判讀。18.透射電鏡超薄切片“刀痕”產(chǎn)生的可能原因及解決方法。刀痕（表現(xiàn)為切片表面平行于刀刃的細(xì)溝）的可能原因：①玻璃刀或鉆石刀刀刃有缺損（如微小崩口）；②組織塊與刀刃角度不當(dāng)（角度過(guò)大導(dǎo)致切片時(shí)阻力增加）；③切片機(jī)推進(jìn)速度過(guò)快（組織塊沖擊刀刃）；④包埋塊硬度不均（局部過(guò)軟或過(guò)硬）。解決方法：①更換新制玻璃刀（用刀筆劃制時(shí)力度均勻）或檢查鉆石刀刀刃（用顯微鏡觀察有無(wú)缺損）；②調(diào)整切割角度（通常玻璃刀8°～10°，鉆石刀3°～5°）；③降低切片機(jī)推進(jìn)速度（0.5-1mm/s）；④包埋時(shí)確保組織周圍包埋劑均勻（避免氣泡或固化不均），或?qū)τ捕炔痪慕M織（如腫瘤+正常組織）分開(kāi)包埋。19.簡(jiǎn)述脫落細(xì)胞巴氏染色中“藍(lán)化”步驟的作用及操作方法。藍(lán)化是指用堿性溶液（如稀氨水、0.5%碳酸氫鈉）處理已染色的細(xì)胞涂片，使蘇木精染成的紫紅色細(xì)胞核轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)紫色的過(guò)程。作用：①增強(qiáng)核結(jié)構(gòu)的對(duì)比度（藍(lán)紫色比紫紅色更易觀察染色質(zhì)細(xì)節(jié)）；②中和細(xì)胞內(nèi)殘留的酸性物質(zhì)（如伊紅染液中的冰醋酸），穩(wěn)定染色結(jié)果。操作方法：將涂片從伊紅染液中取出后，用蒸餾水漂洗3次，然后浸入藍(lán)化液中輕輕晃動(dòng)10-20秒（以細(xì)胞核顏色由紅轉(zhuǎn)藍(lán)為準(zhǔn)），再用蒸餾水漂洗去除殘留堿液，避免背景著色