2025年獸醫(yī)化驗(yàn)員知識(shí)考核試卷及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.實(shí)驗(yàn)室生物安全二級(jí)（BSL-2）操作中，處理可能含有高致病性病原的樣本時(shí)，錯(cuò)誤的防護(hù)措施是：A.佩戴N95口罩B.使用生物安全柜進(jìn)行操作C.樣本離心時(shí)使用密封轉(zhuǎn)子D.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后直接用清水沖洗臺(tái)面2.瑞氏染色法中，緩沖液的最適pH值為：A.5.0-5.5B.6.0-6.5C.7.0-7.5D.8.0-8.53.犬血常規(guī)檢測(cè)中，使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀時(shí)，若血小板計(jì)數(shù)結(jié)果顯著高于手工計(jì)數(shù)，最可能的干擾因素是：A.樣本溶血B.樣本中存在小紅細(xì)胞C.抗凝劑過量D.檢測(cè)時(shí)間超過2小時(shí)4.檢測(cè)動(dòng)物血清中總蛋白含量時(shí)，最常用的方法是：A.雙縮脲法B.凱氏定氮法C.酚試劑法D.考馬斯亮藍(lán)法5.進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)時(shí)，若樣本為化膿性感染的深部組織，優(yōu)先選擇的培養(yǎng)基是：A.普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂B.麥康凱瓊脂C.血瓊脂平板D.SS瓊脂6.以下哪種病毒檢測(cè)方法屬于抗原檢測(cè)技術(shù)？A.實(shí)時(shí)熒光定量PCRB.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）C.中和試驗(yàn)D.核酸雜交7.實(shí)驗(yàn)室高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)條件是：A.100℃，30分鐘B.121℃，15-20分鐘C.135℃，5分鐘D.160℃，2小時(shí)8.奶牛乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)（SCC）超過多少時(shí)，提示可能患有臨床型乳房炎？A.10萬/mLB.50萬/mLC.100萬/mLD.500萬/mL9.檢測(cè)犬細(xì)小病毒（CPV）抗原時(shí)，膠體金快速檢測(cè)試紙條的原理是：A.抗原-抗體直接結(jié)合B.雙抗體夾心法C.競(jìng)爭(zhēng)抑制法D.間接法10.進(jìn)行血涂片鏡檢時(shí)，若發(fā)現(xiàn)大量晚幼紅細(xì)胞，最可能的臨床意義是：A.再生性貧血B.非再生性貧血C.白血病D.嚴(yán)重感染11.生化分析儀校準(zhǔn)的頻率通常為：A.每次檢測(cè)前B.每周1次C.每季度1次D.每年1次12.檢測(cè)弓形蟲IgM抗體時(shí)，若結(jié)果為陽性，提示：A.既往感染B.急性感染期C.疫苗免疫后D.檢測(cè)結(jié)果假陽性13.進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，若某抗生素的抑菌圈直徑為15mm（臨界值為14mm敏感、12mm中介、10mm耐藥），其判讀結(jié)果應(yīng)為：A.敏感B.中介C.耐藥D.無法判斷14.豬瘟病毒（CSFV）檢測(cè)中，RT-PCR擴(kuò)增的靶基因通常選擇：A.E2基因B.NP基因C.M基因D.HA基因15.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制中，室內(nèi)質(zhì)控的“失控”標(biāo)準(zhǔn)通常指：A.連續(xù)3次結(jié)果超出均值±1SDB.單次結(jié)果超出均值±3SDC.20次結(jié)果中2次超出均值±2SDD.結(jié)果與臨床癥狀完全不符二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共30分，多選、少選、錯(cuò)選均不得分）1.影響血液涂片質(zhì)量的因素包括：A.推片角度（30°-45°）B.血液量（1-2μL）C.推片速度（勻速）D.載玻片清潔度2.PCR檢測(cè)的關(guān)鍵步驟包括：A.模板DNA提取B.引物設(shè)計(jì)特異性C.退火溫度優(yōu)化D.擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)3.犬血清生化指標(biāo)中，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）升高可能提示：A.肝細(xì)胞損傷B.肌肉損傷C.腎功能異常D.胰腺炎4.革蘭氏染色的注意事項(xiàng)包括：A.涂片厚度適中，避免過厚B.結(jié)晶紫染色時(shí)間不超過1分鐘C.95%乙醇脫色時(shí)間需嚴(yán)格控制（10-30秒）D.沙黃復(fù)染時(shí)間5分鐘以上5.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的內(nèi)容包括：A.儀器校準(zhǔn)與維護(hù)B.試劑有效期管理C.人員操作培訓(xùn)D.檢測(cè)結(jié)果與臨床的符合性分析6.檢測(cè)動(dòng)物糞便中寄生蟲蟲卵時(shí)，常用的方法有：A.直接涂片法B.飽和鹽水漂浮法C.沉淀法D.瑞氏染色法7.動(dòng)物病毒分離培養(yǎng)的常用方法包括：A.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種B.雞胚接種C.細(xì)胞培養(yǎng)D.血瓊脂培養(yǎng)8.影響ELISA試驗(yàn)結(jié)果的因素有：A.包被抗原/抗體的濃度B.封閉液的選擇（如BSA、脫脂奶粉）C.孵育溫度與時(shí)間D.洗板次數(shù)與殘留液量9.血常規(guī)檢測(cè)中，中性粒細(xì)胞增多常見于：A.細(xì)菌感染B.病毒感染C.應(yīng)激反應(yīng)D.再生性貧血10.實(shí)驗(yàn)室生物安全管理的核心措施包括：A.建立生物安全管理制度B.配備必要的防護(hù)設(shè)備（如生物安全柜）C.定期進(jìn)行人員培訓(xùn)與考核D.所有樣本按普通醫(yī)療廢物處理三、判斷題（每題1分，共10分，正確填“√”，錯(cuò)誤填“×”）1.實(shí)驗(yàn)室廢棄的菌液需先高壓滅菌再按醫(yī)療廢物處理。（）2.瑞氏染色時(shí)，若緩沖液pH偏堿，會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞染成灰藍(lán)色。（）3.檢測(cè)血清淀粉酶升高可作為犬胰腺炎的特異性指標(biāo)。（）4.熒光定量PCR的Ct值越小，說明樣本中靶核酸含量越高。（）5.細(xì)菌藥敏試驗(yàn)中，抑菌圈直徑越大，說明該菌對(duì)藥物越敏感。（）6.奶牛乳汁電導(dǎo)率檢測(cè)可作為乳房炎的快速篩查方法。（）7.檢測(cè)犬瘟熱病毒時(shí)，采集眼鼻分泌物比血液更易獲得陽性結(jié)果。（）8.血涂片鏡檢時(shí)，應(yīng)選擇體尾交界處觀察細(xì)胞形態(tài)。（）9.實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)的電阻率需達(dá)到18.2MΩ·cm才能用于PCR實(shí)驗(yàn)。（）10.間接ELISA法檢測(cè)抗體時(shí)，二抗是針對(duì)樣本中抗原的特異性抗體。（）四、簡(jiǎn)答題（每題6分，共30分）1.簡(jiǎn)述血涂片制備的步驟及注意事項(xiàng)。2.列舉ELISA雙抗體夾心法的原理及操作要點(diǎn)。3.革蘭氏染色的步驟及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)是什么？4.實(shí)驗(yàn)室發(fā)生生物安全事故（如樣本管破裂、液體濺出）時(shí)，應(yīng)如何處理？5.簡(jiǎn)述動(dòng)物病毒分離培養(yǎng)的常用方法及適用范圍。五、案例分析題（共20分）案例1（10分）：某寵物醫(yī)院接診1只3月齡未免疫的拉布拉多犬，主訴嘔吐、腹瀉3天，糞便呈番茄汁樣帶血。血常規(guī)顯示白細(xì)胞總數(shù)2.1×10?/L（參考值6-17×10?/L），中性粒細(xì)胞比例15%（參考值60-77%），淋巴細(xì)胞比例80%（參考值12-30%）；糞便膠體金檢測(cè)CPV抗原陽性。問題：（1）該犬最可能的診斷是什么？（2）血常規(guī)結(jié)果提示的病理意義是什么？（3）除抗原檢測(cè)外，還可通過哪些實(shí)驗(yàn)室方法輔助診斷？案例2（10分）：某豬場(chǎng)爆發(fā)疫情，病豬體溫41-42℃，皮膚潮紅，剖檢見全身淋巴結(jié)出血、脾臟腫大呈紫黑色、腎臟有針尖狀出血點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室采集病豬血液、脾臟組織樣本，需進(jìn)行病原檢測(cè)。問題：（1）根據(jù)臨床癥狀和剖檢變化，可能的病原包括哪些？（2）設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程（需包含樣本處理、檢測(cè)方法選擇及結(jié)果判讀）。答案一、單項(xiàng)選擇題1.D2.B3.B4.A5.C6.B7.B8.D9.B10.A11.B12.B13.A14.A15.B二、多項(xiàng)選擇題1.ABCD2.ABC3.AB4.ABC5.ABCD6.ABC7.ABC8.ABCD9.AC10.ABC三、判斷題1.√2.×（pH偏堿時(shí)，細(xì)胞偏藍(lán)；偏酸時(shí)偏紅）3.×（淀粉酶升高也可見于腎功能損傷）4.√5.√6.√7.√8.√9.√10.×（二抗是針對(duì)樣本中抗體的抗體）四、簡(jiǎn)答題1.步驟：（1）取1滴新鮮抗凝血（EDTA抗凝）置于載玻片一端；（2）用推片邊緣與載玻片呈30°-45°，接觸血滴后勻速向前推動(dòng)，形成頭、體、尾分明的涂片；（3）自然干燥后染色。注意事項(xiàng)：①血液量不宜過多或過少（1-2μL）；②推片速度均勻，避免涂片過厚或過??；③載玻片需清潔無油脂；④抗凝劑比例準(zhǔn)確（EDTA-K2抗凝，1mL血加1.5-2mg）；⑤涂片后盡快染色（避免細(xì)胞變形）。2.原理：用已知特異性抗體包被固相載體，加入待測(cè)樣本（含抗原），抗原與包被抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的特異性抗體（二抗），形成“包被抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物，最后加入底物顯色，顏色深淺與抗原含量成正比。操作要點(diǎn)：①包被抗體濃度需優(yōu)化（通常1-10μg/mL）；②封閉液選擇（如5%脫脂奶粉）以減少非特異性結(jié)合；③樣本孵育時(shí)間（37℃1-2小時(shí)或4℃過夜）；④洗板需徹底（3-5次，每次3-5分鐘）；⑤酶標(biāo)抗體工作濃度需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定；⑥底物顯色時(shí)間控制（避免過久導(dǎo)致顯色過深）；⑦終止液（如2MH2SO4）加入后立即讀數(shù)（450nm波長(zhǎng)）。3.步驟：（1）涂片固定（火焰固定3-5秒）；（2）結(jié)晶紫染色1分鐘，水洗；（3）碘液媒染1分鐘，水洗；（4）95%乙醇脫色10-30秒（至無紫色脫出），水洗；（5）沙黃復(fù)染30秒，水洗，干燥后鏡檢。結(jié)果判斷：革蘭氏陽性菌呈紫色（如葡萄球菌），革蘭氏陰性菌呈紅色（如大腸桿菌）。4.處理流程：（1）立即停止操作，佩戴額外防護(hù)裝備（如手套、護(hù)目鏡）；（2）用吸水紙覆蓋污染區(qū)域，滴加有效氯濃度≥2000mg/L的含氯消毒液，靜置30分鐘；（3）小心移除污染材料，放入專用醫(yī)療廢物袋（雙層，標(biāo)注“感染性廢物”）；（4）用消毒液再次擦拭臺(tái)面，作用15分鐘后用清水清潔；（5）記錄事故經(jīng)過、處理措施及責(zé)任人；（6）若發(fā)生皮膚或黏膜暴露，立即用肥皂水沖洗（黏膜用生理鹽水沖洗），報(bào)告上級(jí)并進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察（必要時(shí)接種疫苗）。5.常用方法及適用范圍：（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種：適用于對(duì)動(dòng)物致病力強(qiáng)、無合適細(xì)胞系的病毒（如犬瘟熱病毒、狂犬病病毒）；（2）雞胚接種：適用于禽源病毒（如禽流感病毒、新城疫病毒），根據(jù)病毒嗜性選擇接種部位（尿囊腔、羊膜腔、絨毛尿囊膜）；（3）細(xì)胞培養(yǎng)：最常用，適用于多數(shù)病毒（如豬瘟病毒、貓杯狀病毒），需選擇敏感細(xì)胞系（如PK-15細(xì)胞用于豬細(xì)小病毒，MDCK細(xì)胞用于犬流感病毒）。五、案例分析題案例1：（1）診斷：犬細(xì)小病毒?。ǔ鲅阅c炎型）。（2）血常規(guī)意義：白細(xì)胞總數(shù)顯著降低（白細(xì)胞減少癥），中性粒細(xì)胞比例下降（細(xì)菌感染防御能力降低），淋巴細(xì)胞比例相對(duì)升高（可能因中性粒細(xì)胞減少導(dǎo)致的相對(duì)性增多，或病毒感染引起淋巴細(xì)胞反應(yīng)性增生）。（3）其他方法：①RT-PCR檢測(cè)CPV核酸（敏感性更高）；②糞便電鏡觀察病毒粒子；③血凝試驗(yàn)（檢測(cè)病毒抗原）；④血液生化檢測(cè)（如肌酸激酶、乳酸脫氫酶評(píng)估腸黏膜損傷）。案例2：（1）可能病原：豬瘟病毒（CSFV）、非洲豬瘟病毒（ASFV）、豬丹毒桿菌（急性敗血癥型）、豬鏈球菌（敗血型）。（2）檢測(cè)流程：①樣本處理：血液（EDTA抗凝）用于核酸檢測(cè)，脾臟組織研磨后用PBS制成10%懸液（離心取上清）用于病毒分離或細(xì)菌培養(yǎng)；②病原檢測(cè)：a.病毒檢測(cè)：提取血液/組織DNA