ICS65.020.20CCSB05DB34DB34/T3715—2020白鶴芋組培快繁技術(shù)規(guī)程TechnicalregulationsfortissuecultureandrapidpropagationofSpathiphyllumkochii安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB34/T3715—2020本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由阜陽(yáng)師范大學(xué)提出。本文件由安徽省林業(yè)局歸口。本文件起草單位：阜陽(yáng)師范大學(xué)、安徽大匯生態(tài)科技發(fā)展有限公司、亳州市花易捷花卉經(jīng)營(yíng)管理有限公司、安徽農(nóng)之源生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司、安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、太和縣淼林現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司。本文件主要起草人：蘭偉、凌飛東、鄭萍、任杰、尚冰冰、劉曉艷、謝欣雨、張?jiān)?、胡新、王靜宇、王顯梅、劉峰、王先亮、侯林威。DB34/T3715—20201白鶴芋組培快繁技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了白鶴芋（Spathiphyllumkochii）組培快繁的組培設(shè)施、培養(yǎng)基配制、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗、組培苗分級(jí)、檔案管理。本文件適用于白鶴芋組培育苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T2289林木種苗生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)檔案NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4組培設(shè)施按照NY/T2306的規(guī)定執(zhí)行。5培養(yǎng)基配制5.1培養(yǎng)基類型的選擇選擇MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。5.2MS培養(yǎng)基配制按照NY/T2306的規(guī)定執(zhí)行。5.3培養(yǎng)基配方5.3.1腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS＋6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠5.5g/L。5.3.2繼代增殖培養(yǎng)基2DB34/T3715—2020MS＋6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L＋KT（6-糠基氨基嘌呤）0.1mg/L+白砂糖30g/L+卡拉膠5.3.3生根培養(yǎng)基1/2MS＋NAA0.5mg/L＋AC（活性炭）0.3g/L+白砂糖20g/L+卡拉膠5.5g/L。5.4培養(yǎng)基pH值用pH計(jì)或pH試紙測(cè)培養(yǎng)基pH值，用1mol/LHCL或1mol/LNaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至5.8。5.5培養(yǎng)基分裝利用自動(dòng)灌裝機(jī)分裝，每升分裝25～30瓶。分裝時(shí)培養(yǎng)基不得沾在培養(yǎng)瓶口周圍。5.6培養(yǎng)基滅菌-2～1.2kg-2、121℃下，培養(yǎng)基滅菌15min～20min，并盡快取出存放固定位置，不得與未滅菌物品混放。配制的培養(yǎng)基應(yīng)12h內(nèi)進(jìn)行滅菌。6愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)6.1外植體選取在生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的白鶴芋植株上，選取幼嫩的側(cè)芽為外植體備用。6.2外植體清洗將選取的外植體在自來(lái)水下流水沖洗15min～20min。6.3外植體消毒在超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌濾紙吸干外植體表面水分，浸入70％乙醇中消毒20s～30s后，將70%乙醇倒去，用無(wú)菌水沖洗3次，再浸入2.0％次氯酸鈉溶液消毒15min～20min，倒出次氯酸鈉溶液，用無(wú)菌水沖洗4～5次，置于無(wú)菌濾紙上晾干備用。6.4外植體接種6.4.1接種工具消毒將剪刀、鑷子等接種工具在高壓滅菌鍋中滅菌后，放置在超凈工作臺(tái)上。接種時(shí)，接種工具用電熱滅菌器滅菌，然后在無(wú)菌工具放置架上冷卻至室溫備用。6.4.2接種將已消毒的外植體去除外層苞葉和下端切口，留取1.5cm～2.0cm長(zhǎng)頂芽，接種在4.3.1腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。每瓶培養(yǎng)基接種2個(gè)～3個(gè)頂芽。6.4.3標(biāo)記接種后，每批用記號(hào)筆將品種代號(hào)、培養(yǎng)基編號(hào)、工作人員編號(hào)及接種日期等信息標(biāo)示在培養(yǎng)瓶上；記錄本人的接種數(shù)量，包括母瓶數(shù)和接種瓶數(shù)。DB34/T3715—202036.5培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度為24℃~26℃,光照強(qiáng)度2000lx～3000Lx，連續(xù)定時(shí)光照時(shí)間12h/d。6.6培養(yǎng)時(shí)間外植體接種后，連續(xù)培養(yǎng)20d左右，外植體逐漸膨大，葉腋處萌發(fā)許多不定芽。繼續(xù)培養(yǎng)45d~50d后，不定芽長(zhǎng)成芽叢。7繼代增殖培養(yǎng)7.1轉(zhuǎn)接將芽叢分成大小相對(duì)一致的兩半，轉(zhuǎn)接到4.3.2繼代增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。如此反復(fù)，通過(guò)以芽叢倍增的方式，實(shí)現(xiàn)幼苗大量增殖。7.2培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度為24℃~26℃,光照強(qiáng)度2000lx～3000Lx，連續(xù)定時(shí)光照時(shí)間12h/d。7.3培養(yǎng)時(shí)間一般為45d左右。7.4培養(yǎng)代數(shù)繼代增殖次數(shù)控制在10代以內(nèi)。8生根培養(yǎng)8.1轉(zhuǎn)接將苗高3.0cm以上，生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)一致的無(wú)根組培苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中。8.2培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度為24℃~26℃,光照強(qiáng)度2000lx～3000Lx，連續(xù)定時(shí)光照時(shí)間12h/d。8.3培養(yǎng)時(shí)間一般為30d左右。9煉苗9.1煉苗標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)的根、莖、葉俱全的完整植株，基部長(zhǎng)出3～5條不定根，株高4.0cm～6.0cm，3~4片葉時(shí)，便可煉苗。9.2煉苗條件DB34/T3715—20204將培養(yǎng)瓶放置在遮陽(yáng)度為5070溫度為24℃~26℃的溫室中，把培養(yǎng)瓶蓋全部打開(kāi)或半打開(kāi)煉苗。9.3煉苗時(shí)間一般煉苗時(shí)間為3d～5d，然后再移栽。10組培苗分級(jí)根據(jù)植株長(zhǎng)勢(shì)，葉片色澤，結(jié)合苗高，可將白鶴芋組培苗分為一級(jí)苗、二級(jí)苗、三級(jí)苗和不合