專題09生物技術(shù)與工程

考點(diǎn)五年考情（2021-2025）命題趨勢(shì)

2024·遼寧、吉林、黑龍江

考點(diǎn)1發(fā)酵工程2023·遼寧從近五年遼寧省高考試題來(lái)

2022·遼寧（2道選擇）看，常出現(xiàn)的考點(diǎn)是發(fā)酵工程和細(xì)

2024·遼寧、吉林、黑龍江胞工程、基因工程，發(fā)酵工程和細(xì)

考點(diǎn)2細(xì)胞工程

2023·遼寧胞工程難度適中，基因工程非選擇

和胚胎工程

2022·遼寧（1道選擇、1道非選擇）題難度較大。發(fā)酵工程和細(xì)胞工程

2024·遼寧、吉林、黑龍江（1道選擇、1道常以選擇題的形式考察、每年一道

非選擇）或2道、基因工程是高頻考點(diǎn)，每

考點(diǎn)3基因工程

2023·遼寧（1道選擇、1道非選擇）年選擇非選擇都有考察。

2022·遼寧

考點(diǎn)01發(fā)酵工程

1.（2024·黑吉遼）某些香蕉植株組織中存在的內(nèi)生菌可防治香蕉枯萎病，其篩選流程及抗性檢測(cè)如圖。下

列操作正確的是（）

A.在大量感染香蕉枯萎病的香蕉種植園內(nèi)，從感病植株上采集樣品

B.將采集的樣品充分消毒后，用蒸餾水沖洗，收集沖洗液進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)

C.將無(wú)菌檢測(cè)合格的樣品研磨，經(jīng)稀釋涂布平板法分離得到內(nèi)生菌的單菌落

D.判斷內(nèi)生菌的抗性效果需比較有無(wú)接種內(nèi)生菌的平板上的病原菌菌斑大小

2.（2023·遼寧）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對(duì)

某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無(wú)菌處理

B.細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置

C.同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值

D.稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高

3.（2022·遼寧）為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務(wù)時(shí)出現(xiàn)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)航天器及潔凈的組裝車

間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物

B.細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕

C.在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品

D.采用平板劃線法等分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征

4.（2022·遼寧）β-苯乙醇是賦予白酒特征風(fēng)味的物質(zhì)。從某酒廠采集并篩選到一株產(chǎn)β-苯乙醇的酵母菌應(yīng)

用于白酒生產(chǎn)。下列敘述正確的是（）

A.所用培養(yǎng)基及接種工具分別采用濕熱滅菌和灼燒滅菌

B.通過(guò)配制培養(yǎng)基、滅菌、分離和培養(yǎng)能獲得該酵母菌

C.還需進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)檢測(cè)該酵母菌產(chǎn)β-苯乙醇的能力

D.該酵母菌的應(yīng)用有利于白酒新產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)

5（2025·黑吉遼蒙）科研人員通過(guò)稀釋涂布平板法篩選出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力強(qiáng)的菌

株，旨在解決金霉素過(guò)量使用所導(dǎo)致的環(huán)境污染問(wèn)題。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．以金霉素為唯一碳源可制備選擇培養(yǎng)基

B．逐步提高培養(yǎng)基中金霉素的濃度有助于獲得高耐受的菌株

C．配制選擇培養(yǎng)基時(shí)，需確保pH滿足實(shí)驗(yàn)要求

D．用接種環(huán)將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面

6.（2021·遼寧）利用菠蘿蜜制作果醋的大致流程為：先在滅菌的果肉勻漿中接種酵母菌，發(fā)酵6天后，再

接入活化的醋酸桿菌，發(fā)酵5天。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A．乙醇既是醋酸發(fā)酵的底物，又可以抑制雜菌繁殖

B．酵母菌和醋酸桿菌均以有絲分裂的方式進(jìn)行增殖

C．酵母菌和醋酸桿菌發(fā)酵過(guò)程中控制通氣的情況不同

D．接入醋酸桿菌后，應(yīng)適當(dāng)升高發(fā)酵溫度

考點(diǎn)02細(xì)胞工程和胚胎工程

1.（2024·黑吉遼）從小鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，在傳代后的不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)細(xì)胞

數(shù)目，結(jié)果如圖。下列敘述正確的是（）

A.傳代培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿需密封防止污染

B.選?、俚募?xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)比②更合理

C.直接用離心法收集細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)

D.細(xì)胞增長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期可能與細(xì)胞密度過(guò)大有關(guān)

2.（2023·遼寧）大量懸浮培養(yǎng)產(chǎn)流感病毒的單克隆細(xì)胞，可用于流感疫苗的生產(chǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.懸浮培養(yǎng)單克隆細(xì)胞可有效避免接觸抑制

B.用于培養(yǎng)單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)基通常需加血清

C.當(dāng)病毒達(dá)到一定數(shù)量時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的增殖

D.培養(yǎng)基pH不會(huì)影響單克隆細(xì)胞的病毒產(chǎn)量

3.（2022·遼寧）藍(lán)莓細(xì)胞富含花青素等多酚類化合物。在藍(lán)莓組織培養(yǎng)過(guò)程中，外植體切口處細(xì)胞被破壞，

多酚類化合物被氧化成褐色醌類化合物，這一過(guò)程稱為褐變。褐變會(huì)引起細(xì)胞生長(zhǎng)停滯甚至死亡，導(dǎo)致藍(lán)

莓組織培養(yǎng)失敗。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.花青素通常存在于藍(lán)莓細(xì)胞的液泡中

B.適當(dāng)增加培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至新鮮培養(yǎng)基的頻率以減少褐變

C.在培養(yǎng)基中添加合適的抗氧化劑以減少褐變

D.宜選用藍(lán)莓成熟葉片為材料制備外植體

4.（2022·遼寧）某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過(guò)程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，

增加其對(duì)N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。

Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1

（1）構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是___________。用脂質(zhì)體將

重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體___________（填“雙分子層中”或“兩層磷

脂分子之間”）。

（2）質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由___________組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純

化N蛋白胞外段。

Ⅱ．N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2

（3）用N蛋白胞外段作為抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用___________酶處理，制成細(xì)胞懸液，

置于含有混合氣體的___________中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。

（4）用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行___________

培養(yǎng)。用___________技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜

交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集___________，提取單克隆抗體。

（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成___________，實(shí)現(xiàn)特異性治療。

5．（2025·黑吉遼蒙）利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得紅豆杉試管苗，有助于解決紫杉醇藥源短缺問(wèn)題。下列敘

述正確的是（）

A．細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例會(huì)影響愈傷組織的形成

B．培養(yǎng)基先分裝到錐形瓶，封口后用干熱滅菌法滅菌

C．芽原基細(xì)胞由于基因選擇性表達(dá)，不能用作外植體

D．紫杉醇不能通過(guò)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)來(lái)獲取，植物組織培養(yǎng)優(yōu)勢(shì)明顯

6．（2025·黑吉遼蒙）研究顯示，約70%的小鼠體細(xì)胞核移植胚胎未能成功發(fā)育至囊胚期，且僅有約2%的

胚胎移植到代孕母鼠后可正常發(fā)育。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．體細(xì)胞核進(jìn)入去核的MⅡ期卵母細(xì)胞形成重構(gòu)胚

B．移植前胚胎發(fā)育率低，可能是植入的體細(xì)胞核不能完全恢復(fù)分化前的功能狀態(tài)

C．胚胎移植到代孕母鼠后成活率低，可能是早期胚胎未能及時(shí)從滋養(yǎng)層內(nèi)孵化

D．為提高胚胎成活率，可用胚胎細(xì)胞核移植代替體細(xì)胞核移植

7.（2021·遼寧）下圖是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆優(yōu)質(zhì)奶牛的簡(jiǎn)易流程圖，有關(guān)敘述正確的是（）

A．后代丁的遺傳性狀由甲和丙的遺傳物質(zhì)共同決定

B．過(guò)程①需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體

C．過(guò)程②常使用顯微操作去核法對(duì)受精卵進(jìn)行處理

D．過(guò)程③將激活后的重組細(xì)胞培養(yǎng)至原腸胚后移植

8.（2025·黑吉遼蒙）下圖是制備抗白細(xì)胞介素-6（IL-6）單克隆抗體的示意圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．步驟①給小鼠注射IL-6后，應(yīng)從脾中分離篩選T淋巴細(xì)胞

B．步驟②在脾組織中加入胃蛋白酶，制成單細(xì)胞懸液

C．步驟③加入滅活病毒或PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合，體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性

D．步驟④經(jīng)過(guò)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)篩選出了雜交瘤細(xì)胞

考點(diǎn)03基因工程

1.（2024·黑吉遼）關(guān)于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的實(shí)驗(yàn)，下列敘述正確的是（）

A.瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小

B.凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置

C.在同一電場(chǎng)作用下，DNA片段越長(zhǎng)，向負(fù)極遷移速率越快

D.瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測(cè)出來(lái)

2.（2024·黑吉遼）將天然Ti質(zhì)粒改造成含有Vir基因的輔助質(zhì)粒（輔助T-DNA轉(zhuǎn)移）和不含有Vir基因、

含有T-DNA的穿梭質(zhì)粒，共同轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，可提高轉(zhuǎn)化效率。細(xì)菌和棉花對(duì)密碼子偏好不同，為提高翻譯

效率，增強(qiáng)棉花抗病蟲(chóng)害能力，進(jìn)行如下操作?；卮鹣铝袉?wèn)題。

注：F1-F3，R1-R3表示引物；T-DNA-LB表示左邊界；T-DNA-RB表示右邊界；Ori表示復(fù)制原點(diǎn)；KanR

表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。

（1）從蘇云金桿菌提取DNA時(shí)，需加入蛋白酶，其作用是______。提取過(guò)程中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)

冷酒精，其目的是______。

（2）本操作中獲取目的基因的方法是______和______。

（3）穿梭質(zhì)粒中p35s為啟動(dòng)子，其作用是______，驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄；插入兩個(gè)p35s啟動(dòng)子，其目的可

能是______。

（4）根據(jù)圖中穿梭質(zhì)粒上的KanR和HygBR兩個(gè)標(biāo)記基因的位置，用______基因?qū)?yīng)的抗生素初步篩選轉(zhuǎn)

化的棉花愈傷組織。

（5）為檢測(cè)棉花植株是否導(dǎo)入目的基因，提取棉花植株染色體DNA作模板，進(jìn)行PCR，應(yīng)選用的引物是

______和______。

（6）本研究采用的部分生物技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程，理由是______。

A.通過(guò)含有雙質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞

B.將蘇云金桿菌Bt基因?qū)朊藁?xì)胞中表達(dá)

C.將1-1362基因序列改變?yōu)槊藁?xì)胞偏好密碼子的基因序列

D.用1-1362合成基因序列和1363-1848天然基因序列獲得改造的抗蟲(chóng)蛋白

3.（2023·遼寧）CD163蛋白是PRRSV病毒感染家畜的受體。為實(shí)時(shí)監(jiān)控CD163蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，

將紅色熒光蛋白R(shí)FP基因與CD163基因拼接在一起（如下圖），使其表達(dá)成一條多肽。該拼接過(guò)程的關(guān)鍵

步驟是除去（）

A.CD163基因中編碼起始密碼子的序列

B.CD163基因中編碼終止密碼子的序列

C.RFP基因中編碼起始密碼子的序列

D.RFP基因中編碼終止密碼子的序列

4.（2023·遼寧）天然β淀粉酶大多耐熱性差，不利于工業(yè)化應(yīng)用。我國(guó)學(xué)者借助PCR改造β-淀粉酶基因，

并將改造的基因與pLN23質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌，最終獲得耐高溫的β-淀粉酶?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）上述過(guò)程屬于_____工程。

（2）PCR中使用的聚合酶屬于_____（填寫編號(hào)）。

①以DNA為模板的RNA聚合酶②以RNA為模板的RNA聚合酶

③以DNA為模板的DNA聚合酶④以RNA為模板的DNA聚合酶

（3）某天然β-淀粉酶由484個(gè)氨基酸構(gòu)成，研究發(fā)現(xiàn)，將該酶第476位天冬氨酸替換為天冬酰胺，耐熱性

明顯提升。在圖1所示的β-淀粉酶基因改造方案中，含已替換堿基的引物是_____（填寫編號(hào)）。

（4）為了使上述改造后的基因能在大腸桿菌中高效表達(dá)，由圖2所示的pLN23質(zhì)粒構(gòu)建得到基因表達(dá)載體。

除圖示信息外，基因表達(dá)載體中還應(yīng)該有目的基因（即改造后的基因）和_____。

（5）目的基因（不含EcoRI酶切位點(diǎn)）全長(zhǎng)為1．5kb，將其插入BamHI位點(diǎn)。用EcoRI酶切來(lái)自于不同

大腸桿菌菌落的質(zhì)粒DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳確定DNA片段長(zhǎng)度，這一操作的目的是_____。正確連接的

基因表達(dá)載體被EcoRⅠ酶切后長(zhǎng)度為_(kāi)____kb。

（6）采用PCR還能在分子水平上確定目的基因是否轉(zhuǎn)錄，根據(jù)中心法則，可通過(guò)_____反應(yīng)獲得PCR的模

板。

5.（2022·遼寧）抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米雙抗12-5是我國(guó)自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種。為給監(jiān)管轉(zhuǎn)基因生物安全提

供依據(jù)，采用PCR方法進(jìn)行目的基因監(jiān)測(cè)，反應(yīng)程序如圖所示。下列敘述正確的是（）

A.預(yù)變性過(guò)程可促進(jìn)模板DNA邊解旋邊復(fù)制

B.后延伸過(guò)程可使目的基因的擴(kuò)增更加充分

C.延伸過(guò)程無(wú)需引物參與即可完成半保留復(fù)制

D.轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測(cè)含有目的基因后即可上市

6.（2025·黑吉遼蒙）香樹(shù)脂醇具有抗炎等功效，從植物中提取難度大、產(chǎn)率低。通過(guò)在酵母菌中表達(dá)外源

香樹(shù)脂醇合酶基因N，可高效生產(chǎn)香樹(shù)脂醇?；卮鹣铝袉?wèn)題。

(1)可從中查詢基因N的編碼序列，設(shè)計(jì)特定引物。如圖1所示，a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，為保證基因N

與質(zhì)粒pYL正確連接，需在引物1和引物2的5'端分別引入和限制酶識(shí)別序列。PCR擴(kuò)

增基因N，特異性酶切后，利用連接DNA片段，構(gòu)建重組質(zhì)粒，大小約9.5kb（kb為千堿基對(duì)），

假設(shè)構(gòu)建重組質(zhì)粒前后，質(zhì)粒pYL對(duì)應(yīng)部分大小基本不變。

(2)進(jìn)一步篩選構(gòu)建的質(zhì)粒，以1-4號(hào)菌株中提取的質(zhì)粒為模板，使用引物1和引物2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳

PCR產(chǎn)物，結(jié)果如圖2。在第5組的PCR反應(yīng)中，使用無(wú)菌水代替實(shí)驗(yàn)組的模板DNA，目的是檢驗(yàn)PCR

反應(yīng)中是否有的污染。初步判斷實(shí)驗(yàn)組（從“1~4”中選填）的質(zhì)粒中成功插入了基因N，

理由是。

(3)為提高香樹(shù)脂醇合酶催化效率，將編碼第240位脯氨酸或第243位苯丙氨酸的堿基序列替換為編碼丙氨

酸的堿基序列，丙氨酸的密碼子有GCA等。a是誘變第240位脯氨酸編碼序列的引物（GCA為誘變序列），

b、c、d其中一條是誘變第243位苯丙氨酸的引物，其配對(duì)模板與a的配對(duì)模板相同。據(jù)此分析，丙氨酸的

密碼子除GCA外，還有。

a：5'-…GCA/CCC/GAG/TTC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC…-3'

b：5'-…GAA/CTG/TGG/GAC/ACC/CTG/AAC/TAC/TTC/TCT/GAG…-3'

c：5'-…GCC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC/CCC/TAC/CAC…-3'

d：5'-…GAT/AAT/AAG/ATC/CGA/GAG/AAG/GCC/ATG/CGA/AAG…-3'

(4)進(jìn)一步檢測(cè)轉(zhuǎn)基因酵母菌發(fā)酵得到的含量并進(jìn)行比較，可以選出最優(yōu)的香樹(shù)脂醇合酶基因的改

造方案。

7．（2021·遼寧）PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動(dòng)物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增

殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡(jiǎn)稱phb2基因），大小為0．9kb（1kb=1000

堿基對(duì)），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白。回答下列問(wèn)題：

(1)為獲取phb2基因，提取該動(dòng)物肝臟組織的總RNA，再經(jīng)過(guò)程得到cDNA，將其作為PCR反

應(yīng)的模板，并設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物來(lái)擴(kuò)增目的基因。

(2)圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見(jiàn)下表。為使phb2基因（該基因序列不

含圖1中限制酶的識(shí)別序列）與載體正確連接，在擴(kuò)增的phb2基因兩端分別引入和兩

種不同限制酶的識(shí)別序列。經(jīng)過(guò)這兩種酶酶切的phb2基因和載體進(jìn)行連接時(shí)，可選用（填

“E．coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。

相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

A↓AGCTTG↓AATTC

HindⅢEcoRI

TTCGA↑ACTTAA↑G

CAG↓CTGCTGC↓AG

PvitⅡPstI

GTC↑GACGA↑CGTC

G↓GTACCG↓GATCC

KpnIBamHI

CCATG↑GCCTAG↑G

注：箭頭表示切割位點(diǎn)

(3)轉(zhuǎn)化前需用CaCl2處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。

(4)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落（分別編號(hào)為1、2、3、4）

培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電分離，結(jié)果如圖2，號(hào)菌

落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

注：M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物；小于0．2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中

(5)將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24小時(shí)后，檢測(cè)處于細(xì)胞周期

（示意圖見(jiàn)圖3）不同時(shí)期的細(xì)胞數(shù)量，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖可能的原因是

將細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的（填“G1”或“S”或“G2/M”）期。

一、單選題

1．（2025·遼寧·模擬預(yù)測(cè)）防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是研究和應(yīng)用微生物的前提，也是發(fā)酵

工程的重要基礎(chǔ)。下列相關(guān)說(shuō)法正確的是（）

A．只有在固體培養(yǎng)基表面才能生長(zhǎng)出微生物菌落

B．固體培養(yǎng)基在高壓蒸汽滅菌后應(yīng)迅速倒平板，以防止凝固

C．為了涂布均勻，涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，涂布后立刻將培養(yǎng)皿倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

D．耐高溫和需要保持干燥的物品，可以采用干熱滅菌法，如玻璃器皿

2．（2025·遼寧沈陽(yáng)·三模）現(xiàn)代生物技術(shù)流程中，“篩選”至關(guān)重要。下列敘述正確的是（）

A．以尿素為唯一碳源的培養(yǎng)基可用于篩選土壤中的尿素分解菌

B．利用選擇培養(yǎng)基可以篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞

C．篩選透明帶厚的原腸胚進(jìn)行移植有利于胚胎的保護(hù)和孵化

D．利用滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行性別篩選有助于構(gòu)建乳腺生物反應(yīng)器

3．（2025·遼寧·三模）為提高作物產(chǎn)量，種植業(yè)往往使用大量的氮肥，既增加了生產(chǎn)成本，又易造成環(huán)境污

染。固氮菌能固定氮?dú)?，為植物生長(zhǎng)提供充足的氮元素，常見(jiàn)的固氮菌有根瘤菌和圓褐固氮菌等?？蒲腥?/p>

員進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測(cè)定的研究，部分實(shí)驗(yàn)流程如下圖。以下敘述正確的是（）

A．根瘤菌與豆科植物共生后才能固氮，其合成固氮酶所需的核糖體和氨基酸均來(lái)源于植物細(xì)胞

B．圓褐固氮菌能在不加氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，說(shuō)明圓褐固氮菌為自養(yǎng)型生物

C．將土壤懸液用無(wú)菌水梯度稀釋后涂布到含青霉素的選擇培養(yǎng)基上，以抑制其他微生物的生長(zhǎng)

D．若④統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是132、136、128，則每克土壤中含有的固氮菌為1.32×107個(gè)

4．（2025·遼寧·模擬預(yù)測(cè)）下列關(guān)于微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)方法的敘述，正確的是（）

A．用營(yíng)養(yǎng)齊全的培養(yǎng)基在80℃下培養(yǎng)棲熱菌不屬于選擇培養(yǎng)

B．不含氮源或碳源的培養(yǎng)基不能用于微生物的培養(yǎng)

C．從加入抗生素、無(wú)氧環(huán)境下的培養(yǎng)基中篩選出的不一定是厭氧真菌

D．含菌溶液的稀釋倍數(shù)并不會(huì)影響活菌計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確度

5．（2025·遼寧·模擬預(yù)測(cè)）漿水是某省非常獨(dú)特的發(fā)酵食品，明代醫(yī)學(xué)家李時(shí)珍在其《本草綱目》中也有專

門記述，“漿水能調(diào)中益氣，宣和強(qiáng)力，止咳消食，利小便”。科研工作者從漿水中分離得到了厭氧益生菌

發(fā)酵黏液乳桿菌GR-3，并有望將其用于疾病治療。下列關(guān)于利用發(fā)酵工程生產(chǎn)發(fā)酵黏液乳桿菌GR-3的敘

述，正確的是（）

A．優(yōu)良的發(fā)酵黏液乳桿菌GR-3可從自然界篩選，也可通過(guò)基因工程育種改良性狀

B．發(fā)酵工程中，可先通氣再進(jìn)行密閉，以提高發(fā)酵黏液乳桿菌GR-3的菌體數(shù)量

C．若要獲得發(fā)酵黏液乳桿菌GR-3的單細(xì)胞蛋白，需將細(xì)胞進(jìn)行去壁、破碎等操作

D．發(fā)酵罐內(nèi)的發(fā)酵是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基的配方不會(huì)影響發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)量

6．（2025·遼寧·模擬預(yù)測(cè)）酸筍是竹筍通過(guò)微生物發(fā)酵工藝制作而成的傳統(tǒng)食品，具有獨(dú)特的酸味和香氣。

下圖為利用乳酸菌、酵母菌、醋酸菌等微生物發(fā)酵制作酸筍的工藝流程圖，有關(guān)敘述合理的是（）

A．殺青、漂燙步驟是通過(guò)高溫滅菌避免雜菌污染

B．酸筍的酸味以乳酸菌產(chǎn)生乳酸為主，接種菌種后需立即通入氧氣

C．醋酸菌能將酵母菌產(chǎn)生的乙醇氧化為醋酸，進(jìn)一步豐富酸筍的酸味層次

D．發(fā)酵過(guò)程中要隨時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可以采用平板劃線法和稀釋涂布平板法

7．（2025高三下·黑龍江模擬）配制伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基可用于鑒定大腸桿菌，生長(zhǎng)在此培養(yǎng)基上的大腸

桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤。下圖為檢測(cè)大腸桿菌對(duì)某種抗生素的敏感性進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，圖示培養(yǎng)兩

天后所見(jiàn)結(jié)果(①②③為加有不同濃度抗生素的圓紙片)。下列相關(guān)敘述正確的是

A．接種用的方法是平板劃線法

B．實(shí)驗(yàn)表明不同種的大腸桿菌對(duì)同一種抗生素敏感性不同

C．①②③周圍透明圈的大小差異可能與培養(yǎng)基的氮源不同有關(guān)

D．浸有無(wú)菌水的圓紙片在本實(shí)驗(yàn)中作為空白對(duì)照

8．（2025·遼寧·二模）玉米赤霉烯酮（ZEN）是一種由鐮刀菌屬真菌產(chǎn)生的真菌毒素，研究人員從連作玉米

田的土壤樣品中分離出了可高效降解ZEN的細(xì)菌菌株，實(shí)驗(yàn)流程如圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．步驟②③④中所用的培養(yǎng)基均為以ZEN為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基

B．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需要將培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)基進(jìn)行干熱滅菌

C．步驟③中培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落數(shù)量可能約等于涂布到平板上的活菌數(shù)量

a瓶ZEN濃度b瓶ZEN濃度

D．可衡量b瓶中菌株的ZEN降解能力

a瓶ZEN濃度

9．（2025·遼寧鞍山·三模）紫花苜蓿是一種豆科牧草，富含植物蛋白，家畜采食后會(huì)鼓脹；百脈根富含單寧，

單寧可與植物蛋白結(jié)合，不引起家畜采食后鼓脹?？蒲腥藛T利用野生型清水紫花苜蓿和里奧百脈根為材料，

培育出抗肥胖鼓脹病的苜蓿新品種，研究主要流程如圖（注：IOA可抑制植物細(xì)胞呼吸第一階段，R—6G

可阻止線粒體的呼吸作用，二者有效抑制不同植物細(xì)胞正常代謝的臨界濃度不同）。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．過(guò)程③表示再分化過(guò)程，誘導(dǎo)出芽和誘導(dǎo)生根不需要更換培養(yǎng)基

B．①過(guò)程實(shí)現(xiàn)了原生質(zhì)體融合，其中只有異源融合體才能存活和具有再生能力

C．圖中植物體細(xì)胞雜交技術(shù)實(shí)現(xiàn)了遠(yuǎn)緣雜交育種

D．圖中再生植株培育的生物學(xué)原理主要是細(xì)胞膜的流動(dòng)性及植物細(xì)胞的全能性

10．（2025·遼寧·三模）甲植物細(xì)胞的核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞的質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究

小組用甲、乙兩種植物（均為二倍體）進(jìn)行體細(xì)胞雜交相關(guān)研究，最終獲得了高產(chǎn)、耐鹽堿的雜種植株丙，

其基本操作流程如圖。為獲得目的植株，下列相關(guān)操作正確的是（）

A．對(duì)外植體消毒時(shí)，使用體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精比70%的酒精消毒效果更好

B．過(guò)程A可用纖維素酶和果膠酶處理，需在低滲溶液中進(jìn)行，以防止過(guò)度失水而死亡

C．過(guò)程C中需用PEG來(lái)誘導(dǎo)原生質(zhì)體再生出新的細(xì)胞壁

D．雜種細(xì)胞經(jīng)植物組織培養(yǎng)形成可育二倍體，還需在個(gè)體水平做鑒定才能篩選出高產(chǎn)、耐鹽堿的雜種

植株丙

11．（2025·遼寧·二模）抗原表位指抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，是抗原與T細(xì)胞或B細(xì)胞

表面的抗原識(shí)別受體及抗體特異性結(jié)合的最小結(jié)構(gòu)單位。下圖為單克隆抗體的制備過(guò)程，下列敘述錯(cuò)誤的

是（）

A．可用PEG或滅活的病毒誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合

B．經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選所得的雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生的抗體共3種

C．克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)后的每個(gè)雜交瘤細(xì)胞只能產(chǎn)生1種抗體

D．由圖可知，利用一種抗原經(jīng)雜交瘤技術(shù)可以獲得多種單克隆抗體

12．（2025·遼寧·二模）與常規(guī)栽培技術(shù)相比，利用植物細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行藥用次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)具有顯著的

優(yōu)越性，根據(jù)不同的需求可以采用不同的技術(shù)流程（如下圖）。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A．培養(yǎng)體系1、2、3中的細(xì)胞基因型不完全相同

B．上圖的過(guò)程與植物組織培養(yǎng)都需要更換培養(yǎng)基

C．將目標(biāo)產(chǎn)物合成途徑中的關(guān)鍵酶基因?qū)霊腋〖?xì)胞，可用花粉管通道法

D．愈傷組織沒(méi)有葉綠體，是異養(yǎng)型細(xì)胞，因此需在培養(yǎng)基中加入有機(jī)碳源

13．（2025·遼寧·模擬預(yù)測(cè)）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。

以下圖DNA為模板，擴(kuò)增n次后（n≥1），與已知序列兩條鏈等長(zhǎng)的子代DNA分子數(shù)為（）

A．2n+1－n－2B．2n－2n

C．2n－2D．2n－n－1

二、多選題

14．（2025·遼寧營(yíng)口·三模）發(fā)根農(nóng)桿菌內(nèi)含有Ri質(zhì)粒，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化可以使植物產(chǎn)生大量毛狀根，由毛狀根再

生的植株往往表現(xiàn)出葉皺、節(jié)間短、頂端優(yōu)勢(shì)弱等特征。下列是利用發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化青蒿外植體的基本流

程。下列相關(guān)說(shuō)法正確的是（）

A．Ri質(zhì)粒上可能存在使植物生成毛狀根的基因

B．步驟③加入抗生素的目的是殺死發(fā)根農(nóng)桿菌

C．青蒿組織培養(yǎng)的脫分化和再分化過(guò)程中不需要光照處理

D．步驟④加入的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素用量的比值應(yīng)該小于1

15．（2025·遼寧·三模）2018年《細(xì)胞》期刊報(bào)道，中國(guó)科學(xué)家率先成功應(yīng)用體細(xì)胞對(duì)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物進(jìn)行

克隆，成功培育了體細(xì)胞克隆猴——“中中”和“華華”，流程如下，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．體外培養(yǎng)猴甲的體細(xì)胞時(shí)，需提供5%CO2的主要目的是促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用

B．采集到的卵母細(xì)胞培養(yǎng)到MⅡ期再通過(guò)顯微操作去除其核膜包被的細(xì)胞核

C．表達(dá)的Kdm4d使重構(gòu)胚中染色質(zhì)組蛋白的甲基化程度降低以促進(jìn)相關(guān)基因的表達(dá)，同時(shí)還常用乙

醇、Ca2+載體等方法激活重構(gòu)胚，使其完成分裂和發(fā)育的進(jìn)程

D．在胚胎移植后，還需對(duì)代孕母猴注射免疫抑制劑，防止免疫排斥的發(fā)生

16．（2025高三下·黑龍江）下圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過(guò)程，有關(guān)敘述正確的是（）

A．圖中實(shí)驗(yàn)小鼠注射的甲是能與抗人體胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原

B．利用聚乙二醇、滅活的病毒和電融合等方法均可誘導(dǎo)細(xì)胞融合獲得乙

C．用特定的選擇培養(yǎng)基對(duì)乙篩選，融合細(xì)胞均能生長(zhǎng)，未融合細(xì)胞均不能生長(zhǎng)

D．丙需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選后可獲得大量能分泌所需抗體的丁

三、實(shí)驗(yàn)題

17．（2025·遼寧沈陽(yáng)·三模）大豆脂肪氧化酶（LOX）在食品加工等方面有重要作用。下圖表示建立LOX基

因原核表達(dá)體系生產(chǎn)LOX的過(guò)程。其中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，T7啟動(dòng)子可被IPTG（異丙基-β-D-

硫代半乳糖苷）激活?；卮鹣铝袉?wèn)題。

(1)①RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄PCR）獲得LOX基因（cDNA）的過(guò)程需要的催化。為了便于基因表達(dá)載體的

構(gòu)建，引物F1和R1分別為。

A．5′-GGTACCGTAGTGTTGGTGGGTTGG-3′

B．5′-CTCGAGAAAGCCAAACATGAAAGC-3′

C．5′-GGTACCAAAGCCAAACATGAAAGC-3′

D．5′-CTCGAGGTAGTGTTGGTGGGTTGG-3′

(2)圖中代表基因工程核心步驟的是（填序號(hào)）。③過(guò)程需用處理大腸桿菌，以利于重組質(zhì)粒的

轉(zhuǎn)化。僅利用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基無(wú)法區(qū)分含有的大腸桿菌，因此還需利用PCR等技術(shù)在水

平上對(duì)大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)與篩選。篩選后的大腸桿菌用于生產(chǎn)時(shí)，除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，培養(yǎng)基中還需添加。

(3)已知天然的LOX具有使β-胡蘿卜素漂白褪色的特性。簡(jiǎn)要敘述利用以上過(guò)程生產(chǎn)的LOX進(jìn)行活性鑒定

的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路：。

18．（2025·遼寧沈陽(yáng)·模擬預(yù)測(cè)）BMP15蛋白由卵母細(xì)胞分泌，在哺乳動(dòng)物卵巢、卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育、成熟以

及排卵過(guò)程中起著不可或缺的作用。科研人員克隆出新西蘭白兔BMP15基因后，構(gòu)建該基因的真核表達(dá)載

體，并對(duì)產(chǎn)生的BMP15蛋白進(jìn)行分析。相關(guān)實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖1所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

(1)選取幼齡健康的新西蘭白兔雌兔，采集組織的RNA，經(jīng)①～③過(guò)程可獲得大量的BMP15基因。

①②過(guò)程中需要用到的酶分別是。

(2)③過(guò)程中，添加的一種引物序列為5′—CGGAATTCGGATGGCCCTCTCAGCATCCT—3′，則下列序列中

最有可能是另一種引物序列的是____。

A．5′-GGTGGTTGGTTGGGCTTTTCAATTCCCGCG-3′

B．5′-TCAGGACGTGTACAGCCACTCCATGGGGC-3′

C．5′-CGGGGTACCTCACCGACATGTGCAGGACT-3′

D．5′-AGGTACCTGAGGAGGGCCATCCGAATTCCG-3′

(3)圖示重組載體pCMV-Myc-BMP15中，未標(biāo)明的結(jié)構(gòu)有，CMV啟動(dòng)子的作用是。

(4)④步驟應(yīng)將轉(zhuǎn)化好的菌涂在含有的培養(yǎng)基上，篩選獲取菌落。若通過(guò)抗原—抗體雜交技術(shù)來(lái)檢測(cè)

融合Myc-tag標(biāo)簽的BMP15蛋白是否表達(dá)成功，一般需加入。

(5)實(shí)驗(yàn)組將重組載體pCMV-Myc-BMP15轉(zhuǎn)染到人胚腎細(xì)胞HEK293T內(nèi)，對(duì)照組將轉(zhuǎn)染到相應(yīng)受體

細(xì)胞，收取細(xì)胞樣品用于檢測(cè)mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)效果。檢測(cè)結(jié)果如圖2（CON：對(duì)照組；OVE：

重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組）。

分析圖示結(jié)果可知。

(6)對(duì)不同物種BMP15基因進(jìn)行核苷酸序列比較，得到下表，據(jù)表推測(cè)，兔與的親緣關(guān)系最近。

同源性（%）

比較項(xiàng)目

兔馬豬綿羊雞

兔81.281.979.938.3兔

馬18.882.284.538馬

豬18.118.18738.6豬

變異度（%）

綿羊19.216.513.439.7綿羊

雞88.590.392.686.4雞

兔馬豬綿羊雞