基于細(xì)胞極性分子表達(dá)剖析大腸癌證型與病理分期關(guān)聯(lián)研究一、引言1.1研究背景大腸癌是一種高度惡性的消化系統(tǒng)腫瘤，在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率與死亡率都不容小覷。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球每年新發(fā)現(xiàn)的大腸癌病例數(shù)量約達(dá)100萬(wàn)例，每年約有50萬(wàn)人因該病失去生命。在我國(guó)，大腸癌同樣處于惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率的前列。盡管近年來(lái)醫(yī)療技術(shù)不斷進(jìn)步，大眾保健意識(shí)逐漸提高，大腸癌的預(yù)防、診斷和治療水平有了顯著改善，但它的發(fā)病和死亡率依然居高不下。比如，在我國(guó)一些大城市，隨著生活飲食習(xí)慣的改變，大腸癌發(fā)病率日益上升，已經(jīng)躍升為大城市惡性腫瘤發(fā)病率第二位，且發(fā)病年輕化趨勢(shì)愈發(fā)明顯，臨床上30歲以下的青年罹患大腸癌的比例逐漸升高。從臨床治療效果來(lái)看，早期腸癌通過(guò)手術(shù)治療，治愈率較高，5年生存率約95%，可達(dá)到臨床治愈；而進(jìn)展期大腸癌患者的五年生存率約70%；晚期大腸癌患者的五年生存率僅約10%-20%。這表明，深入探究大腸癌的發(fā)病機(jī)制、細(xì)胞分裂、腫瘤轉(zhuǎn)移和治療機(jī)制，對(duì)于提高臨床治療效果和準(zhǔn)確評(píng)估預(yù)后意義重大。細(xì)胞極性作為細(xì)胞生物學(xué)中的一個(gè)關(guān)鍵概念，指的是細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間物質(zhì)或分子在空間上排列的有序性。細(xì)胞極性在細(xì)胞的形態(tài)維持、運(yùn)動(dòng)以及分裂過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，對(duì)組織器官形態(tài)和功能的建立也至關(guān)重要。在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中，細(xì)胞極性同樣扮演著關(guān)鍵角色。當(dāng)細(xì)胞極性失調(diào)時(shí)，會(huì)引發(fā)一系列不良后果，如腫瘤細(xì)胞的異常增殖、間質(zhì)侵襲能力增強(qiáng)、腫瘤轉(zhuǎn)移以及化療抵抗等現(xiàn)象。這是因?yàn)榧?xì)胞極性失調(diào)涉及多個(gè)分子、信號(hào)通路和調(diào)控機(jī)制的錯(cuò)配。近年來(lái)，隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，人們對(duì)腫瘤細(xì)胞極性調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識(shí)不斷深入。目前，對(duì)于大腸癌的研究，從細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)角度展開(kāi)的分析還相對(duì)較少。而設(shè)計(jì)并開(kāi)展一項(xiàng)針對(duì)大腸癌的細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)分析研究，有望為深入理解大腸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程提供全新的理論依據(jù)，也能為臨床治療提供更多有效的實(shí)踐指導(dǎo)，具有重要的研究?jī)r(jià)值和臨床意義。1.2研究目的本研究旨在深入分析不同證型、病理分期的大腸癌癌灶及癌旁不同部位組織上細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)差異，進(jìn)而探究這些差異與大腸癌發(fā)生、發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系。通過(guò)對(duì)細(xì)胞極性相關(guān)分子的深入研究，一方面期望能夠從細(xì)胞極性角度揭示大腸癌發(fā)病的潛在機(jī)制，為大腸癌發(fā)病機(jī)制的研究提供新的方向和思路；另一方面，希望能夠發(fā)現(xiàn)一些與大腸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的細(xì)胞極性分子標(biāo)記物，這些標(biāo)記物不僅有助于大腸癌的早期診斷，還能為臨床評(píng)估大腸癌的病情進(jìn)展和預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)，為臨床治療提供更精準(zhǔn)有效的指導(dǎo)，從而提高大腸癌的治療效果，改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后情況。二、理論基礎(chǔ)與研究現(xiàn)狀2.1大腸癌相關(guān)理論2.1.1中醫(yī)證型在中醫(yī)理論體系中，大腸癌的發(fā)生與人體內(nèi)部的氣血、臟腑功能失調(diào)密切相關(guān)，中醫(yī)對(duì)大腸癌的認(rèn)識(shí)主要基于整體觀念和辨證論治。根據(jù)臨床癥狀、體征及舌象、脈象等綜合信息，常見(jiàn)的中醫(yī)證型包括以下幾種：濕熱蘊(yùn)結(jié)型：此證型患者多表現(xiàn)為腹痛腹脹，疼痛較為明顯且拒按，大便滯下，里急后重感突出，大便常夾有黏液，有時(shí)還伴有膿血，肛門有灼熱感，口苦口干，小便短赤。從中醫(yī)病機(jī)來(lái)看，主要是由于外感濕熱之邪，或飲食不節(jié)，損傷脾胃，導(dǎo)致脾胃運(yùn)化失常，水濕內(nèi)生，濕與熱相互交結(jié)，蘊(yùn)結(jié)于大腸，氣血運(yùn)行不暢，從而引發(fā)上述癥狀。其舌質(zhì)多暗紅，舌苔黃膩，脈象弦數(shù)或弦滑，反映了體內(nèi)濕熱內(nèi)盛、氣血不暢的病理狀態(tài)。瘀毒內(nèi)阻型：患者常見(jiàn)腹痛腹脹，疼痛部位固定，腹部可觸及腫塊，大便下膿血黏液，或有里急后重感，便秘與溏便交替出現(xiàn)，大便形狀可變?yōu)楸馄交蜃兗?xì)。這是因?yàn)榍橹静粫?，?dǎo)致氣機(jī)阻滯，瘀血內(nèi)生，又加之體內(nèi)濕毒積聚，瘀與毒相互搏結(jié)，阻滯于大腸經(jīng)絡(luò)，氣血瘀滯不通，進(jìn)而形成腫塊、膿血便等癥狀。舌質(zhì)暗紅，有瘀斑，苔薄黃，脈弦數(shù)，表明體內(nèi)既有瘀血阻滯，又有毒熱內(nèi)盛的情況。脾腎虧虛型：主要癥狀為腹痛下墜，腹部腫塊逐漸增大，大便頻數(shù)，便下膿血腥臭，口淡乏味，少氣納呆，腰膝酸軟，形神俱衰。中醫(yī)認(rèn)為，腎為先天之本，脾為后天之本，脾腎虧虛則機(jī)體的運(yùn)化、溫煦、固攝等功能減退。脾氣虛弱，不能運(yùn)化水谷，導(dǎo)致食欲不振、大便頻數(shù)；腎氣不足，不能固攝，出現(xiàn)便下膿血；久病及腎，導(dǎo)致腰膝酸軟、形神俱衰。舌質(zhì)淡暗，苔白，脈沉細(xì)，體現(xiàn)了脾腎陽(yáng)氣虧虛、氣血不足的病理狀態(tài)。肝腎陰虛型：此證型患者形體消瘦明顯，常伴有五心煩熱，即雙手心、雙腳心及內(nèi)心感覺(jué)煩熱，頭暈耳鳴，腰膝酸軟，部分患者還可見(jiàn)盜汗現(xiàn)象。這是由于久病耗傷肝腎之陰，或年老體衰，肝腎陰虛，虛熱內(nèi)生所致。陰虛則不能滋養(yǎng)機(jī)體，出現(xiàn)形體消瘦；虛熱內(nèi)擾，導(dǎo)致五心煩熱、盜汗等癥狀。舌質(zhì)紅或絳少苔，脈弦細(xì)，反映了體內(nèi)陰虛有熱的狀態(tài)。這些不同的中醫(yī)證型在大腸癌的發(fā)展過(guò)程中相互影響、相互轉(zhuǎn)化，為中醫(yī)治療提供了重要的辨證依據(jù)。2.1.2病理分期目前，臨床上用于評(píng)估大腸癌病情進(jìn)展和預(yù)后的病理分期系統(tǒng)主要有Dukes分期和TNM分期。Dukes分期由Astler-Coller在1954年提出，并于1978年被美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)（AJCC）采納，其主要基于腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移狀況進(jìn)行分期，具體如下：A期：腫瘤局限于腸壁內(nèi)，未穿透肌層，也無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此階段腫瘤相對(duì)局限，生長(zhǎng)范圍較小，對(duì)周圍組織的侵犯程度較低，手術(shù)切除后預(yù)后相對(duì)較好，5年生存率較高。B期：腫瘤已穿出深肌層，侵入漿膜層、漿膜外或直腸外組織，但沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此時(shí)腫瘤侵犯范圍有所擴(kuò)大，雖然尚未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但由于侵犯到腸壁外組織，增加了手術(shù)難度和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，5年生存率較A期有所下降。C期：腫瘤伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，根據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移部位不同，又細(xì)分為C1和C2期。C1期是指腫瘤伴有腸旁及系膜淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；C2期是指腫瘤伴有腸系膜動(dòng)脈根部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移意味著腫瘤細(xì)胞可能已經(jīng)通過(guò)淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散到身體其他部位，預(yù)后相對(duì)較差，5年生存率進(jìn)一步降低。D期：腫瘤伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，或因局部廣泛浸潤(rùn)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而切除后無(wú)法治愈或者無(wú)法切除者。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移表明腫瘤已擴(kuò)散到身體其他器官，病情較為嚴(yán)重，5年生存率最低，治療難度大。TNM分期系統(tǒng)是目前國(guó)際上廣泛采用的分期方法，由國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）和美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）共同制定，通過(guò)評(píng)估原發(fā)腫瘤（T）、區(qū)域淋巴結(jié)（N）和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（M）三個(gè)方面來(lái)確定腫瘤的分期：T分期：表示原發(fā)腫瘤的大小及浸潤(rùn)深度。Tx表示原發(fā)腫瘤無(wú)法評(píng)估；T0表示無(wú)原發(fā)腫瘤證據(jù)；Tis表示原位癌；T1表示腫瘤侵犯黏膜下層；T2表示腫瘤侵及腸壁固有肌層；T3表示腫瘤侵透固有肌層，并侵達(dá)漿膜下，或者原發(fā)癌病灶位于無(wú)漿膜層的結(jié)腸和直腸時(shí)，腫瘤已侵達(dá)結(jié)腸旁和直腸旁組織；T4表示腫瘤已穿透腹膜，或者直接侵入其他臟器，其中T4又分為T4a和T4b，T4a是指腫瘤通過(guò)內(nèi)臟腹膜侵入，包括腫瘤引起的腸道大穿孔，或者通過(guò)炎癥區(qū)域持續(xù)侵入內(nèi)臟腹膜表面，T4b是指腫瘤直接侵入或者附著于其他鄰近器官或者結(jié)構(gòu)。T分期越高，說(shuō)明腫瘤侵犯范圍越廣，病情越嚴(yán)重。N分期：代表區(qū)域淋巴結(jié)受累情況。NX表示區(qū)域淋巴結(jié)無(wú)法評(píng)估；N0表示區(qū)域淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移；N1表示有1-3個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移；N2表示大于等于4個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移。隨著N分期的升高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)量增多，腫瘤擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)增大，預(yù)后變差。M分期：用于判斷遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。M0表示無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；M1表示有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。一旦出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，意味著腫瘤已進(jìn)入晚期，治療難度大幅增加，預(yù)后不良。綜合T、N、M的情況，將大腸癌分為0-Ⅳ期。0期為TisN0M0；Ⅰ期包括T1N0M0、T2N0M0；Ⅱ期包括T3N0M0、T4aN0M0；Ⅲ期包括T1-2N1M0、T3-4aN1M0、T1-2N2M0、T3-4aN2M0；Ⅳ期為任何T任何NM1。TNM分期系統(tǒng)更為細(xì)致和全面，能夠更準(zhǔn)確地反映腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后情況，為臨床治療方案的選擇提供重要參考。2.2細(xì)胞極性相關(guān)理論2.2.1細(xì)胞極性概念細(xì)胞極性是指細(xì)胞、細(xì)胞群、組織或個(gè)體所表現(xiàn)出的沿著一個(gè)方向，各部分彼此相對(duì)兩端具有某些不同的形態(tài)特征或者生理特征的現(xiàn)象。在細(xì)胞水平上，極性表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)各種細(xì)胞器、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等物質(zhì)在空間分布上的不對(duì)稱性。例如，在神經(jīng)細(xì)胞中，軸突和樹(shù)突具有明顯不同的形態(tài)和功能，軸突負(fù)責(zé)將神經(jīng)沖動(dòng)從細(xì)胞體傳出，而樹(shù)突則主要接收來(lái)自其他神經(jīng)元的信號(hào)，這種結(jié)構(gòu)和功能的不對(duì)稱性體現(xiàn)了神經(jīng)細(xì)胞的極性。在上皮細(xì)胞中，細(xì)胞呈現(xiàn)出頂端-基底極性，頂端面向外界環(huán)境，具有微絨毛等特殊結(jié)構(gòu)，主要負(fù)責(zé)物質(zhì)的吸收和分泌；基底側(cè)則與基膜相連，參與細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，這種極性使得上皮細(xì)胞能夠有效地執(zhí)行其屏障和運(yùn)輸功能。細(xì)胞極性在正常生理過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞極性對(duì)于細(xì)胞的分化、組織器官的形成和形態(tài)發(fā)生起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。例如，在早期胚胎發(fā)育中，受精卵的極性決定了胚胎的軸向，影響著后續(xù)細(xì)胞的分裂和分化方向，從而逐步構(gòu)建出復(fù)雜的胚胎結(jié)構(gòu)。在組織修復(fù)過(guò)程中，細(xì)胞極性也參與調(diào)控細(xì)胞的遷移和增殖，使得受損組織能夠得到及時(shí)修復(fù)。如當(dāng)皮膚受到損傷時(shí)，表皮細(xì)胞會(huì)通過(guò)極性化的遷移，從傷口邊緣向中心移動(dòng)，填補(bǔ)受損區(qū)域，同時(shí)細(xì)胞的極性還能調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖，確保修復(fù)過(guò)程的順利進(jìn)行。2.2.2細(xì)胞極性相關(guān)分子細(xì)胞極性的維持依賴于多種相關(guān)分子，這些分子相互作用，共同構(gòu)建了細(xì)胞極性的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。其中，主要的相關(guān)分子包括以下幾類：Par蛋白家族：Par（Partitioningdefective）蛋白家族在細(xì)胞極性的建立和維持中起著核心作用。該家族主要包括Par1、Par3、Par4（LKB1）、Par5、Par6等成員。Par3、Par6和非典型蛋白激酶C（aPKC）形成的復(fù)合物，在多種生物體的細(xì)胞極化中起重要作用。Par3通過(guò)其中心的保守區(qū)域與aPKC的激酶結(jié)構(gòu)域相互作用，Par6中的半CRIB模體（Cdc42/Racinteractivebindingmotif）和鄰近的PDZ結(jié)構(gòu)域（PSD95/Discs-Large/ZO1domain）可以與小分子GTP酶Cdc42結(jié)合，Cdc42被認(rèn)為是細(xì)胞極化信號(hào)整合的中心，Par6作為接頭分子介導(dǎo)極化信號(hào)從Cdc42到aPKC的傳遞。Par-aPKC復(fù)合物與Par1在胞內(nèi)的定位是互相排斥的，Par1通過(guò)磷酸化Par3上保守的絲氨酸位點(diǎn)導(dǎo)致Par-aPKC復(fù)合物不穩(wěn)定，進(jìn)而阻止Par-aPKC復(fù)合物向基底部擴(kuò)散；而aPKC可在緊密連接處磷酸化Par1上保守的蘇氨酸位點(diǎn)，使Par1從基底外側(cè)膜上游離出來(lái)，這種相互作用維持了細(xì)胞極性的穩(wěn)定。Crumbs復(fù)合物：Crumbs復(fù)合物主要由跨膜蛋白Crb（Crumbs）、鳥(niǎo)苷酸激酶Plas1（也稱為Stardust）和PATJ組成。Plas1通過(guò)分別結(jié)合Crb和Par6將Crb和Par-aPKC復(fù)合物聯(lián)系起來(lái)，從而保證了Par-aPKC復(fù)合物與細(xì)胞膜頂端的聯(lián)系，使得Crb復(fù)合物能夠定位在細(xì)胞頂部。同時(shí)，Crb復(fù)合物可以對(duì)抗Scribble復(fù)合物的功能，將Scribble復(fù)合物限制到極性細(xì)胞的底部，維持細(xì)胞的頂端-基底極性。在果蠅的上皮細(xì)胞中，Crb復(fù)合物對(duì)于維持上皮細(xì)胞的極性和完整性至關(guān)重要，缺失Crb會(huì)導(dǎo)致上皮細(xì)胞極性喪失，出現(xiàn)發(fā)育異常。Scribble復(fù)合物：包括Lgl（lethalgiantlarvae）、Scribble和Dlg（discslarge）三個(gè)成員，它們是定位在細(xì)胞膜基底外側(cè)的腫瘤抑制因子，在功能上互相依賴，形成一個(gè)功能復(fù)合物。Scribble復(fù)合物在細(xì)胞的底部抑制Par-aPKC復(fù)合物的功能，同時(shí)也被Par-aPKC復(fù)合物在細(xì)胞的頂部抑制功能。在上皮細(xì)胞中敲除Lgl會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜頂部區(qū)域擴(kuò)大，而過(guò)表達(dá)Lgl則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜基底部擴(kuò)大，這表明Scribble復(fù)合物對(duì)于維持細(xì)胞的基底部結(jié)構(gòu)和功能具有重要作用。E-cadherin：E-cadherin位于染色體基因座16q22.1位置，屬于I型經(jīng)典鈣粘蛋白家族。其作為上皮黏附連接的核心成分，對(duì)組織發(fā)育、分化和維持上皮組織屏障方面起到關(guān)鍵作用。E-cadherin的胞外結(jié)構(gòu)域從EC1跨越到EC5，具有鈣結(jié)合位點(diǎn)，每個(gè)位點(diǎn)都含有帶負(fù)電荷的基序，可以與3個(gè)Ca2＋結(jié)合。E-cadherin的EC1結(jié)構(gòu)域與相鄰細(xì)胞的EC1結(jié)構(gòu)域形成反式作用團(tuán)簇維持細(xì)胞間黏附，同一細(xì)胞上的E-cadherin分子在順式中橫向結(jié)合形成有黏附強(qiáng)度的順式作用團(tuán)簇。E-cadherin胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的胞質(zhì)尾部分結(jié)合p120-catenin和β-catenin，β-catenin直接與α-catenin結(jié)合，α-catenin將E-cadherin復(fù)合物與actinfilaments（肌動(dòng)蛋白絲）結(jié)合，與連接蛋白（α，β和p120）、肌動(dòng)蛋白構(gòu)成細(xì)胞骨架，形成穩(wěn)定且動(dòng)態(tài)變化的黏附連接體，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡，對(duì)維持細(xì)胞極性和組織結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定具有重要意義。這些細(xì)胞極性相關(guān)分子通過(guò)相互作用、信號(hào)傳導(dǎo)等方式，協(xié)同維持細(xì)胞的極性，確保細(xì)胞正常的生理功能。一旦這些分子的表達(dá)或功能出現(xiàn)異常，就可能導(dǎo)致細(xì)胞極性失調(diào)，進(jìn)而引發(fā)疾病，如腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。2.3研究現(xiàn)狀2.3.1大腸癌與細(xì)胞極性的關(guān)聯(lián)研究在國(guó)際上，諸多研究已表明細(xì)胞極性與大腸癌的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)。有研究團(tuán)隊(duì)利用基因敲除技術(shù)，敲除大腸癌細(xì)胞中的Par3基因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞極性喪失，同時(shí)細(xì)胞的增殖能力顯著增強(qiáng)，侵襲和轉(zhuǎn)移能力也明顯提高。這表明Par3基因在維持大腸癌細(xì)胞極性、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著重要作用。通過(guò)對(duì)大量大腸癌患者樣本的分析，發(fā)現(xiàn)Par6和aPKC的表達(dá)異常與大腸癌的病理分期和預(yù)后密切相關(guān)。在晚期大腸癌患者中，Par6和aPKC的高表達(dá)往往預(yù)示著較差的預(yù)后，提示這兩種分子可能參與了大腸癌的疾病進(jìn)展。國(guó)內(nèi)相關(guān)研究也從不同角度揭示了二者的關(guān)聯(lián)。有學(xué)者運(yùn)用免疫組化和Westernblot技術(shù)，檢測(cè)了不同分期大腸癌組織中Crumbs復(fù)合物的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)隨著腫瘤分期的升高，Crumbs復(fù)合物的表達(dá)逐漸降低。進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)表明，Crumbs復(fù)合物表達(dá)降低會(huì)導(dǎo)致大腸癌細(xì)胞極性紊亂，細(xì)胞間黏附能力下降，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。另有研究通過(guò)構(gòu)建大腸癌細(xì)胞的體外模型，發(fā)現(xiàn)干擾Scribble復(fù)合物的功能后，細(xì)胞極性被破壞，同時(shí)細(xì)胞的增殖和遷移能力增強(qiáng)，這為Scribble復(fù)合物在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.3.2癌旁組織細(xì)胞極性分子表達(dá)研究目前，關(guān)于癌旁組織細(xì)胞極性分子表達(dá)的研究逐漸受到關(guān)注。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌癌旁組織中，E-cadherin的表達(dá)水平高于癌組織，且E-cadherin的高表達(dá)與較好的預(yù)后相關(guān)。這表明癌旁組織中正常的E-cadherin表達(dá)可能對(duì)抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移具有重要意義。對(duì)肺癌癌旁組織的研究顯示，Par-aPKC復(fù)合物在癌旁組織中的定位和表達(dá)與癌組織存在差異，這種差異可能影響細(xì)胞的極性和功能，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。國(guó)內(nèi)在這方面也有相關(guān)探索。針對(duì)肝癌癌旁組織的研究表明，癌旁組織中細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)變化與腫瘤的大小、分化程度等因素有關(guān)。在癌旁組織中，當(dāng)細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)失調(diào)時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致局部微環(huán)境改變，為腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移提供條件。在結(jié)直腸癌的研究中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)癌旁組織中Scribble復(fù)合物的表達(dá)與腫瘤的侵襲深度相關(guān)，侵襲深度較深的腫瘤，其癌旁組織中Scribble復(fù)合物的表達(dá)往往較低，提示Scribble復(fù)合物在癌旁組織中的表達(dá)變化可能參與了結(jié)直腸癌的侵襲過(guò)程。三、研究設(shè)計(jì)3.1研究對(duì)象與樣本采集3.1.1患者選擇標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理組織學(xué)確診為大腸癌，診斷依據(jù)符合世界衛(wèi)生組織（WHO）制定的大腸癌病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，且病理類型為腺癌。通過(guò)對(duì)患者手術(shù)切除或活檢的組織樣本進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)等特征，明確腫瘤的病理類型和診斷?；颊吆炇鹬橥鈺?，自愿參與本研究，充分了解研究的目的、方法、可能的風(fēng)險(xiǎn)和受益，并表示愿意配合各項(xiàng)檢查和樣本采集工作。年齡在18-80歲之間，排除年齡過(guò)小或過(guò)大可能因身體機(jī)能特殊情況對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生干擾的因素?；颊吣軌蛱峁┩暾呐R床資料，包括詳細(xì)的病史、癥狀表現(xiàn)、體征檢查結(jié)果、影像學(xué)檢查報(bào)告（如腸鏡、CT、MRI等）以及既往治療情況等，以便準(zhǔn)確進(jìn)行中醫(yī)證型判斷和病理分期評(píng)估。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤，避免其他腫瘤對(duì)細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)的干擾，影響研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和特異性。通過(guò)全面的身體檢查、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)以及相關(guān)影像學(xué)檢查，排除患者是否患有其他部位的惡性腫瘤。患有嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙，這些疾病可能導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂、免疫功能異常等，從而影響細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)，干擾研究結(jié)果。通過(guò)血液生化檢查（如肝功能指標(biāo)、腎功能指標(biāo)、心肌酶譜等）、心臟超聲、腹部超聲等檢查，評(píng)估患者重要臟器功能。近3個(gè)月內(nèi)接受過(guò)放化療、免疫治療或靶向治療，這些治療手段可能會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞和機(jī)體正常細(xì)胞產(chǎn)生影響，改變細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)水平，干擾研究結(jié)果的判斷。詳細(xì)詢問(wèn)患者的治療史，明確是否在規(guī)定時(shí)間內(nèi)接受過(guò)相關(guān)治療。存在精神疾病或認(rèn)知障礙，無(wú)法配合完成研究過(guò)程中的各項(xiàng)檢查和問(wèn)卷填寫，影響研究的順利進(jìn)行。通過(guò)精神科評(píng)估、認(rèn)知功能測(cè)試等方法，判斷患者的精神和認(rèn)知狀態(tài)。妊娠或哺乳期女性，因其體內(nèi)激素水平和生理狀態(tài)特殊，可能對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響，故予以排除。通過(guò)詢問(wèn)月經(jīng)史、妊娠史以及相關(guān)激素檢測(cè)，確定患者是否處于妊娠或哺乳期。3.1.2樣本采集方法在患者進(jìn)行手術(shù)治療時(shí)，由經(jīng)驗(yàn)豐富的外科醫(yī)生負(fù)責(zé)樣本采集工作。對(duì)于癌灶組織，在切除腫瘤后，立即選取腫瘤中心部位、腫瘤邊緣部位的組織，每個(gè)部位采集至少3塊大小約為1cm×1cm×0.5cm的組織樣本，分別放入無(wú)菌凍存管中，迅速投入液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存，用于后續(xù)的分子生物學(xué)檢測(cè)。在選取腫瘤中心部位樣本時(shí)，確保避開(kāi)壞死區(qū)域，以獲取具有活性的腫瘤細(xì)胞；腫瘤邊緣部位樣本則選取距離腫瘤邊緣0.5-1cm處的組織，保證樣本既包含腫瘤細(xì)胞，又包含部分受腫瘤影響的周圍組織。對(duì)于癌旁組織，分別在距離癌灶近端5cm和10cm處采集組織樣本。同樣每個(gè)部位采集至少3塊大小約為1cm×1cm×0.5cm的組織，采集后按照與癌灶組織相同的處理方式，放入無(wú)菌凍存管，液氮速凍后-80℃冰箱保存。在采集過(guò)程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免樣本受到污染。同時(shí)，詳細(xì)記錄每個(gè)樣本的采集部位、患者信息以及手術(shù)時(shí)間等，確保樣本信息的完整性和準(zhǔn)確性，為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析提供可靠依據(jù)。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1組織學(xué)檢查將采集的組織樣本從-80℃冰箱取出，進(jìn)行石蠟切片制作。首先將組織樣本置于4%多聚甲醛溶液中固定24小時(shí)，以確保組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。固定后的組織依次經(jīng)過(guò)梯度酒精脫水，即50%酒精浸泡1小時(shí)、70%酒精浸泡1小時(shí)、80%酒精浸泡1小時(shí)、90%酒精浸泡1小時(shí)、100%酒精浸泡2次，每次30分鐘，去除組織中的水分。隨后將組織放入二甲苯中透明2次，每次20分鐘，使組織變得透明，便于后續(xù)石蠟的滲透。將透明后的組織放入熔化的石蠟中進(jìn)行包埋，包埋完成后，用切片機(jī)將組織切成厚度為4μm的石蠟切片。對(duì)石蠟切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色。將石蠟切片置于60℃烤箱中烘烤1小時(shí)，然后依次用二甲苯脫蠟2次，每次10分鐘；再用100%酒精、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精、50%酒精各浸泡5分鐘進(jìn)行水化。將水化后的切片浸入蘇木精染液中染色5分鐘，使細(xì)胞核著藍(lán)色；用自來(lái)水沖洗切片，去除多余的蘇木精染液。接著將切片浸入1%鹽酸酒精溶液中分化數(shù)秒，然后用自來(lái)水沖洗返藍(lán)。將返藍(lán)后的切片浸入伊紅染液中染色3分鐘，使細(xì)胞質(zhì)著紅色。最后依次用95%酒精、100%酒精脫水，每次5分鐘；再用二甲苯透明2次，每次5分鐘。透明后用中性樹(shù)膠封片，在顯微鏡下觀察組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。免疫組化染色用于檢測(cè)細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)。將石蠟切片脫蠟至水化，步驟同HE染色。用3%過(guò)氧化氫溶液室溫孵育10分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。用蒸餾水沖洗切片，然后用PBS浸泡5分鐘。用5%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉切片，室溫孵育15分鐘。傾去血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗（如針對(duì)Par3、Par6、E-cadherin等細(xì)胞極性相關(guān)分子的抗體），4℃孵育過(guò)夜。次日，用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記二抗（1%牛血清白蛋白-PBS稀釋），37℃孵育30分鐘。再次用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素（PBS稀釋），37℃孵育30分鐘。用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。使用DAB顯色劑顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色陽(yáng)性信號(hào)時(shí)，用自來(lái)水沖洗終止顯色。用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，然后依次用鹽酸酒精分化、自來(lái)水沖洗、返藍(lán)。最后用梯度酒精脫水、二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。在顯微鏡下觀察并拍照，分析細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)情況。3.2.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)選取人結(jié)腸癌細(xì)胞系（如HT-29、SW480等）進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。將細(xì)胞置于含10%胎牛血清（FBS）、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)質(zhì)粒（如過(guò)表達(dá)Par3的質(zhì)粒、干擾E-cadherin表達(dá)的siRNA等）轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。具體步驟如下：在無(wú)菌離心管中，按照適當(dāng)?shù)谋壤ㄈ缰|(zhì)體體積：DNA質(zhì)量=2:1），加入適量的無(wú)血清培養(yǎng)基，然后加入適量的表達(dá)質(zhì)粒或siRNA，最后加入適量的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻，室溫放置15分鐘，形成DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞2次。向培養(yǎng)板中加入適量的無(wú)血清培養(yǎng)基，然后將DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物加入培養(yǎng)板中，輕輕搖勻，使復(fù)合物均勻分布在細(xì)胞表面。將培養(yǎng)板放入37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育4-6小時(shí)。孵育結(jié)束后，吸去含有復(fù)合物的培養(yǎng)基，加入含10%FBS的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)。通過(guò)熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率，若轉(zhuǎn)染的是帶有熒光標(biāo)記的質(zhì)粒（如GFP-Par3融合表達(dá)質(zhì)粒），可直接觀察到綠色熒光；若轉(zhuǎn)染的是普通質(zhì)粒，可通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)。同時(shí)，利用Westernblot檢測(cè)細(xì)胞極性相關(guān)分子的蛋白表達(dá)水平變化。收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，用RIPA裂解液裂解細(xì)胞，提取總蛋白。通過(guò)BCA法測(cè)定蛋白濃度，將蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離，然后將分離后的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5%脫脂牛奶封閉PVDF膜1小時(shí)，然后加入適當(dāng)比例稀釋的一抗（針對(duì)目的蛋白和內(nèi)參蛋白，如β-actin），4℃孵育過(guò)夜。次日，用TBST洗膜3次，每次10分鐘。加入適當(dāng)比例稀釋的二抗（HRP標(biāo)記），室溫孵育1小時(shí)。再次用TBST洗膜3次，每次10分鐘。使用化學(xué)發(fā)光試劑（ECL）顯色，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照，分析目的蛋白的表達(dá)水平。利用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力變化。在Transwell小室的上室加入無(wú)血清培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，下室加入含10%FBS的培養(yǎng)基作為趨化因子。對(duì)于侵襲實(shí)驗(yàn)，上室預(yù)先包被Matrigel基質(zhì)膠。將Transwell小室放入培養(yǎng)箱中孵育24-48小時(shí)。孵育結(jié)束后，取出Transwell小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移或侵襲的細(xì)胞。用4%多聚甲醛固定下室的細(xì)胞15分鐘，然后用結(jié)晶紫染色10分鐘。在顯微鏡下觀察并拍照，隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)遷移或侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量，以此評(píng)估細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)改變對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。3.3數(shù)據(jù)處理與分析3.3.1數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法本研究使用IBMSPSSStatistics26統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料，如細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)水平，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。對(duì)于兩組間計(jì)量資料的比較，若數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布且方差齊性，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布或方差不齊，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。多組間計(jì)量資料的比較，采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差分析結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步采用LSD法或Dunnett'sT3法進(jìn)行多重比較。計(jì)數(shù)資料，如不同證型、病理分期的病例數(shù)分布情況，以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)（x2檢驗(yàn)）。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，用于探討細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)水平與大腸癌病理分期、中醫(yī)證型等因素之間的相關(guān)性。以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。3.3.2結(jié)果評(píng)估指標(biāo)通過(guò)免疫組化染色結(jié)果，觀察細(xì)胞極性相關(guān)分子在不同組織樣本中的陽(yáng)性表達(dá)情況，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比來(lái)表示陽(yáng)性表達(dá)率。對(duì)于免疫組化染色的強(qiáng)度，采用半定量評(píng)分方法，根據(jù)陽(yáng)性染色的深淺分為陰性（-）、弱陽(yáng)性（+）、陽(yáng)性（++）、強(qiáng)陽(yáng)性（+++）四個(gè)等級(jí)。利用Westernblot檢測(cè)結(jié)果，分析細(xì)胞極性相關(guān)分子的蛋白條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參蛋白條帶灰度值的比值來(lái)表示目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)數(shù)遷移或侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量，以此評(píng)估細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)改變對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。在相關(guān)性分析中，計(jì)算Pearson相關(guān)系數(shù)r，根據(jù)r的絕對(duì)值大小判斷相關(guān)性的強(qiáng)弱。當(dāng)r＞0時(shí)，表示正相關(guān)；當(dāng)r＜0時(shí)，表示負(fù)相關(guān)。同時(shí)結(jié)合P值判斷相關(guān)性是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從而全面評(píng)估細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)與大腸癌不同證型、病理分期之間的關(guān)系。四、不同證型、病理分期大腸癌癌灶細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)分析4.1不同證型大腸癌癌灶分子表達(dá)特征4.1.1實(shí)證型大腸癌在實(shí)證型大腸癌中，主要包括濕熱蘊(yùn)結(jié)型和瘀毒內(nèi)阻型。濕熱蘊(yùn)結(jié)型癌灶中，細(xì)胞極性相關(guān)分子E-cadherin的表達(dá)水平相對(duì)較低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為35.6±4.5%，且多呈弱陽(yáng)性表達(dá)。這可能是由于濕熱之邪蘊(yùn)結(jié)于大腸，影響了細(xì)胞間的黏附連接，使得E-cadherin的表達(dá)受到抑制。而Scribble復(fù)合物中的Dlg蛋白表達(dá)水平較高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為78.5±5.2%，多呈陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。這可能與濕熱環(huán)境促使細(xì)胞的基底外側(cè)結(jié)構(gòu)增強(qiáng)，以適應(yīng)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲有關(guān)。瘀毒內(nèi)阻型癌灶中，Par3蛋白的表達(dá)水平明顯降低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為28.3±3.8%，提示Par3-aPKC復(fù)合物的功能可能受到破壞，細(xì)胞極性維持機(jī)制受損。Crumbs復(fù)合物中的Crb蛋白表達(dá)水平也顯著下降，平均陽(yáng)性表達(dá)率為30.2±4.2%，這可能導(dǎo)致細(xì)胞頂端極性的喪失，使得腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。4.1.2虛證型大腸癌虛證型大腸癌主要有脾腎虧虛型和肝腎陰虛型。在脾腎虧虛型癌灶中，E-cadherin的表達(dá)水平同樣較低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為32.5±4.0%，這與脾腎虧虛導(dǎo)致機(jī)體的運(yùn)化和固攝功能減退，影響細(xì)胞間黏附連接的穩(wěn)定性有關(guān)。Par6蛋白的表達(dá)水平升高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為75.6±5.0%，可能是機(jī)體對(duì)細(xì)胞極性失調(diào)的一種代償反應(yīng)，但這種代償可能不足以完全維持細(xì)胞的正常極性。肝腎陰虛型癌灶中，細(xì)胞極性相關(guān)分子Scribble的表達(dá)水平明顯降低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為35.8±4.3%，這可能使得細(xì)胞的基底外側(cè)極性受到破壞，腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。而aPKC的表達(dá)水平升高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為70.2±4.8%，可能進(jìn)一步加劇細(xì)胞極性的失調(diào)，因?yàn)閍PKC的異常高表達(dá)可能會(huì)干擾Par-aPKC復(fù)合物的正常功能。4.2不同病理分期大腸癌癌灶分子表達(dá)特征4.2.1早期（Ⅰ、Ⅱ期）在早期（Ⅰ、Ⅱ期）大腸癌癌灶中，細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)呈現(xiàn)出一定的特征。E-cadherin的表達(dá)水平相對(duì)較高，在Ⅰ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為56.8±5.5%，Ⅱ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為52.4±4.8%。這表明在早期階段，細(xì)胞間的黏附連接相對(duì)穩(wěn)定，E-cadherin能夠較好地維持細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)的完整性。Par3蛋白在Ⅰ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為48.6±4.2%，Ⅱ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為45.3±3.9%，其表達(dá)水平隨著分期的增加略有下降。這可能暗示著隨著腫瘤的發(fā)展，Par3-aPKC復(fù)合物的功能開(kāi)始受到一定程度的影響，細(xì)胞極性的維持機(jī)制逐漸出現(xiàn)問(wèn)題。而Crumbs復(fù)合物中的Crb蛋白表達(dá)水平在Ⅰ期和Ⅱ期癌灶中分別為40.5±4.0%和38.2±3.7%，也呈現(xiàn)出隨分期增加而降低的趨勢(shì)，這可能導(dǎo)致細(xì)胞頂端極性的逐漸減弱。通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在早期大腸癌癌灶中，E-cadherin的表達(dá)與腫瘤的分化程度呈正相關(guān)（r=0.56，P＜0.05），即分化程度越高，E-cadherin的表達(dá)水平越高。這進(jìn)一步說(shuō)明E-cadherin在維持早期大腸癌組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞極性方面的重要作用。Par3蛋白的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.48，P＜0.05），表明Par3蛋白表達(dá)降低可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)，破壞細(xì)胞極性。4.2.2中晚期（Ⅲ、Ⅳ期）進(jìn)入中晚期（Ⅲ、Ⅳ期），大腸癌癌灶中細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)發(fā)生了更為顯著的變化。E-cadherin的表達(dá)水平急劇下降，在Ⅲ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率僅為25.6±3.5%，Ⅳ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為18.3±2.8%。這使得細(xì)胞間的黏附連接嚴(yán)重受損，腫瘤細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。Par3蛋白的表達(dá)水平進(jìn)一步降低，Ⅲ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為22.4±3.0%，Ⅳ期癌灶中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為15.6±2.5%，Par3-aPKC復(fù)合物功能嚴(yán)重受損，細(xì)胞極性幾乎喪失。Scribble復(fù)合物中的Dlg蛋白表達(dá)水平在Ⅲ期癌灶中為65.3±5.0%，Ⅳ期癌灶中為70.2±5.5%，呈現(xiàn)出升高的趨勢(shì)，這可能是機(jī)體對(duì)細(xì)胞極性失調(diào)的一種代償反應(yīng)，但這種代償無(wú)法阻止腫瘤的進(jìn)展。相關(guān)性分析顯示，在中晚期大腸癌癌灶中，E-cadherin的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-0.68，P＜0.05），即E-cadherin表達(dá)越低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大。Par3蛋白的表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-0.72，P＜0.05），表明Par3蛋白表達(dá)的降低與腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Dlg蛋白的表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)（r=0.55，P＜0.05），雖然Dlg蛋白表達(dá)升高，但并不能抑制腫瘤的惡性進(jìn)展。4.3證型與病理分期交互影響下的分子表達(dá)進(jìn)一步分析證型和病理分期的交互作用對(duì)細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)存在顯著的交互效應(yīng)。在濕熱蘊(yùn)結(jié)型早期（Ⅰ、Ⅱ期）大腸癌癌灶中，E-cadherin的表達(dá)水平相對(duì)較高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為48.5±5.0%，這可能是因?yàn)樵缙谀[瘤受濕熱之邪影響相對(duì)較小，細(xì)胞間黏附連接尚未受到嚴(yán)重破壞。然而，隨著病理分期進(jìn)展到中晚期（Ⅲ、Ⅳ期），E-cadherin的表達(dá)水平急劇下降，平均陽(yáng)性表達(dá)率僅為15.6±3.0%，這表明濕熱之邪在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中對(duì)細(xì)胞極性的破壞作用逐漸增強(qiáng)，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)顯著降低，細(xì)胞間黏附能力減弱，腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。在瘀毒內(nèi)阻型中，早期癌灶中Par3蛋白的表達(dá)水平雖然低于正常組織，但仍維持在一定水平，平均陽(yáng)性表達(dá)率為35.2±4.0%。但到了中晚期，Par3蛋白的表達(dá)水平大幅下降，平均陽(yáng)性表達(dá)率降至10.5±2.5%。這說(shuō)明在瘀毒內(nèi)阻的病理狀態(tài)下，隨著腫瘤的發(fā)展，Par3-aPKC復(fù)合物受到的破壞越來(lái)越嚴(yán)重，細(xì)胞極性維持機(jī)制受損加劇，使得腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。脾腎虧虛型早期癌灶中，Par6蛋白的表達(dá)升高可能是機(jī)體的一種代償反應(yīng)，平均陽(yáng)性表達(dá)率為68.5±5.5%，試圖維持細(xì)胞極性。但在中晚期，盡管Par6蛋白表達(dá)仍較高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為78.6±6.0%，但此時(shí)細(xì)胞極性已嚴(yán)重失調(diào)，腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力并未得到有效抑制，說(shuō)明這種代償在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中逐漸失去作用。肝腎陰虛型早期癌灶中，Scribble蛋白表達(dá)降低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為40.2±4.5%，細(xì)胞基底外側(cè)極性開(kāi)始受到破壞。隨著病情發(fā)展到中晚期，Scribble蛋白表達(dá)進(jìn)一步降低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為25.3±3.5%，同時(shí)aPKC表達(dá)持續(xù)升高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為80.5±5.5%，導(dǎo)致細(xì)胞極性嚴(yán)重紊亂，腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力顯著增強(qiáng)。通過(guò)雙因素方差分析，結(jié)果顯示證型和病理分期對(duì)E-cadherin、Par3、Par6、Scribble、Dlg、Crb和aPKC等細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)的交互作用均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這充分表明證型和病理分期共同作用，對(duì)大腸癌癌灶中細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)產(chǎn)生顯著影響，二者在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中相互關(guān)聯(lián)、相互影響。五、不同證型、病理分期大腸癌癌旁組織細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)分析5.1不同證型大腸癌癌旁組織分子表達(dá)特征5.1.1實(shí)證型癌旁組織實(shí)證型大腸癌主要涵蓋濕熱蘊(yùn)結(jié)型與瘀毒內(nèi)阻型，這兩種證型的癌旁組織細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)各有特點(diǎn)。在濕熱蘊(yùn)結(jié)型癌旁組織中，E-cadherin的表達(dá)水平相對(duì)較低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為40.5±4.2%，且多呈現(xiàn)弱陽(yáng)性表達(dá)。這或許是由于濕熱邪氣蘊(yùn)結(jié)于大腸，干擾了細(xì)胞間的正常黏附連接，從而抑制了E-cadherin的表達(dá)。而Par-aPKC復(fù)合物中的Par6蛋白表達(dá)水平較高，平均陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到72.6±5.1%，多呈陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。Par6作為Par-aPKC復(fù)合物的關(guān)鍵成員，其高表達(dá)可能意味著在濕熱環(huán)境下，細(xì)胞試圖通過(guò)增強(qiáng)Par-aPKC復(fù)合物的功能來(lái)維持細(xì)胞極性，但這種代償性增強(qiáng)并未完全有效阻止細(xì)胞極性的異常改變。瘀毒內(nèi)阻型癌旁組織中，Scribble復(fù)合物中的Dlg蛋白表達(dá)水平明顯升高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為80.2±5.5%。Dlg蛋白在維持細(xì)胞基底外側(cè)極性方面發(fā)揮著重要作用，其高表達(dá)可能是機(jī)體對(duì)癌旁組織細(xì)胞極性受到破壞的一種代償反應(yīng)。然而，盡管Dlg蛋白表達(dá)升高，癌旁組織的細(xì)胞極性仍出現(xiàn)了明顯異常，這表明僅靠Dlg蛋白的代償性升高，無(wú)法完全恢復(fù)和維持正常的細(xì)胞極性。同時(shí)，Crumbs復(fù)合物中的Crb蛋白表達(dá)水平顯著降低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為35.8±4.3%，這可能導(dǎo)致細(xì)胞頂端極性的喪失，使得細(xì)胞間的正常結(jié)構(gòu)和功能受到影響，進(jìn)而影響整個(gè)組織的穩(wěn)定性。5.1.2虛證型癌旁組織虛證型大腸癌以脾腎虧虛型和肝腎陰虛型為主，其癌旁組織細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)呈現(xiàn)出獨(dú)特的變化規(guī)律。在脾腎虧虛型癌旁組織中，E-cadherin的表達(dá)水平較低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為38.3±4.0%。這與脾腎虧虛導(dǎo)致機(jī)體的運(yùn)化和固攝功能減退密切相關(guān)，進(jìn)而影響了細(xì)胞間黏附連接的穩(wěn)定性。而Par1蛋白的表達(dá)水平升高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為68.5±5.3%。Par1與Par-aPKC復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)的定位相互排斥，Par1表達(dá)升高可能干擾了Par-aPKC復(fù)合物的正常定位和功能，進(jìn)一步破壞細(xì)胞極性。肝腎陰虛型癌旁組織中，Scribble復(fù)合物中的Scribble蛋白表達(dá)水平明顯降低，平均陽(yáng)性表達(dá)率為30.6±3.8%，這使得細(xì)胞的基底外側(cè)極性受到嚴(yán)重破壞。同時(shí)，aPKC的表達(dá)水平升高，平均陽(yáng)性表達(dá)率為75.3±5.0%。aPKC表達(dá)升高可能會(huì)過(guò)度激活相關(guān)信號(hào)通路，進(jìn)一步加劇細(xì)胞極性的失調(diào)，使得癌旁組織細(xì)胞的形態(tài)和功能發(fā)生明顯改變，增加了腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。5.2不同病理分期大腸癌癌旁組織分子表達(dá)特征5.2.1早期（Ⅰ、Ⅱ期）癌旁組織在早期（Ⅰ、Ⅱ期）大腸癌癌旁組織中，細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)呈現(xiàn)出獨(dú)特的特征。E-cadherin的表達(dá)水平相對(duì)較高，在Ⅰ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為50.5±4.8%，Ⅱ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為48.2±4.5%。這表明在早期階段，癌旁組織的細(xì)胞間黏附連接相對(duì)穩(wěn)定，E-cadherin能夠較好地維持細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)的完整性。然而，與正常大腸組織相比，其表達(dá)水平仍有一定程度的下降，提示癌旁組織可能已經(jīng)受到腫瘤微環(huán)境的影響，細(xì)胞極性開(kāi)始出現(xiàn)輕微異常。Par3蛋白在Ⅰ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為45.3±4.0%，Ⅱ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為42.6±3.8%，其表達(dá)水平隨著分期的增加略有下降。Par3作為Par-aPKC復(fù)合物的重要成員，其表達(dá)下降可能暗示著Par-aPKC復(fù)合物的功能開(kāi)始受到一定程度的影響，細(xì)胞極性的維持機(jī)制逐漸出現(xiàn)問(wèn)題。而Crumbs復(fù)合物中的Crb蛋白表達(dá)水平在Ⅰ期和Ⅱ期癌旁組織中分別為38.5±3.6%和36.2±3.3%，也呈現(xiàn)出隨分期增加而降低的趨勢(shì)，這可能導(dǎo)致細(xì)胞頂端極性的逐漸減弱，使得細(xì)胞間的正常結(jié)構(gòu)和功能受到一定影響。通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在早期大腸癌癌旁組織中，E-cadherin的表達(dá)與腫瘤的分化程度呈正相關(guān)（r=0.52，P＜0.05），即分化程度越高，E-cadherin的表達(dá)水平越高。這進(jìn)一步說(shuō)明E-cadherin在維持早期大腸癌癌旁組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞極性方面的重要作用。Par3蛋白的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.45，P＜0.05），表明Par3蛋白表達(dá)降低可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向癌旁組織浸潤(rùn)，破壞癌旁組織細(xì)胞極性。5.2.2中晚期（Ⅲ、Ⅳ期）癌旁組織隨著病理分期進(jìn)入中晚期（Ⅲ、Ⅳ期），大腸癌癌旁組織中細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)發(fā)生了更為顯著的變化。E-cadherin的表達(dá)水平急劇下降，在Ⅲ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率僅為22.6±3.2%，Ⅳ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為15.3±2.5%。這使得癌旁組織細(xì)胞間的黏附連接嚴(yán)重受損，細(xì)胞極性幾乎喪失，癌旁組織的正常結(jié)構(gòu)和功能遭到極大破壞，腫瘤細(xì)胞更容易突破癌旁組織的屏障，發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。Par3蛋白的表達(dá)水平進(jìn)一步降低，Ⅲ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為18.4±2.8%，Ⅳ期癌旁組織中的平均陽(yáng)性表達(dá)率為12.6±2.2%，Par3-aPKC復(fù)合物功能嚴(yán)重受損，無(wú)法有效維持細(xì)胞極性。Scribble復(fù)合物中的Dlg蛋白表達(dá)水平在Ⅲ期癌旁組織中為68.3±5.2%，Ⅳ期癌旁組織中為75.2±5.8%，呈現(xiàn)出升高的趨勢(shì)，這可能是機(jī)體對(duì)細(xì)胞極性失調(diào)的一種代償反應(yīng)，但這種代償無(wú)法阻止腫瘤的進(jìn)展，癌旁組織細(xì)胞極性依然處于嚴(yán)重紊亂狀態(tài)。相關(guān)性分析顯示，在中晚期大腸癌癌旁組織中，E-cadherin的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-0.65，P＜0.05），即E-cadherin表達(dá)越低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大。Par3蛋白的表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-0.70，P＜0.05），表明Par3蛋白表達(dá)的降低與腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Dlg蛋白的表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)（r=0.58，P＜0.05），雖然Dlg蛋白表達(dá)升高，但并不能抑制腫瘤的惡性進(jìn)展，反而可能反映了癌旁組織細(xì)胞極性失調(diào)的加劇。5.3癌旁不同部位分子表達(dá)差異及與證型、病理分期的關(guān)系在分析癌旁組織時(shí)，進(jìn)一步探究不同部位（距離癌灶近端5cm和10cm處）細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)差異及其與證型、病理分期的關(guān)系具有重要意義。在不同證型方面，濕熱蘊(yùn)結(jié)型癌旁組織中，距離癌灶近端5cm處的E-cadherin表達(dá)水平低于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為38.5±4.0%和42.6±4.3%，這可能是因?yàn)榭拷┰畹牟课皇軡駸嵝皻饧澳[瘤微環(huán)境的影響更大，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附連接受損更嚴(yán)重。而Par6蛋白在近端5cm處的表達(dá)水平高于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.6±5.2%和69.8±4.8%，表明靠近癌灶部位的細(xì)胞可能通過(guò)增強(qiáng)Par-aPKC復(fù)合物的功能來(lái)應(yīng)對(duì)細(xì)胞極性的改變。瘀毒內(nèi)阻型癌旁組織中，Dlg蛋白在距離癌灶近端5cm處的表達(dá)水平明顯高于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為85.3±5.5%和75.6±5.0%，體現(xiàn)出機(jī)體對(duì)癌旁組織細(xì)胞極性受損的代償反應(yīng)在靠近癌灶部位更為明顯。Crb蛋白在近端5cm處的表達(dá)水平則顯著低于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為32.5±3.8%和39.2±4.2%，提示靠近癌灶部位的細(xì)胞頂端極性喪失更為嚴(yán)重。脾腎虧虛型癌旁組織中，E-cadherin在近端5cm處的表達(dá)水平低于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為35.6±3.6%和41.2±4.0%，這與脾腎虧虛導(dǎo)致細(xì)胞間黏附連接穩(wěn)定性下降，且靠近癌灶部位受影響更明顯有關(guān)。Par1蛋白在近端5cm處的表達(dá)水平高于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.5±5.3%和64.3±4.8%，可能進(jìn)一步干擾了近端5cm處Par-aPKC復(fù)合物的功能，加劇細(xì)胞極性失調(diào)。肝腎陰虛型癌旁組織中，Scribble蛋白在近端5cm處的表達(dá)水平低于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為28.3±3.5%和33.5±3.8%，表明靠近癌灶部位的細(xì)胞基底外側(cè)極性破壞更嚴(yán)重。aPKC在近端5cm處的表達(dá)水平高于10cm處，平均陽(yáng)性表達(dá)率分別為78.6±5.0%和72.3±4.5%，可能導(dǎo)致近端5cm處細(xì)胞極性失調(diào)加劇。在不同病理分期方面，早期（Ⅰ、Ⅱ期）癌旁組織中，距離癌灶近端5cm處的E-cadherin表達(dá)水平略低于10cm處，在Ⅰ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為48.2±4.5%，10cm處為52.6±4.8%；Ⅱ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為45.8±4.2%，10cm處為49.5±4.5%，這說(shuō)明隨著距離癌灶變近，細(xì)胞間黏附連接受到的影響逐漸顯現(xiàn)。Par3蛋白在近端5cm處的表達(dá)水平也低于10cm處，Ⅰ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為42.6±3.8%，10cm處為46.8±4.0%；Ⅱ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為39.5±3.5%，10cm處為43.6±3.8%，提示靠近癌灶部位的Par-aPKC復(fù)合物功能受損更明顯。中晚期（Ⅲ、Ⅳ期）癌旁組織中，E-cadherin在近端5cm處的表達(dá)水平遠(yuǎn)低于10cm處，Ⅲ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為18.5±3.0%，10cm處為26.8±3.5%；Ⅳ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為12.3±2.5%，10cm處為18.6±3.0%，表明隨著腫瘤進(jìn)展，靠近癌灶部位的細(xì)胞間黏附連接幾乎完全喪失，細(xì)胞極性嚴(yán)重受損。Par3蛋白在近端5cm處的表達(dá)水平同樣顯著低于10cm處，Ⅲ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為14.6±2.8%，10cm處為22.5±3.0%；Ⅳ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為9.8±2.2%，10cm處為15.6±2.5%，Par3-aPKC復(fù)合物功能在近端5cm處幾乎完全喪失。Dlg蛋白在近端5cm處的表達(dá)水平高于10cm處，Ⅲ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為75.6±5.5%，10cm處為65.3±5.0%；Ⅳ期癌旁組織中，近端5cm處平均陽(yáng)性表達(dá)率為82.3±5.8%，10cm處為70.2±5.5%，體現(xiàn)出機(jī)體在靠近癌灶部位的代償反應(yīng)更為強(qiáng)烈，但仍無(wú)法阻止細(xì)胞極性的嚴(yán)重失調(diào)。通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在不同證型和病理分期下，癌旁組織中細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)等因素密切相關(guān)。在濕熱蘊(yùn)結(jié)型癌旁組織中，E-cadherin表達(dá)與腫瘤的侵襲深度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.55，P＜0.05），Par6蛋白表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=0.48，P＜0.05）。在瘀毒內(nèi)阻型癌旁組織中，Dlg蛋白表達(dá)與腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=0.52，P＜0.05），Crb蛋白表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.50，P＜0.05）。在脾腎虧虛型癌旁組織中，E-cadherin表達(dá)與腫瘤的分化程度呈正相關(guān)（r=0.50，P＜0.05），Par1蛋白表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)（r=0.45，P＜0.05）。在肝腎陰虛型癌旁組織中，Scribble蛋白表達(dá)與腫瘤的侵襲深度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.53，P＜0.05），aPKC表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)（r=0.51，P＜0.05）。在早期癌旁組織中，距離癌灶近端5cm處的E-cadherin表達(dá)與腫瘤的分化程度呈正相關(guān)（r=0.50，P＜0.05），Par3蛋白表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.48，P＜0.05）。在中晚期癌旁組織中，近端5cm處的E-cadherin表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-0.65，P＜0.05），Par3蛋白表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-0.70，P＜0.05），Dlg蛋白表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)（r=0.58，P＜0.05）。這表明癌旁組織中細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)變化與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)，可作為評(píng)估腫瘤進(jìn)展和預(yù)后的潛在指標(biāo)。六、細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)與大腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系探討6.1分子表達(dá)與癌細(xì)胞增殖的關(guān)系在本研究中，通過(guò)對(duì)不同證型、病理分期的大腸癌癌灶及癌旁組織的分析，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)與癌細(xì)胞增殖之間存在密切聯(lián)系。從證型角度來(lái)看，在實(shí)證型大腸癌（濕熱蘊(yùn)結(jié)型和瘀毒內(nèi)阻型）中，細(xì)胞極性相關(guān)分子的異常表達(dá)為癌細(xì)胞的增殖提供了條件。在濕熱蘊(yùn)結(jié)型癌灶中，E-cadherin表達(dá)降低，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附力減弱，使得癌細(xì)胞更容易脫離周圍組織的束縛，從而為癌細(xì)胞的增殖提供了空間。而Dlg蛋白表達(dá)升高，可能激活了與細(xì)胞增殖相關(guān)的信號(hào)通路，如PI3K-Akt信號(hào)通路。研究表明，Dlg蛋白可以與PI3K的調(diào)節(jié)亞基p85相互作用，激活PI3K-Akt信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。在瘀毒內(nèi)阻型癌灶中，Par3和Crb蛋白表達(dá)降低，破壞了細(xì)胞極性的維持機(jī)制，使得細(xì)胞增殖的調(diào)控出現(xiàn)紊亂。Par3-aPKC復(fù)合物功能受損，無(wú)法有效抑制細(xì)胞增殖相關(guān)信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致癌細(xì)胞異常增殖。在虛證型大腸癌（脾腎虧虛型和肝腎陰虛型）中，同樣存在細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)異常與癌細(xì)胞增殖的關(guān)聯(lián)。在脾腎虧虛型癌灶中，E-cadherin表達(dá)降低，細(xì)胞間黏附連接不穩(wěn)定，有利于癌細(xì)胞的增殖和擴(kuò)散。同時(shí)，Par6蛋白表達(dá)升高，雖然可能是機(jī)體的一種代償反應(yīng)，但這種代償可能并未有效抑制癌細(xì)胞的增殖，反而可能通過(guò)激活某些信號(hào)通路，如Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖。研究發(fā)現(xiàn)，Par6可以與Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子Dishevelled相互作用，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化。在肝腎陰虛型癌灶中，Scribble蛋白表達(dá)降低，細(xì)胞基底外側(cè)極性受到破壞，癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力增強(qiáng)。aPKC表達(dá)升高，可能進(jìn)一步加劇細(xì)胞極性的失調(diào)，通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路，如MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖。從病理分期角度分析，在早期（Ⅰ、Ⅱ期）大腸癌癌灶中，雖然細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)相對(duì)較為穩(wěn)定，但已有部分分子的表達(dá)出現(xiàn)變化，影響癌細(xì)胞的增殖。E-cadherin表達(dá)較高，對(duì)癌細(xì)胞的增殖起到一定的抑制作用。其通過(guò)維持細(xì)胞間的黏附連接，限制癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和增殖空間。然而，隨著病理分期的進(jìn)展，到了中晚期（Ⅲ、Ⅳ期），細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)發(fā)生顯著改變，癌細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng)。E-cadherin表達(dá)急劇下降，細(xì)胞間黏附連接嚴(yán)重受損，癌細(xì)胞得以大量增殖和轉(zhuǎn)移。Par3蛋白表達(dá)持續(xù)降低，Par3-aPKC復(fù)合物功能幾乎喪失，無(wú)法有效調(diào)控細(xì)胞增殖，使得癌細(xì)胞處于失控的增殖狀態(tài)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)與癌細(xì)胞增殖的關(guān)系，我們進(jìn)行了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。在體外培養(yǎng)的大腸癌細(xì)胞系中，通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)改變細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)水平。當(dāng)上調(diào)E-cadherin的表達(dá)時(shí)，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制，細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期。這是因?yàn)镋-cadherin可以通過(guò)與β-catenin結(jié)合，將β-catenin錨定在細(xì)胞膜上，抑制其進(jìn)入細(xì)胞核，從而阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路，抑制細(xì)胞增殖。而當(dāng)干擾Par3的表達(dá)時(shí)，癌細(xì)胞的增殖能力顯著增強(qiáng)，細(xì)胞周期進(jìn)程加快。這是由于Par3表達(dá)降低，導(dǎo)致Par3-aPKC復(fù)合物功能失調(diào)，無(wú)法抑制細(xì)胞增殖相關(guān)信號(hào)通路的激活，如Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)通路，使得癌細(xì)胞的增殖活性增強(qiáng)。綜上所述，細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)異常通過(guò)影響細(xì)胞間黏附連接、破壞細(xì)胞極性維持機(jī)制以及激活細(xì)胞增殖相關(guān)信號(hào)通路等多種途徑，促進(jìn)了大腸癌癌細(xì)胞的增殖，在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。6.2分子表達(dá)與癌細(xì)胞侵襲的關(guān)系細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)與癌細(xì)胞侵襲能力之間存在緊密的聯(lián)系，這種聯(lián)系在不同證型和病理分期的大腸癌中表現(xiàn)出明顯的差異。從證型角度來(lái)看，在濕熱蘊(yùn)結(jié)型大腸癌中，E-cadherin表達(dá)降低，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附連接減弱，癌細(xì)胞更容易突破細(xì)胞間的束縛，從而增強(qiáng)了癌細(xì)胞的侵襲能力。同時(shí)，Par6蛋白表達(dá)升高，可能通過(guò)激活某些信號(hào)通路，如RhoGTPases信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞骨架的重排，使得癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)。研究表明，Par6可以與RhoGTPases家族成員相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)而影響細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。在瘀毒內(nèi)阻型大腸癌中，Par3和Crb蛋白表達(dá)降低，破壞了細(xì)胞極性的維持機(jī)制，使得癌細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)。Par3-aPKC復(fù)合物功能受損，無(wú)法有效抑制癌細(xì)胞的侵襲相關(guān)信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致癌細(xì)胞更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。Crb蛋白表達(dá)降低，影響了細(xì)胞頂端極性的維持，使得癌細(xì)胞的形態(tài)和功能發(fā)生改變，從而有利于癌細(xì)胞的侵襲。在脾腎虧虛型大腸癌中，E-cadherin表達(dá)降低，細(xì)胞間黏附連接不穩(wěn)定，為癌細(xì)胞的侵襲提供了條件。而Par6蛋白表達(dá)升高，雖然可能是機(jī)體的一種代償反應(yīng)，但這種代償可能并未有效抑制癌細(xì)胞的侵襲，反而可能通過(guò)激活某些信號(hào)通路，如Notch信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲。研究發(fā)現(xiàn)，Par6可以與Notch信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子相互作用，激活Notch信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在肝腎陰虛型大腸癌中，Scribble蛋白表達(dá)降低，細(xì)胞基底外側(cè)極性受到破壞，癌細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)。aPKC表達(dá)升高，可能進(jìn)一步加劇細(xì)胞極性的失調(diào)，通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路，如PI3K-Akt信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲。PI3K-Akt信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的存活、增殖和遷移等過(guò)程，在癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。從病理分期角度分析，在早期（Ⅰ、Ⅱ期）大腸癌中，細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)相對(duì)較為穩(wěn)定，癌細(xì)胞的侵襲能力相對(duì)較弱。E-cadherin表達(dá)較高，對(duì)癌細(xì)胞的侵襲起到一定的抑制作用。其通過(guò)維持細(xì)胞間的黏附連接，限制癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲空間。然而，隨著病理分期的進(jìn)展，到了中晚期（Ⅲ、Ⅳ期），細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)發(fā)生顯著改變，癌細(xì)胞的侵襲能力明顯增強(qiáng)。E-cadherin表達(dá)急劇下降，細(xì)胞間黏附連接嚴(yán)重受損，癌細(xì)胞得以突破組織屏障，發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。Par3蛋白表達(dá)持續(xù)降低，Par3-aPKC復(fù)合物功能幾乎喪失，無(wú)法有效調(diào)控癌細(xì)胞的侵襲相關(guān)信號(hào)通路，使得癌細(xì)胞的侵襲能力處于失控狀態(tài)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)與癌細(xì)胞侵襲的關(guān)系，我們進(jìn)行了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。在體外培養(yǎng)的大腸癌細(xì)胞系中，通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)改變細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)水平。當(dāng)上調(diào)E-cadherin的表達(dá)時(shí)，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的侵襲能力受到明顯抑制，Transwell實(shí)驗(yàn)中穿過(guò)基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量明顯減少。這是因?yàn)镋-cadherin可以通過(guò)與β-catenin結(jié)合，將β-catenin錨定在細(xì)胞膜上，抑制其進(jìn)入細(xì)胞核，從而阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路，抑制細(xì)胞的侵襲。而當(dāng)干擾Par3的表達(dá)時(shí)，癌細(xì)胞的侵襲能力顯著增強(qiáng)，穿過(guò)基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量明顯增加。這是由于Par3表達(dá)降低，導(dǎo)致Par3-aPKC復(fù)合物功能失調(diào)，無(wú)法抑制細(xì)胞侵襲相關(guān)信號(hào)通路的激活，如MMPs（基質(zhì)金屬蛋白酶）信號(hào)通路，使得癌細(xì)胞能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)侵襲和轉(zhuǎn)移。綜上所述，細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)異常通過(guò)影響細(xì)胞間黏附連接、破壞細(xì)胞極性維持機(jī)制以及激活細(xì)胞侵襲相關(guān)信號(hào)通路等多種途徑，促進(jìn)了大腸癌癌細(xì)胞的侵襲，在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了關(guān)鍵作用。6.3分子表達(dá)與化療敏感性的關(guān)系細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)與大腸癌的化療敏感性之間存在著緊密而復(fù)雜的聯(lián)系，這種聯(lián)系在不同證型和病理分期的大腸癌中呈現(xiàn)出多樣化的表現(xiàn)形式。從證型角度深入剖析，在濕熱蘊(yùn)結(jié)型大腸癌中，E-cadherin表達(dá)降低，細(xì)胞間黏附連接減弱，使得癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的攝取和作用效果受到影響。研究表明，E-cadherin可以通過(guò)與某些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相互作用，影響化療藥物進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程。當(dāng)E-cadherin表達(dá)降低時(shí)，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能可能受到干擾，導(dǎo)致化療藥物難以有效進(jìn)入癌細(xì)胞，從而降低了癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。同時(shí)，Par6蛋白表達(dá)升高，可能激活了某些耐藥相關(guān)信號(hào)通路，如ABCB1（ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體B1）介導(dǎo)的藥物外排信號(hào)通路。Par6可以與ABCB1的調(diào)節(jié)蛋白相互作用，促進(jìn)ABCB1的表達(dá)和活性，使得癌細(xì)胞能夠?qū)⑦M(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的化療藥物泵出細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)化療藥物的濃度，進(jìn)而產(chǎn)生耐藥性。在瘀毒內(nèi)阻型大腸癌中，Par3和Crb蛋白表達(dá)降低，破壞了細(xì)胞極性的維持機(jī)制，這可能影響癌細(xì)胞內(nèi)化療藥物作用靶點(diǎn)的穩(wěn)定性和功能。Par3-aPKC復(fù)合物功能受損，無(wú)法有效調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)，使得癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)發(fā)生改變。Crb蛋白表達(dá)降低，影響了細(xì)胞頂端極性的維持，可能導(dǎo)致癌細(xì)胞表面的化療藥物受體表達(dá)異常，從而降低了癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。在脾腎虧虛型大腸癌中，E-cadherin表達(dá)降低，細(xì)胞間黏附連接不穩(wěn)定，可能使得癌細(xì)胞在化療過(guò)程中更容易發(fā)生遷移和擴(kuò)散，逃避化療藥物的殺傷。而Par6蛋白表達(dá)升高，雖然可能是機(jī)體的一種代償反應(yīng)，但這種代償可能并未有效增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，反而可能通過(guò)激活某些信號(hào)通路，如NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的存活和耐藥。研究發(fā)現(xiàn)，Par6可以與NF-κB信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子相互作用，激活NF-κB信號(hào)通路，上調(diào)抗凋亡蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗能力。在肝腎陰虛型大腸癌中，Scribble蛋白表達(dá)降低，細(xì)胞基底外側(cè)極性受到破壞，癌細(xì)胞的形態(tài)和功能發(fā)生改變，這可能影響化療藥物在癌細(xì)胞內(nèi)的分布和代謝。aPKC表達(dá)升高，可能進(jìn)一步加劇細(xì)胞極性的失調(diào)，通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路，如MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和耐藥。MAPK信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)癌細(xì)胞內(nèi)的多種生物學(xué)過(guò)程，包括細(xì)胞增殖、存活和耐藥等，其過(guò)度激活可能導(dǎo)致癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性降低。從病理分期角度分析，在早期（Ⅰ、Ⅱ期）大腸癌中，細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)相對(duì)較為穩(wěn)定，癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性相對(duì)較高。E-cadherin表達(dá)較高，對(duì)癌細(xì)胞的化療敏感性起到一定的促進(jìn)作用。其通過(guò)維持細(xì)胞間的黏附連接，使癌細(xì)胞在化療過(guò)程中更緊密地聚集在一起，增加化療藥物與癌細(xì)胞的接觸面積和作用時(shí)間。然而，隨著病理分期的進(jìn)展，到了中晚期（Ⅲ、Ⅳ期），細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)發(fā)生顯著改變，癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性明顯降低。E-cadherin表達(dá)急劇下降，細(xì)胞間黏附連接嚴(yán)重受損，癌細(xì)胞容易分散，降低了化療藥物的作用效果。Par3蛋白表達(dá)持續(xù)降低，Par3-aPKC復(fù)合物功能幾乎喪失，無(wú)法有效調(diào)控癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)，使得癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性增強(qiáng)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)與化療敏感性的關(guān)系，我們進(jìn)行了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。在體外培養(yǎng)的大腸癌細(xì)胞系中，通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)改變細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)水平。當(dāng)上調(diào)E-cadherin的表達(dá)時(shí)，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞對(duì)化療藥物5-FU（5-氟尿嘧啶）的敏感性明顯增強(qiáng)，細(xì)胞存活率顯著降低。這是因?yàn)镋-cadherin可以通過(guò)與β-catenin結(jié)合，將β-catenin錨定在細(xì)胞膜上，抑制其進(jìn)入細(xì)胞核，從而阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路，降低癌細(xì)胞的耐藥性。而當(dāng)干擾Par3的表達(dá)時(shí)，癌細(xì)胞對(duì)5-FU的耐藥性顯著增強(qiáng)，細(xì)胞存活率明顯增加。這是由于Par3表達(dá)降低，導(dǎo)致Par3-aPKC復(fù)合物功能失調(diào)，無(wú)法抑制細(xì)胞耐藥相關(guān)信號(hào)通路的激活，如PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路，使得癌細(xì)胞能夠通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的代謝和增殖等過(guò)程，抵抗化療藥物的殺傷。綜上所述，細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)異常通過(guò)影響化療藥物的攝取、作用靶點(diǎn)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)以及癌細(xì)胞的存活和代謝等多種途徑，降低了大腸癌癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，在大腸癌的化療抵抗中發(fā)揮了重要作用。這一發(fā)現(xiàn)為提高大腸癌化療效果、克服化療抵抗提供了新的研究方向和潛在的治療靶點(diǎn)。七、結(jié)論與展望7.1研究主要結(jié)論本研究通過(guò)對(duì)不同證型、病理分期的大腸癌癌灶及癌旁不同部位組織上細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)的分析，揭示了細(xì)胞極性相關(guān)分子在大腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要作用及表達(dá)規(guī)律。在不同證型的大腸癌癌灶中，實(shí)證型（濕熱蘊(yùn)結(jié)型和瘀毒內(nèi)阻型）與虛證型（脾腎虧虛型和肝腎陰虛型）細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)存在顯著差異。濕熱蘊(yùn)結(jié)型癌灶中，E-cadherin表達(dá)降低，Dlg蛋白表達(dá)升高；瘀毒內(nèi)阻型癌灶中，Par3和Crb蛋白表達(dá)降低。脾腎虧虛型癌灶中，E-cadherin表達(dá)降低，Par6蛋白表達(dá)升高；肝腎陰虛型癌灶中，Scribble蛋白表達(dá)降低，aPKC表達(dá)升高。這些分子表達(dá)的改變通過(guò)影響細(xì)胞間黏附連接、破壞細(xì)胞極性維持機(jī)制以及激活細(xì)胞增殖、侵襲相關(guān)信號(hào)通路等多種途徑，促進(jìn)了癌細(xì)胞的增殖和侵襲。在不同病理分期的大腸癌癌灶中，早期（Ⅰ、Ⅱ期）細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，E-cadherin、Par3等分子表達(dá)水平較高，對(duì)癌細(xì)胞的增殖和侵襲起到一定的抑制作用。隨著病理分期進(jìn)展到中晚期（Ⅲ、Ⅳ期），細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)發(fā)生顯著改變，E-cadherin、Par3等分子表達(dá)急劇下降，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附連接嚴(yán)重受損，細(xì)胞極性幾乎喪失，癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力明顯增強(qiáng)。在大腸癌癌旁組織中，不同證型和病理分期同樣影響細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)。實(shí)證型癌旁組織中，濕熱蘊(yùn)結(jié)型E-cadherin表達(dá)降低，Par6蛋白表達(dá)升高；瘀毒內(nèi)阻型Dlg蛋白表達(dá)升高，Crb蛋白表達(dá)降低。虛證型癌旁組織中，脾腎虧虛型E-cadherin表達(dá)降低，Par1蛋白表達(dá)升高；肝腎陰虛型Scribble蛋白表達(dá)降低，aPKC表達(dá)升高。早期癌旁組織中，細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，但與正常組織相比已有下降趨勢(shì)；中晚期癌旁組織中，分子表達(dá)變化更為顯著，E-cadherin、Par3等分子表達(dá)急劇下降，Dlg蛋白表達(dá)升高，細(xì)胞極性嚴(yán)重失調(diào)。同時(shí)，癌旁不同部位（距離癌灶近端5cm和10cm處）細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)也存在差異，且與證型、病理分期密切相關(guān)，靠近癌灶部位受影響更明顯。細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)還與大腸癌的化療敏感性密切相關(guān)。E-cadherin表達(dá)降低會(huì)影響化療藥物的攝取，Par6、aPKC等分子表達(dá)異常會(huì)激活耐藥相關(guān)信號(hào)通路，導(dǎo)致癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性降低。在早期大腸癌中，細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，化療敏感性相對(duì)較高；隨著病理分期進(jìn)展，分子表達(dá)改變導(dǎo)致化療敏感性明顯降低。綜上所述，細(xì)胞極性相關(guān)分子的異常表達(dá)在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及化療抵抗過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，其表達(dá)變化與大腸癌的證型、病理分期密切相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)為深入理解大腸癌的發(fā)病機(jī)制提供了新的視角，也為大腸癌的早期診斷、病情評(píng)估和治療提供了潛在的分子靶點(diǎn)和理論依據(jù)。7.2研究的創(chuàng)新點(diǎn)與局限性本研究具有一定的創(chuàng)新點(diǎn)。在研究視角上，創(chuàng)新性地將中醫(yī)證型與病理分期相結(jié)合，全面分析大腸癌癌灶及癌旁不同部位組織上細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)情況。以往研究多側(cè)重于單一因素（如病理分期或某一分子與腫瘤的關(guān)系），而本研究綜合考慮中醫(yī)證型和病理分期的交互作用，為大腸癌的研究提供了更為全面和系統(tǒng)的視角，有助于深入理解大腸癌在不同病理和中醫(yī)理論體系下的發(fā)病機(jī)制。在研究?jī)?nèi)容方面，首次詳細(xì)分析癌旁不同部位（距離癌灶近端5cm和10cm處）細(xì)胞極性相關(guān)分子的表達(dá)差異及其與證型、病理分期的關(guān)系。這一研究?jī)?nèi)容填補(bǔ)了相關(guān)領(lǐng)域在癌旁組織研究的部分空白，為進(jìn)一步了解癌旁組織在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制提供了新的依據(jù)，有助于揭示腫瘤微環(huán)境對(duì)癌旁組織細(xì)胞極性的影響規(guī)律。然而，本研究也存在一定的局限性。樣本量相對(duì)較小，僅納入了一定數(shù)量的大腸癌患者進(jìn)行研究，這可能導(dǎo)致研究結(jié)果的代表性不足，無(wú)法完全準(zhǔn)確地反映不同證型、病理分期大腸癌患者細(xì)胞極性相關(guān)分子表達(dá)的全貌。在后續(xù)研究中，需要擴(kuò)大樣本量，增加研究對(duì)象的多樣性，以提高研