第二版食品儀器分析技術(shù)“十二五”職業(yè)教育國家規(guī)劃教材

經(jīng)全國職業(yè)教育教材審定委員會審定紫外可見吸收光譜法及其在食品分析中的應(yīng)用Contents目錄知識基礎(chǔ)紫外可見分光光度計(jì)的認(rèn)知與操作紫外可見吸收光譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)紫外可見吸收光譜法在食品分析中的應(yīng)用習(xí)慣吸收

法及應(yīng)【知識目標(biāo)】1、掌握物質(zhì)的吸收光譜曲線和光吸收定律；2、認(rèn)知紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)和各部件的作用；3、熟悉紫外-可見吸收光譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，包括溶劑的選擇、顯色條件的選擇、干擾的消除及制測定條件的養(yǎng)選成擇等；4、熟悉紫外-可見吸收光譜法的定性定定量方法；5、了解紫外-可見吸收光譜法在食品分行析中的原理及實(shí)驗(yàn)技術(shù)。行可見吸

光譜應(yīng)用【技能目標(biāo)】1、能正確使用紫外-可見分光光度計(jì)以及相關(guān)玻璃儀器；2、熟悉紫外-可見分光光度計(jì)的日常維護(hù)與保養(yǎng)；3、能正確配制標(biāo)準(zhǔn)溶液、繪制吸收曲線和工作曲線；4、能根據(jù)待測樣品和實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件進(jìn)制行最佳實(shí)驗(yàn)養(yǎng)條件成的選擇，如顯色劑用量、酸度、顯色時(shí)間、定干擾消除習(xí)以及慣儀器測定條件的選擇；5、能正確進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和處理；6、能對食品項(xiàng)目進(jìn)行定性和定量測定。制定行養(yǎng)成習(xí)慣一、光的基本特性（一）光的波粒二象性

光的本質(zhì)是電磁輻射，光的基本特性是波粒二象性。波動性和粒子性的關(guān)系可表示為：電磁波頻率越大，波長越小，能量就越大。電磁波按頻率（或波長）可分為多種波段。圖1-1部分電磁波波譜習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（二）光的存在和相互作用單色光，既單一頻率（或波長）的光。不發(fā)生色散。復(fù)合光，多種單色光混合而成的光稱為復(fù)合光?？梢姽馐请姶挪ㄗV中人眼可以感知的部分?？梢姽獾墓獠úㄩL范圍在400～780nm之間,波長小于400nm的紫外線或波長大于780nm的紅外線均不能被制人的眼睹感養(yǎng)覺出成。如圖1-2所示列出了各種色光的近似波長定范圍。行圖1-2色光的近似波長范圍制

養(yǎng)成定

習(xí)慣行實(shí)驗(yàn)證明，將兩種適當(dāng)顏色的光按照一定的強(qiáng)度比例混合，可以成為白光，那么這兩種色光就稱為互補(bǔ)色光。圖中處于對頂關(guān)系的兩種顏色的光即為互補(bǔ)色光。例如黃色光和藍(lán)色光互補(bǔ)，綠色光與紅紫色光互補(bǔ)，橙色光與青色光互補(bǔ)等等。圖1-3互補(bǔ)色光示意圖可見吸

光譜應(yīng)用制

養(yǎng)成二、物質(zhì)對光的選擇性吸收化合物之所以能呈現(xiàn)出各種各樣絢麗多彩的顏色，最根本的原因是不同物質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)不同，分子結(jié)構(gòu)中的電子能夠?qū)梢姽獍l(fā)生選擇性吸收，且化合物能夠反射和透射某些波長的光。當(dāng)一束白光通過某透明溶液時(shí)，如果定該溶液對可習(xí)見慣光區(qū)各波長的光都不吸收，即入射光全部通過溶液，這時(shí)看到的這溶液是透明無色的。當(dāng)該溶液對可行見光區(qū)各種波長的光全部吸收時(shí)，此時(shí)看到的溶液呈黑色。若某溶液選擇性地吸收了可見光區(qū)某波長的光，則該溶液即呈現(xiàn)出被吸收光的互補(bǔ)色光的顏色?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用制定行養(yǎng)成習(xí)慣完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意習(xí)慣例如：當(dāng)一束白光通過KMnO4溶液時(shí)，該溶液中的離子或分子選擇性地吸收了500～560nm的綠色光，而將其他的色光兩兩互補(bǔ)成白光而通過，只剩下紅紫色光未被互補(bǔ)，所以KMnO4溶液呈現(xiàn)紫紅色。同樣道理，K2CrO4溶液對可見光中的制藍(lán)色光有最養(yǎng)大成吸收，所以溶液呈藍(lán)色的互補(bǔ)色光黃色。定可見物質(zhì)的顏色是基于物質(zhì)對光有行選擇性吸收的結(jié)果，而物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色則是被物質(zhì)吸收光的互補(bǔ)色?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用制

養(yǎng)成三、物質(zhì)的吸收光譜曲線以不同波長的單色光作為入射光，測定某一溶液的吸光度。然后以入射光的不同波長為橫坐標(biāo)，各相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)作圖，可得到溶液的吸收光譜曲線（簡稱吸收曲線）。吸收光譜曲線是物質(zhì)的特征性曲線，定它和分子結(jié)習(xí)構(gòu)慣有嚴(yán)格的對應(yīng)關(guān)系故可作為定性分析的依據(jù)。不同的物質(zhì)，分子的結(jié)構(gòu)不同，其吸收光譜曲線也有其行特殊形狀?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用制定行養(yǎng)成習(xí)慣在吸收曲線上有一高峰（稱為吸收峰）。光吸收程度最大處所對應(yīng)的波長稱為最大吸收波長（常以λmax表示）。在進(jìn)行光度測定時(shí)，通常都是選取在λmax的波長處來測量，因?yàn)檫@時(shí)可得到最大的測量靈敏度。不同物質(zhì)的吸收曲線，其形狀和最大制吸收波長都養(yǎng)各不成相同。因此，可利用吸收曲線作為物質(zhì)初定步定性的依習(xí)據(jù)慣。不同濃度的溶液，其吸收曲線的形狀行相似，最大吸收波長也一樣，所不同的是吸收峰峰高隨濃度的增加而增高。制養(yǎng)成定

習(xí)慣行圖1-5單色光通過盛有溶液的吸收池示意圖四、光吸收定律光吸收定律是紫外-可見分光光度法的理論依據(jù)，又稱朗伯-比爾定律。當(dāng)用一適當(dāng)波長的單色光照射均勻透明的溶液時(shí)，設(shè)入射光強(qiáng)度為I0，吸收光強(qiáng)度為Ia，透射光強(qiáng)度為It，反射光強(qiáng)度為Ir，則：由于反射光強(qiáng)度很弱，其影響很小，上式可簡化為：可見吸

光譜

應(yīng)用制

養(yǎng)成定

習(xí)慣（一）透光度和吸光度透光度，又稱透射比或透光率，為透過光的強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0之比，用T表示，即當(dāng)入射光全部吸收時(shí)，It=0，T=0；當(dāng)入射光全部透過時(shí)，It=I0，所以0≤T≤1?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用吸光度，表示光束通過溶液時(shí)被吸收的程度，為透光度倒數(shù)的對數(shù)，用A表示，當(dāng)入射光全部被吸收時(shí)，I

=0，A=∞；行當(dāng)入射光全部透t過時(shí)，It=I0，A=0，所以0≤A≤∞。行（二）朗伯-比耳定律光被透明介質(zhì)吸收的比例正比于光程中吸收光的分子的數(shù)目，而與入射光強(qiáng)度無關(guān)，這就是朗伯-比耳定律，是紫外-可見分光光度法進(jìn)行定量分析的理論基礎(chǔ)。用數(shù)學(xué)公式表示為：制

養(yǎng)成式中，K為吸光系數(shù)，與入射光的波定長、物質(zhì)的習(xí)性慣質(zhì)和溶液的溫度等因素有關(guān)。朗伯-比耳定律表明：當(dāng)一束平行單色光垂直入射通過均勻、透明的吸光物質(zhì)的稀溶液時(shí)，溶液對光的吸收程度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用行制

養(yǎng)成定

習(xí)慣朗伯-比耳定律應(yīng)用的條件：一是必須使用單色光；二是吸收發(fā)生在均勻的介質(zhì)中；三是吸收過程吸光物質(zhì)相互不發(fā)生作用。必須指出的是：朗伯-比爾定律只能在一定濃度范圍內(nèi)才適用。因?yàn)闈舛冗^高或過低，溶質(zhì)會發(fā)生電離或聚合而產(chǎn)生誤差。朗伯-比耳定律適用于可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體。（三）吸光系數(shù)朗伯-比耳定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式中K稱為吸光系數(shù)，其物理意義是：單位濃度的溶液，液層厚度為1cm時(shí)，在一定波長下測得的吸光度?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用習(xí)慣K值的大小取決于吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長、溶液溫度和溶劑性質(zhì)等，與溶液濃度大小和液層厚度無關(guān)。但K值大小因溶液濃度所采用的單位不同而異。1、摩爾吸光系數(shù)ε當(dāng)濃度以物質(zhì)的量濃度(mol/L)表示，液層厚度以厘米(cm)表示時(shí)，相應(yīng)的比例常數(shù)K稱為摩爾吸光系數(shù)，以ε表示，其單位為L/(m制ol?cm)。這養(yǎng)樣成，朗伯-比耳定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式可以改寫成定：行摩爾吸光系數(shù)的物理意義是：濃度為lmol/L的溶液，于厚度為1cm的吸收池中，在一定波長下測得的吸光度。行制

養(yǎng)成定

習(xí)慣摩爾吸光系數(shù)是吸光物質(zhì)的重要參數(shù)之一，它反映吸光物質(zhì)對光的吸收能力，也反映用吸收光譜法測定該吸光物質(zhì)的靈敏度。物質(zhì)對某波長光的吸收能力愈強(qiáng)，ε愈大，測定時(shí)靈敏度也就愈高。因此，為了提高分析的靈敏度，測定時(shí)通常選擇ε大的有色化合物進(jìn)行測定，選擇具有最大ε值的波長作入射光。一般認(rèn)為靈敏度較低：ε<1×104L/(mol·cm)中等靈敏度：ε在1×104～6×104L/(mol·cm)之間高靈敏度：ε>6×104L/(mol·cm)，。摩爾吸光系數(shù)由實(shí)驗(yàn)測得。在實(shí)際測量中，不能直接取1mol/L這樣高濃度的溶液去測量摩爾吸光系數(shù)，只能在稀溶液中測量后，換算成摩爾吸光系數(shù)?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用2、質(zhì)量吸光系數(shù)a質(zhì)量吸光系數(shù)適用于摩爾質(zhì)量未知的化合物。若溶液濃度以質(zhì)量濃度ρ(g/L)表示，液層厚度以厘米(cm)表示，相應(yīng)的吸光度則為質(zhì)量吸光度，以a表示，其單位為L/(g·cm)。這樣可表示為：制

養(yǎng)成3、吸光度的加和性

在多組分體系中定，在某一波習(xí)長慣下，如果各種對光有吸收的物質(zhì)之間沒有行相互作用，則體系在該波長處的總吸光度等于各組分吸光度的和，即吸光度具有加和性，稱為吸光度加和性原理?？杀硎救缦拢嚎梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用制

養(yǎng)成定

習(xí)慣行（四）偏離朗伯-比耳定律的因素根據(jù)朗伯-比耳定律，A與c的關(guān)系應(yīng)是一條通過原點(diǎn)的直線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線，斜率為εb。但實(shí)際上往往容易發(fā)生偏離直線的現(xiàn)象而引起誤差，尤其在高濃度時(shí)更加突出，這種現(xiàn)象稱為偏離光吸收定律（如圖所示）。偏離主要源于朗伯-比耳定律本身的局限性、化學(xué)因素和光學(xué)因素。圖1-6標(biāo)準(zhǔn)曲線對光吸收定律的偏離示意圖可見吸

光譜應(yīng)用1、朗伯-比耳定律本身的局限性

比爾定律是個(gè)有限定律，只適用濃度小于0.01mol/L的稀溶液。濃度高時(shí)，吸光粒子（質(zhì)點(diǎn)）間平均距離減小，鄰近質(zhì)點(diǎn)彼此的電荷分布都會相互受到影響，將改變它們對特定輻射的吸收能力。這種影響的程度取決于物質(zhì)的濃度，它可使吸光度與濃度之間的線性關(guān)系發(fā)生偏離。為此，在實(shí)際工作中制，待測溶液養(yǎng)的濃成度應(yīng)控制在0.01mol/L以下。吸光度與濃度之定間線性關(guān)系習(xí)的慣偏離還與溶液的折射率n有關(guān)，而溶液的折射率是隨著溶液的濃度改變而改變的，所以ε也隨濃度而改變行。然而，實(shí)際上當(dāng)濃度小于0.01mol/L時(shí)，n基本是不變的。因此，光吸收定律在低濃度是正確的，只是在高濃度時(shí)才會受到限制，但不排除在高濃度時(shí)，采用差示分光光度法、多波長法等適當(dāng)方式進(jìn)行定量分析。2、化學(xué)因素

溶液對光的吸收程度決定于吸光物質(zhì)的性質(zhì)和數(shù)目。若溶液中發(fā)生了解離、堿反應(yīng)、配位反應(yīng)及締合反應(yīng)，則改變了吸光物質(zhì)的濃度，導(dǎo)致偏離光吸收定律。若化學(xué)反應(yīng)使吸光物質(zhì)濃度降低，而產(chǎn)物在測量波長處不吸收，則引起負(fù)偏差；若產(chǎn)物比原吸光物質(zhì)在測量波長處的吸收更強(qiáng)，則引起正偏差。因制此，測量前養(yǎng)的化成學(xué)預(yù)處理工作是十分重要的，如控制好顯定色反應(yīng)條件習(xí)，控慣制溶液的化學(xué)平衡等，以防止產(chǎn)生偏離。3、光學(xué)因素

吸收定律成立的前提行是：入射光是單色光。但實(shí)際上，一般單色器所提供的入射光并非是純單色光，而是包括一定波長范圍的光譜帶（此波長范圍即譜帶寬度）?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用制定行入射光的譜帶越寬，其誤差越大。實(shí)驗(yàn)證明，只要所選的入射光，其所含的波長范圍在被測溶液的吸收曲線較平坦的部分，偏離程度就要小，如圖1-7所示。養(yǎng)成習(xí)慣圖1-7入射光的非單色性對光吸收定律的影響示意圖可見吸

光譜

應(yīng)用學(xué)習(xí)情景一紫外-可見分光光度計(jì)的認(rèn)制知與操作養(yǎng)成定

習(xí)慣行制養(yǎng)成慣定

習(xí)行可見吸

光譜

應(yīng)用一、紫外/可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)紫外-可見吸收光譜測定所用的儀器是紫外-可見分光光度計(jì)（簡稱分光光度計(jì)），紫外-可見分光光度計(jì)的型

號和種類很多，就其基本結(jié)構(gòu)而言，都是由光源、單色器、吸收池、檢測器和數(shù)據(jù)處理及記錄裝置（計(jì)算機(jī)）五部分組成，如圖1-8所示。圖1-8紫外-可見分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu)示意圖習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（一）光源光源提供入射光，使待測分子產(chǎn)生吸收。光源要能提供所需波長范圍的連續(xù)光譜，具有良好的穩(wěn)定性，光強(qiáng)度足夠大，輻射能量隨波長無明顯變化，使用壽命長。常用的光源有可見光光源（熱輻射光源）和紫外線光源（氣體放電光源）。鎢燈、鹵鎢燈發(fā)射325～2500nm的連續(xù)制光譜，工作養(yǎng)范成圍為360～1000nm，穩(wěn)定性好，常用于可見分光光度計(jì)的光源。鹵鎢燈的使用壽命及發(fā)光效率高于鎢絲燈。定紫外光光源多為氣體放電光源，應(yīng)用最行多的是氫燈、氘燈（185～375nm)。氘燈的燈管內(nèi)充有氫的同位素氘，是紫外區(qū)應(yīng)用最廣泛的一種光源，輻射強(qiáng)度比相同功率的氫燈要大3～5倍。近年來，具有高強(qiáng)度和高單色性的激光已被開發(fā)用作紫外光源。已商品化的激光光源有氬離子激光器和可調(diào)諧染料激光器。行可見吸

光譜應(yīng)用（二）單色器單色器是將來自光源的復(fù)合光分散為單色光的裝置，由入射狹縫、色散元件、出射狹縫和透鏡系統(tǒng)等組成，并分離出所需要波段的光束。單色器是分光光度計(jì)的核心部件，其性能直接影響出射光的純度，從而影響測定的靈敏度、選擇性和工作曲線的線性范圍。單制色器質(zhì)量的養(yǎng)優(yōu)劣成主要取決于色散元件的質(zhì)量，常用的色散定元件有棱鏡習(xí)和光慣柵。（a）棱鏡單色器光路圖

（b）光柵單色器光路圖圖1-9

單色器光路示意圖制

養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用（三）吸收池吸收池又稱比色皿，用于盛放溶液，有玻璃和石英兩種材質(zhì)。玻璃比色皿只能用于可見光區(qū)，石英比色皿可用于紫外區(qū)和可見光區(qū)。吸收池有多種尺寸，其規(guī)格是以光程為標(biāo)志的，常用的吸收池的規(guī)格有：0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm、5.0cm等，一般為1cm。同一臺分光光度計(jì)的吸收池其透光度定應(yīng)一致，在習(xí)同一慣波長下和相同溶液下，吸收池的透光度誤差應(yīng)小于0.5%，為了減小誤差，在測量前應(yīng)對吸收池進(jìn)行配套行性檢驗(yàn)和對吸收池進(jìn)行校正?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用吸收池使用注意事項(xiàng)如下：1、拿取吸收池時(shí)，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃，不可接觸光學(xué)面。同時(shí)注意輕拿輕放，防止外力對吸收池的影響，產(chǎn)生應(yīng)力后破損。2、裝入?yún)⒈热芤汉痛郎y溶液比色皿需要按要求進(jìn)行洗滌，先用蒸餾水反復(fù)潤洗3～4次，再根據(jù)實(shí)際測定過程，用參比溶液或待測溶液潤洗3～4次。潤制洗完畢，一養(yǎng)定用成濾紙先吸干比色皿四周及底部的液滴，再用擦鏡紙小心地擦拭光學(xué)面。注意用擦鏡紙擦拭時(shí)一定要定往一個(gè)方向習(xí)進(jìn)行慣擦拭；裝液高度一般在3／4～4／5之間。行3、凡含有腐蝕玻璃的物質(zhì)的溶液（特別是堿性物質(zhì)）不得長期盛放在吸收池中。4、不能將吸收池放在火焰或電爐上進(jìn)行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤。行可見吸

光譜

應(yīng)用5、當(dāng)發(fā)現(xiàn)吸收池里面被污染后，應(yīng)用乙醚和無水乙醇的混合液（各50%）清洗，及時(shí)擦拭干凈。6、不得將吸收池的透光面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時(shí)，高度為吸收池的2/3處即可，光學(xué)面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用鏡頭紙或絲綢擦拭。7、切忌在用超聲波清洗時(shí)，一定要制注意時(shí)間不養(yǎng)要成超過半小時(shí)，功率不要太大，要用清洗玻璃器定皿的超聲習(xí)波清慣洗機(jī)清洗，清洗時(shí)毛面朝下。8、若太臟可用洗液清洗，但時(shí)間要短（幾秒鐘），再用清水清洗干凈，切忌不能用洗潔精之類的清潔劑，以免影響測量。可見吸

光譜應(yīng)用（四）檢測器許多金屬能在光的照射下產(chǎn)生電流，光愈強(qiáng)電流愈大，即光電效應(yīng)。因光照射而產(chǎn)生的電流叫做光電流。檢測器又稱接受器，其作用是對透過吸收池的光做出響應(yīng)，并轉(zhuǎn)變成電信號輸出，輸出電信號的大小與透過光的強(qiáng)度成正比。1、光電池

光電池根據(jù)半導(dǎo)體材料來制命名，常用養(yǎng)的成光電池是硒光電池和硅光電池。不同的半導(dǎo)定體材料制成習(xí)的光慣電池，對光的響應(yīng)波長范圍和最靈敏峰波長行各不相同。硒光電池對光響應(yīng)的波長范圍一般為250～750nm，靈敏區(qū)為500～600nm，而最高靈敏峰約在530nm。制養(yǎng)成可見吸

光譜

應(yīng)用光電池具有不需要外接電源、不需要放大裝置而直接測量電流的優(yōu)點(diǎn)。其不足之處是：由于內(nèi)阻小，不能用一般的直流放大器放大，因而不適于較微弱光的測量。光電池受光照持續(xù)時(shí)間太久或受強(qiáng)光照射會產(chǎn)生“疲勞”現(xiàn)象，失去正常的響應(yīng)，因此一般不能連續(xù)使用2h以上。2、光電管

光電管在紫外-可見分光光度計(jì)中應(yīng)用廣泛。它是一個(gè)陽極和一個(gè)光敏陰極組成的定真空二極習(xí)管。慣按陰極上光敏材料的不同，光電管分藍(lán)敏和行紅敏兩種，前者可用波長范圍為210～625nm；后者可用波長范圍為625～1000nm。與光電池比較，它具有靈敏度高、光敏范圍廣和不易疲勞等優(yōu)點(diǎn)。制

養(yǎng)成可見吸

光譜

應(yīng)用3、光電倍增管

光電倍增管是檢測弱光最常用的光電元件，它不僅響應(yīng)速度快，能檢測10-8～10-9s的脈沖光，而且靈敏度高，比一般光電管高200倍。目前紫外-可見分光光度計(jì)廣泛使用光電倍增管作檢測器。4、二極管陣列檢驗(yàn)器（五）數(shù)據(jù)處理及記錄裝置光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)變成電信號，經(jīng)放大后由數(shù)碼管直接顯示出透射比或吸光度．由記錄儀記定錄或用數(shù)字習(xí)顯慣示。這種數(shù)據(jù)顯示裝置方便、準(zhǔn)確，避免了人行為讀數(shù)錯(cuò)誤，而且還可以連接數(shù)據(jù)處理裝置，能自動繪制工作曲線，計(jì)算分析結(jié)果并打印報(bào)告，實(shí)現(xiàn)分析自動化。現(xiàn)在新型儀器都配置有微處理機(jī)，可以對很多數(shù)字信號進(jìn)行記錄和處理，同時(shí)也可對分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制。制定行養(yǎng)成習(xí)慣二、紫外/可見分光光度計(jì)的基本操作目前紫外/可見分光光度計(jì)品種和型號繁多，雖然不同型號的儀器操作方法略有不同，但儀器上主要旋鈕和按鍵的功能基本類似，在使用前應(yīng)詳細(xì)閱讀儀器使用說明書。紫外/可見分光光度計(jì)的基本操作主要包括以下幾個(gè)方面：1、開機(jī)關(guān)機(jī)操作；2、選擇工作波長；3、選擇測量模式；4、潤洗比色皿，依次裝入?yún)⒈热芤汉痛郎y溶液；5、用參比溶液進(jìn)行調(diào)0，調(diào)100％；6、在吸光度模式下，測定待測溶液的吸光度?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用三、紫外-可見分光光度計(jì)的類型根據(jù)使用波長范圍分類：1、可見分光光度計(jì)：波長范圍是400～780nm，只能用于測量有色溶液的吸光度；2、紫外-可見分光光度計(jì)波長范圍為制200～l00養(yǎng)0nm成，可測量在紫外、可見及近紅外有吸收的物定質(zhì)的吸光度習(xí)。慣根據(jù)光路數(shù)目可類：1、單光束式；行2、雙光束式。根據(jù)測量時(shí)提供的波長數(shù)分類：1、單波長分光光度計(jì)；2、雙波長分光光度計(jì)。制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用圖1-10不同類型分光光度計(jì)示意圖定行習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用四、紫外-可見分光光度計(jì)的校正和檢驗(yàn)為保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，新制造、使用中和修理后的紫外-分光光度計(jì)都應(yīng)定期進(jìn)行檢定。國家技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)頒布了各類紫外-可見分光光度計(jì)的檢定規(guī)程。檢定規(guī)程規(guī)定，檢定周期為半年，兩次檢定合格的儀器檢定周期可延長至一年。在驗(yàn)收儀器時(shí)應(yīng)按儀器說制明書及驗(yàn)收養(yǎng)合成同進(jìn)行驗(yàn)收。紫外-分光光度計(jì)的校驗(yàn)包括以下幾方面：1、波長準(zhǔn)確度的檢驗(yàn)；2、透射比正確度的檢驗(yàn)；3、穩(wěn)定度的檢驗(yàn)；4、雜散光的檢驗(yàn)5、吸收池配套性檢驗(yàn)。養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用五、紫外-可見分光光度計(jì)的維護(hù)與保養(yǎng)（一）工作環(huán)境要求1、儀器安放場所要求

儀器工作場所應(yīng)與化學(xué)分析操作室隔開。分光光度計(jì)應(yīng)安裝在穩(wěn)固的工作臺上，避免強(qiáng)烈的振動和持續(xù)的振動。周圍不應(yīng)有強(qiáng)磁場，以防電磁干擾。室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)，應(yīng)避免陽光制直射。2、儀器工作電源要求

儀器工作電定源一般允許習(xí)電慣壓在220V±10%，頻率（50Hz±1）HZ的單行相交流電。為保持光源燈和檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性，在電源電壓波動較大的實(shí)驗(yàn)室，最好配備功率不小于500W的穩(wěn)壓器（有過電壓保護(hù)），實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)有地線并保證儀器有良好接地性?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用3、環(huán)境溫度濕度要求

溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。室內(nèi)應(yīng)避免高溫，溫度宜保持在5～35℃。

室內(nèi)應(yīng)干燥，相對濕度宜控制在45%～65%，不應(yīng)超過80％。有條件時(shí)應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。4、環(huán)境衛(wèi)生要求

環(huán)境中的塵埃和制腐蝕性氣體養(yǎng)亦成可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限定位開關(guān)、按習(xí)鍵、慣光電偶合器的可靠性，也是造成光學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔室內(nèi)環(huán)境，保障行衛(wèi)生條件，防塵。室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性氣體（如SO2、NO2、NH3及酸霧等）。定

習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（二）儀器的日常維護(hù)與保養(yǎng)1、光源

光源壽命有限，為延長光源使用壽命，應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)，短時(shí)間內(nèi)可以不關(guān)燈，長時(shí)間不用儀器要關(guān)閉電源燈，剛關(guān)閉的電源燈不要立即重新開啟。儀器連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過3h，如需長時(shí)間使用，可間歇30min。光源燈亮度明顯減弱可不穩(wěn)定時(shí)制，應(yīng)及時(shí)更養(yǎng)換成新燈。2、單色器

單色器是儀器的核心部行分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開。選擇波長時(shí)應(yīng)平衡輕輕轉(zhuǎn)動，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒內(nèi)干燥劑（硅膠），若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。制

養(yǎng)成定

習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用必須正確使用吸收池，保護(hù)吸收池的兩3、吸收池個(gè)光學(xué)面。4、檢測器光電轉(zhuǎn)換元件不能長時(shí)間曝光，且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。儀器停止工作時(shí)，必須切斷電源。為了避免儀器積塵，在停止工作時(shí)，應(yīng)蓋5、電源6、防塵上防塵罩。7、定期通電長時(shí)間不作用儀器，行也要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用學(xué)習(xí)情景二紫外-可見吸收光譜法的實(shí)制驗(yàn)技術(shù)養(yǎng)成定

習(xí)慣行制

養(yǎng)成定

習(xí)慣典型實(shí)例

紫外

可見吸

光譜法及應(yīng)用本法適用于白砂糖、綿白糖、單晶體冰糖等顏色較淺的食糧中亞硝酸鹽的測定.一、食糖中亞硝酸鹽含量的測定（QB/T

5013-2016）1.原理食糖試樣經(jīng)處理后,在弱酸條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后,再與鹽酸萘乙行二胺偶合形成紫紅色染料,在５３８nm處有最大吸收,外標(biāo)法測得亞硝酸鹽含量。制定養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用2.試劑除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純。水為GB/T

6682規(guī)定的二級水或去離子水。(１)亞鐵氰化鉀溶液(１０６g/L)

(２)乙酸鋅溶液(２２０g/L)(３)對氨基苯磺酸溶液(４g/L)

(４)鹽酸萘乙二胺溶液(２g/L)(５)亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(２００μ

g/mL)(６)亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(５.0

μ

g/行mL)制

養(yǎng)成3.儀器和設(shè)備分析天平:感量分別為0.1mg和10mg.恒溫干燥箱.分光光度計(jì):波長范圍為３４０~１０００nm.4.分析步驟（1）試樣的預(yù)處理取５００g食糖試樣,混勻,按四分法定取樣,取樣習(xí)量慣為１００g(冰糖、方糖、冰片糖等塊狀或行片狀食糖,需粉碎后再進(jìn)行混勻取樣).制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用（2）提取稱取試樣１０g(精確至0.01g),以適量水溶解入100mL容量瓶中,加入５mL亞鐵氰化鉀溶液,搖勻,再加入５mL乙酸鋅溶液,以沉淀蛋白質(zhì).然后加水至刻度,搖勻,放置３０min,上清液用濾紙過濾,棄去初濾液１０mL,濾液備用.（3）亞硝酸鹽的測定:吸取50.0mL上述濾液于50mL帶塞比色管中,另吸取0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0，0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,7.5,10.0μg亞硝酸鈉),分別置于５０mL帶塞比色管制中,加水至養(yǎng)５成０mL.于標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入２mL對氨基苯磺酸溶液,混勻,靜置３~５min后各定加入１mL習(xí)鹽慣酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混勻,靜置行15min,用２cm比色皿,以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn),于波長５３８nm處測吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較.同時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn).養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用5．分析結(jié)果的表述（1）亞硝酸鹽含量的計(jì)算亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計(jì)）的含量按式（1-12）進(jìn)行計(jì)算。式中：制X—試樣中亞硝酸鈉的含量，mg/kg；定A—測定用樣液中亞硝酸鈉的質(zhì)量，μ行g(shù)；m—試樣質(zhì)量，ｇ；V—測定用樣液體積，mL；V0

—試樣處理液總體積，mL。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用6.精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。7.實(shí)驗(yàn)說明(１)亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液作為蛋白質(zhì)沉淀,使產(chǎn)生的亞鐵氰化鋅沉淀與蛋白質(zhì)產(chǎn)生共沉淀.(２)亞硝酸鈉易被氧化為硝酸鈉,注意加熱的制溫度和時(shí)間養(yǎng).成(３)顯色時(shí)的pH以1.9-３.0為宜,顯色后穩(wěn)定定性與室溫習(xí)有慣關(guān),顯色溫度為15-３０℃,在15-30min內(nèi)比行色為好.(４)當(dāng)樣品中亞硝酸鹽含量高時(shí),過量的亞硝酸鹽可以將生成的偶氮化合物氧化,使紅色消失,對結(jié)果產(chǎn)生影響.可以采取先放入試劑,然后再滴加試液的方法,以防止氧化.(５)鹽酸萘乙二胺有致癌作用,使用時(shí)應(yīng)注意安全.可見吸

光譜應(yīng)用二、樣品的制備（一）樣品溶液的配制紫外-可見吸收光譜法的測定通常是在溶液中進(jìn)行，固體樣品需轉(zhuǎn)變成溶液，無機(jī)樣品用合適的酸溶解或用堿熔融，有機(jī)樣品用有機(jī)溶劑溶解或抽提。有時(shí)需制要先經(jīng)濕法養(yǎng)或成干法

將樣品消化，然后再轉(zhuǎn)化成適合于光譜測定的溶液。為了得到一張如實(shí)反映樣品性質(zhì)的光譜圖，對樣定品的純化、習(xí)溶慣液濃度和溶劑的選擇都是至關(guān)重要的。固體樣行品在稱量前必須干燥至恒重，除去溶劑和水分。溶液應(yīng)澄清，若有渾濁物則必須先過濾。配制樣品溶液的濃度對不同試樣差別很大，必須調(diào)整濃度使吸收峰的頂端落在記錄紙內(nèi)。制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（二）溶劑的選擇選擇溶劑的條件除了與樣品無反應(yīng)外，還要求樣品在溶劑中能達(dá)到一定濃度，以及在所要測定的波長范圍內(nèi)溶劑本身沒有吸收。理想的溶劑應(yīng)能溶解所有類型的化合物，不易燃燒且無毒，并在全波長區(qū)透明。水是最經(jīng)濟(jì)、透光率最好的溶劑，但對多數(shù)非極性樣品不適用。三、顯色條件的選擇紫外吸收光譜法可以測定在近紫外光區(qū)有吸收的無色透明的化合物，可見吸收光譜法需要加顯色劑顯色后再測定。習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（一）顯色劑的選擇①反應(yīng)生成物在紫外、可見光區(qū)有強(qiáng)光吸收，且反應(yīng)有較高的選擇性；②反應(yīng)生成物穩(wěn)定性好，顯色條件易于控制，反應(yīng)的重現(xiàn)性好；③有色化合物與顯色劑之間顏色差別制要大，即顯養(yǎng)色成劑對光的吸收與有色化合物對光的吸收有明顯區(qū)別，一般要求兩者的最大吸收峰波長之差大于60nm。定能同時(shí)滿足上述條件的顯色劑不是很行多，因此要在初步選定顯色劑后，認(rèn)真研究顯色反應(yīng)條件。（二）顯色劑的用量顯色反應(yīng)一般可用下式表示：M

+

R

＝

MR被測組分

顯色劑

有色化合物制

養(yǎng)定

習(xí)行可見吸

光譜

應(yīng)用顯色劑應(yīng)適當(dāng)過量。通過作A-cR曲線，來獲得顯色劑的適宜用量。方法是：固定被測組分濃度和其他條件，然后加入不同量的顯色劑，分別測定吸光度A值，繪制吸光度（A）-顯色劑濃度（cR）曲線。成慣圖1-

11

吸光度與顯色劑濃度的關(guān)系曲線圖（a）曲線表明顯色劑濃度在a～b范圍內(nèi)吸光度出現(xiàn)穩(wěn)定值，因此可以在a～b間選擇合適的顯色劑用量。這類顯色反應(yīng)生成的配合物穩(wěn)定，對顯色劑濃度控制不太嚴(yán)格；圖（b）曲線表明顯色劑濃度在a～b這一段范圍內(nèi)吸光度值比較穩(wěn)定，在顯色時(shí)要嚴(yán)格控制顯色劑用量；圖（c）曲線表明，隨著顯色劑濃度增大，吸光度不斷增大，這種情況下必須十分嚴(yán)格控制顯色劑加入量或者另換合適的顯色劑。定行習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（三）顯色的時(shí)間顯色（或發(fā)色）時(shí)間：是顯色反應(yīng)完成所需要的時(shí)間；穩(wěn)定時(shí)間：是顯色后有色物質(zhì)色澤保持穩(wěn)定的時(shí)間。確定適宜時(shí)間的方法：配制一份顯色溶液，從加入顯色劑開始，每隔一定時(shí)間測吸光度一次，繪制吸光度-時(shí)間關(guān)系曲線。曲線平坦部分對應(yīng)的時(shí)間就是測制定吸光度養(yǎng)的最成適宜時(shí)間。（四）溶液的酸度溶液的pH值對溶液中待測組分的存在狀態(tài)、顯色劑本身顏色以及對顯色反應(yīng)本身存在影響。制定行養(yǎng)成習(xí)慣具體做法是固定溶液中待測組分和顯色劑的濃度，改變?nèi)芤?通常用緩沖溶液控制)的酸度(pH)，分別測定在不同酸度下溶液的吸光度A，繪制A-pH曲線（如圖1-12所

示），從中找出最適宜的pH范圍。圖1-12

A-pH關(guān)系曲線行定

習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（五）反應(yīng)的溫度吸光度的測量都是在室溫下進(jìn)行的，溫度的稍許變化，對測量影響不大，但是有的顯色反應(yīng)受溫度影響很大，需

要進(jìn)行反應(yīng)溫度的選擇和控制。特別是進(jìn)行熱力學(xué)參數(shù)的測定、動力學(xué)方面的研究等特殊工作時(shí)制，反應(yīng)溫度養(yǎng)的控成制尤為重要。此外，由于配合物的穩(wěn)定時(shí)間不一樣，顯色后放置及測量時(shí)間的影響也不能忽視，需經(jīng)實(shí)驗(yàn)選擇合適的放置、測量的時(shí)間。行制

養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用四、干擾的消除在光度分析中，體系內(nèi)存在的干擾物質(zhì)的影響有以下幾種情況：一、干擾物質(zhì)本身有顏色或與顯色劑形成有色化合物，在測定條件下也有吸收；二、在顯色條件下，干擾物質(zhì)水解，定析出沉淀習(xí)使溶慣液混濁，致使吸光度的測定無法進(jìn)行；三、干擾物質(zhì)與待測離子或顯色劑形成更穩(wěn)定的配合物，使顯色反應(yīng)不能進(jìn)行完全；四、干擾物質(zhì)本身吸收紫外光或影響待測組分對紫外光的吸收。養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用可以采用以下幾種方法來消除這些干擾作用：（一）控制酸度根據(jù)配合物的穩(wěn)定性不同，可以利用控制酸度的方法提高反應(yīng)的選擇性，以保證主反應(yīng)進(jìn)行完全。制例如，二硫腙能與Hg2+、Pb2+、Cu2+、Ni定2+、Cd2+等十習(xí)多慣種金屬離子形成有色配合物，其中與Hg2+生成的配合物最穩(wěn)定，在

0.5mol/L-1H2SO4介質(zhì)中仍能定量進(jìn)行，而行上述其他離子在此條件下不發(fā)生反應(yīng)?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用（二）選擇適當(dāng)?shù)难诒蝿┦褂醚诒蝿┫蓴_是常用的有效方法。選取的條件是掩蔽劑不與待測離子作用，掩蔽劑以及它與干擾物質(zhì)形成的配合物的顏色應(yīng)不干擾待測離子的測定。（三）利用生成惰性配合物例如鋼鐵中微量鈷的測定，常用鈷試劑制為顯色劑養(yǎng)。但成鈷試劑不僅與Co2+有靈敏的反應(yīng)，而且與Ni2定+、Zn2+、Mn習(xí)2+、慣Fe2+等都有反應(yīng)。但它與Co2+在弱酸性介質(zhì)行中一旦完成反應(yīng)

后，即使再用強(qiáng)酸酸化溶液，該配合物也不會分解。而Ni2+、Zn2+、Mn2+、Fe2+等與鈷試劑形成的配合物在強(qiáng)酸介質(zhì)中很快分解，從而消除了上述離子的干擾，提高了反應(yīng)的選擇性。行可見吸

光譜應(yīng)用（四）選擇適當(dāng)?shù)臏y量波長如K2Cr2O7存在下測定KMnO4時(shí)，不是選λmax(525nm)，而是選λ＝545nm。這樣測定KMnO4溶液的吸光度，K2Cr2O7就不干擾了。（五）分離若上述方法不易采用時(shí)，也可以采用制預(yù)先分離的養(yǎng)方成法，如沉淀、萃取、離子交換、蒸發(fā)和蒸餾以定及色譜分離習(xí)法慣(包括柱色譜、紙色譜、薄層色譜等)。此外，還可以利用化學(xué)計(jì)量學(xué)方法實(shí)現(xiàn)多組分同時(shí)測定，以及利用導(dǎo)數(shù)光譜法、雙波長法等新技術(shù)來消除干擾。定

習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用五、測定條件的選擇（一）波長的選擇選擇入射光波長的依據(jù)是該被測物質(zhì)的吸收曲線。一般情況下，應(yīng)選用最大吸收波長λmax作為入射光波長。在λmax附近波長的稍許偏移引起的吸光制度的變化較養(yǎng)小，成可得到較好的測量精度，而且以λmax為入射光測定靈敏度高。但是，如果最大吸收峰附近有干擾行存在（如共存離子或所使用試劑有吸收），或待測組分的深度太高時(shí)，則在保證有一定靈敏度情況下，可以選擇吸收較低、峰形較平坦次強(qiáng)峰的波長進(jìn)行測定，以消除干擾。制定養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（二）狹縫的選擇狹縫寬度直接影響測定的靈敏度和工作曲線的線性范圍。狹縫寬度太大，靈敏度下降，工作曲線的線性范圍變窄；狹縫寬度太小，入射光強(qiáng)度太弱，也不利于測定。應(yīng)以吸光度不再減少的最大狹縫寬度作為合適的狹縫寬度，通常狹縫寬度大約是試樣吸收峰半寬度的1/1O。（三）吸光度范圍的選擇選擇適宜的吸光度范圍，可以減小測量行結(jié)果的誤差。一般情況下，吸光度在0.1～2.0范圍內(nèi)，測定結(jié)果的相對誤差

都比較小。通常在定性測定時(shí)控制吸光度在O.7～

1.2范圍內(nèi)，定量測定時(shí)控制吸光度在0.2～0.8最為合適。制

養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用（四）參比溶液的選擇測量試樣溶液的吸光度時(shí)，先要用參比溶液調(diào)節(jié)透射比為100％，以消除溶液中其他成分以及吸收池和溶劑對光的反射和吸收所帶來的誤差。參比溶液的選擇根據(jù)待測組分溶液的性質(zhì)而定。1、溶劑參比當(dāng)試樣溶液的組成較簡單，共存的其他定組分很少且習(xí)對慣測定波長的光幾乎沒有吸收，以及顯色劑沒有吸行收時(shí)，可采用2、試劑參比如果顯色劑或其他試劑在測定波長有吸收，按顯色反應(yīng)相同的條件，只是不加入試樣溶液，同樣加入試劑和溶劑作為參比溶液。這種參比溶液可消除試劑中的組分產(chǎn)生吸收的影響。制

養(yǎng)成可見吸

光譜

應(yīng)用3、試樣參比如果試樣基體（除被測組分外的其它共存組分）在測定波長處有吸收，而與顯色劑不起顯色反應(yīng)時(shí)可按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，只是不加顯色劑，作為參比溶液。這種參比溶液適用于試樣中有較多的共存組分，加入的顯色劑量不大，且顯色劑在測定波長無吸收的情況。4、褪色參比如果顯色劑及樣品基體有吸收，可以在定顯色液中加習(xí)入慣褪色劑，選擇性地與被測離子配位（或改變其價(jià)態(tài)）行，生成穩(wěn)定無色配合物，使已顯色的產(chǎn)物褪色，用此溶液作參比，稱為褪色參比溶液。例如用鉻天青S與Al3+反應(yīng)顯色后，可以加入NH4F奪取Al3+，形成無色的[AlF6]3-。將些褪色后的溶液作參比可以消除顯色劑的顏色及樣品中微量共存離子的干擾。褪色參比是一種比較理想的參比溶液，但遺憾的是并非任何顯色溶液都能找到適當(dāng)?shù)耐噬椒?。?/p>

養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用六、定量分析方法（一）單組分定量測定1、吸光系數(shù)法（絕對法）E

1%1cm值：一定波長下，吸光物質(zhì)的溶液濃度為1g/100ml(1%)，液層厚度為1cm時(shí)，溶液的吸光度。測定樣品的吸光度（A）值，從有關(guān)手冊定上查閱出習(xí)標(biāo)準(zhǔn)慣的E1%1cm值，兩者相比，可計(jì)算出樣品的含量（行體積分?jǐn)?shù)或質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。例如：維生素B12的水溶液在361nm處的百分吸光系數(shù)1%1cm（

E

）為207，用1cm比色池測得某溶液維生素B12的吸光度是0.414，求該溶液的濃度。解：制定養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用2、標(biāo)準(zhǔn)對比法在相同條件下測定試液和某一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度（Ax）和（As），由標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（cs）可計(jì)算出試樣中的被測組分濃度（cx)。設(shè)試液和標(biāo)準(zhǔn)溶液完全符合朗伯-比爾定律，則這種方法操作簡單，但誤差較大。行使用這種方法要求cx和cs濃度接近，且都符合吸收定律。比較法適于個(gè)別樣品的測定。制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，又稱工作曲線法，繪制方法如下：（1）配制成一定濃度的待測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，進(jìn)行紫外-可見光譜掃描，找出最大吸收波長λmax。（2）配制四個(gè)以上濃度不同的待測組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液,并稀釋至相同體積，以空白溶液作參比，在選定的波長下，從低濃度至高濃度依次測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。繪制濃度（c）與吸光度（A）的關(guān)系曲線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱工作曲線）。可見吸

光譜

應(yīng)用（3）在測定樣品時(shí)，按相同的方法制備待測試液,在相同測量條件下測定試樣的吸光度A樣品，然后在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測試液濃度，或利用線性回歸方程計(jì)算出待測試液濃度，（4)計(jì)算樣品中待測組分的含量。根據(jù)朗伯-比耳定律，在吸收池厚度制不變，其他養(yǎng)條成件相同的情況下，吸光度與樣品濃度之間定呈線性關(guān)系習(xí)，但慣由于一些因素的影響，在某些濃度范圍內(nèi)行吸光度與濃度間不再具有線性關(guān)系，即對朗伯-比耳定律發(fā)生了偏離。在建立測定方法時(shí)，首先要確定符合朗伯-比耳定律的線性范圍。具體的定量測定應(yīng)在線性范圍內(nèi)進(jìn)行，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍還應(yīng)包括未知試樣濃度可能化范圍。制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用4、標(biāo)準(zhǔn)加入法樣品組成比較復(fù)雜，難于制備組成匹配的標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)加入法。將待測試樣分成若干等份，分別加入不同已知量0,c1,c2,…cn的待測組分配制溶液。由加入待測試樣濃度從低至高依次測定吸光度，作一定波長下濃度與吸光度的關(guān)系曲線．得到一條直線。若直線通過原點(diǎn)，則樣品中不含待測組分；若不通過原點(diǎn)，將直線在縱軸上的截距延長與橫軸相交．交點(diǎn)離開原點(diǎn)的距離為樣品中待測組分的濃度。圖1-14標(biāo)準(zhǔn)加入法示意圖制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用（二）多組分定量測定多組分是指在被測溶液中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上的吸光組分。進(jìn)行多組分混合物定量分析的依據(jù)是吸光度具有加和性，即溶液測得的吸光度A=A1+A2+···+An。1、各種吸光物質(zhì)的吸收曲線不相互重疊或很少重疊，則可分別在λ1和λ2處測定組分A和B的吸光度，然后按照單組分的定量方法進(jìn)行計(jì)算。制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用2、吸光物質(zhì)的吸收曲線部分重疊，組分B對A沒有干擾，但是A對B有干擾。A可以按單組分測定的方法在λ1處測定，然后換算成A的濃度cA；B的測定，在

λ2處測定溶液的吸光度A2A+B及A、B純物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)：根據(jù)上式即可求得組分B的濃度?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用3、試樣中各組分的吸收光譜互相重疊彼此干擾，設(shè)

A1a+b和A2a+b是混合體系在λ1和λ2處測得的總吸光度，兩

個(gè)組分A和B在λ1處的摩爾吸光系數(shù)分別為ε1A和ε1B，在λ2處的摩爾吸光系數(shù)分別為ε2A和ε2B，設(shè)吸收池的厚度為1cm。根據(jù)朗伯-比耳定律，可得到如下聯(lián)制立方程組：養(yǎng)成定

習(xí)慣行定

習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用七、誤差分析（一）溶液因素誤差1、待測物質(zhì)本身的因素引起誤差待測物本身的因素是指在一定條件下，待測物參與了某化學(xué)反應(yīng)，包括與溶劑或其他離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，以及本身發(fā)生離解或聚合等。本身濃度發(fā)生了改變，導(dǎo)制致偏離光吸養(yǎng)收定成律。2、溶液中其他因素引起誤差除了待測組分本身的原因外，溶液中其行他因素，例如溶劑的性質(zhì)及共存物質(zhì)的不同，都會引起溶液誤差。減除這類誤差的方法，一般是選擇合適的參比溶液，而最有效的方法是使用雙波長分光光度計(jì)。行制

養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用（二）儀器因素誤差1、儀器的非理想性引起的誤差例如，非單色光引起對光吸收定律的偏離；波長標(biāo)尺來作校正時(shí)引起光譜測量的誤差；吸光度受吸光度標(biāo)尺誤差的影響等。2、儀器噪聲的影響例如，光源強(qiáng)度波動、光電管噪聲、定電子元件噪習(xí)聲慣等。3、吸收池引起的誤差吸收池不匹配或吸收池透光面不平行，吸收池定位不確定或吸收池對光方向不同均會使透射比產(chǎn)生差異，結(jié)果產(chǎn)生誤差?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用學(xué)習(xí)情景三制

養(yǎng)成紫外-可見吸收光譜法在食品分定析中的習(xí)應(yīng)慣用行可見吸

光譜應(yīng)用一、水產(chǎn)品中甲醛的測定甲醛又稱蟻醛，無色、有強(qiáng)烈刺激性氣味的氣體。易溶于水、醇和醚。甲醛在常溫下是氣態(tài)，通常以水溶液形式出現(xiàn)。37%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）或40%（體積分?jǐn)?shù)）的甲醛水溶液叫做福爾馬林。在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、生物學(xué)和醫(yī)藥中被普遍用作消毒、防腐和熏蒸劑。甲醛對人體和動物具制有較高毒性養(yǎng)。成世界衛(wèi)生組織將其確定為致癌、致畸物質(zhì)和公定認(rèn)的變態(tài)反習(xí)應(yīng)慣源。甲醛為國家明文規(guī)定的禁止在食品中行使用的添加劑，食品中不得檢出，但不少食品中都不同程度檢出了甲醛的存在。甲醛已經(jīng)被不法商販廣泛用于泡發(fā)各種水產(chǎn)品中。SC/T3025-2006是農(nóng)業(yè)部現(xiàn)行的水產(chǎn)品中甲醛定性、定量測定標(biāo)準(zhǔn)。定

習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用1.原理水產(chǎn)品中的甲醛在磷酸介質(zhì)中經(jīng)水蒸氣加熱蒸餾，冷凝后經(jīng)水溶液吸收，蒸餾液與乙酰丙酮反應(yīng)．生成黃色的二乙?；涠谆拎ぃ梅止夤舛扔?jì)在413nm處比色定量。2.試劑(1)磷酸溶液（l+9)取l00mL磷酸，制加到900mL養(yǎng)的水成溶液中，混勻。(2)乙酰丙酮溶液

稱取乙酸銨25g，溶于100mL蒸餾水中，加冰乙酸3mL和乙酰丙酮0.4mL,混勻行，貯存于棕色瓶，在2℃～8℃冰箱內(nèi)可保存一個(gè)月。(3)

0.lmol/L碘溶液

稱取40g碘化鉀，溶于25mL水中，加入12.7g碘，待碘完全溶解后，加水定容至1000mL，移入棕色瓶中，暗處貯存。行可見吸

光譜應(yīng)用lmol/L氫氧化鈉溶液。硫酸溶液（1+9）。0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按GB/T5009.1中規(guī)定的方法標(biāo)定。0.5％淀粉溶液：此液應(yīng)當(dāng)日配置。甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液

吸取O.3mL制含量為36％養(yǎng)～3成8％甲醛溶液于l00mL容量瓶中，加水稀釋至刻定度，為甲醛習(xí)標(biāo)慣準(zhǔn)貯備溶液，冷藏保存兩周。(9)

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（5μg/mL

)

根據(jù)甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濃度，精密吸取適量于100

mL容量瓶中，用水定容至刻度，配置甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（5μg/mL)，混勻備用，此液應(yīng)當(dāng)日配置。制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用3.儀器(1)分光光度計(jì)波長范圍為360nm～800nm。(2)圓底燒瓶l000mL/2000mL、25OmL。(3)

容量瓶

200mL。(4)

納氏比色管 20mL

。調(diào)溫電熱套或電爐。組織搗碎機(jī)。蒸餾液冷凝、接收裝置。4.分析步驟(1)取樣①

鮮活水產(chǎn)品

取肌肉等可食部分測定。魚類去頭、去鱗，取背部和腹部肌肉；蝦去頭、去殼、去腸腺后取肉；貝類去殼后取肉；蟹類去殼、去性腺和肝臟后取肉?？梢娢?/p>

光譜

應(yīng)用冷凍水產(chǎn)品經(jīng)半解凍直接取樣，不②冷凍水產(chǎn)品可用水清洗。③

水發(fā)水產(chǎn)品

水發(fā)水產(chǎn)品可取其水發(fā)溶液直接測定?；?qū)悠窞r水后，取可食部分側(cè)定。(2)樣品處理取得的樣品，用組織搗碎機(jī)搗碎，混制合均勻后稱養(yǎng)取成10.00g于250

mL圓底燒瓶中，加入20

mL定蒸餾水，用習(xí)玻璃慣捧攪拌棍勻，浸泡30min后加10mL磷酸（行l(wèi)+9）溶液后立即通水入水蒸氣蒸餾。接收管下口事先插入盛有20mL蒸餾水且置于冰浴的蒸餾液接收裝置中。收集蒸餾液至200mL，同時(shí)做空白對照實(shí)驗(yàn)。收光譜

及應(yīng)(4)操作方法①甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液的標(biāo)定精密吸取甲醛標(biāo)貯備溶液10.00mL，置于250mL碘量瓶中，加入25.00mL0.1mol/L碘溶液,7.50mL

1mol/L氫氧化鈉溶液，放置15min，在加入10.00mL(1+9)硫酸，放置15min；用濃度為0.1mol/L的硫代硫酸鈉制標(biāo)準(zhǔn)溶液滴養(yǎng)定成，當(dāng)?shù)沃恋S色時(shí)，加入1.00mL

O.5％淀粉定指示劑，習(xí)繼續(xù)慣滴定至藍(lán)色消失，記錄所用硫代硫酸鈉體積行（Vl

)mL。同時(shí)用水作試劑空白滴定，記錄空白滴定所用硫代硫酸鈉體積（V0）mL。甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濃度用下式計(jì)算：養(yǎng)成式中：1X--甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液中甲醛的濃度，mg制/L；X0--空白滴定消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的定體積數(shù)，m習(xí)L；慣V1--滴定甲醛消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的行體積數(shù)，mL；

C--硫代硫酸鈉溶液準(zhǔn)確的摩爾濃度，mol/L；15--1mol/L碘相當(dāng)甲醛的量，mg；10--所用甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液的體積，mL。制定養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用②標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取5μg/mL甲醛標(biāo)準(zhǔn)液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL于20mL納氏比色管中，加水至10mL；加人lmL乙酸丙酮溶液，混合均勻，置沸水浴中加熱10min，取出用水冷卻至室溫；以空白液為參比，于波長413nm處，以1cm比色皿進(jìn)行比色，測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。③樣品測定根據(jù)樣品蒸餾液中甲醛濃度高低，吸取行蒸餾液1ml～10mL，補(bǔ)充蒸餾水至10mL，測定過程同（標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制），記錄吸光度。每個(gè)樣品應(yīng)作兩個(gè)平行測定，以其算術(shù)平均值為分析結(jié)果。制

養(yǎng)成可見吸

光譜

應(yīng)用（4）結(jié)果計(jì)算試樣中甲醛的含量按式（1-17）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留兩位小數(shù)。式中：X2--水產(chǎn)品中甲醛含量，單位為毫克每定千克，mg/習(xí)kg慣；C2--查曲線結(jié)果，單位為微克每毫升μ行g(shù)/mL；10--顯色溶液的總體積，單位為毫升mL；m2--樣品質(zhì)量，單位為克g；V2--樣品測定取蒸餾液的體積，單位為毫升mL；200--蒸餾液總體積，單位為毫升mL?？梢娢?/p>

光譜應(yīng)用（5)回收率回收率≥60％。

(6)檢出限樣品中甲醛的檢出限為0.50mg/Kg。

(7)精密度在重復(fù)性條件下獲得兩次獨(dú)立測定結(jié)制果：養(yǎng)成樣品中甲醛含量≤5

mg/kg時(shí)，相對定偏差≤10%習(xí)；慣樣品中甲醛含量＞5

mg/kg時(shí)，相對行偏差≤5％。二、干果中亞硫酸鹽的測定漂白劑是指可使食品中的有色物質(zhì)經(jīng)化學(xué)作用分解轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色物質(zhì)或使其褪色的食品添加劑,包括還原型漂白劑和氧化型漂白劑.我國使用的大都是亞硫酸類化合物的還原型漂白劑.它們通過所產(chǎn)生的二氧化硫的還原作用,來抑制、破壞食品的變色因子,使食品褪色或免于發(fā)生褐變,一般在食品的加工過程中要求漂白劑除對食品的制色澤有一定養(yǎng)作用成外,對食品的品質(zhì)、營養(yǎng)價(jià)值及保存期均不應(yīng)有不良的改變.DB２２/T１８４２—２０１３為吉林定省地方標(biāo)準(zhǔn)習(xí),用慣分光光度法測定干果中亞硫酸鹽的含量.行定行養(yǎng)成習(xí)慣1.原理樣品中亞硫酸鹽與EDTAＧ２鈉形成穩(wěn)定絡(luò)合物,再與鹽酸及鹽酸副玫瑰苯胺作用生成紫紅色絡(luò)合物,與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量.2.試劑(１)碘溶液(0.1mol/L).(２)鹽酸副玫瑰苯胺使用液(0.2％).制(３)氫氧化鈉溶液(１mol/L)(４)淀粉指示劑(５)磷酸溶液(３０％)(６)氨基磺酸銨溶液(0.3％)

(７)EDTA-Na２溶液(0.05mol/L)定行養(yǎng)成習(xí)慣(８)EDTA-Na

２吸收儲備液:(９)EDTA-Na２吸收工作液(10)鹽酸副玫瑰苯胺使用液(0.02%)(11)亞鐵氰化鉀溶液(12)乙酸鋅溶液(13)硫代硫酸鈉溶液(0.1mol/L)(14)二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液(15)二氧化硫使制用液３．儀器(１)分析天平:感量為0.1mg.

(２)可見分光光度計(jì).(３)組織粉碎機(jī).(４)超聲波儀.制

養(yǎng)成４．分析步驟(１)試樣制備:干果樣品粉碎后,備用.(２)試樣處理稱取５g試樣(精確至0.01g)于50mL比色管中,加入EDTA-Na２吸收工作液,用超聲波儀超聲處理９０min后,加入2.5mL亞鐵氰化鉀溶液和2.5mL乙酸鋅溶液,用水轉(zhuǎn)移至1-100mL容量瓶,用水定容至刻度.(３)測定吸取系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)使用液置于２５定mL帶塞比習(xí)色管慣中,加入試劑量見表１Ｇ２.另吸?。祄L樣品濾液加入２５

mL帶塞比色管中,于試樣及標(biāo)準(zhǔn)管中各行加入8.0mLEDTA-Na2吸收工作液、0.5mL氨基磺酸銨溶液,放置５min后加入1.0mL氫氧化鈉溶液及0.5mL鹽酸副玫瑰苯胺使用液,混勻,放置２０min,待用.于波長５５０nm處測吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較.制定行養(yǎng)成習(xí)慣制養(yǎng)成習(xí)慣５．結(jié)果計(jì)算試樣中二氧化硫的含量可按式(１)計(jì)算式中:X———試樣中二氧化硫的含量,mg定/kg;A———測定用樣品液中二氧化硫的行含量,μ

g;m———樣品的質(zhì)量,g;V———測定用樣品液的體積,mL;結(jié)果保留兩位有效數(shù)字.養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用一、紫外分光光度法紫外吸收光譜法是基于物質(zhì)對紫外光的選擇性吸收進(jìn)行分析測定的方法。紫外光區(qū)的波長范圍是10～400nm，主要是利用200～400nm的近紫外光區(qū)的輻射進(jìn)行測制定。紫外吸收光譜與可見吸收光譜同屬電定子光譜，都習(xí)是慣由于分子中價(jià)電子能級躍遷產(chǎn)生的。紫外吸收光行譜可對在紫外光區(qū)有吸收峰的物質(zhì)進(jìn)行鑒定和結(jié)構(gòu)分析（須與紅外光譜、核磁共振波譜和質(zhì)譜等配合使用）；還可以測定在近紫外光區(qū)有吸收的無色透明的化合物，測定方法簡便且快速。制

養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用由于具有π電子和共軛雙鍵的化合物，在紫外光區(qū)會產(chǎn)生強(qiáng)烈的吸收，其摩爾吸光系數(shù)可達(dá)104～105，因此紫外吸收光譜法的定量分析具有很高靈敏度和準(zhǔn)確度，可測至10-4～10-7g/mL，相對誤差可達(dá)1％以下，因而它在定量分析領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。二、有機(jī)化合物紫外吸收光譜的產(chǎn)定生紫外吸收光譜是由于有機(jī)化合物中價(jià)電子的躍遷而產(chǎn)生的。有機(jī)分子中，主要含有三種類型的行價(jià)電子：形成單鍵的σ電子；形成雙鍵的π電子；未成鍵的n電子。制

養(yǎng)成定

習(xí)慣行可見吸

光譜

應(yīng)用以σ鍵為例。原子A和原子B相互作用，各以一個(gè)原子軌道形成兩個(gè)能量不同的分子軌道。一個(gè)分子軌道能量比原來的軌道低，為成鍵分子軌道，以σ表示，是由A與B的原子軌道相加而成；另一個(gè)分子軌道能量則比原來的高，為空的反鍵分子軌道，以σ*表示，是由A與B的原子軌道相減而成。圖1-16價(jià)電子躍遷示意圖制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用由圖1-17所示可以看出電子的躍遷方式有以下幾種：σ→σ*、n→σ*、π→π*、n→π*

、σ→π*

、π→σ*（

*表示反鍵軌道），常見是的前四種。各種躍遷所需要的能量大小不同，由大到小的順序?yàn)棣摇?

>n→σ*

=π→π*

>n→π*。圖1-17電子能級圖及電子躍遷示意圖可見吸

光譜

應(yīng)用1、σ→σ*躍遷

σ鍵的電子云在鍵軸方向相互重疊，鍵結(jié)合牢固，故激發(fā)σ電子所需要的能量大。σ→σ*躍遷所需能量最大，這種躍遷譜帶都落在遠(yuǎn)紫外區(qū)或真空紫外區(qū)，λmax<

170nm。飽和碳?xì)浠衔镏缓薪Y(jié)合牢固的σ鍵，僅在遠(yuǎn)紫外區(qū)可觀察到它們的吸收光譜，如甲烷，λmax=125nm。一般紫外-可見分光光度計(jì)不能用來研究遠(yuǎn)紫外吸收光譜。2、n→σ*躍遷

n電子比成鍵電子受原子制核束縛小，養(yǎng)一成般活動性大，最容易被激發(fā)。含有未共享電子定對的取代基習(xí)都慣可能發(fā)生n→σ*躍遷。因此，含有S、N、O、Cl、行Br、I等雜原子的飽和烴衍生物除了σ→σ*躍遷外，還有n→σ*躍遷。n→σ*躍遷能量比σ→σ*躍遷能量要低，一般λmax在200nm左右，譜帶落在遠(yuǎn)紫外區(qū)，如甲醇λmax=183nm。但n→σ*躍遷所需能量與n電子所屬原子的性質(zhì)關(guān)系很大。雜原子的電負(fù)性越小，電子越易被激發(fā)，激發(fā)波長越長，有時(shí)也落在近紫外區(qū)。如甲胺λmax=213nm。定

習(xí)慣可見吸

光譜

應(yīng)用3、π→π*躍遷

π鍵是在鍵軸垂直方向相互側(cè)面重疊，重疊比σ鍵小，故容易被激發(fā)。當(dāng)分子中含有不飽和鍵或芳環(huán)時(shí)，會產(chǎn)生π→π*躍遷。π→π*躍遷所需能量較少，并隨著雙鍵共

軛程度的增加而降低。含孤立雙鍵體系的π→π*躍遷能量比n→

σ*躍遷能量高，如乙烯，λmax=185nm；當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)π鍵處于共扼關(guān)系時(shí)，π→π*躍遷的譜帶將隨著共扼體系的增大而向長波方向移動至近紫外甚至可見光區(qū)，如丁二制烯，λmax=21養(yǎng)7nm成，己三烯λmax=258nm。4、n→π*躍遷當(dāng)分子中含有C=O、N=行O、C=S等基態(tài)時(shí)（即π鍵的一端連接含未成鍵電子的雜原子），則雜原子的n電子可以被激發(fā)到π*反鍵軌道，產(chǎn)生n→π*躍遷。從圖1-17可以看出，n→π*躍遷所需能量最低，在近紫外區(qū)，有時(shí)在可見區(qū)。許多化合物既有p電子又有n電子，在電磁波作用下，既有π→π*躍遷又有n→π*躍遷。如-COOR基團(tuán)，π→π*躍遷λmax=165nm；而n→π*躍遷λmax=205nm。制定行養(yǎng)成習(xí)慣可見吸

光譜應(yīng)用一般紫外-可見分光光度計(jì)只能提供190～850nm范圍內(nèi)的單色光，只能測量n→σ*和n→π*以及部分π→π*躍遷的吸收，無法測量產(chǎn)生200nm以下吸收的σ→σ*躍遷。制

養(yǎng)成可見吸

光譜應(yīng)用三、影響紫外-可見吸收光譜的因素（一）生色團(tuán)和助色團(tuán)生色團(tuán)是指能產(chǎn)生紫外-可見吸收的官能團(tuán)，如C=C，C=O，N=N，N=O等具有π電子的基團(tuán)稱為生色團(tuán)。不同分子內(nèi)孤立存在的相同生色團(tuán)的吸收峰具有相近的λmax和相近的εmax。助色團(tuán)是指有些基團(tuán)或原子本身在20定0nm以上不習(xí)產(chǎn)生慣吸收，但當(dāng)這些基團(tuán)與生色團(tuán)相連時(shí)，能夠使生行色團(tuán)的吸收峰明顯

向長波方向移動，同時(shí)增強(qiáng)吸收峰的強(qiáng)度．這類基團(tuán)稱為助色團(tuán)。助色團(tuán)的特點(diǎn)在于通常都含有n電子，與生色團(tuán)相連時(shí)．n電子與π電子形成p-π共扼．導(dǎo)致π→π