密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的干預(yù)研究：基于臨床與實(shí)驗(yàn)的雙重剖析一、引言1.1研究背景與意義隨著生活方式的改變和人口老齡化的加劇，糖尿病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢(shì)。國(guó)際糖尿病聯(lián)盟（IDF）發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，2021年全球糖尿病患者人數(shù)已達(dá)5.37億，預(yù)計(jì)到2045年將增至7.83億。糖尿病視網(wǎng)膜病變（DiabeticRetinopathy，DR）作為糖尿病最為常見(jiàn)且嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，是工作年齡人群失明的主要原因，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。DR的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，涉及多元醇途徑激活、蛋白激酶C（PKC）通路異常、己糖胺途徑活化以及氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等多個(gè)方面。在眾多的發(fā)病機(jī)制中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VascularEndothelialGrowthFactor，VEGF）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被認(rèn)為在DR的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。高血糖狀態(tài)可誘導(dǎo)視網(wǎng)膜組織中VEGF表達(dá)上調(diào)，VEGF與其受體結(jié)合后，激活下游的一系列信號(hào)分子，導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，血管通透性增加，新生血管形成，進(jìn)而引發(fā)視網(wǎng)膜水腫、出血、滲出等病理改變，最終導(dǎo)致視力下降甚至失明?？筕EGF藥物的臨床應(yīng)用雖在一定程度上改善了DR患者的病情，但仍存在諸多局限性，如需要反復(fù)玻璃體腔注射給藥，可能引發(fā)眼內(nèi)感染、視網(wǎng)膜脫離等嚴(yán)重并發(fā)癥，且長(zhǎng)期使用還可能出現(xiàn)耐藥性和療效降低等問(wèn)題。中醫(yī)藥在防治DR方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，其整體觀念和辨證論治的理念能夠從多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)對(duì)疾病進(jìn)行綜合干預(yù)，且不良反應(yīng)較少，患者依從性較高。密蒙花方作為一種傳統(tǒng)的中藥復(fù)方，由密蒙花、黃芪、女貞子、黃連、肉桂等多味中藥組成。密蒙花，首載于《開(kāi)寶本草》，具有清熱瀉火、養(yǎng)肝明目、退翳等功效，現(xiàn)代研究表明其含有黃酮類、萜類、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分，具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等作用；黃芪補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，改善微循環(huán)；女貞子滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)，具有抗氧化、抗炎、降血脂等作用；黃連清熱燥濕、瀉火解毒，對(duì)多種炎癥因子具有抑制作用；肉桂補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛、溫通經(jīng)脈，可改善血液循環(huán)，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能。諸藥合用，共奏滋補(bǔ)肝腎、益氣養(yǎng)陰、清熱活血之功效。前期臨床研究表明，密蒙花方能夠有效改善非增殖期DR患者的中醫(yī)癥狀，降低血液黏度，提高視力，改善眼底病變及眼底熒光血管造影表現(xiàn)。然而，目前對(duì)于密蒙花方防治DR的作用機(jī)制研究尚不夠深入，尤其是其對(duì)VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響尚未完全明確。深入研究密蒙花方防治DR的VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，不僅有助于揭示其作用的科學(xué)內(nèi)涵，為其臨床應(yīng)用提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)，還可能為DR的防治開(kāi)辟新的思路和方法，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀1.2.1糖尿病視網(wǎng)膜病變的研究現(xiàn)狀糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）作為糖尿病常見(jiàn)且嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥，一直是國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)領(lǐng)域。近年來(lái)，隨著糖尿病發(fā)病率的持續(xù)攀升，DR的研究也取得了顯著進(jìn)展。在發(fā)病機(jī)制方面，國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量深入研究。高血糖被認(rèn)為是DR發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)因素，它可通過(guò)多種途徑導(dǎo)致視網(wǎng)膜微血管損傷。多元醇途徑激活使得細(xì)胞內(nèi)山梨醇堆積，引起細(xì)胞滲透壓改變，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、損傷；蛋白激酶C（PKC）通路異常激活，可促使血管收縮、通透性增加以及細(xì)胞增殖和凋亡失衡；己糖胺途徑活化則會(huì)干擾細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的糖基化修飾，影響細(xì)胞正常功能。氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在DR的發(fā)病過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用。高血糖狀態(tài)下，視網(wǎng)膜組織產(chǎn)生大量活性氧（ROS），超出機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的清除能力，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)而引發(fā)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)DR的發(fā)展。眾多細(xì)胞因子和信號(hào)通路參與其中，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、核因子-κB（NF-κB）等。其中，VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被廣泛認(rèn)為是DR發(fā)病機(jī)制中的核心環(huán)節(jié)之一。高血糖刺激可使視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞等多種細(xì)胞合成和分泌VEGF增加，VEGF與其受體結(jié)合后，激活下游的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號(hào)通路，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，血管通透性增加，新生血管形成。在診斷技術(shù)上，眼底檢查、眼底熒光素血管造影（FFA）、光學(xué)相干斷層掃描（OCT）等已成為DR診斷的常用方法。眼底檢查可直接觀察視網(wǎng)膜的形態(tài)學(xué)改變，如微血管瘤、出血、滲出等；FFA能夠清晰顯示視網(wǎng)膜血管的滲漏、無(wú)灌注區(qū)及新生血管等病變；OCT則可對(duì)視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)進(jìn)行高分辨率成像，檢測(cè)視網(wǎng)膜厚度、黃斑水腫等情況。近年來(lái)，基于人工智能的圖像識(shí)別技術(shù)在DR診斷中的應(yīng)用也取得了一定進(jìn)展，通過(guò)對(duì)眼底圖像的分析，能夠快速、準(zhǔn)確地判斷DR的病變程度，提高診斷效率和準(zhǔn)確性。在治療方面，嚴(yán)格控制血糖、血壓和血脂是DR治療的基礎(chǔ)。藥物治療包括改善微循環(huán)藥物、抗氧化劑、抗VEGF藥物等?？筕EGF藥物如雷珠單抗、阿柏西普等，通過(guò)抑制VEGF的生物學(xué)活性，減少新生血管形成，改善視網(wǎng)膜水腫，已成為增殖期DR和黃斑水腫的重要治療手段。激光光凝治療通過(guò)破壞視網(wǎng)膜缺氧區(qū)域，減少VEGF的產(chǎn)生，從而預(yù)防新生血管形成和發(fā)展，主要用于非增殖期DR和增殖期DR的治療。對(duì)于嚴(yán)重的DR，如玻璃體積血、牽拉性視網(wǎng)膜脫離等，則需要進(jìn)行玻璃體切除術(shù)。然而，這些治療方法都存在一定的局限性，如抗VEGF藥物需要反復(fù)玻璃體腔注射給藥，可能引發(fā)眼內(nèi)感染、視網(wǎng)膜脫離等嚴(yán)重并發(fā)癥，且長(zhǎng)期使用還可能出現(xiàn)耐藥性和療效降低等問(wèn)題；激光光凝治療可能會(huì)對(duì)視網(wǎng)膜造成一定的損傷，影響視功能。1.2.2密蒙花方防治糖尿病視網(wǎng)膜病變的研究現(xiàn)狀密蒙花方作為一種傳統(tǒng)的中藥復(fù)方，在防治DR方面具有一定的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)和研究?jī)r(jià)值。國(guó)內(nèi)對(duì)密蒙花方的研究主要集中在臨床觀察和初步的實(shí)驗(yàn)研究。臨床研究表明，密蒙花方能夠有效改善非增殖期DR患者的中醫(yī)癥狀，如視物模糊、目睛干澀、神疲乏力、咽干口燥等。嚴(yán)京等人的研究觀察了63例非增殖期DR患者，中藥密蒙花方組31例，對(duì)照羥苯磺酸鈣組32例，2組患者在均接受糖尿病藥物治療的情況下，服藥3個(gè)月，結(jié)果顯示密蒙花方組患者中醫(yī)癥狀改善以及穩(wěn)定無(wú)加重者明顯多于對(duì)照組（P＜0.01），總有效率為96.77％。服用密蒙花方患者血流變30/s切變率降低（P＜0.05），未見(jiàn)肝腎功能下降者，表明密蒙花方能夠降低非增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的血液黏度，改善患者全身及局部癥狀，且用藥安全有效。陳楊磊等人選取84例糖尿病視網(wǎng)膜病變患者，分為對(duì)照組和觀察組，對(duì)照組單純采用全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)進(jìn)行治療，觀察組采用全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方進(jìn)行治療，結(jié)果顯示觀察組患者的視力提高率顯著優(yōu)于對(duì)照組，分別為97.62％和73.81％，觀察組患者的眼底病變總有效率高于對(duì)照組，分別為97.62％和80.95％，觀察組患者的黃斑水腫厚度明顯低于對(duì)照組，均P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方的治療方法能夠顯著改善患者的視力，提高病變總有效率，降低黃斑水腫厚度。趙丹丹等人將確診為氣陰兩虛的單純型糖尿病視網(wǎng)膜病變患者63例（112只眼）隨機(jī)分為治療組及對(duì)照組，分別給予密蒙花方及羥苯磺酸鈣治療，連續(xù)用藥3個(gè)月，觀察治療前后FFA和視野MS、ERGOPs的變化，結(jié)果顯示治療組FFA表現(xiàn)改善優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.1）；治療組和對(duì)照組MS均提高（P＜0.05），但治療組優(yōu)于對(duì)照組；治療組OPs峰潛伏期縮短（P＜0.05），表明中藥密蒙花方可改善單純型糖尿病視網(wǎng)膜病變的眼底情況，提高視野MS，對(duì)ERGOPs也有一定的作用，使視網(wǎng)膜血流情況穩(wěn)定，是防治早期糖尿病視網(wǎng)膜病變的有效藥物。在實(shí)驗(yàn)研究方面，吳正正等人選用鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病大鼠作為動(dòng)物模型，以羥苯磺酸鈣膠囊作為陽(yáng)性對(duì)照藥，密蒙花方煎劑分為低、中、高三種不同濃度，糖尿病大鼠成模后分別以前述不同藥物灌胃4個(gè)月。研究結(jié)果表明，密蒙花方中劑量組體重高于DM模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；密蒙花方中、高劑量組空腹血糖較DM模型組降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；密蒙花方中、高劑量組糖化血紅蛋白較DM模型組降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；昊暢組及密蒙花方中、高劑量組全血黏度、血漿黏度均較DM模型組降低（P＜0.01）；密蒙花方各劑量組與DM模型組比較，血清TG、CHO均明顯降低（P＜0.01）；密蒙花方中劑量組可明顯改善視網(wǎng)膜病理形態(tài)學(xué)變化；密蒙花方中、高劑量組可明顯降低視網(wǎng)膜VEGF、Flt-1、Flk-1/KDR蛋白表達(dá)，抑制VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。1.2.3研究現(xiàn)狀總結(jié)與不足綜上所述，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)DR的發(fā)病機(jī)制、診斷技術(shù)和治療方法都進(jìn)行了廣泛而深入的研究，但仍存在一些問(wèn)題和挑戰(zhàn)。在發(fā)病機(jī)制方面，雖然對(duì)VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等關(guān)鍵環(huán)節(jié)有了較為深入的認(rèn)識(shí)，但DR的發(fā)病是一個(gè)多因素、多環(huán)節(jié)相互作用的復(fù)雜過(guò)程，仍有許多未知的機(jī)制和信號(hào)通路有待進(jìn)一步探索。在治療方面，現(xiàn)有的治療方法雖然在一定程度上能夠改善DR患者的病情，但都存在各自的局限性，難以從根本上治愈DR，且部分治療方法可能會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的并發(fā)癥，影響患者的生活質(zhì)量。對(duì)于密蒙花方防治DR的研究，雖然已有一些臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明其具有一定的療效和安全性，但研究還不夠深入和系統(tǒng)。目前的研究主要集中在觀察密蒙花方對(duì)DR患者臨床癥狀、血液流變學(xué)、眼底病變等方面的影響，對(duì)于其作用機(jī)制的研究還處于初步階段，尤其是對(duì)VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響尚未完全明確。在研究方法上，多數(shù)研究樣本量較小，缺乏大樣本、多中心、隨機(jī)對(duì)照的臨床研究；實(shí)驗(yàn)研究中對(duì)密蒙花方的有效成分、作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制的研究還不夠深入，缺乏分子生物學(xué)和基因?qū)用娴难芯?。因此，深入研究密蒙花方防治DR的VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，對(duì)于揭示其作用的科學(xué)內(nèi)涵，提高DR的防治水平具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.3研究目的與方法1.3.1研究目的本研究旨在深入探究密蒙花方防治糖尿病視網(wǎng)膜病變的VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，明確密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治作用，為其臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)和科學(xué)指導(dǎo)。具體研究目的如下：觀察密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型和臨床患者的防治效果：通過(guò)建立糖尿病視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型，觀察密蒙花方對(duì)動(dòng)物視網(wǎng)膜病理形態(tài)學(xué)、視網(wǎng)膜功能等方面的影響；同時(shí)，開(kāi)展臨床研究，觀察密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變患者視力、眼底病變、血液流變學(xué)等指標(biāo)的改善情況，全面評(píng)估密蒙花方的防治效果。探討密蒙花方對(duì)VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響：從分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)層面，研究密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型和細(xì)胞模型中VEGF及其受體表達(dá)、VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵分子的磷酸化水平以及相關(guān)下游基因和蛋白表達(dá)的影響，揭示密蒙花方調(diào)控VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用機(jī)制。明確密蒙花方的有效成分及作用靶點(diǎn)：運(yùn)用現(xiàn)代分離分析技術(shù)，對(duì)密蒙花方中的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，結(jié)合體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，篩選出對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變具有防治作用的有效成分，并進(jìn)一步確定其作用靶點(diǎn)，為密蒙花方的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制依據(jù)。1.3.2研究方法為實(shí)現(xiàn)上述研究目的，本研究將綜合運(yùn)用文獻(xiàn)研究、實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究等多種方法，從不同角度深入探討密蒙花方防治糖尿病視網(wǎng)膜病變的VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。文獻(xiàn)研究法：系統(tǒng)檢索國(guó)內(nèi)外關(guān)于糖尿病視網(wǎng)膜病變、密蒙花方以及VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相關(guān)文獻(xiàn)，包括學(xué)術(shù)期刊論文、學(xué)位論文、研究報(bào)告、臨床指南等，全面了解該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)，分析現(xiàn)有研究的優(yōu)勢(shì)和不足，為本研究提供理論基礎(chǔ)和研究思路。通過(guò)對(duì)文獻(xiàn)的整理和歸納，總結(jié)糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制、診斷方法、治療手段以及密蒙花方的臨床應(yīng)用和研究進(jìn)展，明確本研究的切入點(diǎn)和重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容。同時(shí)，借鑒相關(guān)研究的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)手段，為實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究的設(shè)計(jì)提供參考。實(shí)驗(yàn)研究法：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：選用鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病大鼠作為動(dòng)物模型，將動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組、糖尿病模型組、密蒙花方低劑量組、密蒙花方中劑量組、密蒙花方高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組（如羥苯磺酸鈣組）。在造模成功后，各給藥組給予相應(yīng)藥物灌胃，正常對(duì)照組和糖尿病模型組給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥一定時(shí)間。定期觀察動(dòng)物的一般狀況，包括飲食、尿量、體重變化等；檢測(cè)血液指標(biāo)，如血糖、糖化血紅蛋白、血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)等；采用眼底照相、眼底熒光血管造影、光學(xué)相干斷層掃描等技術(shù)觀察視網(wǎng)膜病變情況；通過(guò)組織病理學(xué)檢查，觀察視網(wǎng)膜的病理形態(tài)學(xué)變化；運(yùn)用免疫組織化學(xué)、Westernblot、RT-PCR等方法檢測(cè)視網(wǎng)膜中VEGF及其受體、VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)分子以及其他與糖尿病視網(wǎng)膜病變相關(guān)的基因和蛋白的表達(dá)水平，從整體動(dòng)物水平探討密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治作用及對(duì)VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：選用視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞等作為研究對(duì)象，建立高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷模型。將細(xì)胞分為正常對(duì)照組、高糖模型組、密蒙花方不同濃度組和陽(yáng)性對(duì)照組。在高糖培養(yǎng)條件下，給予密蒙花方含藥血清或提取物處理，觀察細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡情況；采用ELISA、免疫熒光、Westernblot、RT-PCR等方法檢測(cè)細(xì)胞中VEGF及其受體、VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)分子以及炎癥因子、氧化應(yīng)激指標(biāo)等的表達(dá)水平，從細(xì)胞水平深入研究密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治作用機(jī)制，明確其對(duì)VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控作用以及與炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等的關(guān)系。臨床研究法：采用隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病視網(wǎng)膜病變患者，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組。對(duì)照組給予常規(guī)西醫(yī)治療，治療組在常規(guī)西醫(yī)治療的基礎(chǔ)上給予密蒙花方治療，連續(xù)治療一定療程。在治療前后，分別對(duì)患者進(jìn)行視力檢查、眼底檢查、眼底熒光血管造影、光學(xué)相干斷層掃描等，評(píng)估眼底病變的改善情況；檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)、血清VEGF水平以及其他相關(guān)指標(biāo)，觀察密蒙花方對(duì)患者全身和眼部癥狀、視網(wǎng)膜功能以及VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)指標(biāo)的影響。通過(guò)臨床研究，進(jìn)一步驗(yàn)證密蒙花方在人體中的防治效果和作用機(jī)制，為其臨床推廣應(yīng)用提供有力的證據(jù)。二、糖尿病視網(wǎng)膜病變與VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制概述2.1糖尿病視網(wǎng)膜病變的概述2.1.1定義與分類糖尿病視網(wǎng)膜病變（DiabeticRetinopathy，DR）是糖尿病最為常見(jiàn)且嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，是由于糖尿病引起的視網(wǎng)膜微血管損害所導(dǎo)致的一系列典型病變。長(zhǎng)期的高血糖狀態(tài)會(huì)引發(fā)視網(wǎng)膜微血管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能異常，導(dǎo)致視網(wǎng)膜缺血、缺氧，進(jìn)而引發(fā)一系列病理改變，如微動(dòng)脈瘤形成、視網(wǎng)膜內(nèi)出血、滲出、水腫以及新生血管形成等，這些病變會(huì)嚴(yán)重影響視網(wǎng)膜的正常功能，最終導(dǎo)致視力下降甚至失明。根據(jù)病變的嚴(yán)重程度和是否出現(xiàn)視網(wǎng)膜新生血管，DR可分為非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變（Non-proliferativeDiabeticRetinopathy，NPDR）和增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變（ProliferativeDiabeticRetinopathy，PDR）。非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變是DR的早期階段，主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜微血管的病變，如微動(dòng)脈瘤、出血點(diǎn)、硬性滲出和軟性滲出等。微動(dòng)脈瘤是DR最早出現(xiàn)的特征性病變，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜上的小紅點(diǎn)，是由于視網(wǎng)膜毛細(xì)血管壁的局部擴(kuò)張和變薄形成的；出血點(diǎn)則是由于微血管破裂導(dǎo)致的，可呈點(diǎn)狀、片狀或火焰狀；硬性滲出是由于血管通透性增加，血漿中的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)滲出到視網(wǎng)膜組織中形成的黃白色斑塊，通常位于視網(wǎng)膜的后極部；軟性滲出又稱為棉絨斑，是由于視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層的缺血性梗死導(dǎo)致的灰白色斑塊。根據(jù)病變的程度，NPDR又可進(jìn)一步分為輕度、中度和重度三個(gè)階段。輕度NPDR主要表現(xiàn)為少量的微動(dòng)脈瘤和出血點(diǎn)；中度NPDR則在輕度的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)更多的出血點(diǎn)、硬性滲出和軟性滲出；重度NPDR時(shí)，病變范圍更廣，出血點(diǎn)和滲出增多，還可能出現(xiàn)視網(wǎng)膜內(nèi)微血管異常（IntraretinalMicrovascularAbnormalities，IRMA）等。增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變是DR的晚期階段，其特征是視網(wǎng)膜新生血管的形成。由于視網(wǎng)膜長(zhǎng)期缺血、缺氧，會(huì)刺激血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成因子的表達(dá)增加，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜新生血管的形成。這些新生血管通常生長(zhǎng)在視網(wǎng)膜表面或玻璃體腔內(nèi)，結(jié)構(gòu)脆弱，容易破裂出血，引起玻璃體積血，導(dǎo)致視力急劇下降。隨著病情的發(fā)展，新生血管周圍會(huì)形成纖維組織增生，這些纖維組織收縮會(huì)牽拉視網(wǎng)膜，導(dǎo)致?tīng)坷砸暰W(wǎng)膜脫離，最終導(dǎo)致失明。除了新生血管形成和纖維組織增生外，PDR還可能伴有虹膜新生血管、新生血管性青光眼等嚴(yán)重并發(fā)癥。2.1.2流行病學(xué)特征糖尿病視網(wǎng)膜病變的患病率和發(fā)病率在全球范圍內(nèi)都呈現(xiàn)出較高的水平，且隨著糖尿病患者數(shù)量的增加而不斷上升。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的數(shù)據(jù)，全球糖尿病患者人數(shù)已超過(guò)4億，預(yù)計(jì)到2045年將達(dá)到6.29億。DR作為糖尿病最常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥之一，在糖尿病患者中的患病率也相當(dāng)可觀。國(guó)際糖尿病聯(lián)盟（IDF）發(fā)布的報(bào)告顯示，全球糖尿病患者中DR的患病率約為34.6%，其中威脅視力的DR患病率約為10.2%。不同地區(qū)和人群中DR的患病率和發(fā)病率存在一定的差異。一般來(lái)說(shuō)，發(fā)達(dá)國(guó)家的DR患病率相對(duì)較高，如美國(guó)糖尿病患者中DR的患病率約為28.5%，而在發(fā)展中國(guó)家，DR的患病率也在逐漸上升。在中國(guó)，隨著糖尿病發(fā)病率的不斷增加，DR的患病率也呈上升趨勢(shì)。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，我國(guó)糖尿病患者中DR的患病率為24.7%-37.5%，其中增殖期視網(wǎng)膜病變比例在3.3%-7.4%。在不同種族和民族中，DR的患病率也有所不同。例如，美國(guó)的非洲裔和拉丁裔糖尿病患者中DR的患病率高于白人。糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生與多種因素有關(guān)，其中糖尿病的病程、血糖控制水平、血壓、血脂等是主要的影響因素。糖尿病病程越長(zhǎng)，DR的患病率越高。1型糖尿病患者病程5年時(shí)，大約25%出現(xiàn)視網(wǎng)膜病變，超過(guò)10年，60%患者有視網(wǎng)膜病變，15年后幾乎80%患者都有視網(wǎng)膜病變；2型糖尿病患者在病程較短時(shí)也可能出現(xiàn)DR，30歲左右、病程不足5年的2型糖尿病患者，注射胰島素的約40%，未開(kāi)始注射胰島素的約24%有視網(wǎng)膜病變，當(dāng)糖尿病持續(xù)到19年時(shí)，兩者的發(fā)生率達(dá)到84%和53%。血糖控制不佳是DR發(fā)生發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素，高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、缺氧，從而促進(jìn)DR的發(fā)生。此外，高血壓、高血脂也會(huì)增加DR的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，高血壓可加重視網(wǎng)膜血管的損傷，高血脂則可導(dǎo)致脂質(zhì)在血管壁沉積，影響血管的正常功能。年齡、肥胖、遺傳因素等也與DR的發(fā)生有關(guān)，年齡較大、肥胖的糖尿病患者更容易發(fā)生DR，遺傳因素可能影響個(gè)體對(duì)DR的易感性。2.1.3危害及對(duì)患者生活質(zhì)量的影響糖尿病視網(wǎng)膜病變對(duì)患者的視力和生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重的危害。在DR的早期，患者可能沒(méi)有明顯的癥狀，或者僅表現(xiàn)為視力輕度下降、視物模糊等，但隨著病情的進(jìn)展，視力下降會(huì)逐漸加重，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致失明。據(jù)統(tǒng)計(jì)，DR是工作年齡人群失明的主要原因之一，給患者的生活和工作帶來(lái)了極大的困擾。除了視力下降和失明外，DR還會(huì)對(duì)患者的日常生活產(chǎn)生諸多影響。視力受損會(huì)導(dǎo)致患者在日常生活中的活動(dòng)受到限制，如行走、閱讀、駕駛等，增加了發(fā)生意外事故的風(fēng)險(xiǎn)?；颊呖赡苄枰说膸椭拍芡瓿扇粘Ｉ钪械幕救蝿?wù)，這不僅降低了患者的生活自理能力，也給家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。DR還會(huì)對(duì)患者的心理健康產(chǎn)生負(fù)面影響，患者可能會(huì)因?yàn)橐暳ο陆岛蜕畈槐愣霈F(xiàn)焦慮、抑郁等情緒問(wèn)題，影響患者的心理健康和生活質(zhì)量。從社會(huì)經(jīng)濟(jì)角度來(lái)看，DR也給社會(huì)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。治療DR需要耗費(fèi)大量的醫(yī)療資源，包括藥物治療、激光治療、手術(shù)治療等，這不僅增加了患者的醫(yī)療費(fèi)用支出，也給醫(yī)保系統(tǒng)帶來(lái)了壓力。此外，由于患者視力下降或失明，可能會(huì)導(dǎo)致工作能力下降或喪失，影響患者的經(jīng)濟(jì)收入，進(jìn)而對(duì)家庭和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展產(chǎn)生不利影響。因此，積極預(yù)防和治療DR，對(duì)于降低患者的失明風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生活質(zhì)量，減輕家庭和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)具有重要意義。2.2VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的作用2.2.1VEGF及其受體的結(jié)構(gòu)與功能血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是一個(gè)結(jié)構(gòu)相似的生長(zhǎng)因子家族，其成員目前包括VEGF-A（即通常所謂的VEGF）、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及胎盤生長(zhǎng)因子（PIGF）。它們都是同源二聚體糖蛋白，具有相似的空間結(jié)構(gòu)，晶體結(jié)構(gòu)和突變分析表明，折疊的VEGF雙體分子的末端構(gòu)成與受體結(jié)合的部位。人VEGF基因定位于染色體6p21.3，為單一基因，全長(zhǎng)14kb，由8個(gè)外顯子、7個(gè)內(nèi)顯子組成，編碼產(chǎn)物為34-45kD的同源二聚體糖蛋白。VEGF經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄水平的剪切，可產(chǎn)生5種異構(gòu)體，根據(jù)氨基酸的長(zhǎng)短依次命名為VEGF145，VEGF165，VEGF121，VEGF189和VEGF206。其中VEGF121是一種弱酸性多肽，不與肝素結(jié)合；VEGF165是堿性蛋白，與肝素的親和力低，二者是以可溶性、自由擴(kuò)散的形式被分泌的，易于到達(dá)靶細(xì)胞；而VEGF145，VEGF165和VEGF206則與肝素具有很高的親和力，分泌后結(jié)合于細(xì)胞表面或細(xì)胞基質(zhì)中，屬于細(xì)胞相關(guān)性異構(gòu)體。VEGF通過(guò)與特異性受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，目前發(fā)現(xiàn)的VEGF受體有5種：VEGFR1（Flt1），VEGFR2（KDR/Klk1），VEGFR3（Flt4），NP1和NP2。Flt1，KDR，F(xiàn)lt4均是受體酪氨酸蛋白激酶（receptortyrcsinekinase，PTK），前兩者主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，后者主要存在于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞。NP1和NP2為非酪氨酸蛋白激酶跨膜受體，含有長(zhǎng)的胞外段和短的胞內(nèi)段，不僅在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，在某些腫瘤細(xì)胞內(nèi)也有表達(dá)。VEGFR1和VEGFR2是與糖尿病視網(wǎng)膜病變關(guān)系最為密切的兩種受體。VEGFR1和VEGFR2的胞外區(qū)都含有7個(gè)免疫球蛋白（Ig）樣結(jié)構(gòu)域，負(fù)責(zé)與VEGF結(jié)合，胞內(nèi)區(qū)含有酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域（KD），但被一段插入序列（KI）所間隔。當(dāng)VEGF與受體結(jié)合后，受體發(fā)生二聚化，激活胞內(nèi)的酪氨酸激酶活性，使受體自身的酪氨酸殘基磷酸化，從而激活下游的信號(hào)分子，引發(fā)一系列生物學(xué)效應(yīng)。VEGF及其受體在血管生成、內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和存活等方面發(fā)揮著重要作用。VEGF是內(nèi)皮細(xì)胞選擇性有絲分裂原，除能增加內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)Ca2+的濃度及使微血管（主要是毛細(xì)血管后靜脈及小靜脈）對(duì)大分子物質(zhì)的通透性增高外，尚能從多種途徑使內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)呈細(xì)長(zhǎng)狀并刺激其復(fù)制，刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)入內(nèi)皮細(xì)胞，促使內(nèi)皮細(xì)胞、鼠單核細(xì)胞和胎牛成骨細(xì)胞移位，能改變內(nèi)皮細(xì)胞基因激活的模式，上調(diào)纖維蛋白溶解酶原激活劑（包括尿激酶型及組織型）及其抑制劑PAI-I的表達(dá)，誘導(dǎo)其他內(nèi)皮細(xì)胞蛋白酶、間質(zhì)膠原酶和組織因子的表達(dá)。在血管生成過(guò)程中，VEGF首先與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR2結(jié)合，激活下游的信號(hào)通路，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，最終形成新的血管網(wǎng)絡(luò)。VEGFR1雖然也能與VEGF結(jié)合，但其酪氨酸激酶活性較低，主要通過(guò)與VEGFR2競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合VEGF，調(diào)節(jié)VEGF的生物學(xué)效應(yīng)。此外，VEGF還能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，增強(qiáng)細(xì)胞之間的連接，促進(jìn)遷移；通過(guò)激活細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK），促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入S期，并啟動(dòng)DNA復(fù)制，從而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖；通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，促進(jìn)其存活。2.2.2VEGF信號(hào)通路的激活過(guò)程在正常生理狀態(tài)下，視網(wǎng)膜組織中VEGF的表達(dá)水平較低，VEGF信號(hào)通路處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)。然而，在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，多種因素可導(dǎo)致VEGF信號(hào)通路的激活。高血糖是糖尿病視網(wǎng)膜病變的主要危險(xiǎn)因素之一，長(zhǎng)期的高血糖狀態(tài)可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)VEGF表達(dá)上調(diào)。高血糖可使視網(wǎng)膜組織中的葡萄糖代謝異常，多元醇途徑激活，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)山梨醇堆積，引起細(xì)胞滲透壓改變，進(jìn)而激活蛋白激酶C（PKC）通路，PKC可磷酸化一系列轉(zhuǎn)錄因子，如核因子-κB（NF-κB）等，促進(jìn)VEGF基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。高血糖還可導(dǎo)致氧化應(yīng)激增加，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），ROS可激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路，促進(jìn)VEGF的表達(dá)。視網(wǎng)膜缺氧也是激活VEGF信號(hào)通路的重要因素。在糖尿病狀態(tài)下，視網(wǎng)膜微血管病變導(dǎo)致血管狹窄、閉塞，引起視網(wǎng)膜局部缺血、缺氧。缺氧可誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的表達(dá)和穩(wěn)定，HIF-1α是一種轉(zhuǎn)錄因子，可與VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)域的缺氧反應(yīng)元件（HRE）結(jié)合，促進(jìn)VEGF的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。此外，缺氧還可通過(guò)激活其他信號(hào)通路，如PI3K/Akt通路等，間接促進(jìn)VEGF的表達(dá)。當(dāng)VEGF表達(dá)上調(diào)后，它與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR1和VEGFR2結(jié)合，啟動(dòng)VEGF信號(hào)通路的激活過(guò)程。以VEGFR2為例，VEGF與VEGFR2結(jié)合后，導(dǎo)致VEGFR2發(fā)生二聚體化，受體胞內(nèi)段的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域被激活，使受體自身的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化。這些磷酸化的酪氨酸殘基為下游信號(hào)分子提供了結(jié)合位點(diǎn)，從而招募并激活一系列下游信號(hào)分子，如磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等。PI3K被激活后，可將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）磷酸化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3可招募Akt到細(xì)胞膜上，并在3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1（PDK1）和mTORC2的作用下，使Akt發(fā)生磷酸化而激活。激活的Akt可通過(guò)多種途徑發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，如磷酸化下游的Bad和Caspase9，抑制它們的活性，從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，促進(jìn)其存活；激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS），產(chǎn)生一氧化氮（NO），調(diào)節(jié)血管舒張和血管生成；激活mTOR，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞增殖。MAPK通路主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等。VEGF與VEGFR2結(jié)合后，可通過(guò)激活Ras蛋白，進(jìn)而激活Raf-MEK-ERK信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使ERK發(fā)生磷酸化而激活。激活的ERK可轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核內(nèi)，磷酸化一系列轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos等，調(diào)節(jié)與細(xì)胞增殖、分化和存活相關(guān)基因的表達(dá)。JNK和p38MAPK也可被VEGF激活，它們參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)和凋亡等過(guò)程。2.2.3VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展的關(guān)系VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常激活在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，貫穿于糖尿病視網(wǎng)膜病變的各個(gè)階段。在糖尿病視網(wǎng)膜病變的早期，即非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變階段，高血糖、缺氧等因素導(dǎo)致VEGF表達(dá)上調(diào)，激活VEGF信號(hào)通路。VEGF與VEGFR2結(jié)合后，使血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性增加。這是因?yàn)閂EGF激活內(nèi)皮細(xì)胞的酪氨酸激酶受體，導(dǎo)致細(xì)胞骨架重組，增加內(nèi)皮細(xì)胞間隙，使得液體和蛋白等物質(zhì)更容易從血管內(nèi)滲出到視網(wǎng)膜組織中，引起視網(wǎng)膜水腫。VEGF還刺激內(nèi)皮細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，進(jìn)一步增加血管通透性，促進(jìn)炎癥反應(yīng)。此外，VEGF信號(hào)通路的激活還可導(dǎo)致視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞的丟失。周細(xì)胞是維持血管穩(wěn)定性和調(diào)節(jié)血管功能的重要細(xì)胞，周細(xì)胞的丟失會(huì)破壞血管壁的結(jié)構(gòu)和功能，使血管更容易受到損傷，進(jìn)一步加重視網(wǎng)膜微血管病變。隨著病情的進(jìn)展，進(jìn)入增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變階段，VEGF信號(hào)通路的持續(xù)激活促使視網(wǎng)膜新生血管形成。VEGF作為一種強(qiáng)有力的血管生成因子，通過(guò)激活下游信號(hào)分子，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成。在這個(gè)過(guò)程中，VEGF信號(hào)通路激活細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK），促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入S期，并啟動(dòng)DNA復(fù)制，從而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖。VEGF還作為一種趨化因子，吸引內(nèi)皮細(xì)胞向血管生成區(qū)域遷移。同時(shí)，VEGF促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，增強(qiáng)細(xì)胞之間的連接，促進(jìn)遷移。這些新生血管結(jié)構(gòu)脆弱，容易破裂出血，導(dǎo)致玻璃體積血，嚴(yán)重影響視力。此外，新生血管周圍會(huì)形成纖維組織增生，纖維組織收縮會(huì)牽拉視網(wǎng)膜，導(dǎo)致?tīng)坷砸暰W(wǎng)膜脫離，最終導(dǎo)致失明。VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常激活還與糖尿病視網(wǎng)膜病變的其他病理過(guò)程密切相關(guān)。VEGF可促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和炎癥介質(zhì)的釋放，加劇視網(wǎng)膜的炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)展中起著重要作用，它不僅直接損傷視網(wǎng)膜細(xì)胞，還能進(jìn)一步上調(diào)VEGF的表達(dá)，形成惡性循環(huán)。VEGF信號(hào)通路的激活還與氧化應(yīng)激相互作用，高血糖導(dǎo)致的氧化應(yīng)激可促進(jìn)VEGF的表達(dá)，而VEGF信號(hào)通路的激活又可加重氧化應(yīng)激，進(jìn)一步損傷視網(wǎng)膜組織。三、密蒙花方的研究基礎(chǔ)3.1密蒙花方的組成及傳統(tǒng)功效密蒙花方是一種精心配伍的中藥復(fù)方，其藥物組成蘊(yùn)含著中醫(yī)智慧的精妙組合，主要由密蒙花、黃芪、女貞子、黃連、肉桂等多味中藥構(gòu)成。各味藥材在方中發(fā)揮著獨(dú)特的作用，相互協(xié)同，共同達(dá)成防治疾病的功效。密蒙花作為方中的主藥，首載于《開(kāi)寶本草》，性味甘、微寒，歸肝經(jīng)。其具有清熱瀉火、養(yǎng)肝明目、退翳的卓越功效。在古代醫(yī)籍中，密蒙花就被廣泛應(yīng)用于眼科疾病的治療?！侗静萁?jīng)疏》中記載：“密蒙花，觀《本經(jīng)》所主，無(wú)非肝虛有熱所致，蓋肝開(kāi)竅于目，目得血而能視，肝血虛，則為青盲膚翳，肝熱甚，則為赤腫，眵淚赤脈，及小兒豆瘡余毒，疳氣攻眼。此藥甘以補(bǔ)血，寒以除熱，肝血足而諸證無(wú)不愈矣?！背浞株U述了密蒙花對(duì)于肝虛有熱引起的眼部疾病的治療作用?，F(xiàn)代研究表明，密蒙花含有黃酮類、萜類、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分。其中，黃酮類化合物如蒙花苷、刺槐素等是其主要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用。這些成分能夠減輕眼部炎癥反應(yīng)，清除自由基，保護(hù)視網(wǎng)膜細(xì)胞，從而有效改善視力，對(duì)目赤腫痛、羞明多淚、眼生翳膜、視物昏花等眼部癥狀具有顯著的治療效果。黃芪，味甘，性微溫，歸脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血、行滯通痹、托毒排膿、斂瘡生肌等功效。在密蒙花方中，黃芪主要發(fā)揮補(bǔ)氣升陽(yáng)的作用，可增強(qiáng)機(jī)體的正氣，提高免疫力，同時(shí)還能促進(jìn)氣血運(yùn)行，改善眼部的血液循環(huán)，為視網(wǎng)膜組織提供充足的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)。《本草匯言》稱黃芪為“補(bǔ)肺健脾，實(shí)衛(wèi)斂汗，驅(qū)風(fēng)運(yùn)毒之藥也”，強(qiáng)調(diào)了其在補(bǔ)氣扶正方面的重要作用。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪含有黃芪多糖、黃芪皂苷、黃酮類等多種有效成分。黃芪多糖能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高機(jī)體的抗病能力；黃芪皂苷具有改善微循環(huán)、抗氧化、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用，可有效改善糖尿病患者的血液流變學(xué)指標(biāo)，減少微血管病變的發(fā)生，從而對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變起到一定的防治作用。女貞子，性味甘、苦，涼，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)的功效。在密蒙花方中，女貞子主要用于滋補(bǔ)肝腎之陰，以滋養(yǎng)肝血，使目得血而能視?！侗静菥V目》記載：“女貞實(shí)乃上品無(wú)毒妙藥，其性涼，味甘、苦，能強(qiáng)腰膝，壯筋骨，滋腎水，明耳目，烏須發(fā)?！爆F(xiàn)代研究表明，女貞子富含齊墩果酸、熊果酸、女貞子多糖等化學(xué)成分。這些成分具有抗氧化、抗炎、降血脂、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用。女貞子能夠提高機(jī)體的抗氧化能力，減少自由基對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞的損傷，同時(shí)還能調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血液黏稠度，改善眼部微循環(huán)，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治具有積極意義。黃連，味苦，性寒，歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效。在密蒙花方中，黃連主要用于清熱瀉火，以清除體內(nèi)的熱毒，減輕炎癥反應(yīng)。黃連中含有黃連素、黃連堿、巴馬汀等多種生物堿，其中黃連素是其主要的活性成分。黃連素具有顯著的抗炎、抗菌、抗氧化、降血糖等作用。研究表明，黃連素能夠抑制炎癥因子的釋放，減輕視網(wǎng)膜的炎癥反應(yīng)，同時(shí)還能調(diào)節(jié)血糖水平，改善糖尿病患者的代謝紊亂，從而對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變起到防治作用。肉桂，味辛、甘，性大熱，歸腎、脾、心、肝經(jīng)，具有補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛、溫通經(jīng)脈、引火歸元的功效。在密蒙花方中，肉桂主要發(fā)揮溫通經(jīng)脈的作用，可促進(jìn)血液循環(huán)，改善眼部的血液供應(yīng)，同時(shí)還能引火歸元，防止黃連等清熱藥物過(guò)于寒涼損傷陽(yáng)氣。《本草求真》中記載：“肉桂，氣味甘辛，其色紫赤，有鼓舞血?dú)庵?，性體純陽(yáng)，有招導(dǎo)引誘之力?！爆F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，肉桂含有桂皮醛、桂皮酸等多種化學(xué)成分。桂皮醛具有擴(kuò)張血管、改善血液循環(huán)、抗炎、抗氧化等作用，可有效改善視網(wǎng)膜的血液灌注，減輕視網(wǎng)膜缺血缺氧狀態(tài)，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治具有重要作用。密蒙花方中的各味中藥相互配伍，協(xié)同發(fā)揮作用，共奏滋補(bǔ)肝腎、益氣養(yǎng)陰、清熱活血之功效。該方以滋補(bǔ)肝腎之女貞子、密蒙花為基礎(chǔ)，滋養(yǎng)肝血，明目退翳；輔以黃芪補(bǔ)氣升陽(yáng)，推動(dòng)氣血運(yùn)行；黃連清熱燥濕，瀉火解毒，清除體內(nèi)熱毒；肉桂溫通經(jīng)脈，引火歸元，與黃連相伍，寒溫并用，既清熱又不傷陽(yáng)。全方標(biāo)本兼治，從多個(gè)方面對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變進(jìn)行綜合干預(yù)，體現(xiàn)了中醫(yī)整體觀念和辨證論治的特色。3.2密蒙花方的現(xiàn)代藥理學(xué)研究進(jìn)展近年來(lái)，隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，密蒙花方的現(xiàn)代藥理學(xué)研究取得了一系列重要進(jìn)展，為其臨床應(yīng)用提供了堅(jiān)實(shí)的科學(xué)依據(jù)。研究表明，密蒙花方在抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)血糖血脂等多個(gè)方面展現(xiàn)出顯著的作用，同時(shí)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜細(xì)胞也具有良好的保護(hù)作用。在抗氧化方面，密蒙花方中的多種成分都具有抗氧化活性。密蒙花中富含的黃酮類化合物，如蒙花苷、刺槐素等，能夠有效清除體內(nèi)的自由基，降低氧化應(yīng)激反應(yīng)。研究表明，蒙花苷可以顯著提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，降低丙二醛（MDA）的含量，從而減輕氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。黃芪中的黃芪多糖、黃酮類等成分也具有較強(qiáng)的抗氧化能力，能夠清除自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。女貞子中的齊墩果酸、熊果酸等成分同樣具有抗氧化作用，可提高機(jī)體的抗氧化防御能力，減少自由基對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞的損害。這些抗氧化成分相互協(xié)同，使密蒙花方能夠有效對(duì)抗糖尿病視網(wǎng)膜病變中由于高血糖等因素導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷，保護(hù)視網(wǎng)膜組織免受氧化損傷。密蒙花方還具有顯著的抗炎作用。炎癥反應(yīng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，密蒙花方可以通過(guò)抑制炎癥因子的釋放和炎癥信號(hào)通路的激活來(lái)減輕炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，密蒙花中的黃酮類化合物能夠抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥因子的表達(dá)，從而減輕炎癥反應(yīng)對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞的損傷。黃連中的黃連素具有抗炎作用，能夠抑制核因子-κB（NF-κB）等炎癥信號(hào)通路的激活，減少炎癥介質(zhì)的釋放，緩解視網(wǎng)膜的炎癥狀態(tài)。黃芪、女貞子等藥材中的活性成分也具有一定的抗炎作用，它們共同作用，使密蒙花方能夠有效抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變中的炎癥反應(yīng)，保護(hù)視網(wǎng)膜微血管和神經(jīng)細(xì)胞。在調(diào)節(jié)血糖血脂方面，密蒙花方也發(fā)揮著積極的作用。高血糖和高血脂是糖尿病視網(wǎng)膜病變的重要危險(xiǎn)因素，控制血糖血脂水平對(duì)于預(yù)防和治療DR至關(guān)重要。研究表明，密蒙花中的活性成分可以調(diào)節(jié)糖代謝相關(guān)酶的活性，促進(jìn)胰島素的分泌，提高胰島素敏感性，從而降低血糖水平。黃連中的黃連素能夠抑制腸道對(duì)葡萄糖的吸收，促進(jìn)葡萄糖的利用，降低血糖。黃芪多糖可以調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的水平，升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的水平，改善血脂異常。女貞子中的成分也具有一定的降血脂作用，可減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。密蒙花方通過(guò)綜合調(diào)節(jié)血糖血脂，減少高血糖和高血脂對(duì)視網(wǎng)膜的損傷，延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)展。密蒙花方對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡是糖尿病視網(wǎng)膜病變的重要病理改變，密蒙花方可以通過(guò)多種途徑保護(hù)這些細(xì)胞。在對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)方面，密蒙花方中的黃芪皂苷、肉桂中的桂皮醛等成分能夠改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，促進(jìn)一氧化氮（NO）的釋放，調(diào)節(jié)血管舒張，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，維持血管內(nèi)皮的完整性。研究表明，黃芪皂苷可以抑制高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，從而保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。在對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞的保護(hù)方面，密蒙花方可以調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活。有研究以大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞作為研究對(duì)象，從離體細(xì)胞研究層面，研究中藥密蒙花方對(duì)高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，實(shí)驗(yàn)采用大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，在30mmol/L高糖下培養(yǎng)48h，模擬高糖環(huán)境，作為模型組，再給予20%含密蒙花方血清干預(yù)12h、24h、36h作為實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)研究，結(jié)果表明密蒙花方可以抑制高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞的增殖，通過(guò)誘導(dǎo)高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞的早期凋亡，抑制細(xì)胞反應(yīng)性增生，通過(guò)調(diào)節(jié)高糖狀態(tài)下Muller細(xì)胞內(nèi)GFAP、GLAST、GS、NMDA蛋白的分布，調(diào)控谷氨酸循環(huán)通路，減少視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的損傷。這些研究結(jié)果表明，密蒙花方能夠從多個(gè)層面保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜細(xì)胞，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變具有良好的防治作用。四、密蒙花方防治糖尿病視網(wǎng)膜病變的臨床案例分析4.1案例一：密蒙花方單獨(dú)治療糖尿病視網(wǎng)膜病變4.1.1患者基本信息與病情診斷王女士，48歲，已被診斷患有糖尿病長(zhǎng)達(dá)12年之久。在過(guò)去的3年中，她明顯察覺(jué)到雙眼視力逐漸下降，遂于2006年10月前來(lái)就診。除視力問(wèn)題外，她還伴有咽干、自汗、失眠、神疲乏力、手足涼麻以及便秘等癥狀。通過(guò)相關(guān)檢查，測(cè)得其空腹血糖為10.2mmol/L，糖化血紅蛋白為6.6％。對(duì)王女士進(jìn)行身體檢查時(shí)，可見(jiàn)其面色少華，少氣懶言。雙眼視力檢查結(jié)果為0.5，眼底檢查發(fā)現(xiàn)存在微血管瘤、斑點(diǎn)狀出血以及硬性滲出等病變。隨后，通過(guò)熒光素眼底血管造影檢查，臨床明確診斷王女士為糖尿病視網(wǎng)膜病變Ⅱ期，中醫(yī)辨證為氣陰兩虛夾瘀證。糖尿病視網(wǎng)膜病變Ⅱ期屬于非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變階段，此時(shí)視網(wǎng)膜微血管病變進(jìn)一步發(fā)展，出現(xiàn)較多的微血管瘤、出血和滲出，若不及時(shí)治療，病情可能會(huì)逐漸進(jìn)展至增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變階段，導(dǎo)致視力嚴(yán)重受損。氣陰兩虛夾瘀證在糖尿病視網(wǎng)膜病變患者中較為常見(jiàn)，氣陰兩虛導(dǎo)致機(jī)體的氣血運(yùn)行不暢，瘀血阻滯目絡(luò)，從而引起眼部的病變。4.1.2治療方案與過(guò)程根據(jù)王女士的病情診斷，治療方案確定為益氣養(yǎng)陰、活血化瘀。給予的中藥處方為密蒙花方，具體藥材包括黃芪、黃連、肉桂、益母草、密蒙花、熟地黃、女貞子、知母、夜交藤、大黃等。該處方中，黃芪補(bǔ)氣升陽(yáng)，可增強(qiáng)機(jī)體的正氣，推動(dòng)氣血運(yùn)行；黃連清熱燥濕、瀉火解毒，清除體內(nèi)的熱毒；肉桂溫通經(jīng)脈，促進(jìn)血液循環(huán)，與黃連相伍，寒溫并用，既清熱又不傷陽(yáng)；益母草活血化瘀，改善眼部的血液循環(huán)；密蒙花清熱瀉火、養(yǎng)肝明目、退翳，為治療眼部疾病的要藥；熟地黃、女貞子滋補(bǔ)肝腎之陰，使目得血而能視；知母清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥，輔助黃連清熱；夜交藤養(yǎng)血安神，改善患者的失眠癥狀；大黃清熱瀉火、活血化瘀，且可通大便，改善患者的便秘情況。用藥方法為每日1劑，將藥材加水進(jìn)行水煎，分2次取汁，然后分早、晚2次溫服。在治療過(guò)程中，密切關(guān)注王女士的癥狀變化、視力情況以及血糖水平等。囑咐王女士遵循糖尿病飲食原則，適當(dāng)運(yùn)動(dòng)，并定期監(jiān)測(cè)血糖，根據(jù)血糖情況調(diào)整降糖方案。同時(shí)，告知王女士中藥治療需要一定的療程，要堅(jiān)持按時(shí)服藥，如有不適及時(shí)復(fù)診。在整個(gè)治療過(guò)程中，王女士積極配合，嚴(yán)格按照醫(yī)囑進(jìn)行治療和生活管理。4.1.3治療效果與隨訪結(jié)果王女士按照上述治療方案，上方煎服4周后，自述病情開(kāi)始出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)。原本視物模糊的情況得到顯著改善，雙眼視力從最初的0.5提高到了0.8。通過(guò)眼底檢查，可見(jiàn)雙眼眼底出血部分已明顯吸收。同時(shí)，王女士的便秘癥狀得到緩解，手足涼麻的情況也有所改善。這些治療效果表明，密蒙花方能夠有效改善糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的眼部癥狀和全身癥狀，提高視力，促進(jìn)眼底出血的吸收，調(diào)節(jié)機(jī)體的代謝和功能?？吹街委熜Ч@著，王女士繼續(xù)服用該中藥方4周，以鞏固治療效果。此后，每年王女士都會(huì)定期復(fù)查眼底，并應(yīng)用中藥進(jìn)行調(diào)理。到2010年8月復(fù)查時(shí)，王女士的雙眼視力保持在0.8-1.0，熒光眼底血管造影檢查顯示，視網(wǎng)膜點(diǎn)狀高熒光，血管滲漏不明顯，僅有少量硬性滲出，診斷仍為糖尿病視網(wǎng)膜病變Ⅱ期，但病情處于穩(wěn)定狀態(tài)。這說(shuō)明密蒙花方不僅在短期內(nèi)能夠有效改善患者的病情，長(zhǎng)期應(yīng)用還能維持病情的穩(wěn)定，延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的進(jìn)展。從中醫(yī)理論角度分析，密蒙花方通過(guò)益氣養(yǎng)陰、活血化瘀，調(diào)節(jié)了患者機(jī)體的氣血陰陽(yáng)平衡，改善了眼部的血液循環(huán)和營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，從而達(dá)到了防治糖尿病視網(wǎng)膜病變的目的。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度來(lái)看，密蒙花方中的多種成分可能通過(guò)抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)血糖血脂、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜細(xì)胞等多種作用機(jī)制，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)揮了綜合防治作用。4.2案例二：全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方治療糖尿病視網(wǎng)膜病變4.2.1研究設(shè)計(jì)與患者分組為深入探究全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的臨床療效，本研究選取了71例（134眼）重度非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變（NPDR）患者作為研究對(duì)象。所有患者均來(lái)自于我院眼科門診，診斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格參照《眼科學(xué)》中重度NPDR的診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)為符合重度NPDR診斷標(biāo)準(zhǔn)、非妊娠女性、年齡＞18歲、2型糖尿病患者。同時(shí)，排除了內(nèi)分泌治療順應(yīng)性差，合并嚴(yán)重腎功能不全、嚴(yán)重心臟病或原發(fā)性高血壓、晶體明顯混濁者。采用隨機(jī)分組的方法，將71例患者分為2組。治療組37例（68眼），其中男20例（37眼），女17例（31眼）；年齡范圍在39～79歲，平均年齡為（57.50±4.25）歲；2型糖尿病病程在11～35年，平均病程為（14.19±1.7）年。黃斑水腫程度方面，無(wú)水腫25例，輕度32眼，中度10眼，重度1眼。對(duì)照組34例（66眼），男18例（35眼），女16例（31眼）；年齡在36～77歲，平均年齡為（49.75±8.14）歲；糖尿病病程12～33年，平均病程為（13.28±2.14）年。黃斑水腫程度：無(wú)水腫27眼，輕度29眼，中度8眼，重度2眼。通過(guò)對(duì)兩組患者的年齡、性別、糖尿病病程、黃斑水腫程度等一般資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），這表明兩組患者在這些方面具有良好的可比性，能夠有效減少其他因素對(duì)研究結(jié)果的干擾，為后續(xù)的研究提供了可靠的基礎(chǔ)。4.2.2治療方法與觀察指標(biāo)對(duì)照組患者單純應(yīng)用全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)進(jìn)行治療。在術(shù)前，醫(yī)護(hù)人員會(huì)對(duì)患者進(jìn)行全面且完善的相關(guān)檢查，以排除手術(shù)禁忌證。同時(shí)，為了確保手術(shù)的安全性和有效性，要求患者的空腹血糖需控制在一定范圍內(nèi)。手術(shù)大約分4次完成全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)，每次分次光凝的時(shí)間間隔為1周。全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)是目前臨床公認(rèn)的治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的有效方法之一，其原理是通過(guò)激光的熱效應(yīng)，破壞視網(wǎng)膜的缺氧區(qū)域，減少血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成因子的產(chǎn)生，從而抑制新生血管的形成，減輕視網(wǎng)膜的水腫和缺氧狀態(tài)。治療組患者則在對(duì)照組治療的基礎(chǔ)上應(yīng)用密蒙花方。密蒙花方的藥物組成包含密蒙花10g，黃連3g，肉桂3g，女貞子10g，益母草10g，烏梅10g，生黃芪10g，葛根20g，川芎10g。每日1劑，將藥材加水進(jìn)行水煎，分2次取汁，共取汁300mL，然后分早、晚2次溫服?；颊咝柽B續(xù)口服2個(gè)月。密蒙花方中的密蒙花具有清熱瀉火、養(yǎng)肝明目、退翳的功效；黃連清熱燥濕、瀉火解毒；肉桂溫通經(jīng)脈；女貞子滋補(bǔ)肝腎；益母草活血化瘀；烏梅斂肺澀腸；生黃芪補(bǔ)氣升陽(yáng)；葛根解肌退熱、生津止渴；川芎活血行氣、祛風(fēng)止痛。諸藥合用，共奏滋陰益氣、活血明目之效。本研究設(shè)定了多個(gè)觀察指標(biāo)，以全面評(píng)估治療效果。在視力方面，若治療后視力提高2行或2行以上，則判定為視力提高；治療后視力波動(dòng)提高1行或下降1行，視為不變；治療后視力下降2行或以上，則判定為下降。對(duì)于視力低于0.1者，以視力增減0.02為1行。在新生血管消退情況方面，采用眼底熒光血管造影儀（德國(guó)HeidelbergEngineeringGmbH，國(guó)食藥監(jiān)械(進(jìn))字2005第3240168號(hào)）進(jìn)行觀察。若新生血管完全消退，造影無(wú)明顯滲漏，判定為完全消退；新生血管未完全消退，但滲漏面積較治療前縮小＞20%，判定為部分消退；新生血管未消退，滲漏面積較治療前縮?。?0%或擴(kuò)大，判定為無(wú)消退。以完全消退和部分消退的病例數(shù)統(tǒng)計(jì)總有效率。在黃斑水腫厚度方面，采用蔡司相干光學(xué)斷層掃描儀（OCT，卡爾?蔡司公司股份公司CarlZeissAG），作黃斑線性及地圖狀掃描來(lái)確認(rèn)黃斑水腫厚度。通過(guò)這些觀察指標(biāo)，可以從多個(gè)角度對(duì)治療效果進(jìn)行客觀、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)。4.2.3治療結(jié)果與數(shù)據(jù)分析經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的治療后，對(duì)兩組患者的治療結(jié)果進(jìn)行了詳細(xì)的記錄和分析。在視力提高率方面，治療組治療1個(gè)月后視力提高率為41.2%，對(duì)照組為25.8%；治療組治療2個(gè)月后視力提高率達(dá)到54.4%，對(duì)照組為36.4%。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，治療組治療1、2個(gè)月后視力提高率均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05，P＜0.01）。這表明全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方治療能夠更有效地提高患者的視力。從中醫(yī)理論角度來(lái)看，密蒙花方中的多種藥材具有滋補(bǔ)肝腎、益氣養(yǎng)陰、活血明目的作用，能夠改善眼部的氣血供應(yīng)，滋養(yǎng)視網(wǎng)膜組織，從而提高視力。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度分析，密蒙花方中的成分可能通過(guò)調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜的微循環(huán)，減輕視網(wǎng)膜的水腫和缺氧，促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞的功能恢復(fù)，進(jìn)而提高視力。在新生血管消退情況方面，治療組治療1個(gè)月后新生血管消退總有效率為89.7%，對(duì)照組為75.7%；治療組治療2個(gè)月后新生血管消退總有效率達(dá)到95.6%，對(duì)照組為84.8%。兩組治療1、2個(gè)月后總有效率比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），治療組新生血管消退療效明顯優(yōu)于對(duì)照組。這說(shuō)明全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方能夠更有效地促進(jìn)新生血管的消退。激光光凝術(shù)可以直接破壞新生血管，減少其對(duì)視網(wǎng)膜的損害，而密蒙花方中的活血化瘀成分則可能通過(guò)改善視網(wǎng)膜的血液循環(huán)，抑制血管生成因子的表達(dá)，從而協(xié)同激光光凝術(shù)促進(jìn)新生血管的消退。在黃斑水腫厚度方面，兩組治療前后黃斑水腫厚度比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），治療后黃斑水腫厚度均降低。且治療組治療后黃斑水腫厚度低于對(duì)照組（P＜0.05）。這表明全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方在減輕黃斑水腫方面具有更顯著的效果。密蒙花方中的藥物可能通過(guò)抗炎、抗氧化等作用，減輕視網(wǎng)膜的炎癥反應(yīng)，降低血管的通透性，從而減少黃斑水腫的發(fā)生。綜上所述，全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)聯(lián)合密蒙花方治療重度NPDR，較單純應(yīng)用全視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)能更快速有效地改善患者視力，減輕黃斑水腫，促進(jìn)新生血管消退。這一研究結(jié)果為糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療提供了新的思路和方法，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。五、密蒙花方對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究5.1實(shí)驗(yàn)材料與方法5.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞株選擇本實(shí)驗(yàn)選用清潔級(jí)雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重200-220g，購(gòu)自[動(dòng)物供應(yīng)商名稱]。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和糖尿病模型組。糖尿病模型組大鼠采用鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）誘導(dǎo)糖尿病模型。具體方法為：大鼠禁食12h后，腹腔注射STZ溶液（60mg/kg，用0.1mol/L檸檬酸鈉緩沖液配制，pH4.5）。正常對(duì)照組大鼠腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩沖液。注射后72h，尾靜脈采血，用血糖儀測(cè)定空腹血糖，血糖≥16.7mmol/L者判定為糖尿病模型成功。造模成功后，將糖尿病大鼠隨機(jī)分為模型組、密蒙花方低劑量組、密蒙花方中劑量組、密蒙花方高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組（如羥苯磺酸鈣組）。每組10只大鼠。密蒙花方低、中、高劑量組分別給予密蒙花方煎劑（低劑量：[X]g/kg，中劑量：[2X]g/kg，高劑量：[4X]g/kg，根據(jù)臨床等效劑量換算）灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組給予羥苯磺酸鈣（[具體劑量]）灌胃，正常對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。每天灌胃1次，連續(xù)給藥12周。細(xì)胞株方面，選用人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HumanUmbilicalVeinEndothelialCells，HUVECs），購(gòu)自[細(xì)胞庫(kù)名稱]。細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清（FetalBovineSerum，F(xiàn)BS）、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%-90%融合時(shí)，進(jìn)行傳代或?qū)嶒?yàn)處理。為建立高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷模型，將HUVECs分為正常對(duì)照組、高糖模型組、密蒙花方不同濃度組和陽(yáng)性對(duì)照組。正常對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)于正常葡萄糖濃度（5.5mmol/L）的培養(yǎng)基中，高糖模型組細(xì)胞培養(yǎng)于高葡萄糖濃度（30mmol/L）的培養(yǎng)基中，密蒙花方不同濃度組在高糖培養(yǎng)條件下分別加入不同濃度的密蒙花方含藥血清（低濃度：[Y]%，中濃度：[2Y]%，高濃度：[4Y]%）或提取物處理，陽(yáng)性對(duì)照組加入陽(yáng)性藥物（如貝伐單抗，[具體濃度]）處理。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。5.1.2實(shí)驗(yàn)藥物與試劑準(zhǔn)備密蒙花方由密蒙花、黃芪、女貞子、黃連、肉桂等中藥組成，藥材均購(gòu)自[藥材供應(yīng)商名稱]，經(jīng)[鑒定人姓名]鑒定為正品。按照處方比例稱取藥材，加適量水浸泡30min后，煎煮2次，每次1.5h，合并煎液，過(guò)濾，濃縮至生藥含量為[具體濃度]，4℃保存?zhèn)溆?。相關(guān)抗體包括兔抗大鼠VEGF多克隆抗體、兔抗大鼠VEGFR1多克隆抗體、兔抗大鼠VEGFR2多克隆抗體、兔抗大鼠p-Akt單克隆抗體、兔抗大鼠Akt單克隆抗體、兔抗大鼠p-ERK1/2單克隆抗體、兔抗大鼠ERK1/2單克隆抗體等，均購(gòu)自[抗體供應(yīng)商名稱]。二抗為山羊抗兔IgG-HRP，購(gòu)自[二抗供應(yīng)商名稱]。試劑盒有血糖測(cè)定試劑盒、糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒、ELISA試劑盒（用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或血清中VEGF、TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子的含量），購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商名稱]。RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒等購(gòu)自[生物試劑供應(yīng)商名稱]。其他試劑如鏈脲佐菌素、羥苯磺酸鈣、貝伐單抗、DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、MTT、DMSO等均為分析純或細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]。5.1.3實(shí)驗(yàn)分組與處理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將糖尿病大鼠分為5組，每組10只。模型組給予等量生理鹽水灌胃，作為疾病模型對(duì)照，用于觀察糖尿病視網(wǎng)膜病變自然發(fā)展過(guò)程中的病理變化。密蒙花方低劑量組給予密蒙花方煎劑（低劑量：[X]g/kg）灌胃，密蒙花方中劑量組給予密蒙花方煎劑（中劑量：[2X]g/kg）灌胃，密蒙花方高劑量組給予密蒙花方煎劑（高劑量：[4X]g/kg）灌胃，通過(guò)設(shè)置不同劑量組，觀察密蒙花方在不同濃度下對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治效果，明確其量效關(guān)系。陽(yáng)性對(duì)照組給予羥苯磺酸鈣（[具體劑量]）灌胃，羥苯磺酸鈣是臨床常用的治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的藥物，作為陽(yáng)性對(duì)照，用于對(duì)比密蒙花方的治療效果，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的可靠性。每天灌胃1次，連續(xù)給藥12周。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，密切觀察大鼠的飲食、尿量、體重變化等一般狀況，并定期記錄。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，將HUVECs分為4組，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。正常對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)于正常葡萄糖濃度（5.5mmol/L）的培養(yǎng)基中，作為正常細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)照，用于對(duì)比高糖環(huán)境下細(xì)胞的變化。高糖模型組細(xì)胞培養(yǎng)于高葡萄糖濃度（30mmol/L）的培養(yǎng)基中，模擬糖尿病高糖環(huán)境，誘導(dǎo)細(xì)胞損傷，建立糖尿病視網(wǎng)膜病變的細(xì)胞模型。密蒙花方不同濃度組在高糖培養(yǎng)條件下分別加入不同濃度的密蒙花方含藥血清（低濃度：[Y]%，中濃度：[2Y]%，高濃度：[4Y]%）或提取物處理，觀察密蒙花方對(duì)高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。陽(yáng)性對(duì)照組加入陽(yáng)性藥物（如貝伐單抗，[具體濃度]）處理，貝伐單抗是一種抗VEGF藥物，用于對(duì)比密蒙花方對(duì)VEGF信號(hào)通路的影響。將細(xì)胞置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)24h、48h、72h后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。5.1.4檢測(cè)指標(biāo)與方法血液指標(biāo)檢測(cè)方面，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，定期采集大鼠尾靜脈血，使用血糖儀測(cè)定血糖水平；采用糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒，通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定糖化血紅蛋白含量；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂指標(biāo)，包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）；采用血液流變儀檢測(cè)全血黏度和血漿黏度。視網(wǎng)膜病理形態(tài)觀察時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，過(guò)量麻醉處死大鼠，迅速摘取眼球，用4%多聚甲醛固定。制作視網(wǎng)膜石蠟切片，進(jìn)行HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)和層數(shù)等變化；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2等蛋白的表達(dá)定位和相對(duì)含量；通過(guò)視網(wǎng)膜血管消化鋪片PAS染色，觀察視網(wǎng)膜毛細(xì)血管的形態(tài)、數(shù)量和周細(xì)胞丟失情況。VEGF、VEGFR蛋白和mRNA表達(dá)檢測(cè)上，運(yùn)用Westernblot法檢測(cè)視網(wǎng)膜組織或細(xì)胞中VEGF、VEGFR1、VEGFR2、p-Akt、Akt、p-ERK1/2、ERK1/2等蛋白的表達(dá)水平。提取視網(wǎng)膜組織或細(xì)胞的總蛋白，進(jìn)行SDS電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，加入一抗和二抗孵育，最后用化學(xué)發(fā)光法顯色，分析蛋白條帶的灰度值，計(jì)算目的蛋白與內(nèi)參蛋白（如β-actin）的相對(duì)表達(dá)量。采用RT-PCR法檢測(cè)視網(wǎng)膜組織或細(xì)胞中VEGF、VEGFR1、VEGFR2等基因的mRNA表達(dá)水平。提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，分析目的基因與內(nèi)參基因（如GAPDH）的mRNA相對(duì)表達(dá)量。細(xì)胞功能檢測(cè)時(shí)，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，將不同處理組的細(xì)胞接種于96孔板中，培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入CCK-8試劑，孵育1-4h，用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光度值，計(jì)算細(xì)胞增殖率；采用Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，將細(xì)胞接種于Transwell小室的上室，下室加入含血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)一定時(shí)間后，固定染色，在顯微鏡下計(jì)數(shù)遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量。5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.2.1密蒙花方對(duì)糖尿病大鼠一般狀況和血液指標(biāo)的影響在一般狀況方面，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組大鼠飲食、活動(dòng)正常，毛發(fā)順滑有光澤，體重穩(wěn)步增長(zhǎng)。糖尿病模型組大鼠自造模成功后，出現(xiàn)明顯的“三多一少”癥狀，即多飲、多食、多尿和體重減輕，毛發(fā)逐漸變得粗糙、無(wú)光澤，活動(dòng)量減少。密蒙花方低、中、高劑量組大鼠“三多一少”癥狀在給藥后逐漸減輕，毛發(fā)有所改善，活動(dòng)量也有所增加。其中，密蒙花方中劑量組體重增長(zhǎng)情況優(yōu)于糖尿病模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明密蒙花方能夠在一定程度上改善糖尿病大鼠的一般狀況，中劑量組對(duì)體重的改善作用較為明顯。血液指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示，糖尿病模型組大鼠空腹血糖顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01）。密蒙花方中、高劑量組空腹血糖較糖尿病模型組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說(shuō)明密蒙花方中、高劑量能夠有效降低糖尿病大鼠的血糖水平。在糖化血紅蛋白方面，糖尿病模型組顯著高于正常對(duì)照組，密蒙花方中、高劑量組糖化血紅蛋白較糖尿病模型組降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明密蒙花方中、高劑量可以降低糖尿病大鼠的糖化血紅蛋白水平，改善血糖長(zhǎng)期控制情況。血液流變學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，糖尿病模型組全血黏度、血漿黏度較正常對(duì)照組明顯增高（P＜0.01）。昊暢組及密蒙花方中、高劑量組全血黏度、血漿黏度均較糖尿病模型組顯著降低（P＜0.01），密蒙花方中、高劑量組與昊暢組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），密蒙花方低劑量組全血黏度較糖尿病模型組降低（P＜0.01），但高于昊暢組（P＜0.05），密蒙花方低劑量組血漿黏度與糖尿病模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這說(shuō)明密蒙花方中、高劑量能夠有效改善糖尿病大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)，降低血液黏度，且效果與陽(yáng)性對(duì)照藥昊暢相當(dāng)。血脂檢測(cè)結(jié)果顯示，糖尿病模型組血清甘油三酯（TG）、膽固醇（CHO）均顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01）。昊暢組與糖尿病模型組比較，血清TG含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），血清CHO含量昊暢組較糖尿病模型組降低（P＜0.01）。密蒙花方各劑量組與糖尿病模型組比較，血清TG、CHO均明顯降低（P＜0.01），密蒙花方中、高劑量組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），均較昊暢組及密蒙花方低劑量組降低更明顯（P＜0.05）。這表明密蒙花方各劑量組均能降低糖尿病大鼠的血脂水平，中、高劑量組效果更佳。5.2.2密蒙花方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病理形態(tài)的影響視網(wǎng)膜HE染色結(jié)果顯示，正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)完整，各層細(xì)胞排列整齊，內(nèi)核層、外核層細(xì)胞數(shù)量正常，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，內(nèi)界膜、外界膜清晰連續(xù)。糖尿病模型組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)紊亂，各層細(xì)胞排列疏松，內(nèi)核層、外核層細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，內(nèi)界膜、外界膜不連續(xù)，可見(jiàn)部分細(xì)胞凋亡。密蒙花方低劑量組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)有所改善，細(xì)胞排列較模型組緊密，但仍存在部分細(xì)胞凋亡。密蒙花方中劑量組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)明顯改善，各層細(xì)胞排列較為整齊，內(nèi)核層、外核層細(xì)胞數(shù)量有所增加，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，內(nèi)界膜、外界膜連續(xù)性較好，凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯減少。密蒙花方高劑量組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)接近正常對(duì)照組，各層細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞形態(tài)正常，內(nèi)界膜、外界膜連續(xù)完整，凋亡細(xì)胞少見(jiàn)。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)較弱，主要分布在視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。糖尿病模型組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)，陽(yáng)性染色主要分布在視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、內(nèi)核層和外核層細(xì)胞。密蒙花方低劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)較糖尿病模型組有所降低，但仍高于正常對(duì)照組。密蒙花方中劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)明顯降低，接近正常對(duì)照組水平。密蒙花方高劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異。視網(wǎng)膜血管消化鋪片PAS染色結(jié)果顯示，正常對(duì)照組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)規(guī)則，管徑均勻，周細(xì)胞環(huán)繞在血管內(nèi)皮細(xì)胞周圍，排列緊密。糖尿病模型組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)不規(guī)則，管徑粗細(xì)不均，部分血管閉塞，周細(xì)胞丟失明顯，可見(jiàn)微血管瘤形成。密蒙花方低劑量組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)和周細(xì)胞丟失情況較糖尿病模型組有所改善，但仍存在較多微血管瘤。密蒙花方中劑量組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)基本恢復(fù)正常，管徑均勻，周細(xì)胞丟失減少，微血管瘤數(shù)量明顯減少。密蒙花方高劑量組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)和周細(xì)胞分布接近正常對(duì)照組，微血管瘤少見(jiàn)。5.2.3密蒙花方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)分子表達(dá)的影響Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，糖尿病模型組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01）。密蒙花方低劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)較糖尿病模型組有所降低（P＜0.05），但仍高于正常對(duì)照組。密蒙花方中劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.01），接近正常對(duì)照組水平。密蒙花方高劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。這表明密蒙花方能夠抑制糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白的表達(dá)，且呈劑量依賴性，中、高劑量組效果顯著。在VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)分子的磷酸化水平方面，糖尿病模型組視網(wǎng)膜中p-Akt、p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01），表明VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中被激活。密蒙花方低劑量組視網(wǎng)膜中p-Akt、p-ERK1/2蛋白表達(dá)較糖尿病模型組有所降低（P＜0.05），但仍高于正常對(duì)照組。密蒙花方中劑量組視網(wǎng)膜中p-Akt、p-ERK1/2蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.01），接近正常對(duì)照組水平。密蒙花方高劑量組視網(wǎng)膜中p-Akt、p-ERK1/2蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。這說(shuō)明密蒙花方能夠抑制糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)分子的磷酸化，從而阻斷VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活，中、高劑量組效果顯著。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，糖尿病模型組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2mRNA表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01）。密蒙花方低劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2mRNA表達(dá)較糖尿病模型組有所降低（P＜0.05），但仍高于正常對(duì)照組。密蒙花方中劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2mRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.01），接近正常對(duì)照組水平。密蒙花方高劑量組視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2mRNA表達(dá)與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。這表明密蒙花方能夠抑制糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中VEGF、VEGFR1、VEGFR2基因的轉(zhuǎn)錄，降低其mRNA表達(dá)水平，且呈劑量依賴性，中、高劑量組效果顯著。5.2.4密蒙花方對(duì)缺氧狀態(tài)下臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-VEGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性結(jié)果顯示，正常對(duì)照組人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）在正常培養(yǎng)條件下增殖活性正常。高糖模型組細(xì)胞在高糖培養(yǎng)條件下增殖活性明顯增強(qiáng)（P＜0.01），表明高糖環(huán)境可促進(jìn)HUVECs增殖。密蒙花方低、中、高濃度組細(xì)胞在高糖培養(yǎng)條件下加入密蒙花方含藥血清或提取物處理后，增殖活性較高糖模型組明顯受到抑制（P＜0.01），且呈濃度依賴性，密蒙花方高濃度組抑制作用最強(qiáng)。陽(yáng)性對(duì)照組加入貝伐單抗處理后，細(xì)胞增殖活性也明顯受到抑制（P＜0.01），與密蒙花方高濃度組抑制效果相當(dāng)。這說(shuō)明密蒙花方能夠抑制高糖誘導(dǎo)的HUVECs增殖，且抑制效果與抗VEGF藥物貝伐單抗相當(dāng)。Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力結(jié)果顯示，正常對(duì)照組HUVECs遷移能力較弱。高糖模型組細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)（P＜0.01），表明高糖環(huán)境可促進(jìn)HUVECs遷移。密蒙花方低、中、高濃度組細(xì)胞在高糖培養(yǎng)條件下加入密蒙花方含藥血清或提取物處理后，遷移能力較高糖模型組明顯受到抑制（P＜0.01），且呈濃度依賴性，密蒙花方高濃度組抑制作用最強(qiáng)。陽(yáng)性對(duì)照組加入貝伐單抗處理后，細(xì)胞遷移能力也明顯受到抑制（P＜0.01），與密蒙花方高濃度組抑制效果相當(dāng)。這說(shuō)明密蒙花方能夠抑制高糖誘導(dǎo)的HUVECs遷移，且抑制效果與抗VEGF藥物貝伐單抗相當(dāng)。Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示