《GB/T39730-2020細(xì)胞計(jì)數(shù)通用要求

流式細(xì)胞測(cè)定法》(2026年)深度解析目錄一

流式細(xì)胞測(cè)定法細(xì)胞計(jì)數(shù)為何需統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)？

GB/T39730-2020核心價(jià)值與行業(yè)影響深度剖析二

如何精準(zhǔn)把控樣本質(zhì)量？

GB/T39730-2020樣本采集至處理全流程規(guī)范專家視角解讀三

儀器性能是計(jì)數(shù)精準(zhǔn)的關(guān)鍵嗎？

GB/T39730-2020

流式細(xì)胞儀選型校準(zhǔn)與維護(hù)要點(diǎn)解析四

熒光試劑如何選與用？

GB/T39730-2020試劑性能要求與操作規(guī)范深度剖析五

細(xì)胞計(jì)數(shù)核心流程有哪些？

GB/T39730-2020樣本制備至結(jié)果獲取全步驟實(shí)操指南六

結(jié)果如何判讀才可靠？

GB/T39730-2020數(shù)據(jù)處理與結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)專家解讀七

質(zhì)量控制體系如何搭建？

GB/T39730-2020室內(nèi)質(zhì)控與室間質(zhì)評(píng)實(shí)施要點(diǎn)解析八

不同細(xì)胞類型計(jì)數(shù)有差異嗎？

GB/T39730-2020特殊細(xì)胞計(jì)數(shù)適配性與優(yōu)化策略九

標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施中常見問(wèn)題如何破解？

GB/T39730-2020實(shí)操疑點(diǎn)與解決方案深度剖析十

未來(lái)細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)如何發(fā)展？

GB/T39730-2020

引領(lǐng)下的技術(shù)創(chuàng)新與標(biāo)準(zhǔn)升級(jí)趨勢(shì)預(yù)測(cè)流式細(xì)胞測(cè)定法細(xì)胞計(jì)數(shù)為何需統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)？GB/T39730-2020核心價(jià)值與行業(yè)影響深度剖析流式細(xì)胞測(cè)定法細(xì)胞計(jì)數(shù)行業(yè)現(xiàn)狀與標(biāo)準(zhǔn)缺失痛點(diǎn)1當(dāng)前流式細(xì)胞測(cè)定法在細(xì)胞計(jì)數(shù)中應(yīng)用廣泛，但不同實(shí)驗(yàn)室儀器試劑流程各異，導(dǎo)致結(jié)果差異顯著。如臨床檢測(cè)中同一標(biāo)本在不同機(jī)構(gòu)計(jì)數(shù)結(jié)果偏差達(dá)20%以上，影響疾病診斷準(zhǔn)確性?？蒲蓄I(lǐng)域因數(shù)據(jù)不可比，延緩成果轉(zhuǎn)化。標(biāo)準(zhǔn)缺失成為制約行業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵瓶頸，亟需統(tǒng)一規(guī)范。2（二）GB/T39730-2020制定背景與核心目標(biāo)解讀A隨著細(xì)胞治療再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域快速發(fā)展，對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)精準(zhǔn)性要求提升，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)啟動(dòng)該標(biāo)準(zhǔn)制定。核心目標(biāo)為規(guī)范流式細(xì)胞測(cè)定法細(xì)胞計(jì)數(shù)流程，明確質(zhì)量要求，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠可比，為科研臨床生產(chǎn)等領(lǐng)域提供技術(shù)依據(jù)，推動(dòng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展。B（三）標(biāo)準(zhǔn)核心價(jià)值與對(duì)行業(yè)發(fā)展的長(zhǎng)遠(yuǎn)影響標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)通用要求空白，實(shí)現(xiàn)不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果互認(rèn)。臨床層面提升疾病診斷與療效評(píng)估準(zhǔn)確性；科研層面加速成果共享與轉(zhuǎn)化；產(chǎn)業(yè)層面規(guī)范細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)控，提升我國(guó)細(xì)胞產(chǎn)業(yè)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力。長(zhǎng)遠(yuǎn)將推動(dòng)流式細(xì)胞技術(shù)規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展。12如何精準(zhǔn)把控樣本質(zhì)量？GB/T39730-2020樣本采集至處理全流程規(guī)范專家視角解讀樣本采集通用要求與不同樣本類型特殊規(guī)范通用要求包括采集器具無(wú)菌標(biāo)識(shí)清晰采集量充足。外周血需使用EDTA抗凝，采集后24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)；骨髓樣本需避免凝固，及時(shí)混勻；細(xì)胞培養(yǎng)樣本需在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期采集，確保細(xì)胞活性。采集過(guò)程需嚴(yán)格避免污染與溶血，保障樣本原始狀態(tài)。（二）樣本運(yùn)輸與保存條件控制要點(diǎn)01運(yùn)輸溫度控制在2-8℃,避免劇烈震蕩。短期保存(≤24小時(shí)）可置于4℃冰箱，長(zhǎng)期保存需采用液氮冷凍。運(yùn)輸過(guò)程需使用專用保溫箱，配備溫度監(jiān)控設(shè)備，保存記錄需完整可追溯。不同樣本保存時(shí)限不同，如臍帶血樣本4℃保存不超過(guò)72小時(shí)。02（三）樣本前處理關(guān)鍵步驟與質(zhì)量控制措施1前處理包括離心洗滌過(guò)濾等步驟。離心轉(zhuǎn)速與時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整，如淋巴細(xì)胞離心采用300g×10分鐘。洗滌需使用無(wú)菌PBS緩沖液，去除雜質(zhì)與殘留抗凝劑。過(guò)濾采用40-70μm濾網(wǎng)去除團(tuán)塊，確保樣本單細(xì)胞懸液狀態(tài)。每步驟需做質(zhì)量檢查，如細(xì)胞活性檢測(cè)≥90%方可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2儀器性能是計(jì)數(shù)精準(zhǔn)的關(guān)鍵嗎？GB/T39730-2020流式細(xì)胞儀選型校準(zhǔn)與維護(hù)要點(diǎn)解析流式細(xì)胞儀核心性能指標(biāo)要求與選型依據(jù)核心指標(biāo)包括熒光靈敏度分辨率流速穩(wěn)定性計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性等。熒光靈敏度需能檢測(cè)到低表達(dá)抗原細(xì)胞；分辨率以CV值衡量，淋巴細(xì)胞CV值≤3%；流速穩(wěn)定性變異系數(shù)≤5%。選型需結(jié)合應(yīng)用場(chǎng)景，臨床檢測(cè)側(cè)重穩(wěn)定性與自動(dòng)化，科研側(cè)重多參數(shù)分析能力，確保符合標(biāo)準(zhǔn)性能要求。（二）儀器安裝與校準(zhǔn)規(guī)范及周期要求1安裝需滿足環(huán)境要求：溫度20-25℃濕度40%-60%，遠(yuǎn)離電磁干擾。校準(zhǔn)包括光路校準(zhǔn)流速校準(zhǔn)熒光強(qiáng)度校準(zhǔn)。光路校準(zhǔn)每周1次，使用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球調(diào)整光路對(duì)齊；流速校準(zhǔn)每批次實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行，確保計(jì)數(shù)體積準(zhǔn)確；年度需由專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行全面校準(zhǔn)，校準(zhǔn)記錄存檔。2（三）儀器日常維護(hù)與故障排查核心要點(diǎn)日常維護(hù)包括每日實(shí)驗(yàn)后清洗流路系統(tǒng)，使用75%乙醇與去離子水交替沖洗；每周更換鞘液與廢液，檢查壓力系統(tǒng)。常見故障如堵孔，可通過(guò)反沖超聲清洗解決；熒光信號(hào)異常需檢查光路污染或激光強(qiáng)度衰減。建立維護(hù)日志，定期更換損耗部件，保障儀器穩(wěn)定運(yùn)行。熒光試劑如何選與用？GB/T39730-2020試劑性能要求與操作規(guī)范深度剖析熒光染料與抗體的性能指標(biāo)要求與篩選標(biāo)準(zhǔn)性能指標(biāo)包括特異性熒光強(qiáng)度穩(wěn)定性信噪比等。特異性需通過(guò)陰性對(duì)照驗(yàn)證，無(wú)交叉反應(yīng)；熒光強(qiáng)度需滿足檢測(cè)需求，避免信號(hào)過(guò)弱或溢出；穩(wěn)定性要求試劑在有效期內(nèi)性能無(wú)明顯下降。篩選時(shí)需進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)比不同試劑的計(jì)數(shù)結(jié)果，選擇符合標(biāo)準(zhǔn)且適配儀器的試劑。（二）試劑儲(chǔ)存與復(fù)溶操作規(guī)范及質(zhì)量把控01試劑需按說(shuō)明書儲(chǔ)存，熒光抗體通常-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。復(fù)溶需使用專用稀釋液，嚴(yán)格按照說(shuō)明書比例操作，輕輕混勻避免氣泡產(chǎn)生。復(fù)溶后試劑4℃保存不超過(guò)72小時(shí)，每次使用前需檢查外觀，如出現(xiàn)渾濁沉淀則禁止使用，確保試劑活性與穩(wěn)定性。02（三）染色反應(yīng)條件優(yōu)化與常見問(wèn)題解決方案染色條件包括試劑用量反應(yīng)溫度反應(yīng)時(shí)間。需通過(guò)梯度實(shí)驗(yàn)確定最佳用量，避免過(guò)量導(dǎo)致非特異性結(jié)合。一般反應(yīng)溫度為室溫或4℃,反應(yīng)時(shí)間15-30分鐘，避光進(jìn)行。常見問(wèn)題如染色過(guò)淺，可增加試劑用量或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間；非特異性染色可通過(guò)增加洗滌次數(shù)解決。細(xì)胞計(jì)數(shù)核心流程有哪些？GB/T39730-2020樣本制備至結(jié)果獲取全步驟實(shí)操指南樣本制備標(biāo)準(zhǔn)化流程與關(guān)鍵操作要點(diǎn)01流程包括樣本解凍（冷凍樣本）混勻稀釋染色固定等。解凍需37℃水浴快速融化，避免反復(fù)凍融；稀釋需使用校準(zhǔn)移液器，確保稀釋比例準(zhǔn)確；染色需嚴(yán)格控制試劑用量與反應(yīng)條件；固定劑使用需符合安全規(guī)范。每步驟需做好記錄，確?？勺匪?，保障樣本制備質(zhì)量。02（二）儀器操作參數(shù)設(shè)置與優(yōu)化策略參數(shù)設(shè)置包括流速增益閾值等。根據(jù)細(xì)胞大小設(shè)置閾值，排除碎片干擾；增益調(diào)整以熒光信號(hào)位于檢測(cè)范圍內(nèi)且不過(guò)載為宜；流速根據(jù)樣本濃度選擇，高濃度樣本采用低速，避免細(xì)胞重疊。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化，確保不同批次實(shí)驗(yàn)參數(shù)一致性，提升結(jié)果重復(fù)性。（三）數(shù)據(jù)采集規(guī)范與質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)解讀數(shù)據(jù)采集需確保獲取足夠細(xì)胞數(shù)量，常規(guī)計(jì)數(shù)采集10000-20000個(gè)目標(biāo)細(xì)胞。質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)包括細(xì)胞活性≥90%目標(biāo)細(xì)胞比例穩(wěn)定熒光信號(hào)CV值≤5%。采集過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)，如出現(xiàn)異常立即停止，排查樣本試劑或儀器問(wèn)題，確保采集數(shù)據(jù)可靠。結(jié)果如何判讀才可靠？GB/T39730-2020數(shù)據(jù)處理與結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)專家解讀數(shù)據(jù)處理基本原則與常用軟件操作規(guī)范01數(shù)據(jù)處理需遵循真實(shí)性可重復(fù)性原則，去除異常值（如信號(hào)溢出數(shù)據(jù)）。常用軟件如FlowJoBDFACSDiva等，操作時(shí)需統(tǒng)一gates設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)，避免主觀誤差。采用補(bǔ)償調(diào)節(jié)消除熒光串?dāng)_，確保多色分析準(zhǔn)確性。處理過(guò)程需保留原始數(shù)據(jù)，建立處理日志，便于追溯與審核。02（二）計(jì)數(shù)結(jié)果計(jì)算方法與不確定度評(píng)定要點(diǎn)計(jì)數(shù)結(jié)果按公式計(jì)算：細(xì)胞濃度=（目標(biāo)細(xì)胞數(shù)/獲取體積）×稀釋倍數(shù)。不確定度評(píng)定需考慮樣本制備儀器誤差試劑偏差等因素，采用A類與B類評(píng)定方法。不確定度報(bào)告需包含擴(kuò)展不確定度與包含因子，確保結(jié)果科學(xué)性與嚴(yán)謹(jǐn)性，符合標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量要求。（三）結(jié)果有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)與異常結(jié)果處理流程A有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞活性≥90%重復(fù)檢測(cè)結(jié)果相對(duì)偏差≤10%質(zhì)控品檢測(cè)值在參考范圍內(nèi)。異常結(jié)果需首先排查樣本質(zhì)量?jī)x器狀態(tài)試劑性能等，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。如仍異常，結(jié)合樣本背景信息（如臨床診斷培養(yǎng)條件）分析，必要時(shí)咨詢專家，確保結(jié)果解讀準(zhǔn)確。B質(zhì)量控制體系如何搭建？GB/T39730-2020室內(nèi)質(zhì)控與室間質(zhì)評(píng)實(shí)施要點(diǎn)解析室內(nèi)質(zhì)量控制體系構(gòu)建核心要素與流程核心要素包括人員設(shè)備試劑方法環(huán)境等。建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP），明確各環(huán)節(jié)職責(zé)。流程包括每日質(zhì)控（儀器性能檢查試劑質(zhì)量核查）批次質(zhì)控（質(zhì)控品同步檢測(cè)）月度回顧（質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析）。定期開展人員培訓(xùn)與考核，確保操作規(guī)范。12（二）室內(nèi)質(zhì)控品選擇與使用規(guī)范及結(jié)果分析方法質(zhì)控品需選擇與檢測(cè)樣本類型匹配穩(wěn)定性好的產(chǎn)品，如標(biāo)準(zhǔn)淋巴細(xì)胞懸液。使用前需復(fù)溶至室溫，混勻后檢測(cè)。結(jié)果分析采用Levey-Jennings質(zhì)控圖，設(shè)定均值±2SD為警告線，±3SD為失控線。失控時(shí)需查找原因并糾正，記錄處理過(guò)程。（三）室間質(zhì)評(píng)參與要求與結(jié)果應(yīng)用及持續(xù)改進(jìn)措施01實(shí)驗(yàn)室需定期參與國(guó)家或省級(jí)室間質(zhì)評(píng)，按要求接收樣本檢測(cè)并上報(bào)結(jié)果。對(duì)不合格項(xiàng)目，分析原因并制定整改措施，如人員再培訓(xùn)儀器校準(zhǔn)方法優(yōu)化。將室間質(zhì)評(píng)結(jié)果納入質(zhì)量改進(jìn)計(jì)劃，與室內(nèi)質(zhì)控結(jié)合，形成持續(xù)改進(jìn)的質(zhì)量控制體系，確保檢測(cè)質(zhì)量。02不同細(xì)胞類型計(jì)數(shù)有差異嗎？GB/T39730-2020特殊細(xì)胞計(jì)數(shù)適配性與優(yōu)化策略淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞計(jì)數(shù)適配性與操作優(yōu)化01淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)需選擇CD45/SSCgates區(qū)分，避免與其他細(xì)胞混淆。優(yōu)化染色條件，如CD3CD4等抗體組合使用，確保亞群識(shí)別準(zhǔn)確。單核細(xì)胞因體積與顆粒度特殊，需調(diào)整SSC閾值，避免漏計(jì)。計(jì)數(shù)時(shí)采集足夠細(xì)胞數(shù)量，提升小亞群計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。02（二）干細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)與質(zhì)控措施01干細(xì)胞計(jì)數(shù)采用CD34+標(biāo)志物，需優(yōu)化抗體濃度與染色時(shí)間，避免假陽(yáng)性。使用質(zhì)控品驗(yàn)證計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性，確保回收率在85%-115%。腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)需結(jié)合特異性標(biāo)志物與SSC/FSC特性，設(shè)置嚴(yán)格gates排除正常細(xì)胞干擾。增加復(fù)孔檢測(cè)，降低誤差，保障結(jié)果可靠。02（三）原代細(xì)胞與培養(yǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)差異及適配性調(diào)整方案01原代細(xì)胞活性差異大，計(jì)數(shù)前需嚴(yán)格檢測(cè)活性，剔除死細(xì)胞。培養(yǎng)細(xì)胞需在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期計(jì)數(shù)，避免細(xì)胞凋亡影響結(jié)果。原代細(xì)胞樣本雜質(zhì)多，需加強(qiáng)過(guò)濾與洗滌；培養(yǎng)細(xì)胞可適當(dāng)調(diào)整稀釋比例，確保計(jì)數(shù)濃度在儀器檢測(cè)范圍內(nèi)。根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整參數(shù)，提升計(jì)數(shù)適配性。02標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施中常見問(wèn)題如何破解？GB/T39730-2020實(shí)操疑點(diǎn)與解決方案深度剖析樣本污染與細(xì)胞活性低問(wèn)題成因與解決對(duì)策污染成因包括采集器具不潔操作環(huán)境不達(dá)標(biāo)試劑污染等。對(duì)策：使用無(wú)菌器具，在生物安全柜操作，試劑使用前檢查無(wú)菌性。細(xì)胞活性低多因保存不當(dāng)或處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，需嚴(yán)格控制保存條件，縮短處理時(shí)間，使用細(xì)胞保護(hù)液。污染或活性不足時(shí)需重新采集樣本。（二）儀器計(jì)數(shù)結(jié)果重復(fù)性差的故障排查與解決方法01重復(fù)性差可能因儀器未校準(zhǔn)流速不穩(wěn)定樣本混勻不充分等導(dǎo)致。排查步驟：檢查儀器校準(zhǔn)狀態(tài)，重新校準(zhǔn)；檢測(cè)流速穩(wěn)定性，調(diào)整壓力；確保樣本充分混勻，避免細(xì)胞沉降。更換損耗部件（如噴嘴），清潔流路系統(tǒng)。通過(guò)多次重復(fù)檢測(cè)驗(yàn)證，直至重復(fù)性符合標(biāo)準(zhǔn)（CV≤5%）。02（三）不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果不一致的根源分析與統(tǒng)一方案根源包括儀器型號(hào)差異試劑品牌不同操作流程不統(tǒng)一。統(tǒng)一方案：采用標(biāo)準(zhǔn)參考品校準(zhǔn)不同儀器；選用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的統(tǒng)一品牌試劑；嚴(yán)格執(zhí)行GB/T39730-2020標(biāo)準(zhǔn)流程，統(tǒng)一SOP。開展實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)實(shí)驗(yàn)，共享質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，逐步實(shí)現(xiàn)結(jié)果互認(rèn)，解決不一致問(wèn)題。未來(lái)細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)如何發(fā)展？GB/T39730-2020引領(lǐng)下的技術(shù)創(chuàng)新與標(biāo)準(zhǔn)升級(jí)趨勢(shì)預(yù)測(cè)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)創(chuàng)新方向與發(fā)展前景01創(chuàng)新方向包括高通量檢測(cè)單細(xì)胞測(cè)序結(jié)合智能化分析等。高通量?jī)x器可同時(shí)檢測(cè)多樣本，提升效率；與單細(xì)胞測(cè)序結(jié)合實(shí)現(xiàn)細(xì)胞功能與計(jì)數(shù)同步分析；AI算法優(yōu)化數(shù)據(jù)處理，減少人為誤差。發(fā)展前景廣闊，將在精準(zhǔn)醫(yī)療再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮更重要作用，推動(dòng)行業(yè)技術(shù)革新。02（二）GB/T39730-2020標(biāo)準(zhǔn)升級(jí)需求與方向預(yù)測(cè)