ICS65.020.01

CCSB05

DB23

黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB23/T2922-2021

注：

注：

水曲柳腋芽微繁技術(shù)規(guī)程

2021-06-29發(fā)布2021-07-28實(shí)施

黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB23/T2922-2021

前??言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由黑龍江省林業(yè)和草原管理局提出。

本文件起草單位：東北林業(yè)大學(xué)、巴彥縣雙鴨山林場(chǎng)、綏棱縣國有林場(chǎng)三吉臺(tái)林場(chǎng)、黑龍江省山河

屯林業(yè)局黑龍江省葦河林業(yè)局、哈爾濱市林業(yè)工作管理總站、黑龍江省慶安國有林場(chǎng)管理局、哈爾濱市

呼蘭區(qū)黃土山林場(chǎng)、黑龍江省應(yīng)急救援保障中心、黑龍江省林業(yè)和草原第二調(diào)查規(guī)劃設(shè)計(jì)院、五常市森

林病蟲防治檢疫站、五常市林業(yè)工作總站、五常市勝利林場(chǎng)。

本文件主要起草人：詹亞光、齊鳳慧、于磊、車德軍、林顯峰、曾凡鎖、薛文輝、劉林、何利明、

謝春風(fēng)、趙曉軍、張連生、李云慶、馮丹、代文棟、王培強(qiáng)、鄭宏、王麗娜、李軼男、高群、夏晨、于

航、高航、李曉彬。

I

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水曲柳腋芽微繁技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了水曲柳（FraxinusmandshuricaRupr.）腋芽微繁的外植體采集與表面消毒、培養(yǎng)基選

擇及配制、組織培養(yǎng)程序、組培苗移栽、苗期管理和生產(chǎn)檔案。

本文件適用于水曲柳腋芽微繁。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文

件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用

于本文件。

LY/T1000容器育苗技術(shù)

LY/T1671水曲柳林人工培育技術(shù)規(guī)程

LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4外植體采集與表面消毒

4.1外植體

采集水曲柳優(yōu)樹當(dāng)年生穗條上帶有頂芽或者腋芽的莖段作為組織培養(yǎng)的外植體。

4.2消毒

按LY/T1882的規(guī)定執(zhí)行。

5培養(yǎng)基選擇及配制

5.1初代培養(yǎng)基

WPM固體培養(yǎng)基，附加20gL-1蔗糖、7gL-1瓊脂和1mgL-16-BA（6-芐基腺嘌呤），pH=5.8~6.0。

5.2繼代和分化培養(yǎng)基

繼代培養(yǎng)基1為WPM液體培養(yǎng)基，附加30gL-1蔗糖和0.6mg/LTDZ（噻苯?。╬H=5.8~6.0）；

繼代培養(yǎng)基2為WPM固體培養(yǎng)基，附加30gL-1蔗糖、0.05mg·L-1TDZ、0.6mg·L-1BA和7gL-1瓊

脂（pH=5.8~6.0）；

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芽分化增殖培養(yǎng)基為WPM固體培養(yǎng)基，附加30gL-1蔗糖、1.0mg·L-1ZT（玉米素）和7gL-1瓊脂

（pH=6.0~6.5）。

5.3生根培養(yǎng)基

生根培養(yǎng)為WPM固體培養(yǎng)基，附加20gL-1蔗糖、1.4mg·L-1IBA（吲哚丁酸）、0.7mg·L-1NAA（萘

乙酸）和7g·L-1瓊脂（pH=5.8~6.0）。

5.4培養(yǎng)基母液的配制及保存

按LY/T1882的規(guī)定執(zhí)行。

5.5培養(yǎng)基的滅菌

按LY/T1882的規(guī)定執(zhí)行。

6組織培養(yǎng)

6.1條件

溫度25±2℃，濕度60%~70%，光照16h無光8h交替培養(yǎng)，光照強(qiáng)度40μmolm-2s-1~80μmolm-2s-1；

在無光條件下液體培養(yǎng)時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速60rpmmin-1。

6.2初代培養(yǎng)

取滅菌（121滅菌20min）的刀具、鑷子、培養(yǎng)皿，將消毒的莖段放入培養(yǎng)皿中，切去莖節(jié)兩端

變褐部分露出新鮮組織，接入初代培養(yǎng)基中光照培養(yǎng)20d~30d，至芽萌發(fā)和生長。

℃

6.3繼代和分化增殖培養(yǎng)

萌發(fā)芽接種到繼代培養(yǎng)基1中液體培養(yǎng)20d~30d，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基2中，光照培養(yǎng)20d~30d，再轉(zhuǎn)

入芽分化增殖培養(yǎng)基，在光照條件下培養(yǎng)25d~35d，直至新芽分化。

6.4壯苗生根培養(yǎng)

新芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20d~30d后，待芽長至3cm~5cm長，基部形成不定根時(shí)，切下單

個(gè)芽再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至根長約1cm。

7組培苗移栽

7.1基質(zhì)配置

按LY/T1000的規(guī)定執(zhí)行。

7.2環(huán)境要求

溫度23~27、濕度60%~90%的溫室內(nèi)自然光照。

7.3移栽℃℃

將滅菌的基質(zhì)，裝入口徑6cm~8cm的無紡布育苗袋中，用不含蔗糖和瓊脂的生根培養(yǎng)基澆透。將

帶有3個(gè)以上根的組培苗栽植于育苗袋，空氣濕度80%~90%；移栽7d后濕度控制在60%~70%。

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8苗