核酸pcr試驗(yàn)員考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.延伸D.轉(zhuǎn)化答案：D2.Taq酶的特點(diǎn)是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化DNA合成方向3’→5’D.具有校對(duì)功能答案：A3.進(jìn)行核酸提取時(shí)，常用的裂解液成分不包括（）A.蛋白酶KB.SDSC.乙醇D.Tris-HCl答案：C4.PCR反應(yīng)體系中，提供dNTP的作用是（）A.提供能量B.作為模板C.合成新的DNA鏈D.調(diào)節(jié)反應(yīng)pH答案：C5.核酸定量常用的方法是（）A.比色法B.熒光定量法C.重量法D.滴定法答案：B6.引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長(zhǎng)度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.35-50bpD.50bp以上答案：B7.以下哪種物質(zhì)不會(huì)抑制PCR反應(yīng)（）A.血紅蛋白B.尿素C.牛血清白蛋白D.酚答案：C8.反轉(zhuǎn)錄PCR是將（）逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行的PCR反應(yīng)。A.DNAB.rRNAC.tRNAD.mRNA答案：D9.核酸提取過(guò)程中，使用氯仿的目的是（）A.沉淀核酸B.去除蛋白質(zhì)C.溶解核酸D.抑制核酸酶答案：B10.熒光定量PCR技術(shù)中，常用的熒光染料是（）A.溴酚藍(lán)B.二甲苯青C.SYBRGreenID.考馬斯亮藍(lán)答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.以下屬于PCR反應(yīng)體系組成成分的有（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.Mg2?答案：ABCDE2.核酸提取的方法有（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠膜吸附法C.磁珠法D.鹽析法E.離子交換法答案：ABC3.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.引物設(shè)計(jì)B.模板質(zhì)量C.反應(yīng)溫度D.反應(yīng)時(shí)間E.Taq酶活性答案：ABCDE4.熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.病原體檢測(cè)B.基因表達(dá)分析C.單核苷酸多態(tài)性分析D.腫瘤診斷E.親子鑒定答案：ABD5.引物設(shè)計(jì)的原則包括（）A.長(zhǎng)度合適B.GC含量適中C.避免引物二聚體D.特異性強(qiáng)E.與模板結(jié)合穩(wěn)定答案：ABCDE6.核酸提取過(guò)程中，防止核酸降解的措施有（）A.使用無(wú)核酸酶的試劑B.低溫操作C.避免劇烈振蕩D.加入核酸酶抑制劑E.延長(zhǎng)提取時(shí)間答案：ABCD7.以下哪些是PCR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.操作簡(jiǎn)便D.可自動(dòng)化E.能擴(kuò)增未知序列答案：ABCD8.進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)，樣本采集的注意事項(xiàng)有（）A.樣本類型正確B.采集時(shí)間合適C.采集方法規(guī)范D.樣本保存得當(dāng)E.樣本標(biāo)記清晰答案：ABCDE9.核酸純度檢測(cè)指標(biāo)包括（）A.A???/A???B.A???/A???C.A???/A???D.濃度E.完整性答案：AB10.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定量方法有（）A.絕對(duì)定量B.相對(duì)定量C.終點(diǎn)定量D.循環(huán)閾值定量E.熒光強(qiáng)度定量答案：AB三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)中，引物的濃度越高越好。（）答案：×2.核酸提取過(guò)程中，乙醇沉淀核酸時(shí)，溫度越低效果越好。（）答案：√3.Taq酶沒(méi)有3’→5’外切酶活性，所以不能校正擴(kuò)增過(guò)程中的錯(cuò)誤。（）答案：√4.熒光定量PCR可以檢測(cè)基因的拷貝數(shù)。（）答案：√5.引物與模板的結(jié)合是通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。（）答案：√6.核酸提取時(shí)，紅細(xì)胞裂解液主要用于裂解紅細(xì)胞釋放白細(xì)胞。（）答案：√7.進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，退火溫度越高，特異性越強(qiáng)，所以退火溫度越高越好。（）答案：×8.磁珠法核酸提取比酚氯仿抽提法更環(huán)保。（）答案：√9.反轉(zhuǎn)錄PCR可以直接以DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。（）答案：×10.核酸定量時(shí)，A???/A???比值在1.8-2.0之間說(shuō)明核酸純度較好。（）答案：√四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR是在體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程。通過(guò)高溫變性使模板DNA雙鏈解開(kāi)，低溫復(fù)性讓引物與模板結(jié)合，適溫延伸由Taq酶催化dNTP合成新的DNA鏈，經(jīng)多輪循環(huán)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的大量擴(kuò)增。2.核酸提取過(guò)程中，如何保證核酸的質(zhì)量？答案：使用無(wú)核酸酶試劑，低溫操作減少核酸酶活性；避免劇烈振蕩防止機(jī)械損傷；加入核酸酶抑制劑；選擇合適提取方法；及時(shí)檢測(cè)核酸濃度與純度、完整性。3.簡(jiǎn)述熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物數(shù)量成正比。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線或相對(duì)定量方法對(duì)起始模板量進(jìn)行分析。4.引物設(shè)計(jì)的要點(diǎn)有哪些？答案：長(zhǎng)度15-30bp為宜；GC含量40%-60%；避免自身互補(bǔ)、引物二聚體；3’端不能錯(cuò)配；與模板結(jié)合穩(wěn)定且特異性強(qiáng)，上下游引物Tm值相近。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論在核酸檢測(cè)過(guò)程中，如何避免樣本交叉污染。答案：檢測(cè)前對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境、儀器設(shè)備徹底清潔消毒；樣本采集時(shí)規(guī)范操作，一人一套采集用品；實(shí)驗(yàn)分區(qū)進(jìn)行，樣本處理、加樣等環(huán)節(jié)嚴(yán)格遵守流程；移液器等耗材及時(shí)更換槍頭，不同樣本操作后清潔雙手和臺(tái)面。2.分析PCR反應(yīng)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的原因及解決方法。答案：原因可能是引物特異性差、退火溫度低、模板有雜質(zhì)等。解決方法有重新設(shè)計(jì)引物，提高特異性；適當(dāng)提高退火溫度；優(yōu)化模板提取方法，去除雜質(zhì)；調(diào)整Mg2?濃度和Taq酶用量等。3.談?wù)労怂崽崛》椒ǖ倪x擇依據(jù)。答案：依據(jù)樣本類型、核酸種類、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募皩?shí)驗(yàn)室條件。如病毒核酸可用磁珠法快速提??；植物核酸因含雜質(zhì)多，可選用酚氯仿抽提法；大規(guī)模檢測(cè)時(shí)考慮操作簡(jiǎn)便、自動(dòng)化程度