第四章藥物含量測(cè)定方法驗(yàn)證文檔ppt

第二節(jié)

定量分析樣品的前處理方法一、概述

1.為什么要對(duì)定量分析的樣品進(jìn)行前處理？

含鹵素、氮、硫、磷等有機(jī)藥物R-X（F，Cl,Br,I，N）

金屬有機(jī)藥物R-O-Me（有機(jī)酸或酚的含金屬有機(jī)藥物金屬鹽；結(jié)合不牢固）

有機(jī)金屬藥物R-Me

（結(jié)合牢固）

2.常用的處理方法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法藥物分析中常用的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）直接測(cè)定法例如：富馬酸亞鐵

溶于熱稀礦酸，采用鈰量法，鄰二氮菲作指示劑二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法

1.直接回流后測(cè)定法例如：三氯叔丁醇的含量測(cè)定

CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3

2.用硫酸水解后測(cè)定法例如：硬脂酸鎂的含量測(cè)定

Mg(C17H35COO)2+H2SO4MgSO4+2C17H35COOH

H2SO4+2NaOHNa2SO4

+2H2O

△二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（三）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法1、碘他拉酸的含量測(cè)定

2.碘番酸、膽影酸、膽影葡胺注射液、泛影酸、泛影酸納及泛影葡胺注射液的含量測(cè)定Zn還原，后銀量法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法3.利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量

（1）含銻藥物例如：葡萄糖酸銻的含量測(cè)定

Sb5++2KISb3++2K+

++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

（2）含鐵藥物2Fe3++2KI2Fe2++2K++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6H+二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法含氮有機(jī)藥物凱氏定氮法在催化劑作用下，用硫酸破壞有機(jī)物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測(cè)出氮含量。1.原理2.包括四個(gè)過程：消化、蒸餾、吸收、滴定2.反應(yīng)過程1.有機(jī)物中的氮在強(qiáng)熱和

濃H2SO4作用下，消化生成無機(jī)氮

NH2CHCOOH+2H2SO4=SO2+H2O+2CO2+NH3

2NH3+H2SO4=(NH4)2SO4

2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3(NH4)2SO4+2NaOH=Na2SO4+2NH4OH

4.用已知濃度的HCI標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)HCI消耗的量計(jì)算出氮的含量。NH4H2BO3

+HCl=H3BO3+NH4Cl3.

NH3收集于H3BO3

溶液中。NH3+H3BO3=NH4H2BO33.反應(yīng)裝置4.反應(yīng)試劑1、消化液：硫酸2、催化劑：硫酸銅、硫酸鉀3、堿溶液：40%氫氧化鈉4、吸收液：2%硼酸5、混合指示劑：（1：1）乙醇溶液

0.1%甲基紅：0.1%溴甲酚綠6、標(biāo)準(zhǔn)滴定液：0.2MHCL5.各種試劑的作用硫酸：

1.脫水。使有機(jī)物炭化，生成C

2.氧化。H2SO4將C、H氧化為CO2和H2O蒸汽逸出，本身還原為SO2，而藥物則分解成無機(jī)氮，并與硫酸結(jié)合成硫酸銨，留在酸性溶液中硫酸銅：1.催化劑加速反應(yīng)硫酸銅，氧化汞或硒粉作為催化劑以及加入少量過氧化氫作為氧化劑，次氯酸鉀防止污染。通常使用硫酸銅。2.堿性反應(yīng)指示劑

有機(jī)物全部消化后，出現(xiàn)硫酸銅的蘭綠色，可以作為指示劑。

是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)金屬有機(jī)藥物R-O-Me（有機(jī)酸或酚的A．準(zhǔn)確度B．回收率C．精密度常量分析：≥80mlNaOH，25ml的2%硼酸，1、碘他拉酸的含量測(cè)定同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。A．未知藥物的真?zhèn)蜝．已知藥物的真?zhèn)沃貜?fù)性在相同條件下,由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度.質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用以驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn)也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有適用的高低限度或量的區(qū)間。六、線性40%氫氧化鈉

堿性條件下，使硫酸銨釋放出氨氣。加入氫氧化鈉溶液要過量；要防止樣液中氨氣逸出。硼酸H3BO3：半微量或微量定氮通常用硼酸溶液吸收氨的作用。硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影響指示劑變色反應(yīng)。

鹽酸：HCl滴定液常量法中取比較合適，半微量法中則在～之間比較合適。

6.注意事項(xiàng)取樣量：

常量法：相當(dāng)于含氮量2530mg半微量法：相當(dāng)于含氮量2.蒸餾加濃堿NaOH，加的量為H2SO4量的4倍常量分析：≥80mlNaOH，25ml的2%硼酸，半微量分析：例如10ml樣品，10mlNaOH，

10ml2%硼酸3.硼酸保持過量。4.標(biāo)準(zhǔn)酸濃度：一般常量用

半微量用

微量用氧燃瓶燃燒法(oxygenflaskcombustionmethod)1.原理將含有待測(cè)元素的有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底分解為二氧化碳和水，而待測(cè)元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不同價(jià)態(tài)的氧化物（或無氧酸），被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校缓蟾鶕?jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行檢查或定量測(cè)定。適用范圍：含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析。2.氧燃瓶燃燒法的適用范圍及特點(diǎn)

3.儀器裝置燃燒瓶為500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶瓶塞空心底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀

4.稱樣用材料及稱樣

A.固體樣品無灰濾紙

B.液體樣品紙袋

C.軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測(cè)成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無灰濾紙包裹5.吸收液作用將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y(cè)定的價(jià)態(tài)吸收液的選擇氟水（HF)

氯NaOH溶液（HCl溶解度低）溴H2O2-NaOH（NaOH-硫酸肼飽和溶液碘NaOH－硫酸肼飽和溶液硫NaOH或H2O2

硒硝酸溶液應(yīng)報(bào)告S或SD、RSD和可信限。色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說明專屬性。要求制備高、中、低三濃度的樣品，各測(cè)定3次。它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。(NH4)2SO4+2NaOH=Na2SO4+2NH4OH它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。000mlE．25±1ml它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。檢測(cè)出的最低濃度或量。采用在空白輔料中加入原用于原料藥中雜質(zhì)測(cè)定和制劑中降解產(chǎn)物測(cè)定的方法：藥物分析中常用的分析方法濕法破壞(coefficientofvariation,CV)利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量6.操作方法①燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備：用洗液洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。②樣品的準(zhǔn)備：取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。③樣品的燃燒：點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗(yàn)。然后按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。①根據(jù)被燃燒分解的樣品量選用適宜大小的燃燒瓶。ChP（2005）規(guī)定的燃燒瓶體積為500、1000或2000ml三種，采用常量或半微量分析。（4）注意事項(xiàng)

待分解樣品量

燃燒瓶的體積3~5mg（微量分析）150~250ml20~30mg（半微量分析）300~500ml50~60mg1000ml0.6~0.7g或更多2000ml或特殊結(jié)構(gòu)的燃燒瓶

正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。②測(cè)定含氟有機(jī)藥物時(shí)，用石英制燃燒瓶③鉑絲燃燒時(shí)起催化作用④應(yīng)同時(shí)做空白試驗(yàn)⑤燃燒時(shí)要注意防爆⑥燃燒要完全⑦燃燒產(chǎn)生的煙霧完全被吸收應(yīng)用示例：碘苯酯的測(cè)定返回（二）數(shù)據(jù)要求

回收率%=（測(cè)定平均值—空白值）/加入量×100%要求制備高、中、低三濃度的樣品，各測(cè)定3次。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率，或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。

第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度

是指用該方法測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用回收率表示（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度1.原料藥可用已知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。2.制劑要考察輔料對(duì)回收率的影響。采用在空白輔料中加入原料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算RSD。

具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，n=3,共9個(gè)數(shù)據(jù)來評(píng)價(jià)回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC發(fā)時(shí)，一般回收率可達(dá)98%～102%；容量法可達(dá)99.7%～100.3%

二、精密度

是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定結(jié)果之間的接近程度。

（一）精密度表示方法1.偏差(deviation,d)d=測(cè)得值-平均值=Xi-X

2.標(biāo)準(zhǔn)偏差（standarddeviation,SD或S）

S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(relativestandarddeviation,RSD)也稱變異系數(shù)(coefficientofvariation,CV)RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%=S/X×100%（二）重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性1.重復(fù)性在相同條件下,由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度.2.中間精密度在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。3.重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。（三）數(shù)據(jù)要求

應(yīng)報(bào)告S或SD、RSD和可信限。用統(tǒng)計(jì)學(xué)的可信性分析(t或f）。為什么要對(duì)定量分析的樣品進(jìn)行前處理？同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。H2SO4-硫酸鹽法（凱氏定氮法）I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6溴H2O2-NaOH（150~250ml同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。5．表示兩變量指標(biāo)A與C之間線性相關(guān)程度常用3、堿溶液：40%氫氧化鈉氟水（HF)碘番酸、膽影酸、膽影葡胺注射液、泛影酸、泛影酸納及泛影葡胺注射液的含量測(cè)定Zn還原，后銀量法2Fe3++2KI2Fe2++2K++I2在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH32．相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差表示的應(yīng)是

三、專屬性是指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。

（一）鑒別反應(yīng)應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。（二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說明專屬性。

圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。在能獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對(duì)結(jié)果的干擾。在雜質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用以驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn)行對(duì)照；也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。四、檢測(cè)限（limitofdetection,LOD)是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量，是限度檢驗(yàn)指標(biāo)。它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。（一）常用的方法

1.非儀器分析目視法用已知濃度被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。2.儀器分析方法UV法：LOD=f.3S空=C樣/A樣×

3S空

Flu法：LOD=f.3S空=C樣/(F樣-F空)×

3S空

GC和HPLC法：

LOD=S/N=2或3

（二）數(shù)據(jù)要求應(yīng)附測(cè)試圖，說明測(cè)試過程和檢測(cè)限結(jié)果。

五、定量限（limitofquantitation,LOQ)

是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求

LOQ.常用信噪比法確定定量限，一般以S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行測(cè)定。

六、線性

是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

UV法：首先制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)

建立回歸方程C=aA+b;r＞0.9999。HPLC法：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n=5～7;以C對(duì)h或A或與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比，建立回歸方程r＞0.9999。七、范圍

是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法適用的高低限度或量的區(qū)間。原料藥和制劑含量測(cè)定：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%-～120%。制劑含量均勻度檢查：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%-～130%。溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定：范圍應(yīng)為限度的±20%。

八、耐用性

是指在測(cè)定條件下有效的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。典型的變動(dòng)因素有：被溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。HPLC法變動(dòng)因素有：流動(dòng)相組成與pH，色譜柱，柱溫，流速等。

GC法變動(dòng)因素有：色譜柱，固定相，擔(dān)體、柱溫、進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。

分析方法效能指標(biāo)的具體應(yīng)用：1.用于鑒別試驗(yàn)的方法：只要求專屬性、耐用性，其余不要求。2.用于原料藥中雜質(zhì)測(cè)定和制劑中降解產(chǎn)物測(cè)定的方法：①用于定量：除了檢測(cè)限不要求外，其余七