基于液體活檢的ILD抗纖維化藥物療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案演講人01基于液體活檢的ILD抗纖維化藥物療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案02ILD抗纖維化治療的臨床需求與監(jiān)測(cè)困境03ILD的病理生理特征與抗纖維化治療的核心靶點(diǎn)04液體活檢在ILD中的理論基礎(chǔ)與應(yīng)用價(jià)值05ILD抗纖維化藥物療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案的核心設(shè)計(jì)06臨床實(shí)施的關(guān)鍵環(huán)節(jié)與注意事項(xiàng)07挑戰(zhàn)與未來(lái)展望08總結(jié)與展望目錄01基于液體活檢的ILD抗纖維化藥物療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案02ILD抗纖維化治療的臨床需求與監(jiān)測(cè)困境ILD抗纖維化治療的臨床需求與監(jiān)測(cè)困境作為呼吸領(lǐng)域的研究者與臨床實(shí)踐者，我深刻間質(zhì)性肺疾?。↖LD）的診療之路充滿(mǎn)挑戰(zhàn)。ILD是一組以肺泡炎癥和纖維化為特征的異質(zhì)性肺部疾病，特發(fā)性肺纖維化（IPF）是其最具代表性的類(lèi)型，中位生存期僅2-3年。抗纖維化藥物（如尼達(dá)尼布、吡非尼酮）的問(wèn)世雖為患者帶來(lái)希望，但臨床實(shí)踐中仍面臨核心難題：療效異質(zhì)性顯著與動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)手段匱乏。研究顯示，約30%-40%的ILD患者對(duì)抗纖維化藥物反應(yīng)不佳，而傳統(tǒng)監(jiān)測(cè)手段（如肺功能檢查、高分辨率CT）存在明顯滯后性——肺功能指標(biāo)（如FVC）下降往往提示纖維化已進(jìn)展至不可逆階段，HRCT雖能直觀(guān)顯示影像學(xué)變化，但輻射暴露、成本高昂及主觀(guān)解讀差異使其難以頻繁重復(fù)。ILD抗纖維化治療的臨床需求與監(jiān)測(cè)困境更值得關(guān)注的是，ILD的病理過(guò)程存在“動(dòng)態(tài)演進(jìn)”特征：纖維化區(qū)域存在活躍的成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）沉積與異常修復(fù)，而傳統(tǒng)活檢因創(chuàng)傷大、重復(fù)性差，難以實(shí)現(xiàn)“全程監(jiān)測(cè)”。液體活檢（liquidbiopsy）技術(shù)的出現(xiàn)為這一困境提供了突破性思路：通過(guò)檢測(cè)外周血中來(lái)源肺組織的生物標(biāo)志物，可實(shí)現(xiàn)對(duì)ILD病理過(guò)程的“實(shí)時(shí)窗口”觀(guān)察。本文將從ILD的病理生理特征出發(fā)，結(jié)合液體活檢的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，構(gòu)建一套系統(tǒng)的抗纖維化藥物療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案，旨在推動(dòng)ILD診療從“經(jīng)驗(yàn)導(dǎo)向”向“精準(zhǔn)動(dòng)態(tài)”模式轉(zhuǎn)變。03ILD的病理生理特征與抗纖維化治療的核心靶點(diǎn)ILD的病理生理特征與抗纖維化治療的核心靶點(diǎn)ILD的纖維化本質(zhì)是“失控的組織修復(fù)過(guò)程”，其核心機(jī)制包括：①肺泡上皮細(xì)胞損傷與凋亡，觸發(fā)TGF-β、PDGF等促纖維化因子釋放；②成纖維細(xì)胞活化、增殖并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，大量分泌ECM（如I型膠原、纖維連接蛋白）；③ECM降解與合成失衡，導(dǎo)致肺結(jié)構(gòu)破壞與功能喪失。抗纖維化藥物主要通過(guò)抑制成纖維細(xì)胞活化（尼達(dá)尼布靶向PDGF、VEGF、FGF受體）、抑制促纖維化因子信號(hào)（吡非尼酮抑制TGF-β）發(fā)揮作用，但療效受患者個(gè)體差異（如基因多態(tài)性、共病狀態(tài)）、疾病亞型（如IPFvs.非IPF-ILD）及藥物代謝動(dòng)力學(xué)影響。傳統(tǒng)療效評(píng)價(jià)依賴(lài)“終點(diǎn)指標(biāo)”（如6個(gè)月FVC下降≥10%或死亡），但這一指標(biāo)無(wú)法反映藥物早期的生物學(xué)效應(yīng)。例如，部分患者治療初期影像學(xué)纖維化負(fù)荷未明顯減少，但促纖維化通路已被抑制；而另一些患者雖FVC暫時(shí)穩(wěn)定，但潛在纖維化活動(dòng)仍在持續(xù)。ILD的病理生理特征與抗纖維化治療的核心靶點(diǎn)這種“評(píng)價(jià)滯后性”導(dǎo)致治療調(diào)整延遲，錯(cuò)失最佳干預(yù)時(shí)機(jī)。液體活檢的優(yōu)勢(shì)在于可捕捉反映“纖維化活動(dòng)度”的早期生物標(biāo)志物，如循環(huán)纖維化細(xì)胞（circulatingfibrocytes）、促纖維化因子、ECM成分及miRNA等，為療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)提供“中間表型”依據(jù)。04液體活檢在ILD中的理論基礎(chǔ)與應(yīng)用價(jià)值液體活檢在ILD中的理論基礎(chǔ)與應(yīng)用價(jià)值液體活檢是指通過(guò)檢測(cè)外周血、尿液等體液中的生物標(biāo)志物，反映疾病狀態(tài)的技術(shù)。ILD的液體活檢標(biāo)志物主要來(lái)源于肺組織損傷釋放的物質(zhì)，其理論基礎(chǔ)在于：肺泡上皮損傷后，細(xì)胞內(nèi)容物（如DNA、RNA）、分泌的因子（如TGF-β）及循環(huán)中的肺源性細(xì)胞（如肺泡上皮細(xì)胞外泌體）可進(jìn)入外周血，形成“肺組織-血液”信息通路。液體活檢標(biāo)志物的分類(lèi)與ILD相關(guān)性1.循環(huán)DNA（cfDNA）：包括肺源性cfDNA（攜帶肺組織特異性突變或甲基化特征）和cfDNA碎片化模式（反映細(xì)胞死亡程度）。研究顯示，IPF患者外周血中cfDNA濃度與肺纖維化程度正相關(guān)，且甲基化標(biāo)志物（如SFRP2、DACH1）可區(qū)分進(jìn)展型與非進(jìn)展型ILD。2.外泌體（exosome）：由肺泡上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞分泌的納米級(jí)囊泡，攜帶miRNA、蛋白質(zhì)等生物活性分子。例如，肺泡上皮細(xì)胞來(lái)源的外泌體miR-21可通過(guò)抑制PTEN基因促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化，其水平與ILD患者預(yù)后不良相關(guān)。3.循環(huán)蛋白標(biāo)志物：如基質(zhì)金屬蛋白酶-7（MMP-7）、骨膜蛋白（periostin）、表面活性蛋白D（SP-D）等。MMP-7由肺泡上皮細(xì)胞分泌，可降解ECM并促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，是ILD進(jìn)展的強(qiáng)預(yù)測(cè)因子；periostin反映TGF-β通路激活，其水平與吡非尼酮療效相關(guān)。液體活檢標(biāo)志物的分類(lèi)與ILD相關(guān)性4.循環(huán)細(xì)胞（circulatingcells）：如纖維細(xì)胞（表達(dá)CD34+CD45+COL1+）、循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞（CECs）等。纖維細(xì)胞可遷移至肺組織并分化為肌成纖維細(xì)胞，其在外周血中的比例與ILD纖維化負(fù)荷正相關(guān)。液體活檢相比傳統(tǒng)方法的核心優(yōu)勢(shì)①微創(chuàng)性與可重復(fù)性：僅需2-5ml外周血，可每周甚至每日監(jiān)測(cè)，克服了肺活檢的風(fēng)險(xiǎn)與HRCT的輻射限制；②早期敏感性：標(biāo)志物變化早于肺功能或影像學(xué)改變，例如MMP-7水平在治療2周即可顯著下降，而FVC變化通常需要3-6個(gè)月；③異質(zhì)性解析：通過(guò)單細(xì)胞測(cè)序等技術(shù)，可識(shí)別不同ILD亞型的分子分型（如“炎癥驅(qū)動(dòng)型”vs“纖維化主導(dǎo)型”），指導(dǎo)個(gè)體化治療；④全景式監(jiān)測(cè)：同時(shí)反映肺組織損傷、炎癥、纖維化等多維度病理過(guò)程，而非單一指標(biāo)。05ILD抗纖維化藥物療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案的核心設(shè)計(jì)ILD抗纖維化藥物療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案的核心設(shè)計(jì)基于ILD的病理特征與液體活檢的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，我們構(gòu)建了“多維度、多時(shí)間點(diǎn)、多技術(shù)整合”的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案，核心目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)“療效早期識(shí)別、無(wú)效及時(shí)干預(yù)、進(jìn)展精準(zhǔn)預(yù)警”。方案設(shè)計(jì)遵循“個(gè)體化基線(xiàn)建立-治療早期反應(yīng)評(píng)估-中期療效確認(rèn)-長(zhǎng)期預(yù)后監(jiān)測(cè)”的全程管理邏輯。監(jiān)測(cè)指標(biāo)體系的分層構(gòu)建根據(jù)ILD纖維化進(jìn)程的“啟動(dòng)-進(jìn)展-穩(wěn)定”階段，將監(jiān)測(cè)指標(biāo)分為三級(jí)，形成“核心指標(biāo)+次要指標(biāo)+探索指標(biāo)”的分層體系。監(jiān)測(cè)指標(biāo)體系的分層構(gòu)建核心指標(biāo)（必備監(jiān)測(cè)項(xiàng)目）-MMP-7：作為“纖維化活動(dòng)度”的通用標(biāo)志物，其半衰期短（約2-3小時(shí)），可快速反映藥物對(duì)TGF-β通路的抑制效果?；€(xiàn)水平＞1.2ng/ml提示進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)高，治療4周較基線(xiàn)下降≥30%定義為“早期反應(yīng)”。12-FVC變化：作為傳統(tǒng)“金標(biāo)準(zhǔn)”，在基線(xiàn)、3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)重復(fù)檢測(cè)，結(jié)合液體活檢結(jié)果綜合判斷（如液體活檢提示有效但FVC下降，需排除其他因素如肺動(dòng)脈高壓）。3-外泌體miR-21-5p：靶向PTEN/PI3K/Akt通路，促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化。采用數(shù)字PCR檢測(cè)，基線(xiàn)相對(duì)表達(dá)量＞2.0（以健康人為對(duì)照）提示纖維化活躍，治療2周下降≥40%提示藥物有效。監(jiān)測(cè)指標(biāo)體系的分層構(gòu)建次要指標(biāo)（輔助判斷項(xiàng)目）-cfDNA甲基化標(biāo)志物：選擇SFRP2（Wnt通路抑制劑）和DACH1（TGF-β通路調(diào)控基因），采用甲基化測(cè)序技術(shù)?；€(xiàn)高甲基化（甲基化水平＞15%）提示纖維化進(jìn)程緩慢，可能對(duì)吡非尼酮反應(yīng)更佳；治療3個(gè)月甲基化水平回升≥20%提示疾病穩(wěn)定。-骨膜蛋白（periostin）：反映TGF-β下游效應(yīng)，ELISA檢測(cè)?；€(xiàn)＞50ng/ml提示“纖維化主導(dǎo)型”ILD，對(duì)尼達(dá)尼布的響應(yīng)率更高；治療6個(gè)月較基線(xiàn)下降≥25%提示療效維持。-循環(huán)纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD34+CD45+COL1+細(xì)胞，基線(xiàn)＞15個(gè)/μl提示持續(xù)纖維化活動(dòng)，治療3個(gè)月下降≥50%提示藥物抑制成纖維細(xì)胞活化有效。監(jiān)測(cè)指標(biāo)體系的分層構(gòu)建探索指標(biāo)（研究性項(xiàng)目，用于個(gè)體化調(diào)整）-單細(xì)胞測(cè)序（scRNA-seq）：對(duì)治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）進(jìn)行測(cè)序，識(shí)別肺源性細(xì)胞亞群（如肺泡上皮細(xì)胞來(lái)源的EpCAM+CD326+細(xì)胞）及基因表達(dá)譜，解析藥物對(duì)免疫微環(huán)境的影響。-微生物組學(xué)：檢測(cè)腸道/呼吸道菌群組成，菌群多樣性降低（如擬桿菌門(mén)減少）與ILD進(jìn)展相關(guān)，可輔助預(yù)測(cè)藥物療效（如高纖維降解菌abundance患者對(duì)吡非尼酮反應(yīng)更佳）。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)間窗的個(gè)體化設(shè)定根據(jù)ILD“纖維化不可逆”的特點(diǎn)，監(jiān)測(cè)時(shí)間窗需聚焦“早期干預(yù)窗口”（治療0-3個(gè)月）和“長(zhǎng)期維持窗口”（治療3個(gè)月后），不同階段監(jiān)測(cè)頻率與目標(biāo)差異如下：|治療階段|監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)|核心目標(biāo)|監(jiān)測(cè)指標(biāo)重點(diǎn)||--------------------|-----------------------------|----------------------------------------------------------------------------|---------------------------------------------||基線(xiàn)評(píng)估|治療前1周內(nèi)|建立個(gè)體化分子分型與風(fēng)險(xiǎn)分層|MMP-7、miR-21-5p、cfDNA甲基化、FVC、HRCT|動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)間窗的個(gè)體化設(shè)定|早期反應(yīng)窗口|治療后2周、4周、8周|識(shí)別快速反應(yīng)者（早期有效）與潛在無(wú)反應(yīng)者，及時(shí)調(diào)整藥物|MMP-7、miR-21-5p、循環(huán)纖維細(xì)胞（2周重點(diǎn)）；FVC（8周）|12|長(zhǎng)期預(yù)后監(jiān)測(cè)|每3個(gè)月（6個(gè)月后）|預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，指導(dǎo)長(zhǎng)期治療策略|綜合核心+次要指標(biāo)，關(guān)注趨勢(shì)性變化（如miR-21-5p持續(xù)上升）|3|中期療效確認(rèn)|治療后3個(gè)月、6個(gè)月|確認(rèn)療效是否持續(xù)，排除假性反應(yīng)（如炎癥暫時(shí)抑制）|骨膜蛋白、cfDNA甲基化、FVC、6分鐘步行距離（6MWD）|動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)間窗的個(gè)體化設(shè)定個(gè)體化調(diào)整原則：對(duì)于“早期反應(yīng)者”（2周MMP-7下降≥30%，4周miR-21-5p下降≥40%），維持原劑量治療，每3個(gè)月監(jiān)測(cè)1次核心指標(biāo)；對(duì)于“潛在無(wú)反應(yīng)者”（2周MMP-7下降＜10%，或miR-21-5p上升），需排查藥物依從性、藥物相互作用，必要時(shí)聯(lián)合其他抗纖維化藥物（如尼達(dá)尼布+吡非尼酮）或轉(zhuǎn)換方案；對(duì)于“進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)者”（3個(gè)月骨膜蛋白上升＞20%，或FVC下降≥5%），需強(qiáng)化抗纖維化治療（如增加劑量）或加用抗炎藥物（如糖皮質(zhì)激素）。技術(shù)平臺(tái)的整合與標(biāo)準(zhǔn)化液體活檢結(jié)果的可靠性依賴(lài)技術(shù)平臺(tái)的標(biāo)準(zhǔn)化與多平臺(tái)整合，方案采用“核心標(biāo)志物快速檢測(cè)+深度組學(xué)驗(yàn)證”的雙軌模式：技術(shù)平臺(tái)的整合與標(biāo)準(zhǔn)化核心標(biāo)志物快速檢測(cè)平臺(tái)-化學(xué)發(fā)光免疫分析：用于MMP-7、骨膜蛋白等蛋白標(biāo)志物檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間＜1小時(shí)，適合臨床常規(guī)開(kāi)展，每批樣本需設(shè)置內(nèi)質(zhì)控（如回收率85%-115%）。-數(shù)字PCR（dPCR）：用于外泌體miR-21-5p、cfDNA甲基化標(biāo)志物的絕對(duì)定量，檢測(cè)限達(dá)0.1copies/μl，重復(fù)性變異系數(shù)（CV）＜5%，適用于高頻監(jiān)測(cè)（如2周一次）。技術(shù)平臺(tái)的整合與標(biāo)準(zhǔn)化深度組學(xué)驗(yàn)證平臺(tái)-全基因組甲基化測(cè)序（WGBS）：用于發(fā)現(xiàn)新的cfDNA甲基化標(biāo)志物，每3個(gè)月對(duì)部分患者（如進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)者）進(jìn)行檢測(cè)，篩選個(gè)體化標(biāo)志物。-單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（scRNA-seq）：用于探索藥物對(duì)免疫微環(huán)境的影響，每6個(gè)月對(duì)治療無(wú)反應(yīng)者進(jìn)行檢測(cè)，識(shí)別耐藥相關(guān)細(xì)胞亞群（如M2型巨噬細(xì)胞）。技術(shù)平臺(tái)的整合與標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)整合與分析系統(tǒng)建立液體活檢數(shù)據(jù)庫(kù)，整合臨床數(shù)據(jù)（年齡、性別、ILD亞型）、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)（核心指標(biāo)動(dòng)態(tài)變化）、影像數(shù)據(jù)（HRCT纖維化評(píng)分），通過(guò)機(jī)器學(xué)習(xí)算法（如隨機(jī)森林、LSTM模型）構(gòu)建“療效預(yù)測(cè)模型”，輸出個(gè)體化治療建議。例如，模型輸入“基線(xiàn)MMP-71.5ng/ml、miR-21-5p相對(duì)表達(dá)量3.0、年齡＞70歲”，可預(yù)測(cè)“6個(gè)月進(jìn)展概率＞60%”，建議強(qiáng)化治療。06臨床實(shí)施的關(guān)鍵環(huán)節(jié)與注意事項(xiàng)臨床實(shí)施的關(guān)鍵環(huán)節(jié)與注意事項(xiàng)液體活檢動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案的臨床落地需解決“標(biāo)準(zhǔn)化操作”“結(jié)果解讀”“臨床轉(zhuǎn)化”三大核心問(wèn)題，需多學(xué)科協(xié)作（呼吸科、檢驗(yàn)科、信息科）共同推進(jìn)。樣本采集與預(yù)處理的質(zhì)量控制1.采集規(guī)范：使用EDTA-K2抗凝管采集外周血5ml，2小時(shí)內(nèi)完成血漿分離（2000g×10min），4小時(shí)內(nèi)完成外泌體/血漿cfDNA提?。ū苊夥磸?fù)凍融）；血清樣本需靜置30min后分離，避免溶血（溶血會(huì)導(dǎo)致miRNA假性升高）。2.存儲(chǔ)條件：血漿/血清分裝后儲(chǔ)存于-80℃，避免反復(fù)凍融（凍融次數(shù)≤2次）；外泌體沉淀可保存于-80℃或液氮，提取后1周內(nèi)完成檢測(cè)。3.內(nèi)質(zhì)控設(shè)置：每批次樣本加入陽(yáng)性質(zhì)控品（如重組MMP-7、合成miR-21-5p模擬物）和陰性質(zhì)控品（如健康人混合血漿），確保檢測(cè)批間CV＜10%。結(jié)果解讀與臨床決策的整合液體活檢指標(biāo)需結(jié)合臨床、影像、肺功能數(shù)據(jù)綜合解讀，避免單一指標(biāo)誤判：-案例1：患者A（IPF），尼達(dá)尼布治療2周，MMP-7下降40%，miR-21-5p下降50%，但8周FVC下降5%。解讀：液體活檢提示“早期生物學(xué)有效”，F(xiàn)VC下降可能因急性加重（如感染）或測(cè)量誤差，需完善HRCT（排除新發(fā)感染）并加強(qiáng)抗感染治療，暫不調(diào)整尼達(dá)尼布劑量。-案例2：患者B（非IPF-ILD），吡非尼酮治療3個(gè)月，MMP-7上升20%，骨膜蛋白上升30%，F(xiàn)VC穩(wěn)定。解讀：液體活檢提示“纖維化活動(dòng)持續(xù)”，F(xiàn)VC穩(wěn)定可能因炎癥暫時(shí)抑制，需評(píng)估ILD亞型（如是否為自身免疫性ILD相關(guān)），必要時(shí)加用免疫抑制劑（如環(huán)磷酰胺）。為輔助臨床決策，我們制定了“液體活檢療效分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)”：結(jié)果解讀與臨床決策的整合STEP1STEP2STEP3STEP4-完全反應(yīng)（CR）：核心指標(biāo)2周下降≥30%，4周下降≥50%，6個(gè)月維持在穩(wěn)定范圍（波動(dòng)＜20%）；-部分反應(yīng)（PR）：核心指標(biāo)2周下降10%-30%，4周下降30%-50%，6個(gè)月無(wú)上升趨勢(shì)；-疾病穩(wěn)定（SD）：核心指標(biāo)波動(dòng)＜10%，無(wú)持續(xù)上升；-疾病進(jìn)展（PD）：核心指標(biāo)2周上升≥20%，或4周上升≥30%，或6個(gè)月FVC下降≥10%。多學(xué)科協(xié)作與患者教育1.MDT團(tuán)隊(duì)建設(shè)：成立ILD液體活檢監(jiān)測(cè)小組，成員包括呼吸科醫(yī)師（負(fù)責(zé)臨床決策）、檢驗(yàn)科技師（負(fù)責(zé)樣本檢測(cè)與質(zhì)量控制）、生物信息分析師（負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)建模）、臨床藥師（負(fù)責(zé)藥物調(diào)整建議），定期召開(kāi)病例討論會(huì)（每周1次）。2.患者溝通：向患者解釋液體活檢的意義（“通過(guò)抽血就能監(jiān)測(cè)藥物是否有效”）、監(jiān)測(cè)頻率（“初期每2-4周抽血一次，穩(wěn)定后每3個(gè)月一次”）及配合要點(diǎn)（“避免劇烈運(yùn)動(dòng)后采血，保持藥物規(guī)律服用”），提高依從性。07挑戰(zhàn)與未來(lái)展望挑戰(zhàn)與未來(lái)展望盡管液體活檢為ILD抗纖維化藥物療效監(jiān)測(cè)帶來(lái)突破，但仍面臨多重挑戰(zhàn)：-標(biāo)志物特異性不足：部分標(biāo)志物（如MMP-7）在COPD、肺纖維化等肺部疾病中均升高，需結(jié)合ILD特異性標(biāo)志物（如肺泡上皮細(xì)胞來(lái)源的外泌體）提升準(zhǔn)確性；-技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化差異：不同實(shí)驗(yàn)室的cfDNA提取方法、dPCR反應(yīng)體系存在差異，需建立統(tǒng)一的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（如參與國(guó)際質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃，如EMQN）；-成本與可及性：深度組學(xué)檢測(cè)（如scRNA-