實(shí)驗(yàn)一大腸桿菌的培養(yǎng)和分離一、微生物1．概念：微生物是結(jié)構(gòu)簡單、形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物。2．利用：生產(chǎn)抗生素，制作發(fā)酵食品，治理環(huán)境污染等。二、培養(yǎng)基1．概念人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。2．營養(yǎng)構(gòu)成各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽及生長因子，此外還要滿足微生物生長對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。3．培養(yǎng)基的類型(1)按物理性質(zhì)分：固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基。(2)按目的用途分：鑒別培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基。4．微生物生長對(duì)特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求(1)細(xì)菌培養(yǎng)基要用蛋白胨和酵母菌提取物來配置，細(xì)菌喜葷。(2)霉菌培養(yǎng)基一般用無機(jī)物配制或加蔗糖的豆芽汁即可，霉菌喜素。5．微生物生長對(duì)pH的要求細(xì)菌要求在中性偏堿(6.5～7.5)的環(huán)境中生長；真菌要求在中性偏酸(5.0～6.0)的環(huán)境中生長。三、無菌技術(shù)1．獲取純凈培養(yǎng)物的方法獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，具體操作如下：(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。(3)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(4)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。2．消毒和滅菌(1)概念：[填表]項(xiàng)目方法結(jié)果常用的方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、過濾滅菌(2)常用方法：[連線]四、分離細(xì)菌的兩種方法比較項(xiàng)目劃線分離法涂布分離法工具接種環(huán)玻璃刮刀原理劃線過程中接種環(huán)上的菌液逐漸減少，到劃線最后部分細(xì)菌間距離加大，經(jīng)培養(yǎng)后能得到單菌落將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落特點(diǎn)方法簡單，但單菌落較難分開單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些目的使培養(yǎng)基上形成由單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體——菌落五、大腸桿菌的培養(yǎng)與分離1．大腸桿菌(1)特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌。(2)繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。2．?dāng)U大培養(yǎng)與分離擴(kuò)大培養(yǎng)用LB液體培養(yǎng)基，劃線分離用LB固體平面培養(yǎng)基。3．大腸桿菌分離過程(1)培養(yǎng)基滅菌：50mLLB液體培養(yǎng)基和50mLLB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿使用高壓蒸汽滅菌。(2)倒平板：將培養(yǎng)基分別倒入4個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面。(3)接種：在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，在每分鐘200轉(zhuǎn)的搖床上振蕩培養(yǎng)12h。(4)劃線分離：用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿。培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24h后，可看到在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落。(5)培養(yǎng)觀察：在無菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在空白斜面上，在37℃下培養(yǎng)24h后，置于4℃冰箱中保存。1．下列操作錯(cuò)誤的是()A．用酒精擦拭雙手B．用氯氣消毒水源C．實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行D．玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)用酒精擦拭滅菌解析：選D對(duì)玻璃器皿一般應(yīng)進(jìn)行干熱滅菌，而不是用酒精擦拭消毒。2．下列有關(guān)涂布分離法的敘述，錯(cuò)誤的是()A．首先將菌懸液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B．將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C．在適宜條件下培養(yǎng)D．都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落解析：選D涂布分離法是將菌懸液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)。只有在稀釋度足夠高的菌懸液里，聚集在一起的微生物才能被分散成單個(gè)細(xì)菌，從而在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。3．進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)為什么要將培養(yǎng)皿倒置？提示：恒溫培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中的水分會(huì)以水蒸氣的形式蒸發(fā)，倒放培養(yǎng)皿則會(huì)使水蒸氣凝結(jié)成的水滴在培養(yǎng)基表面更好地?fù)]發(fā)；如果正放，則水分形成的水滴會(huì)落入培養(yǎng)基表面并擴(kuò)散開。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則會(huì)導(dǎo)致菌隨水?dāng)U散，很難再分成單菌落，達(dá)不到分離目的。4．實(shí)驗(yàn)完成后，接種過細(xì)菌的器皿應(yīng)如何處理？提示：所有接觸過菌的器皿都要先高壓滅菌后再洗滌(特別是培養(yǎng)基)；使用后的廢棄物也要高壓滅菌后再拋棄。

1．LB培養(yǎng)基的分類及用途2．幾種常用滅菌和消毒方法的比較滅菌和消毒種類主要方法應(yīng)用范圍灼燒滅菌酒精燈火焰灼燒微生物接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具等，接種過程中的試管口或瓶口等干熱滅菌干熱滅菌箱在160～170℃加熱1～2h玻璃器皿(如吸管、培養(yǎng)皿等)、金屬用具等凡不適宜用其他方法滅菌而又能耐高溫的物品高壓蒸汽滅菌100kPa、121℃維持15～30min培養(yǎng)基及多種器材、物品玻璃砂漏斗過濾滅菌玻璃砂漏斗過濾含尿素或葡萄糖的培養(yǎng)基的滅菌煮沸消毒法100℃煮沸5～6min家庭餐具等生活用品的消毒紫外線消毒30W紫外燈照射30min接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)化學(xué)藥物消毒用體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的酒精、碘酒涂抹，來蘇爾噴灑等用于皮膚、傷口、動(dòng)植物組織表面消毒和空氣、手術(shù)器械、塑料或玻璃器皿等的消毒3．倒平板操作的注意事項(xiàng)(1)打開紫外燈和過濾風(fēng)，待LB固體培養(yǎng)基冷卻到60℃左右。(2)關(guān)閉紫外燈，點(diǎn)燃酒精燈，用酒精棉球擦拭桌面及雙手。(3)在火焰旁右手3指拿錐形瓶，2指拿封口膜。(4)使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰。(5)左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋。(6)待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。[題組沖關(guān)]1．大腸桿菌的培養(yǎng)和分離所用的培養(yǎng)基從物理性質(zhì)上分別屬于()A．液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基B．固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基C．液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基D．固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基解析：選A培養(yǎng)基從物理性質(zhì)上可分為固體、半固體和液體培養(yǎng)基。大腸桿菌的分離和培養(yǎng)分別用固體和液體培養(yǎng)基。2．下列對(duì)滅菌和消毒的理解，錯(cuò)誤的是()A．滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子B．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是完全相同的C．接種環(huán)用灼燒法滅菌D．常用滅菌方法有灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法解析：選B消毒是使用較為溫和的物理或化學(xué)方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物，不包括芽孢和孢子。滅菌則是使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。3．下列有關(guān)倒平板操作的敘述，錯(cuò)誤的是()A．將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上B．使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C．將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上D．平板冷卻凝固后需要倒過來放置解析：選C整個(gè)倒平板過程要防止外來雜菌的入侵，因此滅過菌的培養(yǎng)皿應(yīng)放在火焰旁，打開的錐形瓶瓶口應(yīng)迅速通過火焰，培養(yǎng)皿應(yīng)打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不能將培養(yǎng)皿蓋完全打開，平板冷卻凝固后需要倒過來放置。4．請(qǐng)回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題：(1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于________。(2)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4顯色劑瓊脂含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL該培養(yǎng)基屬于__________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基中的碳源是____________________。(3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行____________(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和__________?？諝庵械募?xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能____________________。(4)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入______________中滅菌，溫度為________，時(shí)間為__________。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時(shí)，將試管取出。如果棉塞上沾有培養(yǎng)基，此試管應(yīng)____________。(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)注意，先向鍋內(nèi)倒入________。把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后將鍋密閉。若在滅菌前，沒有排盡鍋內(nèi)的冷空氣會(huì)導(dǎo)致________________________________________________________________________。(6)從一支試管向另一支試管接種時(shí)注意，接種環(huán)要在酒精燈________(填“內(nèi)焰”或“外焰”)滅菌，并且待接種環(huán)______后蘸取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管在適宜溫度下培養(yǎng)，長成菌落后放入______冰箱中保存。解析：(1)大腸桿菌營腐生生活，從生態(tài)系統(tǒng)的成分來看，大腸桿菌屬于分解者。(2)表中的培養(yǎng)基配方中含有瓊脂，是固體培養(yǎng)基，其中能為大腸桿菌提供碳元素的物質(zhì)有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)微生物培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進(jìn)行滅菌，操作者的雙手要進(jìn)行清洗和消毒；紫外線殺菌的原理是紫外線不僅能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。(4)培養(yǎng)基及器材、物品的滅菌應(yīng)用高壓蒸汽滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃條件下，滅菌15～30min。若棉塞上沾有培養(yǎng)基，易被雜菌污染，應(yīng)廢棄。(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)要先加入適量水，否則沒有高壓蒸汽，還有可能損壞設(shè)備。(6)酒精燈外焰溫度高，滅菌效果好。灼燒后待冷卻后再蘸取菌種，否則會(huì)殺死菌種造成實(shí)驗(yàn)失敗。答案：(1)分解者(2)固體乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)(4)高壓蒸汽滅菌鍋121℃15～30min廢棄(5)適量水鍋內(nèi)溫度上升不到應(yīng)有度數(shù)，使滅菌不徹底(6)外焰冷卻4℃eq\a\vs4\al(核心要點(diǎn)二)eq\a\vs4\al(\b\lc\|\rc\(\a\vs4\al\co1(,,,,)))eq\a\vs4\al(大腸桿菌的培養(yǎng)和分離)1．平板劃線法的操作步驟2．涂布平板法的操作步驟(1)操作圖示：(2)相關(guān)說明：①將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101～106的順序編號(hào)。②用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水充分混勻。③從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)②步的混勻操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。[題組沖關(guān)]5．如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行C．只有在5區(qū)域中才有可能得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌解析：選D進(jìn)行平板劃線操作之前，要將接種環(huán)在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒滅菌；平板劃線操作應(yīng)在火焰旁進(jìn)行，不能在火焰上進(jìn)行；由題圖可知，5區(qū)域是最后一個(gè)區(qū)域，有可能在5區(qū)域獲得所需要的菌落，在4區(qū)域也有可能得到所需要的菌落。6．現(xiàn)有1L水樣，梯度稀釋至103倍。各取0.1mL已稀釋103倍的水樣分別接種到三個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57個(gè)，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為()A．560個(gè) B．5.6×105個(gè)C．5.6×107個(gè) D．5.6×108個(gè)解析：選D圖中稀釋的倍數(shù)是103，三個(gè)菌落的平均數(shù)＝(55＋56＋57)÷3＝56，則每毫升樣品中菌株數(shù)＝56÷0.1×103＝5.6×105個(gè)，所以每升土壤浸出液中的菌株數(shù)＝5.6×105×103＝5.6×108個(gè)。7．大腸桿菌是生活在人和高等動(dòng)物體內(nèi)的一種常見細(xì)菌，在飲用水的檢測(cè)中常用它作為水源是否受到污染的指示菌，在遺傳學(xué)上常作為實(shí)驗(yàn)材料，在基因工程中常用它作為受體細(xì)胞，為人類的健康和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展作出了許多貢獻(xiàn)。請(qǐng)回答下列有關(guān)大腸桿菌的問題：(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、易培養(yǎng)、____________等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。(2)分離大腸桿菌時(shí)常用的接種方法是____________法和____________法。前者操作簡單，后者_(dá)_______更易分開，但操作復(fù)雜些。(3)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，觀察________________________。(4)若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，下列對(duì)操作過程說法不妥的是()A．嚴(yán)格操作、多次重復(fù)B．保證待測(cè)樣品稀釋的濃度比較合適C．倒平板培養(yǎng)D．計(jì)數(shù)所有濃度梯度下的菌落，取其平均值(5)通常對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小、硬度和顏色等____________對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定(或分類)。(6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過________處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。解析：(1)大腸桿菌的培養(yǎng)除需要合適的營養(yǎng)條件外，還需要適宜的溫度、酸堿度(pH)和滲透壓。由于大腸桿菌變異類型容易選擇、繁殖速度快，常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。(2)分離微生物常用的接種方法有劃線分離法和涂布分離法。前者方法簡單，后者單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些。(3)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。若固體培養(yǎng)基被細(xì)菌污染，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，細(xì)菌會(huì)大量繁殖，形成菌落，可根據(jù)菌落數(shù)量的多少判斷污染程度。(4)若用涂布分離法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，應(yīng)該采用倒平板培養(yǎng)，并且嚴(yán)格操作、多次重復(fù)，保證待測(cè)樣品稀釋的濃度比較合適。(5)對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。(6)因?yàn)橛械拇竽c桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素，并可能導(dǎo)致腸道出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，所以使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。答案：(1)溫度酸堿度(pH)生活周期短(或繁殖快)(2)劃線分離涂布分離單菌落(3)培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(4)D(5)菌落特征(6)滅菌[隨堂基礎(chǔ)鞏固]1．下列關(guān)于培養(yǎng)基的說法，正確的是()A．任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水及生長因子B．培養(yǎng)基只有液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基D．配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例解析：選D不同微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，如自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要加碳源，自生固氮菌的培養(yǎng)基不需要加氮源。按不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基可有不同的種類。配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例。2．下列操作與消毒、滅菌無關(guān)的是()A．接種前用酒精燈火焰灼燒接種環(huán)B．接種前用酒精擦拭雙手C．將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D．接種在酒精燈的火焰旁完成解析：選C將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)與滅菌無關(guān)。3．采用干熱滅菌、灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線照射等幾種方法，可分別用于對(duì)哪些器物的滅菌()A．接種環(huán)、吸管、培養(yǎng)基、接種室B．培養(yǎng)皿、接種環(huán)、培養(yǎng)基、接種箱C．培養(yǎng)基、吸管、接種環(huán)、接種箱D．培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基、雙手解析：選B干熱滅菌是將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃加熱1～2h，適用于耐高溫且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等；灼燒滅菌是利用酒精燈火焰的充分燃燒層滅菌，如接種針、接種環(huán)等；高壓蒸汽滅菌用高壓蒸汽滅菌鍋，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min，主要用于培養(yǎng)基滅菌；紫外線照射適用于物體表面滅菌和空氣滅菌，如接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)等，使用前用紫外線照射約30min。4．將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱的目的是()A．對(duì)比觀察培養(yǎng)基的成分是否相同B．對(duì)比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染C．沒必要放入未接種的培養(yǎng)基D．為了下次接種時(shí)再使用解析：選B對(duì)未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，起到對(duì)照作用，可確定培養(yǎng)基是否被雜菌污染。5．下列有關(guān)平板劃線操作的描述，錯(cuò)誤的是()A．將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅B．接種環(huán)在平板上劃線的位置是隨機(jī)的C．在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰D．最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)相連解析：選B將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅；接種環(huán)在平板上劃線的位置不是隨機(jī)的；在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰；最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)相連。6．下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問題：(1)圖甲是利用____________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用____________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是____________和玻璃刮刀；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌的方法依次是__________和取出放在70%酒精中的玻璃刮刀引燃。(2)平板劃線時(shí)，為保證微生物的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐步減少，每次劃線都要從________________開始，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線________。(3)接種操作為什么一定要在酒精燈火焰附近進(jìn)行？________________________________________________________________________。(4)下圖是接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是______(填“圖甲”或“圖乙”)。(5)假設(shè)用圖乙所示方法接種培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)圖甲和圖乙分別是劃線分離法和涂布分離法進(jìn)行微生物接種，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和玻璃刮刀。(2)劃線分離時(shí)，每次劃線前都要從上一次劃線的末端開始，最后一次劃線不能與第一次劃線相連。(3)由于在酒精燈火焰附近存在著無菌區(qū)域，因此接種常在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(4)培養(yǎng)基上的菌落分布均勻，接種方法為涂布分離法。(5)采用涂布分離法進(jìn)行菌種分離時(shí)，稀釋度要足夠高，否則會(huì)使微生物不能分散成單個(gè)細(xì)胞。答案：(1)劃線分離涂布分離接種環(huán)灼燒滅菌(2)上一次劃線的末端相連(或相接、相交、交叉等)(3)火焰附近存在著無菌區(qū)域(4)圖乙(5)稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高課時(shí)跟蹤檢測(cè)]對(duì)應(yīng)配套卷P491．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)條件的敘述，錯(cuò)誤的是()A．分離微生物常用固體培養(yǎng)基，擴(kuò)大培養(yǎng)常用液體培養(yǎng)基B．“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”，培養(yǎng)基中成分的含量和配比因培養(yǎng)物而異C．培養(yǎng)基的滅菌均采用高壓蒸汽法D．制作固體培養(yǎng)基時(shí)常常加入瓊脂解析：選C培養(yǎng)基的滅菌通常是采用高壓蒸汽法，但因培養(yǎng)基的成分而異。如培養(yǎng)基中有葡萄糖，高壓蒸汽條件下會(huì)導(dǎo)致葡萄糖分解碳化，而采用500g/cm2壓力滅菌30min。2．獲得純凈培養(yǎng)物的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)是()A．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B．接種純種細(xì)菌C．適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D．防止外來雜菌的入侵解析：選D純凈培養(yǎng)物是單一、純種菌的菌落。因此，確保無其他雜菌的入侵是關(guān)鍵。3．金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒。下述有關(guān)接種金黃色葡萄球菌的實(shí)驗(yàn)敘述錯(cuò)誤的是()A．將灼燒的接種環(huán)伸入試管內(nèi)，先接觸長菌多的部位B．取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌C．對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理D．接種后還要將試管口滅菌加塞解析：選A接種環(huán)伸入試管后應(yīng)先接觸未長菌的部位，待接種環(huán)冷卻后再接觸長菌部位。4．下列劃線分離的圖解中，正確的是()解析：選C劃線分離的劃線有許多要求。A的劃線方法不對(duì)，而B錯(cuò)在劃線2的起點(diǎn)，D項(xiàng)錯(cuò)在4與1交叉了。5．要獲得遺傳特性單一的大腸桿菌菌種，一般必須對(duì)原有的大腸桿菌菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)、并利用純化技術(shù)得到單菌落。請(qǐng)回答下列有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)的相關(guān)問題：(1)對(duì)買回來的大腸桿菌菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，一般用LB培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中為微生物提供碳源、氮源和能源的物質(zhì)主要是____________________，為調(diào)節(jié)滲透壓，要加入一定量的__________。為進(jìn)行大腸桿菌的分離，還要加入瓊脂配制成固體培養(yǎng)基，并進(jìn)行倒平板的操作。(2)獲得純凈微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是____________________，為此，必須對(duì)培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格滅菌。培養(yǎng)器皿和培養(yǎng)基一般采用________法滅菌，接種環(huán)采用灼燒法滅菌。同時(shí)在接種或倒平板操作時(shí)，除了在超凈臺(tái)上進(jìn)行操作并對(duì)實(shí)驗(yàn)者的衣著、手和實(shí)驗(yàn)空間進(jìn)行嚴(yán)格清潔和消毒外，還必須_______________________________________以防止空氣中的雜菌污染。(3)大腸桿菌菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)一般采用液體培養(yǎng)基，接種后將培養(yǎng)基置于37℃搖床振蕩條件下培養(yǎng)12小時(shí)。菌種的分離一般在固體培養(yǎng)基上采用____________法，并將培養(yǎng)皿以______狀態(tài)放置于適宜溫度的恒溫箱中，培養(yǎng)12～24小時(shí)后，____________________，接種于固體斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，得到的純化菌種在________條件下保存。解析：(1)LB培養(yǎng)基的主要成分有蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水、瓊脂，其中蛋白胨和酵母提取物為微生物提供碳源、氮源和能源，氯化鈉可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，瓊脂作為凝固劑。(2)微生物純培養(yǎng)的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染，因此操作過程中要嚴(yán)格滅菌，培養(yǎng)器皿和培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，而接種時(shí)要在酒精燈火焰旁進(jìn)行。(3)大腸桿菌菌種分離采用劃線分離法，接種后將培養(yǎng)皿置于恒溫箱中倒置培養(yǎng)，以防培養(yǎng)過程中被污染；培養(yǎng)后菌種的保藏方法是：用接種環(huán)將單菌落挑出，接種于斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后置于4℃條件下保存。答案：(1)蛋白胨和酵母提取物氯化鈉(2)防止外來雜菌的侵入高壓蒸汽滅菌保證操作過程在酒精燈火焰旁進(jìn)行(3)劃線分離倒置將單菌落用接種環(huán)取出4℃6．大腸桿菌是生存在人體腸道中的正常菌群，每克糞便中含有109個(gè)，且能夠與致病菌混雜生長。如果食品和飲用水中出現(xiàn)大腸桿菌，就意味著食物可能被糞便污染而帶上致病菌，因而常將大腸桿菌的數(shù)量作為食品衛(wèi)生的檢測(cè)指標(biāo)之一。請(qǐng)據(jù)此回答下列問題：(1)測(cè)定街邊出售的奶茶中大腸桿菌的