微生物崗位技能考核試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共30分。每題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)將正確選項(xiàng)字母填入括號(hào)內(nèi)）1.在革蘭染色中，碘液的主要作用是（）A.固定細(xì)胞壁B.與結(jié)晶紫形成復(fù)合物C.脫色D.復(fù)染答案：B2.下列哪種培養(yǎng)基最適合分離霍亂弧菌（）A.血瓊脂B.TCBS瓊脂C.麥康凱瓊脂D.SS瓊脂答案：B3.關(guān)于高壓蒸汽滅菌器滅菌效果監(jiān)測(cè)，最具法律效力的生物指示菌是（）A.大腸桿菌B.金黃色葡萄球菌C.嗜熱脂肪芽孢桿菌D.銅綠假單胞菌答案：C4.在API20E鑒定系統(tǒng)中，陽性反應(yīng)孔通常呈現(xiàn)（）A.藍(lán)色B.黃色C.紫色D.紅色答案：C5.下列哪項(xiàng)不是細(xì)菌L型形成的原因（）A.青霉素作用B.溶菌酶作用C.補(bǔ)體作用D.高滲環(huán)境答案：D6.用于檢測(cè)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的表型確證試驗(yàn)中，加入克拉維酸后抑菌圈直徑增加≥（）mm即為陽性A.3B.5C.7D.10答案：B7.在真菌藥敏試驗(yàn)中，CLSIM38A2方案推薦使用的培養(yǎng)基是（）A.沙氏葡萄糖瓊脂B.馬鈴薯葡萄糖瓊脂C.RPMI1640+2%葡萄糖D.血瓊脂答案：C8.關(guān)于結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，下列哪項(xiàng)描述正確（）A.最適pH為7.4B.需添加X因子C.5%CO?可加速生長(zhǎng)D.最適溫度為25℃答案：C9.在病毒細(xì)胞培養(yǎng)中，用于檢測(cè)流感病毒血凝活性的紅細(xì)胞來源通常是（）A.人O型紅細(xì)胞B.雞紅細(xì)胞C.豚鼠紅細(xì)胞D.大鼠紅細(xì)胞答案：B10.下列哪種方法可用于快速篩查耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的耐藥基因（）A.紙片擴(kuò)散法B.頭孢西丁篩選法C.PNAFISHD.mecA基因PCR答案：D11.關(guān)于內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試驗(yàn)，下列哪項(xiàng)可造成假陽性（）A.樣品pH7.0B.樣品含β葡聚糖C.樣品經(jīng)0.22μm濾膜過濾D.使用λ=0.125EU/mL靈敏度鱟試劑答案：B12.在厭氧罐中，指示厭氧狀態(tài)的化學(xué)試劑是（）A.美藍(lán)B.刃天青C.溴甲酚紫D.酚紅答案：B13.下列哪項(xiàng)不是真菌厚壁孢子的功能（）A.抵抗干燥B.抵抗吞噬C.促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)D.長(zhǎng)期存活答案：C14.關(guān)于細(xì)菌生長(zhǎng)曲線，穩(wěn)定期細(xì)菌總數(shù)不變的主要原因是（）A.營(yíng)養(yǎng)充足B.毒素積累與營(yíng)養(yǎng)耗盡平衡C.溫度升高D.pH升高答案：B15.在VITEK2Compact系統(tǒng)中，用于鑒定革蘭陰性桿菌的卡片型號(hào)是（）A.GNB.GPC.YSTD.NH答案：A16.下列哪項(xiàng)不是病毒蝕斑形成單位（PFU）計(jì)算必需參數(shù)（）A.稀釋度B.接種體積C.蝕斑數(shù)D.紅細(xì)胞數(shù)答案：D17.關(guān)于質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移，下列哪項(xiàng)描述錯(cuò)誤（）A.需供體菌含接合型質(zhì)粒B.需性菌毛接觸C.受體菌必須獲得全部染色體D.可傳播耐藥基因答案：C18.在CLSI文件中，頭孢他啶/阿維巴坦的敏感折點(diǎn)紙片含量為（）A.10μgB.30μgC.75μgD.30/20μg答案：D19.下列哪種染色方法最適合檢測(cè)隱球菌莢膜（）A.革蘭染色B.抗酸染色C.墨汁負(fù)染D.瑞氏染色答案：C20.關(guān)于生物安全柜分類，處理結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本應(yīng)選用（）A.A1型B.A2型C.B1型D.B2型答案：B21.在細(xì)菌耐藥機(jī)制中，AmpC酶的主要編碼位置是（）A.質(zhì)粒B.染色體C.轉(zhuǎn)座子D.噬菌體答案：B22.下列哪項(xiàng)不是病毒中和試驗(yàn)的觀察指標(biāo)（）A.CPE抑制B.蝕斑減少C.紅細(xì)胞吸附抑制D.菌落大小答案：D23.關(guān)于真菌雙相性，下列哪項(xiàng)描述正確（）A.37℃時(shí)均為酵母相B.25℃時(shí)均為菌絲相C.組織內(nèi)多為酵母相D.菌絲相無感染性答案：C24.在細(xì)菌基因組DNA提取中，SDS的主要作用是（）A.裂解細(xì)胞壁B.沉淀DNAC.抑制RNaseD.溶解膜蛋白答案：D25.下列哪項(xiàng)不是支原體與細(xì)菌L型的共同特征（）A.無細(xì)胞壁B.可透過濾器C.需高滲培養(yǎng)D.對(duì)青霉素耐藥答案：C26.關(guān)于病毒TCID??計(jì)算，ReedMuench法需先確定（）A.蝕斑數(shù)B.紅細(xì)胞凝集滴度C.距離比例D.菌落形成單位答案：C27.在真菌藥敏Etest條中，判讀終點(diǎn)為（）A.完全抑制橢圓抑菌環(huán)上緣B.80%抑制C.50%抑制D.首孔無生長(zhǎng)答案：A28.下列哪項(xiàng)不是細(xì)菌生物膜形成階段（）A.可逆附著B.不可逆附著C.微菌落形成D.芽孢形成答案：D29.關(guān)于噬菌體展示技術(shù)，下列哪項(xiàng)描述錯(cuò)誤（）A.外源肽融合于衣殼蛋白B.可篩選抗體C.需活細(xì)菌宿主D.只能展示DNA答案：D30.在實(shí)時(shí)熒光PCR中，TaqMan探針的熒光基團(tuán)通常連接在（）A.5′端B.3′端C.中間堿基D.引物5′端答案：A二、配伍選擇題（每題1分，共20分。每組試題共用五個(gè)備選答案，每題一個(gè)最佳答案，備選答案可重復(fù)選用）【3135】備選答案A.沙氏葡萄糖瓊脂B.巧克力瓊脂C.羅氏培養(yǎng)基D.鮑金培養(yǎng)基E.堿性蛋白胨水31.分離百日咳鮑特菌首選（）32.分離白喉棒狀桿菌需（）33.分離新生隱球菌需（）34.分離結(jié)核分枝桿菌需（）35.分離霍亂弧菌需（）答案：31D32B33A34C35E【3640】備選答案A.過氧化氫酶B.氧化酶C.脲酶D.凝固酶E.脂酶36.金黃色葡萄球菌產(chǎn)生（）37.銅綠假單胞菌產(chǎn)生（）38.幽門螺桿菌產(chǎn)生（）39.棒狀桿菌屬產(chǎn)生（）40.產(chǎn)單核李斯特菌產(chǎn)生（）答案：36D37B38C39A40E【4145】備選答案A.16SrRNAB.ITSC.hsp65D.rpoBE.gyrB41.真菌系統(tǒng)發(fā)育常用（）42.分枝桿菌菌種鑒定常用（）43.細(xì)菌通用鑒定靶基因（）44.腸桿菌科快速鑒定補(bǔ)充靶基因（）45.銅綠假單胞菌分型常用（）答案：41B42C43A44E45D【4650】備選答案A.血平板B.麥康凱C.SSD.TCBSE.哥倫比亞CNA46.篩選耐萬古霉素腸球菌需（）47.篩選MRSA需含頭孢西丁的（）48.分離沙門菌志賀菌首選（）49.分離耐多藥鮑曼不動(dòng)桿菌常用（）50.分離耐碳青霉烯類腸桿菌科需（）答案：46E47A48C49B50B三、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）51.高壓蒸汽滅菌121℃15min可完全破壞朊病毒。（）答案：×52.真菌菌絲分隔屬于無隔菌絲的是毛霉屬。（）答案：√53.病毒蝕斑試驗(yàn)中，覆蓋瓊脂濃度越高蝕斑越大。（）答案：×54.細(xì)菌生物膜對(duì)消毒劑抵抗力高于浮游菌。（）答案：√55.實(shí)時(shí)熒光PCR的Ct值與初始模板量呈正比關(guān)系。（）答案：×56.支原體對(duì)多西環(huán)素天然耐藥。（）答案：×57.結(jié)核分枝桿菌對(duì)吡嗪酰胺耐藥多由pncA基因突變引起。（）答案：√58.真菌Etest判讀時(shí)，如出現(xiàn)雙抑菌圈，以內(nèi)側(cè)為準(zhǔn)。（）答案：×59.細(xì)菌產(chǎn)碳青霉烯酶表型確證試驗(yàn)中，EDTA協(xié)同試驗(yàn)陽性提示金屬酶。（）答案：√60.病毒TCID??與PFU可經(jīng)公式1TCID??≈0.7PFU換算。（）答案：√四、填空題（每空1分，共20分）61.革蘭染色脫色劑常用________與________混合液。答案：丙酮、乙醇62.真菌厚壁孢子常用________染色可顯________色。答案：熒光增白劑、亮藍(lán)63.病毒紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)中，血清需先經(jīng)________處理以去除非特異凝集素。答案：受體破壞酶（RDE）64.細(xì)菌接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)需________培養(yǎng)基以篩選接合子。答案：選擇性65.實(shí)時(shí)熒光PCR中，Taq酶5′→3′外切活性切割探針釋放_(tái)_______熒光。答案：報(bào)告基團(tuán)66.分枝桿菌噬菌體報(bào)告法使用________噬菌體感染活菌后表達(dá)________酶。答案：熒光素酶、熒光素67.真菌藥敏CLSIM27A3方案中，氟康唑?qū)Π咨钪榫拿舾姓埸c(diǎn)為≤________μg/mL。答案：268.細(xì)菌生物膜定量常用________染色后測(cè)________值。答案：結(jié)晶紫、OD???69.病毒空斑純化時(shí)，挑取________斑需用________槍頭。答案：?jiǎn)蝹€(gè)、無菌70.質(zhì)?？截悢?shù)測(cè)定常以內(nèi)參基因________與靶基因________比值計(jì)算。答案：gyrB、rep五、簡(jiǎn)答題（每題6分，共30分）71.簡(jiǎn)述臨床標(biāo)本中懷疑產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌科菌的表型篩查流程。答案：（1）初篩：采用厄他培南或美羅培南紙片，抑菌圈≤標(biāo)準(zhǔn)值提示可能產(chǎn)酶；（2）表型確證：①改良Hodge試驗(yàn)，待測(cè)菌與指示菌交叉劃線，出現(xiàn)增強(qiáng)生長(zhǎng)為陽性；②EDTA協(xié)同試驗(yàn)，美羅培南±EDTA紙片，抑菌圈差值≥5mm提示金屬酶；③CarbaNP試驗(yàn)，菌懸液加入底物后酚紅變黃為陽性；（3）基因確認(rèn)：PCR檢測(cè)bla_KPC、bla_NDM、bla_IMP、bla_VIM、bla_OXA48like；（4）按CLSI折點(diǎn)報(bào)耐藥，并注明酶型，指導(dǎo)隔離及感染控制。72.簡(jiǎn)述真菌G試驗(yàn)原理及干擾因素。答案：原理：血清樣本中(1→3)βD葡聚糖可激活鱟試劑中G因子，引發(fā)級(jí)聯(lián)酶反應(yīng)，生成產(chǎn)色物質(zhì)，動(dòng)態(tài)濁度或顏色變化與葡聚糖濃度成正比。干擾因素：①纖維素膜透析、血透患者假陽性；②靜脈輸注白蛋白、免疫球蛋白含葡聚糖；③某些細(xì)菌膿毒血癥釋放類似多糖；④溶血、脂血、黃疸影響透光率；⑤操作污染如紗布、棉塞釋放葡聚糖；⑥抗真菌藥物如棘白菌素治療早期可暫時(shí)降低水平。需結(jié)合臨床、影像學(xué)、GM試驗(yàn)綜合判斷。73.簡(jiǎn)述病毒TCID??測(cè)定步驟及結(jié)果計(jì)算要點(diǎn)。答案：步驟：①病毒原液10倍系列稀釋10?1至10??；②每稀釋度接種4孔96板，每孔100μL，補(bǔ)100μL維持液；③35℃5%CO?培養(yǎng)57天；④每日觀察CPE，記錄每孔陽性；⑤按ReedMuench法計(jì)算：距離比例=（>50%陽性率－50%）/（>50%陽性率－<50%陽性率），TCID??=負(fù)對(duì)數(shù)+距離比例×稀釋系數(shù)；⑥換算為每mL含TCID??量，報(bào)告log??值保留兩位小數(shù)。74.簡(jiǎn)述細(xì)菌生物膜體外建模常用方法及評(píng)價(jià)指標(biāo)。答案：方法：①96孔板靜態(tài)法，菌懸液加入孔內(nèi)37℃培養(yǎng)24h，棄浮游菌，PBS洗3次；②CDC生物膜反應(yīng)器，持續(xù)流培養(yǎng)48h，剪切力模擬體內(nèi)；③導(dǎo)管模型，硅膠片置于流室，實(shí)時(shí)觀察。評(píng)價(jià)：①結(jié)晶紫染色測(cè)生物量；②活菌計(jì)數(shù)超聲刮取后平板計(jì)數(shù)；③共聚焦激光掃描顯微鏡測(cè)厚度、死/活菌比例；④掃描電鏡觀察微觀結(jié)構(gòu)；⑤XTT/MTT測(cè)代謝活性；⑥抗藥試驗(yàn)MBEC（最小生物膜清除濃度）。指標(biāo)：厚度≥50μm、活菌≥10?CFU/cm2、MBEC≥浮游MIC101000倍為成熟膜。75.簡(jiǎn)述臨床血培養(yǎng)報(bào)陽后一級(jí)處理“4小時(shí)速報(bào)”內(nèi)容。答案：①革蘭染色：報(bào)告染色性質(zhì)、形態(tài)、排列、是否分枝、芽孢、莢膜；②直接藥敏：采用自動(dòng)化快速梯度條或紙片，接種0.5麥?zhǔn)暇鷳乙海?5℃孵育46h讀取頭孢他啶、美羅培南、萬古霉素等關(guān)鍵藥物結(jié)果；③快速鑒定：MALDITOF直接涂靶板，或PCRESI/MS檢測(cè)16SrRNA；④特殊病原：發(fā)現(xiàn)酵母樣菌立即加做氟康唑Etest；發(fā)現(xiàn)分枝桿菌形態(tài)立即轉(zhuǎn)入BSL2隔離培養(yǎng)；⑤臨床溝通：電話通知主管醫(yī)生，提示可能病原及耐藥預(yù)警，指導(dǎo)經(jīng)驗(yàn)用藥調(diào)整；⑥記錄：拍照染色鏡下視野，保存質(zhì)譜圖，確保可追溯。六、案例分析題（每題10分，共30分）76.患者男，68歲，糖尿病足潰瘍，分泌物送檢。培養(yǎng)48h后血瓊脂上形成灰白色、β溶血、凸起小菌落，革蘭陽性球菌，觸酶陰性，PYR陽性，CAMP試驗(yàn)陰性，膽汁七葉苷陽性，6.5%NaCl生長(zhǎng)陽性。（1）給出最可能菌種；（2）列出兩項(xiàng)確證試驗(yàn)；（3）若該菌對(duì)青霉素MIC≥32μg/mL，寫出可報(bào)告的治療藥物及劑量。答案：（1）糞腸球菌；（2）①PCR檢測(cè)ddl_E.faecalis基因；②MALDITOF得分≥2.0；（3）氨芐西林耐藥，可選萬古霉素15mg/kgq12h或利奈唑胺600mgq12h；若VanB型耐藥，可選達(dá)托霉素68mg/kgqd或替考拉寧10mg/kgq12h前3劑。77.患者女，45歲，急性白血病化療后發(fā)熱，血培養(yǎng)報(bào)陽，革蘭陰性桿菌，氧化酶陽性，有鞭毛，無芽孢，無溶血，麥康凱生長(zhǎng)呈無色菌落，頭孢他啶抑菌圈6mm，美羅培南抑菌圈8mm，CarbaNP陽性，PCR檢出bla_NDM1。（1）給出菌種及耐藥機(jī)制；（2）寫出至少三種感染控制措施；（3）列出可選擇的聯(lián)合用藥方案。答案：（1）產(chǎn)NDM1型金屬β內(nèi)酰胺酶陰溝腸桿菌復(fù)合群；（2）①單間隔離，接觸隔離標(biāo)識(shí)；②專用體溫計(jì)、血壓計(jì)，每日氯己定擦浴；③醫(yī)護(hù)進(jìn)入穿隔離衣、手套，手衛(wèi)生含醇速干手消；④