2025年大學(xué)第二學(xué)年（基因工程）載體構(gòu)建階段測試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題共40分）答題要求：本大題共20小題，每小題2分，共40分。在每小題給出的四個選項中，只有一項是符合題目要求的。請將正確答案的序號填在括號內(nèi)。1.基因工程載體構(gòu)建中，常用的載體不包括（）A.質(zhì)粒B.噬菌體C.病毒D.染色體2.質(zhì)粒作為載體，其特點(diǎn)不包括（）A.具有自我復(fù)制能力B.含有多個限制酶切割位點(diǎn)C.分子量較大D.具有標(biāo)記基因3.下列關(guān)于限制酶的說法，正確的是（）A.只能識別一種特定的核苷酸序列B.其作用是將DNA分子連接起來C.不同的限制酶切割DNA后產(chǎn)生的末端相同D.限制酶廣泛存在于各種生物中4.基因工程中，構(gòu)建重組DNA分子時，需要用到的酶是（）A.限制酶和DNA連接酶B.限制酶和DNA聚合酶C.DNA連接酶和DNA聚合酶D.解旋酶和DNA連接酶5.為了使目的基因與載體正確連接，通常需要對目的基因和載體進(jìn)行（）A.相同的限制酶切割B.不同的限制酶切割C.甲基化處理D.磷酸化處理6.載體上標(biāo)記基因的作用是（）A.便于篩選含有重組DNA分子的細(xì)胞B.增加載體的穩(wěn)定性C.提高目的基因的表達(dá)水平D.促進(jìn)目的基因的轉(zhuǎn)錄7.下列關(guān)于噬菌體載體的說法，錯誤的是（）A.可以容納較大的外源DNA片段B.具有較高的感染效率C.常用于構(gòu)建基因組文庫D.其外殼蛋白基因可作為標(biāo)記基因8.基因工程載體構(gòu)建中，篩選重組子的方法不包括（）A.抗生素抗性篩選B.藍(lán)白斑篩選C.PCR篩選D.熒光定量篩選9.質(zhì)粒載體中，多克隆位點(diǎn)的作用是（）A.提高載體的復(fù)制效率B.便于目的基因的插入C.增強(qiáng)標(biāo)記基因的表達(dá)D.促進(jìn)載體的轉(zhuǎn)化10.病毒載體的優(yōu)點(diǎn)不包括（）A.感染效率高B.可容納較大的外源基因C.安全性高D.可實現(xiàn)基因的高效表達(dá)11.在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，啟動子的作用是（）A.啟動目的基因的轉(zhuǎn)錄B.終止目的基因的轉(zhuǎn)錄C.促進(jìn)目的基因的翻譯D.增強(qiáng)目的基因的穩(wěn)定性12.終止子的作用是（）A.啟動目的基因的轉(zhuǎn)錄B.終止目的基因的轉(zhuǎn)錄C.促進(jìn)目的基因的翻譯D.增強(qiáng)目的基因的穩(wěn)定性13.下列關(guān)于基因工程載體構(gòu)建的步驟，正確的順序是（）①目的基因與載體的酶切②重組DNA分子的導(dǎo)入③重組DNA分子的篩選④重組DNA分子的連接A.①②③④B.①④②③C.④①②③D.①③④②14.基因工程載體構(gòu)建中，常用的連接方法是（）A.粘性末端連接B.平末端連接C.同聚物加尾連接D.以上都是15.為了提高重組DNA分子的轉(zhuǎn)化效率，可對受體細(xì)胞進(jìn)行（）A.氯化鈣處理B.高溫處理C.紫外線照射D.蔗糖處理16.下列關(guān)于基因組文庫的說法，正確的是（）A.包含了生物體的全部基因B.只包含了目的基因C.是通過PCR技術(shù)構(gòu)建的D.其構(gòu)建不需要載體17.cDNA文庫與基因組文庫的區(qū)別在于（）A.cDNA文庫只包含編碼蛋白質(zhì)的基因B.基因組文庫只包含非編碼區(qū)C.cDNA文庫構(gòu)建不需要反轉(zhuǎn)錄酶D.基因組文庫構(gòu)建不需要限制酶18.基因工程載體構(gòu)建中，常用的宿主細(xì)胞不包括（）A.大腸桿菌B.酵母菌C.植物細(xì)胞D.病毒19.下列關(guān)于載體構(gòu)建的質(zhì)量控制，說法錯誤的是（）A.確保載體的完整性B.保證目的基因的正確插入C.提高轉(zhuǎn)化效率即可，無需考慮其他因素D.檢測重組DNA分子的正確性20.載體構(gòu)建過程中，防止載體自身環(huán)化的方法是（）A.用不同的限制酶切割載體和目的基因B.提高DNA連接酶的濃度C.延長酶切時間D.降低載體的濃度第II卷（非選擇題共60分）答題要求：本大題共5小題，共60分。請將答案寫在相應(yīng)的位置。21.（10分）簡述基因工程載體構(gòu)建的基本原理。22.（12分）請詳細(xì)說明質(zhì)粒載體的特點(diǎn)及構(gòu)建重組質(zhì)粒的主要步驟。23.（12分）在基因工程載體構(gòu)建中，如何篩選含有重組DNA分子的細(xì)胞？請列舉至少兩種方法并簡要說明原理。24.（13分）閱讀以下材料：在基因工程載體構(gòu)建中，科研人員欲將一段特定的目的基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞中。他們首先選擇了合適的質(zhì)粒載體，該質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因。然后用限制酶對質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割，并通過DNA連接酶將目的基因與質(zhì)粒連接，構(gòu)建成重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞后，在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。問題：請分析該實驗中選擇氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因的作用，并說明在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的目的。25.（13分）閱讀以下材料：科學(xué)家在進(jìn)行基因工程載體構(gòu)建時，嘗試構(gòu)建一個用于植物基因表達(dá)的載體。他們選用了一種病毒載體，并對其進(jìn)行改造，使其能夠攜帶目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞并實現(xiàn)表達(dá)。在構(gòu)建過程中，對載體的啟動子、終止子等元件進(jìn)行了精心設(shè)計和調(diào)整。問題：請說明該病毒載體改造后用于植物基因表達(dá)的優(yōu)勢，以及啟動子、終止子在載體構(gòu)建中的重要性。答案：1.D2.C3.A4.A5.A6.A7.D8.D9.B10.C11.A12.B13.B14.D15.A16.A17.A18.D19.C20.A21.基因工程載體構(gòu)建基本原理是：首先獲取目的基因，然后選擇合適的載體，用限制酶分別切割目的基因和載體，使其產(chǎn)生互補(bǔ)的粘性末端或平末端。接著用DNA連接酶將目的基因與載體連接形成重組DNA分子。再將重組DNA分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞，通過篩選標(biāo)記基因等方法篩選出含有重組DNA分子的細(xì)胞，從而實現(xiàn)目的基因的克隆、表達(dá)等操作。22.質(zhì)粒載體特點(diǎn)：具有自我復(fù)制能力，能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立復(fù)制；含有多個限制酶切割位點(diǎn)，便于目的基因插入；分子量較小，便于操作；具有標(biāo)記基因，便于篩選。構(gòu)建重組質(zhì)粒步驟：提取質(zhì)粒；用限制酶切割質(zhì)粒；提取目的基因并用相同限制酶切割；用DNA連接酶將目的基因與切割后的質(zhì)粒連接；導(dǎo)入宿主細(xì)胞。23.方法及原理：抗生素抗性篩選，若載體上有抗生素抗性基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞能在含該抗生素的培養(yǎng)基上生長，未導(dǎo)入的則不能，原理是重組質(zhì)粒賦予細(xì)胞抗生素抗性。藍(lán)白斑篩選，載體上有l(wèi)acZ基因，若目的基因插入破壞該基因，重組菌在含X-gal的培養(yǎng)基上形成白色菌落，未插入目的基因的形成藍(lán)色菌落，原理是利用lacZ基因的功能變化。24.氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因的作用是：用于篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞。因為只有導(dǎo)入了重組質(zhì)粒（含有氨芐青霉素抗性基因）的細(xì)胞才能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長，未導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會因無抗性而被氨芐青霉素抑制生長。在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的目的就是淘汰未導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞，富集含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞。25.病毒