2025年華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生物醫(yī)學(xué)與健康學(xué)院噬菌體或蛋白質(zhì)藥方向?qū)Ｈ谓處煟┦亢蠊_招聘筆試歷年典型考題（歷年真題考點(diǎn)）解題思路附帶答案詳解一、選擇題從給出的選項中選擇正確答案（共50題）1、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪個結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白2、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，下列哪項技術(shù)最常用于檢測蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象與折疊狀態(tài)？A.SDSB.WesternblotC.圓二色光譜（CD）D.RT-PCR3、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)在病毒顆粒表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白4、蛋白質(zhì)類藥物開發(fā)中，提高其在體內(nèi)半衰期的常用策略是與其融合或偶聯(lián)下列哪種分子？A.聚乙二醇（PEG）B.脂多糖（LPS）C.磷脂酰膽堿D.透明質(zhì)酸5、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪個結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以實(shí)現(xiàn)其在噬菌體表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白6、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，聚乙二醇（PEG）修飾的主要目的是？A.增強(qiáng)蛋白質(zhì)的免疫原性B.提高蛋白質(zhì)的組織靶向性C.延長蛋白質(zhì)的血清半衰期D.促進(jìn)蛋白質(zhì)的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)7、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以實(shí)現(xiàn)在噬菌體表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白8、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，為提高其在體內(nèi)的半衰期，常采用聚乙二醇（PEG）修飾技術(shù)，該技術(shù)主要通過何種方式發(fā)揮作用？A.增強(qiáng)蛋白質(zhì)的抗原性B.促進(jìn)蛋白質(zhì)的快速降解C.增大分子體積，減少腎清除D.提高蛋白質(zhì)與受體的結(jié)合親和力9、在噬菌體生命周期中，能夠整合到宿主細(xì)菌染色體中并隨其復(fù)制而復(fù)制的階段稱為？A.裂解周期B.溶原周期C.吸附階段D.組裝階段10、在蛋白質(zhì)藥物研發(fā)中，以下哪種修飾最有助于提高其在體內(nèi)的半衰期？A.磷酸化B.泛素化C.PEG化D.乙?；?1、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪個結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)在噬菌體表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白12、在蛋白質(zhì)藥物研發(fā)中，提高重組蛋白熱穩(wěn)定性的常用策略不包括以下哪項？A.引入二硫鍵B.增加表面疏水殘基C.定點(diǎn)突變以優(yōu)化電荷互補(bǔ)D.添加聚乙二醇（PEG）修飾13、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白14、在蛋白質(zhì)藥物研發(fā)中，提高重組蛋白血清半衰期的常用策略是？A.增加蛋白等電點(diǎn)B.融合Fc片段或聚乙二醇修飾C.減少二硫鍵數(shù)量D.切除信號肽序列15、在噬菌體展示技術(shù)中，外源肽或蛋白質(zhì)通常與噬菌體的哪個結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白16、在重組蛋白質(zhì)藥物純化過程中，常用鎳柱親和層析法進(jìn)行初步純化，該方法主要依賴于目標(biāo)蛋白的哪一特性？A.等電點(diǎn)差異B.分子量大小C.帶有組氨酸標(biāo)簽D.疏水性強(qiáng)弱17、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)表型與基因型的關(guān)聯(lián)？A.pIII蛋白B.pV蛋白C.pX蛋白D.pIX蛋白18、在重組蛋白質(zhì)藥物制備過程中，常采用包涵體表達(dá)策略，但需后續(xù)復(fù)性處理。以下哪種方法最常用于變性蛋白的梯度復(fù)性？A.透析法去除變性劑B.高溫孵育促進(jìn)折疊C.直接稀釋硫酸銨沉淀物D.加入高濃度鹽離子19、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pV蛋白C.pVI蛋白D.pVIII蛋白20、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，提高其體內(nèi)半衰期的常用策略不包括以下哪項？A.與聚乙二醇（PEG）偶聯(lián)B.與白蛋白融合表達(dá)C.增加蛋白的等電點(diǎn)D.利用Fc融合技術(shù)21、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白22、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，以下哪種方法最常用于評估蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)完整性？A.SDSB.紫外吸收光譜C.圓二色性光譜（CD）D.WesternBlot23、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白24、在重組蛋白質(zhì)藥物純化過程中，常利用His標(biāo)簽與哪種金屬離子的親和作用進(jìn)行固定化金屬離子親和層析（IMAC）？A.Fe2?B.Mg2?C.Ni2?D.Zn2?25、在研究噬菌體裂解周期時，下列哪一結(jié)構(gòu)直接參與宿主細(xì)胞壁的降解，從而促進(jìn)子代噬菌體的釋放？A.尾絲B.衣殼C.溶菌酶D.基板26、在蛋白質(zhì)類藥物開發(fā)中，提高其體內(nèi)半衰期的常用策略是？A.增加分子疏水性B.減少二硫鍵數(shù)量C.聚乙二醇（PEG）修飾D.切除信號肽序列27、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在病毒表面展示？A.pIII蛋白B.pV蛋白C.pX蛋白D.pIX蛋白28、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，為提高其體內(nèi)半衰期，常采用聚乙二醇（PEG）修飾技術(shù)，該修飾主要通過何種方式發(fā)揮作用？A.增強(qiáng)蛋白質(zhì)的酶解活性B.減少腎臟清除和免疫識別C.提高蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)D.促進(jìn)受體特異性結(jié)合29、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)在噬菌體表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白30、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，提高其體內(nèi)半衰期的常用策略是與下列哪種大分子進(jìn)行共價連接？A.聚乙二醇（PEG）B.脂多糖C.纖維素D.透明質(zhì)酸31、在噬菌體展示技術(shù)中，用于篩選特異性結(jié)合靶標(biāo)蛋白的噬菌體庫，其原理主要依賴于以下哪一過程？A.噬菌體DNA在大腸桿菌中的自主復(fù)制B.外源蛋白與噬菌體衣殼蛋白的融合表達(dá)C.噬菌體對宿主細(xì)胞的裂解作用D.RNA聚合酶識別噬菌體啟動子32、在蛋白質(zhì)藥物研發(fā)中，提高其體內(nèi)半衰期的常用策略是？A.增加蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)B.通過聚乙二醇（PEG）修飾減少腎清除C.提高蛋白質(zhì)的疏水性以增強(qiáng)細(xì)胞穿透D.去除N-糖基化位點(diǎn)以降低分子量33、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以實(shí)現(xiàn)在噬菌體表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白34、在重組蛋白質(zhì)藥物純化過程中，利用組氨酸標(biāo)簽（His-tag）進(jìn)行親和層析時，通常依靠哪種金屬離子與組氨酸殘基的特異性結(jié)合？A.Fe2?B.Mg2?C.Ni2?D.Zn2?35、在噬菌體展示技術(shù)中，常用于篩選特異性結(jié)合靶標(biāo)蛋白的多肽或抗體片段的原理是基于以下哪項生物學(xué)機(jī)制？A.噬菌體基因組的隨機(jī)突變B.外源蛋白在噬菌體表面的表達(dá)與基因型-表型關(guān)聯(lián)C.噬菌體對真核細(xì)胞的感染能力D.噬菌體DNA的自我復(fù)制效率36、在重組蛋白質(zhì)藥物制備過程中，采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)時，常遇到目標(biāo)蛋白以包涵體形式存在。以下哪種策略最有助于獲得具有正確空間構(gòu)象的活性蛋白？A.提高培養(yǎng)溫度至42℃以促進(jìn)蛋白溶解B.使用低強(qiáng)度誘導(dǎo)劑（如低濃度IPTG）并降低誘導(dǎo)溫度C.增加溶菌酶的添加量D.直接進(jìn)行鎳柱親和純化后使用37、在噬菌體展示技術(shù)中，外源多肽或蛋白質(zhì)通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白38、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，以下哪種修飾方式最常用于延長重組蛋白在體內(nèi)的半衰期？A.磷酸化B.泛素化C.PEG化D.乙?；?9、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白40、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，下列哪種修飾方式最常用于延長其體內(nèi)半衰期？A.磷酸化B.泛素化C.PEG化D.乙?；?1、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白42、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，提高其在體內(nèi)的半衰期常采用聚乙二醇（PEG）修飾技術(shù)，該技術(shù)的主要作用機(jī)制是？A.增強(qiáng)蛋白質(zhì)的免疫原性B.降低蛋白質(zhì)的溶解度C.增大分子體積，減少腎清除D.促進(jìn)蛋白質(zhì)的降解43、在噬菌體展示技術(shù)中，外源多肽或蛋白質(zhì)通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以實(shí)現(xiàn)表型與基因型的關(guān)聯(lián)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白44、在重組蛋白質(zhì)藥物純化過程中，常用鎳柱親和層析法進(jìn)行初步純化，其主要原理依賴于目標(biāo)蛋白的哪種修飾？A.磷酸化修飾B.泛素化標(biāo)記C.GST標(biāo)簽融合D.組氨酸標(biāo)簽（His-tag）45、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在病毒表面展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pIX蛋白D.pVIII蛋白46、在蛋白質(zhì)藥物開發(fā)中，為提高重組蛋白的穩(wěn)定性與半衰期，常采用聚乙二醇（PEG）修飾技術(shù)，該修飾主要影響蛋白質(zhì)的哪項性質(zhì)？A.抗原結(jié)合特異性B.分子電荷分布C.腎臟清除速率D.二級結(jié)構(gòu)形成能力47、在噬菌體展示技術(shù)中，外源蛋白或多肽通常與噬菌體的哪種結(jié)構(gòu)蛋白融合表達(dá)，以便在噬菌體表面呈現(xiàn)？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白48、在重組蛋白質(zhì)藥物的純化過程中，His-tag標(biāo)簽最常通過哪種層析方法進(jìn)行特異性富集？A.離子交換層析B.凝膠過濾層析C.親和層析D.疏水相互作用層析49、在噬菌體展示技術(shù)中，用于篩選特異性結(jié)合靶標(biāo)蛋白的噬菌體克隆，主要依賴于以下哪種分子展示在噬菌體表面？A.噬菌體基因組DNAB.宿主菌的核糖體蛋白C.外源多肽或蛋白質(zhì)融合于噬菌體外殼蛋白D.游離的mRNA分子50、在重組蛋白質(zhì)藥物純化過程中，常利用His標(biāo)簽與鎳柱親和層析進(jìn)行初步分離，其主要原理是什么？A.蛋白質(zhì)的疏水性差異B.組氨酸殘基與鎳離子的配位結(jié)合C.蛋白質(zhì)分子大小的篩選D.抗原-抗體特異性識別

參考答案及解析1.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)利用絲狀噬菌體（如M13）的外殼蛋白展示外源多肽或蛋白。其中，pIII蛋白位于噬菌體一端，通常與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)，每顆粒噬菌體展示1-5個拷貝，適合高親和力篩選。pVIII為次要衣殼蛋白，用于短肽高頻展示，但易影響噬菌體感染能力。本題考查對噬菌體展示系統(tǒng)核心組件的理解，pIII是常用融合位點(diǎn)，故選A。2.【參考答案】C【解析】圓二色光譜（CD）可檢測蛋白質(zhì)在溶液中的二級結(jié)構(gòu)（如α-螺旋、β-折疊）含量，反映其折疊與構(gòu)象狀態(tài)。SDS用于分離蛋白質(zhì)并測定分子量，但破壞高級結(jié)構(gòu)；Westernblot用于特異性蛋白檢測，不分析構(gòu)象；RT-PCR檢測基因表達(dá)水平，與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)無關(guān)。CD是研究蛋白質(zhì)折疊、穩(wěn)定性及藥物作用機(jī)制的重要手段，故選C。3.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，M13噬菌體最常用，其pIII蛋白位于噬菌體一端，為吸附宿主菌的關(guān)鍵蛋白。將外源基因插入pIII基因中，可實(shí)現(xiàn)外源多肽或蛋白在其表面展示，便于高通量篩選。pVIII為外殼主蛋白，適合短肽展示；而pIII更適合展示較大蛋白，且展示數(shù)量可控，是常用選擇。4.【參考答案】A【解析】聚乙二醇化（PEGylation）是蛋白質(zhì)藥物修飾的常用手段，通過共價連接PEG分子，可顯著增加蛋白質(zhì)的分子量，減少腎清除，屏蔽免疫識別，從而延長其在血液循環(huán)中的半衰期。該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于干擾素、粒細(xì)胞集落刺激因子等藥物中，安全性和有效性明確。其余選項不用于常規(guī)半衰期延長策略。5.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，M13噬菌體的pIII蛋白位于噬菌體尾端，通常用于融合表達(dá)外源多肽或蛋白，因具有較低拷貝數(shù)（3~5個）且不影響噬菌體感染能力，適合高親和力篩選。pVIII為外殼主蛋白，適用于短肽展示，但外源序列過長易影響組裝。本題考查關(guān)鍵技術(shù)細(xì)節(jié)，pIII是最常用且經(jīng)典的融合位點(diǎn)。6.【參考答案】C【解析】PEG修飾（PEGylation）通過在蛋白質(zhì)表面共價連接PEG分子，增加其分子量，減少腎清除，屏蔽蛋白酶降解和免疫識別，從而顯著延長藥物在血液中的循環(huán)時間。雖然可能影響活性，但整體藥代動力學(xué)改善明顯。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于干擾素、粒細(xì)胞集落刺激因子等蛋白藥物，核心優(yōu)勢即延長半衰期，故C正確。7.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)常用M13絲狀噬菌體，外源多肽或蛋白通常與噬菌體外殼蛋白pIII或pVIII融合表達(dá)。其中，pIII蛋白位于噬菌體尾端，每顆粒含3-5個拷貝，適合展示較大蛋白；pVIII為主要外殼蛋白，拷貝數(shù)高，適用于短肽展示。因pIII容載量大且不影響噬菌體感染能力，常用于抗體或受體篩選。故本題選A。8.【參考答案】C【解析】PEG修飾（PEGylation）是在蛋白質(zhì)表面共價連接聚乙二醇鏈，從而增大其流體動力學(xué)半徑，減少腎小球?yàn)V過清除，延長血漿半衰期。同時可降低免疫原性、提高溶解度和穩(wěn)定性。雖可能略微降低結(jié)合親和力，但整體藥代動力學(xué)顯著改善，廣泛應(yīng)用于如PEG-干擾素等藥物。故正確答案為C。9.【參考答案】B【解析】噬菌體的生命周期分為裂解周期和溶原周期。溶原周期中，噬菌體DNA整合入宿主細(xì)菌染色體，成為前噬菌體，隨宿主DNA復(fù)制而同步復(fù)制，不立即引起細(xì)胞裂解。此狀態(tài)可長期維持，直至受外界刺激轉(zhuǎn)入裂解周期。選項B正確。裂解周期則直接完成復(fù)制、組裝并裂解宿主細(xì)胞；吸附和組裝僅為裂解過程中的步驟，不具備整合特性。10.【參考答案】C【解析】PEG化是指將聚乙二醇（PEG）共價連接到蛋白質(zhì)分子上，可顯著增加其分子體積，減少腎小球?yàn)V過，降低免疫原性，并提高穩(wěn)定性，從而延長蛋白質(zhì)藥物在血液循環(huán)中的半衰期，廣泛應(yīng)用于臨床蛋白藥物改良。磷酸化與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)；泛素化標(biāo)記蛋白質(zhì)降解；乙酰化多參與基因表達(dá)調(diào)控，均不具延長半衰期的主要作用。故C正確。11.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，最常用的絲狀噬菌體（如M13）通過將外源基因插入噬菌體基因組，使其表達(dá)產(chǎn)物與噬菌體外殼蛋白融合。其中，pIII蛋白位于噬菌體一端，通常與靶標(biāo)分子結(jié)合，在展示文庫構(gòu)建中廣泛用于展示抗體片段或肽段。因其拷貝數(shù)少（3-5個），適合高親和力篩選。pVIII為衣殼主蛋白，多用于短肽展示，但易影響噬菌體感染能力。本題考查對噬菌體展示系統(tǒng)核心機(jī)制的理解。12.【參考答案】B【解析】提高蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性常用手段包括：引入二硫鍵增強(qiáng)結(jié)構(gòu)剛性（A正確），通過定點(diǎn)突變優(yōu)化內(nèi)部電荷或氫鍵網(wǎng)絡(luò)（C正確），PEG修飾可增加分子尺寸、減少降解（D正確）。而增加表面疏水殘基易導(dǎo)致蛋白聚集或誤折疊，反而降低溶解度與穩(wěn)定性，故不屬于合理策略。本題考察蛋白質(zhì)工程中穩(wěn)定性調(diào)控的科學(xué)原則。13.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，外源多肽或蛋白質(zhì)常與絲狀噬菌體（如M13）的外殼蛋白融合表達(dá)。其中，pIII蛋白位于噬菌體一端，每個噬菌體僅含3-5個拷貝，適合展示較大蛋白而不影響噬菌體感染能力。pVIII為主衣殼蛋白，適用于短肽高拷貝展示，但大蛋白融合易影響組裝。因此，外源蛋白展示多選用pIII蛋白作為融合載體，確保功能完整與篩選效率。14.【參考答案】B【解析】重組蛋白易被腎清除或蛋白酶降解，半衰期短。PEG化（聚乙二醇修飾）可增大分子量，減少腎濾過；Fc融合利用IgGFc與新生兒Fc受體（FcRn）循環(huán)機(jī)制，延長血清存留時間。此兩類技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床蛋白藥物（如阿達(dá)木單抗、依那西普）。增加等電點(diǎn)或切除信號肽不直接延長半衰期，減少二硫鍵可能降低穩(wěn)定性，故B為正確策略。15.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，外源肽或蛋白質(zhì)常與絲狀噬菌體（如M13）的pIII蛋白或pVIII蛋白融合表達(dá)。其中pIII蛋白位于噬菌體一端，拷貝數(shù)少（通常3-5個），適合展示較大蛋白或需要低密度展示的分子；pVIII蛋白位于噬菌體外殼主體，拷貝數(shù)高，適合小肽展示。對于蛋白質(zhì)藥物篩選，常使用pIII蛋白融合，因其對蛋白功能影響較小且便于后續(xù)親和篩選。因此答案為A。16.【參考答案】C【解析】鎳柱親和層析（Ni-NTA）基于目標(biāo)蛋白N端或C端融合的6×His標(biāo)簽（多組氨酸標(biāo)簽）與鎳離子（Ni2?）的配位結(jié)合能力。在洗脫時通過增加咪唑濃度競爭性洗脫目標(biāo)蛋白。該方法特異性強(qiáng)、操作簡便，廣泛用于原核或真核表達(dá)的重組蛋白純化。等電點(diǎn)用于離子交換層析，分子量用于凝膠過濾，疏水性用于疏水相互作用層析。故正確答案為C。17.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)常用M13絲狀噬菌體，其外源多肽或蛋白通常與外殼蛋白pIII融合表達(dá)。pIII位于噬菌體顆粒的一端，參與感染大腸桿菌的F菌毛結(jié)合，其結(jié)構(gòu)允許外源序列插入而不破壞噬菌體感染能力。展示在pIII上的多肽與編碼該多肽的DNA共同包裹于同一噬菌體顆粒中，實(shí)現(xiàn)“表型-基因型”一對一關(guān)聯(lián)，便于后續(xù)篩選。其他蛋白如pV為內(nèi)部蛋白，不用于表面展示；pIX雖可用于展示，但容量較小，應(yīng)用不如pIII廣泛。18.【參考答案】A【解析】包涵體表達(dá)后，蛋白質(zhì)處于變性狀態(tài)，需去除變性劑（如尿素或鹽酸胍）并恢復(fù)天然構(gòu)象。透析法通過逐步降低透析液中變性劑濃度，實(shí)現(xiàn)蛋白緩慢復(fù)性，減少聚集。直接稀釋雖快但易致蛋白沉淀；高溫和高鹽通常破壞結(jié)構(gòu)，不利于復(fù)性。梯度透析可維持復(fù)性中間體穩(wěn)定性，是實(shí)驗(yàn)室最常用且有效的復(fù)性手段。19.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)常利用M13絲狀噬菌體，外源多肽或蛋白通常與噬菌體外殼蛋白pIII（次要外殼蛋白）或pVIII（主要外殼蛋白）融合表達(dá)。其中，pIII蛋白位于噬菌體一端，拷貝數(shù)少（3-5個），適合展示較大蛋白片段而不影響噬菌體感染能力；pVIII則拷貝數(shù)高，適合展示小肽。因此，展示抗體片段或較大蛋白時多選用pIII融合。故正確答案為A。20.【參考答案】C【解析】延長蛋白質(zhì)藥物半衰期的常用策略包括PEG化修飾、白蛋白融合、Fc融合等，這些方法可減少腎清除、增強(qiáng)血清穩(wěn)定性。而增加等電點(diǎn)可能改變蛋白的溶解性或?qū)е路翘禺愋越Y(jié)合，反而影響藥代動力學(xué)，且并非延長半衰期的有效手段。等電點(diǎn)影響電荷性質(zhì)，與清除速率無直接正相關(guān)。故C項不屬于有效策略，為正確答案。21.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，常用M13噬菌體作為載體，外源肽或蛋白基因與噬菌體外殼蛋白基因融合表達(dá)。pIII蛋白位于噬菌體一端，參與感染宿主菌的吸附過程，因其拷貝數(shù)少（3~5個）、對噬菌體感染性影響較小，常用于展示較大蛋白分子。pVIII蛋白為主殼蛋白，拷貝數(shù)高，適合展示小肽段。因此，外源蛋白多與pIII蛋白融合表達(dá)，便于高效篩選功能性結(jié)合蛋白。22.【參考答案】C【解析】圓二色性光譜（CD）可檢測蛋白質(zhì)中α-螺旋、β-折疊等二級結(jié)構(gòu)比例，反映其空間構(gòu)象是否正確折疊。SDS主要用于測定分子量及純度，破壞高級結(jié)構(gòu)；WesternBlot用于抗原檢測；紫外吸收光譜可測濃度，但不提供結(jié)構(gòu)信息。CD光譜在溶液狀態(tài)下非破壞性檢測，是評估蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)完整性的常用手段。23.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)常用M13絲狀噬菌體，外源多肽或蛋白通常與噬菌體外殼的pIII蛋白或pVIII蛋白融合表達(dá)。其中pIII蛋白位于噬菌體一端，拷貝數(shù)少（3~5個），適合展示較大蛋白；pVIII蛋白位于噬菌體主衣殼，拷貝數(shù)高，適合短肽展示。實(shí)際應(yīng)用中，pIII蛋白因展示效率高、不影響噬菌體感染能力而被廣泛用于抗體或受體篩選。因此，正確答案為A。24.【參考答案】C【解析】His標(biāo)簽（6×His）由6個連續(xù)組氨酸殘基組成，能特異性結(jié)合Ni2?、Co2?、Cu2?等過渡金屬離子。其中Ni2?最常用，因其與組氨酸側(cè)鏈咪唑基團(tuán)結(jié)合能力強(qiáng)、特異性較高，且成本適中。IMAC柱通常以Ni-NTA（鎳-氮川三乙酸）為配體，廣泛應(yīng)用于原核或真核表達(dá)系統(tǒng)中重組蛋白的純化。Fe2?、Mg2?、Zn2?不常規(guī)用于此技術(shù)。故正確答案為C。25.【參考答案】C【解析】噬菌體在完成復(fù)制后，通過裂解周期釋放子代病毒。此過程中，噬菌體基因編碼的溶菌酶（lysozyme）被合成并釋放到宿主細(xì)胞壁，特異性降解肽聚糖層，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂，細(xì)胞裂解。尾絲用于識別和吸附宿主細(xì)胞，衣殼是包裹核酸的蛋白質(zhì)外殼，基板參與尾部結(jié)構(gòu)組裝并觸發(fā)DNA注入，三者均不直接參與細(xì)胞壁的降解。因此，正確答案為C。26.【參考答案】C【解析】聚乙二醇（PEG）修飾是一種廣泛應(yīng)用的蛋白質(zhì)藥物理化性質(zhì)優(yōu)化技術(shù)。PEG分子共價連接至蛋白質(zhì)表面，可增加其分子大小，減少腎小球?yàn)V過，屏蔽免疫識別位點(diǎn)，從而延長血漿半衰期。增加疏水性可能導(dǎo)致聚集或快速清除；減少二硫鍵會降低蛋白質(zhì)穩(wěn)定性；信號肽在翻譯后即被切除，與半衰期調(diào)控?zé)o直接關(guān)系。因此，C為正確選項。27.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，常使用M13絲狀噬菌體，其pIII蛋白位于噬菌體顆粒的一端，負(fù)責(zé)與宿主菌的Fpilus結(jié)合。將外源基因插入pIII基因中，可實(shí)現(xiàn)外源肽段與pIII蛋白的融合表達(dá)，并展示于噬菌體表面，便于后續(xù)篩選。pV蛋白主要參與單鏈DNA的結(jié)合，不用于展示；pIX為次要外殼蛋白，雖可用于展示，但應(yīng)用不如pIII廣泛。因此，最常用的是pIII蛋白。28.【參考答案】B【解析】PEG修飾（Pegylation）是在蛋白質(zhì)藥物表面共價連接聚乙二醇分子，形成水化層，從而增大分子體積、減少腎小球?yàn)V過，降低免疫原性，延緩體內(nèi)清除速度，顯著延長血漿半衰期。該技術(shù)不增強(qiáng)酶活性，也不直接提高受體結(jié)合能力或改變等電點(diǎn)。其核心優(yōu)勢在于屏蔽抗原表位和減緩降解與排泄，因此B項正確。29.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，外源多肽或蛋白常與絲狀噬菌體（如M13）的外殼蛋白融合表達(dá)。其中，pIII蛋白位于噬菌體一端，通常用于展示較大蛋白片段，因其拷貝數(shù)少（3~5個），有利于高親和力結(jié)合篩選；pVIII為次要衣殼蛋白，適合展示小肽。本題考查核心技術(shù)原理，pIII是最常用且關(guān)鍵的融合表達(dá)載體蛋白，故選A。30.【參考答案】A【解析】聚乙二醇化（PEGylation）是蛋白質(zhì)藥物修飾的重要手段，通過共價連接PEG分子，可增加蛋白質(zhì)的分子量，減少腎清除率，屏蔽免疫識別，從而顯著延長其在血液中的半衰期。該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于干擾素、粒細(xì)胞集落刺激因子等藥物改良。脂多糖具免疫毒性，纖維素與透明質(zhì)酸非主流修飾載體，故正確答案為A。31.【參考答案】B【解析】噬菌體展示技術(shù)的核心是將外源多肽或蛋白與噬菌體外殼蛋白（如pIII或pVIII）融合表達(dá)，使目標(biāo)蛋白展示在噬菌體表面，從而能與固定靶標(biāo)特異性結(jié)合。通過多輪“結(jié)合-洗脫-擴(kuò)增”篩選出高親和力克隆。選項B正確描述了該技術(shù)的關(guān)鍵機(jī)制。其他選項雖涉及噬菌體生物學(xué)特性，但非篩選原理核心。32.【參考答案】B【解析】PEG化修飾可在蛋白質(zhì)表面形成水化層，增大分子尺寸，減少腎臟濾過，同時屏蔽免疫識別，顯著延長血漿半衰期，是臨床常用策略。選項A、C、D可能影響穩(wěn)定性或活性，但不一定延長半衰期，甚至可能加速清除。B項科學(xué)合理且廣泛應(yīng)用，為正確答案。33.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，M13噬菌體最常用于構(gòu)建展示庫，其外殼蛋白pIII位于噬菌體一端，負(fù)責(zé)識別宿主菌的Fpilus。由于pIII為次要衣殼蛋白，拷貝數(shù)少（通常1-5個），適合展示大分子蛋白而不影響噬菌體感染能力。外源多肽或蛋白常與pIII融合表達(dá)，實(shí)現(xiàn)功能性展示。pVIII為主要衣殼蛋白，適用于短肽高拷貝展示，但對大蛋白易造成結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。因此，正確答案為A。34.【參考答案】C【解析】組氨酸標(biāo)簽（His-tag）由6個連續(xù)組氨酸殘基構(gòu)成，能特異性結(jié)合過渡金屬離子。在親和層析中，Ni2?最常用于螯合到固定化NTA或IDA載體上，形成Ni-NTA樹脂，選擇性捕獲His-tag融合蛋白。其他金屬如Co2?或Cu2?也可用，但Ni2?結(jié)合能力強(qiáng)、成本低、應(yīng)用最廣。Fe2?、Mg2?、Zn2?與組氨酸親和力弱，不用于常規(guī)純化。因此，正確答案為C。35.【參考答案】B【解析】噬菌體展示技術(shù)的核心是將外源多肽或蛋白質(zhì)基因插入噬菌體外殼蛋白基因中，使表達(dá)的融合蛋白展示在噬菌體表面，同時其編碼基因包含在噬菌體內(nèi)，實(shí)現(xiàn)“表型（結(jié)合能力）”與“基因型（編碼序列）”的物理關(guān)聯(lián)。通過多輪親和篩選（如淘選），可富集能特異性結(jié)合靶標(biāo)的噬菌體克隆，進(jìn)而獲得目標(biāo)序列。該技術(shù)不依賴突變或復(fù)制效率，也不涉及感染真核細(xì)胞。故正確答案為B。36.【參考答案】B【解析】包涵體主要因蛋白表達(dá)過快、折疊不充分所致。降低IPTG濃度可減緩表達(dá)速率，降低誘導(dǎo)溫度（如25–30℃）有助于分子伴侶參與正確折疊，提高可溶性活性蛋白產(chǎn)量。高溫（A）會加劇錯誤折疊；溶菌酶（C）僅用于裂解細(xì)胞，不影響折疊過程；直接純化包涵體蛋白（D）需后續(xù)復(fù)雜復(fù)性步驟，且活性難保證。因此，B為最優(yōu)策略。37.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，常用M13絲狀噬菌體作為載體，外源基因片段插入至噬菌體基因組中編碼外殼蛋白的基因序列內(nèi)，使表達(dá)的融合蛋白展示于噬菌體表面。其中，pIII蛋白位于噬菌體一端，參與感染大腸桿菌的吸附過程，因其每個噬菌體僅含3-5個拷貝，適合展示較大外源蛋白且不影響感染能力，常用于構(gòu)建噬菌體展示文庫。pVIII蛋白雖也用于展示，但拷貝數(shù)極高，適用于短肽展示。因此，正確答案為A。38.【參考答案】C【解析】PEG化（聚乙二醇修飾）是在蛋白質(zhì)藥物表面共價連接聚乙二醇分子，可顯著增加分子體積，減少腎小球?yàn)V過，降低免疫原性，并提高穩(wěn)定性，從而有效延長藥物在血液循環(huán)中的半衰期。磷酸化、乙?；头核鼗鶠榧?xì)胞內(nèi)天然發(fā)生的翻譯后修飾，分別參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控和蛋白降解，不用于延長藥用蛋白的體內(nèi)存留時間。因此，PEG化是蛋白質(zhì)藥物工程中廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵技術(shù)，正確答案為C。39.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)常用M13絲狀噬菌體，其pIII蛋白位于噬菌體一端，參與感染宿主菌的吸附過程。外源多肽或蛋白與pIII蛋白融合后，可在噬菌體表面展示，且不影響其感染能力，便于后續(xù)篩選。pVIII為外殼主蛋白，適用于短肽展示；pIII更適用于較大蛋白片段展示，因此pIII是常用載體。40.【參考答案】C【解析】PEG化（聚乙二醇修飾）可通過在蛋白質(zhì)表面共價連接聚乙二醇分子，增加其分子量，減少腎清除率，并屏蔽免疫識別，顯著延長血漿半衰期。磷酸化、乙酰化和泛素化多為細(xì)胞內(nèi)調(diào)控修飾，泛素化甚至促進(jìn)蛋白酶體降解。因此，PEG化是蛋白質(zhì)藥物改良中最常用的半衰期延長技術(shù)。41.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，外源多肽或蛋白常與絲狀噬菌體（如M13）的外殼蛋白pIII或pVIII融合表達(dá)。其中，pIII蛋白位于噬菌體一端，拷貝數(shù)少（3~5個），適合展示較大蛋白片段，且有利于后續(xù)富集與篩選。pVIII為主外殼蛋白，拷貝數(shù)高，適合展示小肽。本題考查核心技術(shù)原理，pIII是常用融合靶點(diǎn)，故選A。42.【參考答案】C【解析】PEG修飾（PEGylation）通過共價連接聚乙二醇鏈至蛋白質(zhì)分子，顯著增大其流體動力學(xué)體積，有效避免腎臟濾過（腎清除主要過濾小于60kDa的分子），同時屏蔽蛋白表面，減少酶解和免疫識別，從而延長血漿半衰期。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于干擾素、尿酸氧化酶等蛋白藥物，故正確答案為C。43.【參考答案】A【解析】噬菌體展示技術(shù)中，外源多肽或蛋白質(zhì)常與絲狀噬菌體（如M13）的外殼蛋白pIII融合表達(dá)。pIII蛋白位于噬菌體顆粒的一端，參與感染大腸桿菌的吸附過程。因其拷貝數(shù)低（通常1~5個），適合展示較大蛋白片段而不影響噬菌體感染能