DB32T8982006蛋品中乙氧酰胺苯甲酯殘留量的測(cè)定高效液相色譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蛋品中乙氧酰胺苯甲酯殘留量測(cè)定的高效液相色譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞蛋、鴨蛋、鵝蛋等禽蛋類產(chǎn)品中乙氧酰胺苯甲酯殘留量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限為0.01mg/kg，定量限為0.03mg/kg。2原理試樣中的乙氧酰胺苯甲酯用乙腈提取，經(jīng)正己烷液液分配凈化，去除脂肪等干擾物質(zhì)，濃縮后用高效液相色譜紫外檢測(cè)器測(cè)定，外標(biāo)法定量。3試劑與材料除非另有說(shuō)明，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1乙腈：色譜純3.2正己烷：色譜純3.3甲醇：色譜純3.4無(wú)水硫酸鈉：650℃灼燒4h，冷卻后置于干燥器中備用3.5乙氧酰胺苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98.0%3.6乙氧酰胺苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取乙氧酰胺苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，用乙腈溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃避光保存，有效期3個(gè)月。3.7乙氧酰胺苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈逐級(jí)稀釋成0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。4儀器與設(shè)備4.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器4.2分析天平：感量0.0001g和0.01g4.3均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min4.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀4.6氮吹儀4.7渦旋混合器4.8超聲波清洗器4.9固相萃取裝置4.10有機(jī)相濾膜：0.45μm4.11容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL4.12具塞離心管：50mL、100mL4.13分液漏斗：250mL5樣品采集與保存5.1樣品采集按GB/T9695.19規(guī)定的方法采集具有代表性的蛋品樣品，采樣量不少于500g。采樣過(guò)程中應(yīng)避免樣品受到污染，采集的樣品應(yīng)置于清潔、干燥的樣品容器中。5.2樣品保存6分析步驟6.1樣品前處理6.1.1提取稱取5.00g（精確至0.01g）均質(zhì)后的蛋品樣品于50mL具塞離心管中，加入20mL乙腈，渦旋混合2min，超聲提取15min，以4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至100mL具塞離心管中。殘?jiān)?0mL乙腈重復(fù)提取一次，合并上清液。6.1.2凈化向提取液中加入20mL正己烷，渦旋混合2min，以4000r/min離心5min，棄去上層正己烷層。向下層乙腈層中加入10g無(wú)水硫酸鈉，渦旋混合1min，以4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，在40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。用2mL乙腈溶解殘?jiān)?，?jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾，待測(cè)。6.2色譜條件6.2.1色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或相當(dāng)者6.2.2流動(dòng)相：乙腈水（70:30，V/V）6.2.3流速：1.0mL/min6.2.4柱溫：30℃6.2.5檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm6.2.6進(jìn)樣量：20μL6.3測(cè)定分別吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液和試樣溶液各20μL注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。在上述色譜條件下，乙氧酰胺苯甲酯的保留時(shí)間約為8.5min。7結(jié)果計(jì)算試樣中乙氧酰胺苯甲酯殘留量按式（1）計(jì)算：X=(A×c×V)/(A?×m)式中：X——試樣中乙氧酰胺苯甲酯殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；A——試樣溶液中乙氧酰胺苯甲酯的峰面積；c——標(biāo)準(zhǔn)工作液中乙氧酰胺苯甲酯的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；A?——標(biāo)準(zhǔn)工作液中乙氧酰胺苯甲酯的峰面積；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。8精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%。9回收率本標(biāo)準(zhǔn)方法的添加回收率范圍為85%~110%。10檢驗(yàn)規(guī)則10.1檢驗(yàn)批以同一生產(chǎn)日期、同一生產(chǎn)班次、同一品種的產(chǎn)品為一批。10.2抽樣方法按GB/T9695.19規(guī)定的方法進(jìn)行抽樣，每批產(chǎn)品隨機(jī)抽取不少于3個(gè)獨(dú)立包裝的樣品，總量不少于500g。10.3判定規(guī)則10.3.1當(dāng)所有樣品的測(cè)定結(jié)果均低于本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢出限時(shí)，判定該批產(chǎn)品合格。10.3.2當(dāng)有樣品的測(cè)定結(jié)果超過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限量時(shí)，應(yīng)重新抽取雙倍樣品進(jìn)行復(fù)檢。若復(fù)檢結(jié)果仍有樣品超過(guò)限量，