ICS65.020.30

CCSB40

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T2154—2021

瘤胃保護(hù)性氨基酸穩(wěn)定性檢驗(yàn)

Testmethodforthestabilityofrumen-protectedaminoacid

2021-04-15發(fā)布2021-05-15實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T2154—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC19）歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院、伊金霍洛旗文兵農(nóng)業(yè)機(jī)械服務(wù)企業(yè)。

本文件主要起草人：孫海洲、桑丹、金鹿、李勝利、張春華、張崇志、劉和平、王澤平、王永榮、

韓文兵、劉要仙、趙曉華、王東兵。

I

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瘤胃保護(hù)性氨基酸穩(wěn)定性檢驗(yàn)

1范圍

本文件規(guī)定了瘤胃保護(hù)性氨基酸穩(wěn)定性檢驗(yàn)方法。

本文件適用于瘤胃保護(hù)性氨基酸測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB5009.124食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測(cè)定

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

RPAA釋放率rumenprotectedaminoacidreleaserate

RPAA經(jīng)消化，被降解的氨基酸含量占RPAA中氨基酸含量的百分比。

4試劑和材料

4.1試劑

4.1.1磷酸氫二鈉（Na2HPO4）：優(yōu)級(jí)純。

4.1.2碳酸氫鈣（NaHCO3）：優(yōu)級(jí)純。

4.1.3氯化鈉（NaCl）：優(yōu)級(jí)純。

4.1.4氯化鉀（KCl）：優(yōu)級(jí)純。

4.1.5氯化鈣（CaCl2）：優(yōu)級(jí)純。

4.1.6硫酸鎂（MgSO4）：優(yōu)級(jí)純。

4.1.7人工唾液：將9.30g磷酸氫二鈉、9.80g碳酸氫鈣、0.47g氯化鈉、0.57g氯化鉀、0.04g

氯化鈣及0.12g硫酸鎂先溶于少量蒸餾水中，再定容至1000mL水中。

4.1.8過(guò)瘤胃保護(hù)性氨基酸（RPAA）：購(gòu)買產(chǎn)品。

4.2材料

尼龍袋：選用孔徑為50μm的尼龍布，制成長(zhǎng)×寬為6cm×10cm的尼龍袋，用細(xì)滌綸線雙線縫

合，袋底部?jī)山浅殊g圓形，散邊用烙鐵燙平或用酒精燈烤焦。

5儀器和設(shè)備

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5.1分析天平：感量0.0001g。

5.2烘箱：25℃～300℃。

5.3恒溫水浴搖床：25℃～99.9℃。

6測(cè)定步驟

6.1RPAA在人工唾液中穩(wěn)定性檢驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取0.5gRPAA，于50mL具塞試管底部，加入20mL人工唾液（4.1.7），蓋緊試管塞，在39℃、

100轉(zhuǎn)/分的恒溫水浴搖床內(nèi)消化2h，4h，8h，12h，16h和24h后分別取出，定性濾紙過(guò)濾，蒸餾

水沖洗3遍，將濾渣置于65℃烘箱中烘干，按照GB5009.124規(guī)定的方法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)殘?jiān)械陌被?/p>

酸含量，計(jì)算氨基酸釋放率。

6.2RPAA在瘤胃液中穩(wěn)定性檢驗(yàn)

選擇孔徑為50μm的尼龍布，用細(xì)滌綸線雙線縫合，制成長(zhǎng)×寬為6cm×10cm的尼龍袋，尼龍袋

邊緣用烙鐵熨燙使其無(wú)散邊，用油性筆標(biāo)號(hào)，放入瘤胃內(nèi)72h，取出、洗凈、65℃烘干，備用。準(zhǔn)確

稱取5gRPAA放入尼龍袋內(nèi)，將有待測(cè)樣品的樣袋交叉夾于一根半軟塑料管底端的夾縫中，用橡皮筋纏

繞固定,于晨飼后2h投入瘺管羊瘤胃內(nèi)，用塑料管上端的尼龍線與瘺管蓋固定。將待測(cè)樣品在瘺管羊瘤

胃中消化2h，4h，8h，12h，16h和24h后分別取出，用中等流速自來(lái)水沖洗1min，將濾渣置于65℃

烘箱中烘干，按照GB5009.124規(guī)定的方法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)尼龍袋中殘留的氨基酸含量，計(jì)算氨基酸

釋放率。

6.3RPAA在十二指腸中穩(wěn)定性檢驗(yàn)

采集綿羊十二指腸液200mL，經(jīng)四層紗布過(guò)濾后取濾液裝入250mL三角瓶?jī)?nèi)，準(zhǔn)確稱取0.5gRPAA，

放入50mL具塞試管底部，蓋緊試管塞，在39℃、100轉(zhuǎn)/分恒溫水浴搖床內(nèi)消化2h，4h，8h，12h，

16h和24h后分別取出，定性濾紙過(guò)濾，蒸餾水沖洗3遍，按照GB5009.124規(guī)定的方法測(cè)定殘?jiān)械陌?/p>

基酸含量，計(jì)算氨基酸釋放率。

6.4平行試驗(yàn)

每試樣稱取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，取平均值為分析結(jié)果。

7結(jié)果計(jì)算

RPAA在人工唾液、瘤胃液及十二指腸液中的釋放率按公式（1）計(jì)算。

…………………（1）

式中：

R——RPAA的釋放率，單位為百分比（%）；

w1——RPAA中氨基酸含量，單位為納摩爾每毫升（nmol/ml）；

w2——消化后殘留物中氨基酸的含量，單位為納摩爾每毫升（nmol/ml）。

取兩次測(cè)定的算數(shù)平均值作為結(jié)果，保留到小數(shù)點(diǎn)后一位。

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在重復(fù)