肺炎支原體慢性感染中免疫逃逸機(jī)制的研究進(jìn)展2026肺炎支原體（Mycoplasmapneumoniae，MP）是兒童社區(qū)獲得性肺炎的常見病原體之一。其致病機(jī)制主要包括對呼吸道上皮細(xì)胞的黏附、細(xì)胞內(nèi)定植、毒力因子釋放以及免疫介導(dǎo)損傷等。上述過程可激活宿主免疫應(yīng)答，引起細(xì)胞損傷，進(jìn)而導(dǎo)致急性或慢性炎癥性疾病［1］。近年來，重癥MP肺炎的發(fā)病率呈上升趨勢，國外報(bào)道發(fā)病率可達(dá)2%至12%［2-3］，我國上海市2023年流行病學(xué)研究顯示其發(fā)病率已接近21%［4］。MP還可誘發(fā)哮喘加重及慢性阻塞性肺疾病等慢性呼吸道疾病，其核心機(jī)制與免疫逃逸密切相關(guān)，包括抗原變異、生物膜形成、細(xì)胞內(nèi)定植、免疫調(diào)節(jié)等，本文綜述近年來MP慢性感染中免疫逃逸機(jī)制的研究進(jìn)展。1

MP慢性感染MP屬于柔膜體綱，是目前已知能夠自主復(fù)制的最小原核生物，其進(jìn)化過程中形成的基因組包含687個基因，全長為816394bp［5］。MP通過頂端黏附細(xì)胞器與呼吸道上皮細(xì)胞特異性結(jié)合，侵入細(xì)胞后釋放社區(qū)獲得性呼吸窘迫綜合征毒素和過氧化氫等毒性物質(zhì)，導(dǎo)致宿主細(xì)胞溶解并觸發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，從而引發(fā)急性呼吸道感染。典型病理特征包括支氣管黏膜水腫和纖毛運(yùn)動障礙，臨床表現(xiàn)主要為發(fā)熱和刺激性干咳，部分患兒可出現(xiàn)皮膚黏膜損害、自身免疫性溶血、神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥等肺外表現(xiàn)，多數(shù)病例呈自限性病程［6］。然而，部分患兒表現(xiàn)為反復(fù)感染、持續(xù)性咳嗽或運(yùn)動耐量下降，進(jìn)展為慢性感染。此時，疾病的病理機(jī)制由急性期的直接細(xì)胞毒性轉(zhuǎn)變?yōu)槊庖呓閷?dǎo)的持續(xù)性組織重塑。在慢性感染階段，MP持續(xù)激活Toll樣受體2/4（TLR2/4）介導(dǎo)的促炎信號通路，導(dǎo)致氣道基底膜增厚、杯狀細(xì)胞化生及不可逆性纖維化改變，臨床上可表現(xiàn)為難治性肺炎、哮喘急性加重、慢性阻塞性肺疾病或支氣管擴(kuò)張等慢性呼吸系統(tǒng)疾病，并伴隨肺功能進(jìn)行性下降［7-9］。此外，流行病學(xué)調(diào)查顯示，在健康兒童鼻咽部MP陽性率可達(dá)21%至56%，且MP在呼吸道內(nèi)持續(xù)時間可超過120d。目前，核酸擴(kuò)增技術(shù)與血清學(xué)檢測難以有效區(qū)分MP活動性感染與無癥狀性攜帶狀態(tài)［10］。另有研究表明，在反復(fù)呼吸道感染患兒中，68%的患兒MP病原學(xué)檢測為陽性，且其呼吸道微生物群豐度降低，而與感染相關(guān)的菌群比例升高，提示MP在細(xì)胞內(nèi)定植后可能通過改變局部微生態(tài)促進(jìn)呼吸道疾病的慢性化進(jìn)程［11］。2

MP慢性感染中的免疫逃逸機(jī)制2.1

表面抗原變異表面抗原變異是指病原體通過改變表面抗原結(jié)構(gòu)以逃避免疫識別的一種生物學(xué)機(jī)制。MP對呼吸道上皮細(xì)胞的黏附是其致病的前提，該能力依賴于頂端黏附細(xì)胞器，其中P1蛋白起關(guān)鍵作用［12］?；蚪M分析表明，MP基因組中含有四種重復(fù)序列元件：RepMP1、RepMP2/3、RepMP4和RepMP5。P1基因（MPN141）編碼P1蛋白，其開放閱讀框內(nèi)含有21個色氨酸UGA密碼子和兩種重復(fù)序列——位于3′端的RepMP2/3（含10個拷貝）和位于5'端的RepMP4（含8個拷貝）［13］。研究表明，P1基因中短串聯(lián)重復(fù)序列的動態(tài)擴(kuò)增由DNA聚合酶滑動錯配介導(dǎo)，這種擴(kuò)增導(dǎo)致基因序列呈現(xiàn)多態(tài)性，是構(gòu)成P1蛋白表面抗原表位多樣性的分子基礎(chǔ)［14］。MP可通過基因突變或基因內(nèi)/間高頻同源重組導(dǎo)致P1基因發(fā)生變異。Qiu等［15］對中國暴發(fā)流行株的RepMP2/3和RepMP4元件進(jìn)行全基因組測序分析發(fā)現(xiàn)，P1-Ⅰ型菌株的RepMP2/3區(qū)域存在一段126bp的新型插入序列，包含28個突變位點(diǎn)，導(dǎo)致24個氨基酸替換；同時在P1-Ⅱ型菌株的RepMP4元件中檢測到31個突變位點(diǎn)。全基因組關(guān)聯(lián)分析顯示，MP亞型分化主要源于P1基因內(nèi)部RepMP元件間的同源重組事件，表現(xiàn)為菌株內(nèi)或菌株間RepMP元件的位點(diǎn)特異性重組。此外，RepMP4元件的單核苷酸多態(tài)性密度顯著高于RepMP2/3，提示其在進(jìn)化過程中具有更高的遺傳可塑性。MP基因組中任意兩個RepMP元件之間均可發(fā)生一次或多次同源重組［14］。由同源重組和突變引起的抗原變異可能是MP實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的重要機(jī)制。P1蛋白的變異導(dǎo)致其表面抗原表位改變，使宿主原有抗體無法有效識別新變異株，從而逃避免疫系統(tǒng)的識別和清除，促成慢性感染的發(fā)生。此外，MP的表面抗原變異可通過轉(zhuǎn)錄后修飾實(shí)現(xiàn)，主要包括裂解修飾和磷酸化修飾兩種方式［16］。Widjaja等［12］通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析和免疫印跡對MP的M129蛋白進(jìn)行研究，鑒定出22種不同形式的P1蛋白，并確定了17個切割位點(diǎn)。另有研究系統(tǒng)闡明了MP磷酸化修飾的調(diào)控機(jī)制，發(fā)現(xiàn)其在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中的廣泛程度遠(yuǎn)超預(yù)期［16］。轉(zhuǎn)錄后修飾可能改變MP膜表面脂蛋白的結(jié)構(gòu)異質(zhì)性，促進(jìn)免疫表位多樣性，從而增強(qiáng)其免疫逃逸能力。2.2

生物膜形成生物膜是由附著于微生物表面或嵌入細(xì)胞外基質(zhì)中的微生物群落所形成的結(jié)構(gòu)。生物膜不僅可增強(qiáng)病原體對抗免疫監(jiān)視的能力及對抗菌藥物的耐藥性，導(dǎo)致慢性感染，還可通過調(diào)控病原體對補(bǔ)體和抗菌肽的敏感性來影響宿主特異性免疫反應(yīng)，抑制炎癥信號通路的激活，最終引發(fā)免疫抑制［17-18］。細(xì)胞外聚合物由脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNA和胞外多糖組成，作為物理屏障阻礙藥物、抗體及免疫細(xì)胞向生物膜內(nèi)部滲透，在生物膜抵抗藥物作用和逃避免疫監(jiān)視過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用［19］。Chen等［20］研究發(fā)現(xiàn)，生物膜對抗生素耐藥性的增強(qiáng)與病原體自身的代謝變化及其特有蛋白成分密切相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)表明，MP可在玻片表面形成以菌體為主體的生物膜結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)對抗生素和高溫均具有一定抵抗力［21］。目前研究表明，僅有部分支原體可在支氣管上皮細(xì)胞表面形成生物膜［22］。MP的P1蛋白與宿主細(xì)胞表面唾液化寡糖受體的結(jié)合是生物膜形成的初始步驟，而針對P1蛋白的特異性抗體可抑制MP生物膜的形成［21］。Vsa蛋白基因串聯(lián)重復(fù)序列中的滑動錯配機(jī)制可改變自身蛋白分子的大小，進(jìn)而影響生物膜的形成。多糖的合成有助于生物膜的形成［16］。有研究認(rèn)為過氧化物酶可能參與MP生物膜的形成，但其具體作用機(jī)制尚待闡明［23］。生物膜的物理屏障功能有助于MP實(shí)現(xiàn)免疫逃逸，并可能導(dǎo)致慢性及持續(xù)性感染。因此，MP生物膜形成及其調(diào)控的分子機(jī)制仍需深入探究，以期為臨床干預(yù)提供理論依據(jù)。2.3

細(xì)胞內(nèi)定植MP可通過黏附作用與宿主細(xì)胞結(jié)合，并進(jìn)一步侵入細(xì)胞，在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核周圍定植。一方面可獲取營養(yǎng)物質(zhì)以維持自身生存，另一方面可有效逃避免疫細(xì)胞及免疫效應(yīng)分子的清除［24］。研究表明，MP可在人肺癌細(xì)胞（A549）中長期存活，但其細(xì)胞內(nèi)定植的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探究［25］?，F(xiàn)有研究證實(shí)，某些細(xì)菌可通過與硫酸乙酰肝素類多糖或纖維連接蛋白結(jié)合而侵入細(xì)胞。MP能夠與硫酸乙酰肝素類多糖結(jié)合，且其基因編碼的果糖-1，6-二磷酸醛縮酶可介導(dǎo)MP與纖維連接蛋白的結(jié)合，提示MP可能通過上述分子相互作用介導(dǎo)細(xì)胞入侵，此假說有待進(jìn)一步驗(yàn)證［16］。2.4

免疫調(diào)節(jié)2.4.1

Mpn491Mpn491是MP分泌的一種Mg2+依賴性核酸酶。中性粒細(xì)胞是先天免疫反應(yīng)的第一道防線。中性粒細(xì)胞胞外陷阱（neutrophilextracellulartraps，NETs）主要由DNA、抗菌肽以及活化的多形核中性粒細(xì)胞釋放的多種酶構(gòu)成，是中性粒細(xì)胞胞外殺菌作用的核心組成部分。MP感染可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞釋放NETs，而其分泌的Mpn491可通過核酸酶活性降解NETs中的DNA骨架，破壞NETs結(jié)構(gòu)，從而削弱中性粒細(xì)胞的殺菌功能，促進(jìn)MP自我復(fù)制并延長其在宿主體內(nèi)的存活時間。動物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，小鼠體內(nèi)Mpn491的表達(dá)可增強(qiáng)對NETs的降解能力，導(dǎo)致MP的持續(xù)感染。此外，Mpn491功能缺陷株對NETs介導(dǎo)的胞外殺菌敏感性顯著增加，進(jìn)一步證實(shí)Mpn491在MP逃避中性粒細(xì)胞殺傷中的關(guān)鍵作用，提示其可能成為新型疫苗研發(fā)的重要靶點(diǎn)［26］。2.4.2

Mpn400近年來研究發(fā)現(xiàn)，支原體可通過表達(dá)免疫球蛋白結(jié)合蛋白M或類似蛋白直接結(jié)合宿主抗體，干擾抗體與其抗原的識別與結(jié)合，從而逃避免疫攻擊［27］。Bl?tz等［28］發(fā)現(xiàn)MP表達(dá)的Mpn400功能類似于蛋白M，可結(jié)合人類免疫球蛋白（IgM、IgA和IgG），是一種位于細(xì)胞表面的蛋白，因此亦被稱為支原體免疫球蛋白結(jié)合蛋白（immunoglobulin-bindingproteinofMycoplasma，IbpM），這種不依賴抗原識別位點(diǎn)的非特異性結(jié)合機(jī)制有助于MP逃避宿主體液免疫。進(jìn)一步研究表明，MP通過IbpM介導(dǎo)宿主細(xì)胞毒性效應(yīng)，表現(xiàn)為線粒體膜電位去極化及半胱天冬酶-3依賴性凋亡通路的激活，提示IbpM是MP的關(guān)鍵毒力因子之一。其編碼基因MPN400在臨床分離株中的轉(zhuǎn)錄水平顯著高于實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)株。目前IbpM在體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)通路仍需進(jìn)一步研究，這將為新型疫苗開發(fā)提供潛在方向。2.4.3

因子H因子H是宿主補(bǔ)體系統(tǒng)的負(fù)向調(diào)節(jié)因子，可通過與宿主細(xì)胞結(jié)合抑制補(bǔ)體激活。研究表明，包括MP在內(nèi)的多種支原體可通過延伸因子-Tu（EF-Tu）與因子H結(jié)合，減少C3在病原體表面的沉積，從而有效逃避補(bǔ)體介導(dǎo)的殺傷。此外，EF-Tu還可增強(qiáng)支原體與呼吸道上皮細(xì)胞之間的黏附能力［1］。MP在宿主體內(nèi)除逃避固有免疫防御、干擾抗體功能及逃逸補(bǔ)體攻擊外，還可表達(dá)多種Vsa家族抗吞噬脂蛋白，避免被吞噬細(xì)胞吞噬。另有研究發(fā)現(xiàn)，MP自身產(chǎn)生的莢膜多糖也是一種常見的抗吞噬因子，可減少M(fèi)P與肺泡巨噬細(xì)胞的結(jié)合［16］。MP還可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞增殖逃避宿主免疫清除。Chen等［29］利用流式細(xì)胞術(shù)檢測重癥肺炎支原體肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中T細(xì)胞亞群的動態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)炎癥性氣道微環(huán)境可誘導(dǎo)T細(xì)胞過度活化，進(jìn)而發(fā)生耗竭樣分化并最終啟動凋亡程序。此外，在MP感染過程中，持續(xù)性抗原刺激可加劇肺部炎癥反應(yīng)，肺組織中促炎因子IL-17A與抗炎因子IL-10的表達(dá)水平均顯著升高，其中IL-10的上調(diào)有助于MP逃避免疫攻擊，抑制局部炎癥反應(yīng)［30］。2.5

其他分子模擬是指病原體與宿主細(xì)胞共享抗原表位，借此逃避宿主免疫識別。MP可通過模擬宿主分子誘導(dǎo)產(chǎn)生交叉反應(yīng)性抗體，這些抗體與宿主自身成分結(jié)合形成免疫復(fù)合物，引發(fā)自身免疫應(yīng)答，并造成多器官損傷。MP黏附蛋白P1和P30的C末端區(qū)域與宿主多種蛋白具有高度同源性，如肌鈣蛋白、細(xì)胞骨架蛋白、角蛋白和纖維蛋白等，易被宿主免疫系統(tǒng)誤認(rèn)為“自我”成分，在逃避免疫監(jiān)視和巨噬細(xì)胞吞噬的同時，誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體可攻擊宿主組織，導(dǎo)致肺外并發(fā)癥［25］。MP