檢驗技術標準操作規(guī)程執(zhí)行手冊一、前言本手冊旨在規(guī)范檢驗技術操作流程，確保檢驗結(jié)果的準確性、可靠性與可追溯性，為臨床診斷、治療監(jiān)測及公共衛(wèi)生防控提供科學依據(jù)。適用于醫(yī)療機構(gòu)檢驗科、第三方醫(yī)學檢驗機構(gòu)及相關科研實驗室的檢驗技術人員，涵蓋生化檢驗、免疫檢驗、微生物檢驗、分子生物學檢驗等核心技術領域。編制依據(jù)包括《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》《臨床檢驗操作規(guī)程》（第四版）、ISO____醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則及各專業(yè)領域的國家/行業(yè)標準，結(jié)合本機構(gòu)檢驗工作實際需求制定，用于指導日常檢驗操作、新員工培訓及質(zhì)量體系建設。二、檢驗技術基礎規(guī)范（一）人員資質(zhì)與職責1.資質(zhì)要求：檢驗人員需持有效《臨床檢驗資格證書》，新入職人員須通過崗前培訓（含理論考核、實操考核）；特殊檢驗項目（如HIV抗體檢測、PCR擴增實驗）需取得專項培訓證書。2.崗位職責：檢驗技師：嚴格執(zhí)行SOP，完成樣本檢測、結(jié)果審核、設備維護，及時報告異常結(jié)果；質(zhì)量管理員：監(jiān)督SOP執(zhí)行情況，組織室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，分析質(zhì)量數(shù)據(jù)并提出改進措施；技術主管：負責SOP的編制與修訂，指導復雜技術操作，處理重大質(zhì)量問題。（二）樣本管理規(guī)范1.采集要求采集人員需核對受檢者信息（姓名、性別、年齡、樣本類型），確認采集時間與醫(yī)囑要求一致；靜脈血采集：使用一次性真空采血管，根據(jù)檢驗項目選擇抗凝劑（如EDTA-K?用于血常規(guī)，肝素鋰用于血氣分析），采集量誤差≤10%，避免溶血、脂血、凝塊；尿液/體液采集：使用無菌容器，采集后2小時內(nèi)送檢；特殊樣本（如腦脊液）需立即送檢并保溫（37℃）。2.運輸與保存常溫樣本（如血清生化）：2~8℃保存不超過24小時，-20℃可短期凍存（≤1周）；需低溫保存樣本（如病毒核酸）：-80℃冰箱或液氮罐，避免反復凍融；運輸過程中防震、避光，冷鏈運輸溫度波動≤±2℃，記錄運輸時間、溫度。3.接收與拒收檢驗科接收樣本時核查外觀（是否漏液、污染）、標簽信息（是否清晰、完整）、采集時間；不符合要求的樣本需注明拒收原因（如“樣本溶血”“標簽模糊”），并通知臨床重新采集。三、核心檢驗技術操作流程（一）生化檢驗技術1.全自動生化分析儀操作開機前準備：檢查試劑倉：確認試劑余量充足，批號、有效期符合要求；新試劑需進行批號驗證（與校準品同步測定，偏差≤5%）；校準品與質(zhì)控品：校準品復溶后2~8℃保存，24小時內(nèi)使用；質(zhì)控品提前平衡至室溫，記錄復溶時間。儀器操作步驟：1.開機：依次啟動電源、工作站軟件，等待儀器自檢（模塊通訊、液路壓力、溫度校準），自檢通過后進入操作界面；2.樣本裝載：將離心后的血清/血漿樣本放入樣本架，掃描條碼（或手動輸入編號），確認樣本類型與檢測項目匹配；3.項目設置：選擇檢測菜單（如肝功能、腎功能），設置急診優(yōu)先級（急診樣本標記“STAT”，優(yōu)先檢測）；4.檢測運行：啟動檢測程序，實時監(jiān)控儀器狀態(tài)（反應曲線、吸光度值），異常報警時暫停檢測，排查原因（如試劑針堵塞、樣本凝塊）；5.結(jié)果審核：自動生成結(jié)果后，核對質(zhì)控數(shù)據(jù)（在控時結(jié)果有效，失控時需復檢）；異常結(jié)果（如ALT＞1000U/L）需結(jié)合臨床信息（病史、用藥史）判斷，必要時復檢樣本。關機與維護：每日維護：清洗試劑針、樣本針（使用專用清洗液），檢查廢液桶容量，清理儀器表面；每周維護：清潔比色杯（或反應模塊），校準光路系統(tǒng)，檢查孵育溫度（偏差≤±0.5℃）；關機：依次關閉儀器電源、工作站，記錄當日運行日志（檢測數(shù)量、故障次數(shù)、試劑消耗）。（二）免疫檢驗技術（以酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA為例）1.試劑與耗材準備試劑盒：檢查批號、有效期，確認板條密封完好；標準品復溶后分裝（避免反復凍融），2~8℃保存；耗材：一次性加樣槍頭（無酶、無熱源），酶標板（提前平衡至室溫，避免潮濕）。2.操作流程1.加樣：標準品：按濃度梯度（如0、1、2、4、8、16ng/mL）加樣至酶標板，每孔100μL，設復孔（n=2）；樣本：血清樣本56℃滅活30分鐘（病毒類檢測），每孔加樣100μL，設陰性對照、陽性對照各2孔；加樣后振蕩混勻（300rpm，1分鐘），封板膜密封，37℃孵育60分鐘。2.洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液300μL，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，最后拍干（避免殘留液體影響結(jié)果）。3.加酶結(jié)合物：按說明書稀釋酶結(jié)合物（如1:1000），每孔加100μL，37℃孵育30分鐘，重復洗滌步驟。4.顯色與終止：加顯色劑（TMB）100μL/孔，37℃避光孵育15分鐘；加終止液（H?SO?）50μL/孔，輕輕振蕩混勻，10分鐘內(nèi)用酶標儀（波長450nm）讀取吸光度。5.結(jié)果判定：計算標準品濃度-吸光度曲線（線性回歸或四參數(shù)擬合），樣本濃度=曲線方程計算值；陽性判定：樣本吸光度/陰性對照吸光度≥2.1（S/CO≥2.1），結(jié)合臨床癥狀綜合判斷。四、質(zhì)量控制與驗證體系（一）室內(nèi)質(zhì)量控制1.質(zhì)控品選擇：涵蓋檢測項目的醫(yī)學決定水平（如血糖3.9、6.1、11.1mmol/L），購買商品化質(zhì)控品（高、中、低濃度），有效期內(nèi)使用；自制質(zhì)控品（如混合血清）需驗證穩(wěn)定性（-20℃保存3個月內(nèi)濃度偏差≤5%）。2.質(zhì)控頻率：常規(guī)項目：每批次檢測帶質(zhì)控品（如生化項目每天上午、下午各做一次質(zhì)控）；急診項目：單獨檢測時需做質(zhì)控（如夜間急診血常規(guī)，先做質(zhì)控品再測樣本）；新開展項目：前20次檢測每次帶質(zhì)控，穩(wěn)定后改為每批次一次。3.失控處理：當質(zhì)控值超出±3SD（或違反Westgard多規(guī)則），立即暫停檢測，分析原因（試劑、儀器、操作問題）；失控后需重新檢測質(zhì)控品（在控后）和樣本，記錄失控處理過程（《室內(nèi)質(zhì)控失控報告》）。（二）室間質(zhì)量評價（EQA）1.參加要求：所有開展的檢驗項目（除科研項目）需參加國家級或省級EQA，每年至少2次；收到EQA樣本后，按常規(guī)樣本檢測（盲樣，不特殊處理），結(jié)果上報至EQA機構(gòu)。2.結(jié)果分析：EQA回報后，計算本實驗室結(jié)果與靶值的偏差（偏差率=|結(jié)果-靶值|/靶值×100%）；偏差率≤10%為合格，不合格項目需分析原因（如方法學差異、試劑批號更換），制定改進措施并驗證。五、異常情況處置流程（一）樣本相關異常1.溶血樣本：原因：采集時負壓過大、混勻過度、離心不足；處置：通知臨床重新采集，若無法重采，備注“樣本溶血”，并分析溶血對結(jié)果的影響（如K?、LDH升高），結(jié)果報告需注明干擾因素。2.樣本污染：表現(xiàn)：培養(yǎng)基有雜菌生長（微生物檢驗）、ELISA結(jié)果非特異性顯色；處置：隔離污染樣本，查找污染源（如采集容器、實驗室環(huán)境），對相關區(qū)域進行消毒（紫外線照射30分鐘，75%乙醇擦拭臺面），重新采集樣本。（二）儀器故障處置1.常見故障：試劑針堵塞：用通針清理針內(nèi)雜質(zhì)，超聲清洗（功率50W，時間5分鐘）；光路異常：清潔比色杯、光源燈，更換燈泡（如氙燈使用時間超2000小時）；軟件崩潰：重啟工作站，恢復備份數(shù)據(jù)（每日備份檢測數(shù)據(jù)）。2.應急流程：故障發(fā)生時，優(yōu)先啟用備用儀器（如備用生化儀、手工法），確保急診樣本檢測；聯(lián)系廠家工程師（4小時內(nèi)響應），記錄故障現(xiàn)象、處理措施，填寫《設備故障維修記錄》。六、文件與記錄管理（一）SOP文件管理1.編制與修訂：技術主管組織編寫SOP，內(nèi)容包括目的、范圍、職責、操作步驟、質(zhì)量控制、注意事項；每年評審SOP，根據(jù)標準更新、儀器升級、質(zhì)量問題分析結(jié)果進行修訂，修訂后經(jīng)質(zhì)量主管、技術負責人審批生效。2.發(fā)放與培訓：SOP紙質(zhì)版存放于檢驗科各操作區(qū)域，電子版上傳至內(nèi)部管理系統(tǒng)（權限：檢驗人員可查閱，外部人員禁止訪問）；新SOP實施前，組織全員培訓（理論講解+實操演示），培訓記錄存檔（含簽到表、考核成績）。（二）檢驗記錄管理1.記錄類型：設備記錄：儀器使用日志（開機時間、檢測項目、維護內(nèi)容）、校準記錄（校準日期、校準結(jié)果、校準人）；檢驗記錄：樣本接收登記（編號、采集時間、狀態(tài)）、檢測原始數(shù)據(jù)（吸光度值、酶標儀讀數(shù)）、結(jié)果報告（審核人、報告時間）；質(zhì)量記錄：室內(nèi)質(zhì)控圖、EQA結(jié)果分析、失控報告、方法學驗證報告。2.保存與查閱：紙質(zhì)記錄：存放于專用檔案柜，防潮、防火，保存期限≥5年（含病毒核酸檢測記錄≥10年）；電子記錄：加密存儲（密碼定期更換），備份至云端或移動硬盤，查閱需經(jīng)科室主任審批，記錄查閱時間、人員、用途。七、持續(xù)改進機制（一）內(nèi)部評審1.定期自查：每月質(zhì)量會議：分析室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)、EQA結(jié)果，討論常見問題（如樣本拒收率高、結(jié)果報告延遲），制定改進措施；季度操作考核：隨機抽取檢驗人員進行實操考核（如ELISA加樣、生化儀校準），考核結(jié)果與績效掛鉤。2.滿意度調(diào)查：每半年向臨床科室、患者發(fā)放滿意度問卷，調(diào)查內(nèi)容包括“報告及時性”“結(jié)果準確性”“服務態(tài)度”，得分＜80分的項目需整改。（二）外部反饋與標準跟蹤1.行業(yè)交流：參加學術會議、檢驗醫(yī)學論壇，學習最新技術（如質(zhì)譜檢測、基因測序），評估是否引入本實驗室；加入檢驗醫(yī)學協(xié)作網(wǎng)，共享質(zhì)量數(shù)據(jù)、疑難病例經(jīng)驗。2.標準更新：專人跟蹤國家衛(wèi)健委、CNAS等機構(gòu)發(fā)布的標準更新，及時修訂SOP；每年訂閱《中華檢驗醫(yī)學雜志》《ClinicalChemistry》等期刊，關注前沿研究對檢驗操作的影響。八、附錄（一）常用試劑配制方法1.PBS緩沖液（pH7.4）：配方：NaCl8g、KCl0.2g、Na?HPO?·12H?O2.9g、KH?PO?0.2g，加蒸餾水至1000mL；滅菌：121℃高壓滅菌20分鐘，4℃保存，有效期1個月。2.洗滌液（ELISA用）：配方：PBS1000mL、Tween-200.5mL、NaN?0