ICS71.100.70Y42/43團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CIQA***—2025食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)熱穩(wěn)定二氧化碳傳感技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)控-呼吸信號(hào)法RapidDetectionMethodofCommercialSterilityinfoodThermallyStableCO?SensingTechnologyforReal-TimeMonitoring-BreathSignalMethod（征求意見(jiàn)稿）2025-**-**發(fā)布2025-**-**實(shí)施中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)發(fā)布 T/CIQA***—2025 前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定要求進(jìn)行起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件負(fù)責(zé)起草單位：上海美凱純生物科技有限公司本文件主要起草單位：廈門(mén)海關(guān)技術(shù)中心、廈門(mén)燕之屋絲濃食品有限公司、河北省產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)中心、中檢科（北京）測(cè)試技術(shù)有限公司、沈陽(yáng)海關(guān)技術(shù)中心、浙江省檢驗(yàn)檢疫科學(xué)技術(shù)研究院、君樂(lè)寶乳業(yè)集團(tuán)、南京衛(wèi)崗乳業(yè)有限公司、伊利乳業(yè)集團(tuán)股份有限公司、山東熊貓乳業(yè)集團(tuán)、廈門(mén)燕鴻基健康美（廈門(mén)）食品有限公司、北大荒完達(dá)山乳業(yè)有限公司、山西九牛牧業(yè)有限公司、山西牧童乳業(yè)有限公司、上海天噯生物科技有限公司、天津海河乳業(yè)有限公司本文件主要起草人：徐敦明、范群艷、李雁鵬、張耀廣、柳訓(xùn)才、廖江、王紫薇、王金玲、李可、呂新峰、李佳興、張曉婷、李飛、阮成發(fā)、徐紅、肖圣乾、梁瑞芳、何躍建、楊明陽(yáng)、徐鳳云、王建平、張旭玲、袁莉紅、李利、李小偉等。本文件的所有權(quán)和解釋權(quán)歸中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)。 T/CIQA***—2025 食品商業(yè)無(wú)菌快速檢測(cè)熱穩(wěn)定二氧化碳傳感技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)控-呼吸信號(hào)法1范圍本文件描述了食品的商業(yè)無(wú)菌快速檢測(cè)方法熱穩(wěn)定CO?傳感技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)控--呼吸信號(hào)法的檢驗(yàn)程序、檢驗(yàn)步驟、結(jié)果判定與報(bào)告要求。本文件適用于即食燕窩制品、UHT乳和調(diào)制乳等產(chǎn)品的商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)。本方法的檢出限LOD95＜1log10CFU/mL.。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.26-2023《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)商業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)》。技術(shù)要求：3.1原理微生物生長(zhǎng)繁殖的過(guò)程中伴隨著各類(lèi)代謝產(chǎn)物的生成，利用熱穩(wěn)定二氧化碳傳感器和光學(xué)傳感技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)控微生物在檢測(cè)管中生長(zhǎng)代謝產(chǎn)生的二氧化碳和pH值的變化。當(dāng)微生物在檢測(cè)管中生長(zhǎng)，這些代謝物透過(guò)檢測(cè)區(qū)的透氣膜，引起檢測(cè)管底部傳感器中的感光劑的光譜模式和化學(xué)特性發(fā)生變化，同時(shí)也與監(jiān)測(cè)設(shè)備中的光源的光譜趨于一致。光傳感器以預(yù)先設(shè)定好的時(shí)間間隔實(shí)時(shí)檢測(cè)到這些變化，并表達(dá)給計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，通過(guò)運(yùn)算法則完成對(duì)樣品中微生物的檢測(cè)和分析，從而報(bào)告微生物陽(yáng)性結(jié)果。而當(dāng)樣品中沒(méi)有活菌時(shí)，檢測(cè)管的光譜模式始終不會(huì)發(fā)生變化，監(jiān)測(cè)系統(tǒng)會(huì)判定樣品為商業(yè)無(wú)菌。3.2設(shè)備和材料：除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌設(shè)備外，本文件所需的其他儀器和材料如下：1)Biofirst實(shí)時(shí)微生物多溫區(qū)熒光光電快速檢測(cè)系統(tǒng)；3)微量可調(diào)移液器和槍頭。量程1mL和200uL電子天平：感量0.01g。恒溫培養(yǎng)箱：36°C±1°C、39℃±1℃3.3培養(yǎng)基和試劑1）即用型培養(yǎng)試劑管：BioFirst檢測(cè)管BFS-TCD；2）75%乙醇；3）BFS-AABS1和BFS-AABS2厭氧添加劑。檢驗(yàn)步驟4.1保溫普通食品樣品置于36°C±1°C的培養(yǎng)箱中保溫24h±2h；即食燕窩制品、UHT乳和調(diào)制乳的保溫溫度為39℃±1℃。保溫24h±2h后，如有脹罐（袋、瓶、杯等）或泄露現(xiàn)象，應(yīng)參照GB4789.26進(jìn)行檢驗(yàn)。4.2開(kāi)啟食品容器將保溫后的樣品，用75%酒精對(duì)包裝外表面進(jìn)行消毒，參照GB4789.26開(kāi)啟食品容器。開(kāi)啟食品容器前應(yīng)上下顛倒混勻。4.3加樣4.3.1液體樣品，無(wú)菌操作用移液器吸取樣品4mL加入到BFS-TCD檢測(cè)管中，旋緊檢測(cè)管瓶蓋，輕輕上下顛倒三次混勻。固體樣品,無(wú)菌操作稱(chēng)取1g樣品到BFS-TCD檢測(cè)管中，旋緊檢測(cè)管瓶蓋，輕輕上下顛倒三次混勻。4.3.2如需進(jìn)行樣品中厭氧菌的檢測(cè)，在BFS-TCD檢測(cè)管中加入0.1mLBFS-AABS1和2mLBFS-AABS2的厭氧添加劑,其余步驟按照4.3.1進(jìn)行。4.4上機(jī)操作打開(kāi)儀器并設(shè)定溫度為39℃±1℃。將加樣后的BFS-TCD檢測(cè)管放入BioFirst實(shí)時(shí)微生物多溫區(qū)熒光光電快速檢測(cè)儀的測(cè)試孔位；打開(kāi)BioFirst軟件，編輯并選擇相應(yīng)的食品類(lèi)別和商業(yè)無(wú)菌測(cè)試方法，食品商業(yè)無(wú)菌相應(yīng)的儀器參數(shù)設(shè)置見(jiàn)附錄A。點(diǎn)擊開(kāi)始檢測(cè)。儀器自動(dòng)運(yùn)行并報(bào)告結(jié)果。4.5結(jié)果判定與報(bào)告：當(dāng)儀器檢測(cè)時(shí)間達(dá)到設(shè)定的最長(zhǎng)運(yùn)行時(shí)間，培養(yǎng)瓶中無(wú)微生物生長(zhǎng)，儀器未報(bào)檢出時(shí)間，則結(jié)果為陰性，報(bào)告為商業(yè)無(wú)菌；當(dāng)儀器報(bào)告檢測(cè)時(shí)間，且生長(zhǎng)曲線形態(tài)結(jié)果為陽(yáng)性，則報(bào)告為非商業(yè)無(wú)菌。典型與非典型生長(zhǎng)曲線的結(jié)果判定與報(bào)告見(jiàn)附錄B。附 錄 A（規(guī)范性）A.1商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)CO2傳感技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)控—呼吸信號(hào)法的實(shí)時(shí)熒光光電檢測(cè)儀參數(shù)的設(shè)置表A.1 商業(yè)無(wú)菌測(cè)試模塊參數(shù)設(shè)置檢測(cè)項(xiàng)目溫度運(yùn)行時(shí)間忽略值靈敏度最小報(bào)告值分辨率商業(yè)無(wú)菌39℃24h60-706-71CFU1附 錄 B（規(guī)范性）典型和非典型曲線解讀BioFirst實(shí)時(shí)熒光光電檢測(cè)儀器每6分鐘采集一次光信號(hào)，并繪制生長(zhǎng)曲線；曲線向上的拐點(diǎn)即為微生物代謝產(chǎn)物達(dá)到檢測(cè)閾值的時(shí)間，也是報(bào)告結(jié)果的時(shí)間。對(duì)于非典型生長(zhǎng)曲線，觀察生長(zhǎng)曲線形態(tài)，按照表1判定結(jié)果，排除誤報(bào)。典型和非典型生長(zhǎng)曲線的特征和解讀見(jiàn)表B.1。表B.1典型和非典型生長(zhǎng)曲線的特征和解讀結(jié)果類(lèi)型曲線特征圖片示例典型陽(yáng)性結(jié)果生長(zhǎng)曲線初期平穩(wěn)，后續(xù)有明顯向上的拐點(diǎn)，呈現(xiàn)S型，具典型細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的特征。典型陰性結(jié)果生長(zhǎng)曲線平穩(wěn)，無(wú)明顯拐點(diǎn)。陽(yáng)性結(jié)果生長(zhǎng)曲線早期可能有輕微波動(dòng)或不明顯的遲緩期。后期有拐點(diǎn)。判定方法：在拐點(diǎn)處順著弧線的弧度畫(huà)圓，圓心在曲線上方為陽(yáng)性結(jié)果。陰性結(jié)果生長(zhǎng)曲線起始即連續(xù)上升呈現(xiàn)拋物線型，缺乏遲緩期，缺乏明顯