巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的角色與機(jī)制解析一、引言1.1研究背景與意義肝癌，作為肝臟惡性腫瘤的統(tǒng)稱，主要包括原發(fā)性肝癌和繼發(fā)性肝癌。其中，原發(fā)性肝癌又可細(xì)分為肝細(xì)胞癌、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌和混合型細(xì)胞癌，而肝細(xì)胞癌在原發(fā)性肝癌中占比高達(dá)75%-85%。肝癌是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，發(fā)病率和死亡率均位居前列。據(jù)統(tǒng)計(jì)，肝癌發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位列第六，死亡率更是高居第三，嚴(yán)重影響著人們的生命健康和生活質(zhì)量。我國(guó)是肝癌的高發(fā)國(guó)家，每年新增病例數(shù)眾多，且大部分患者確診時(shí)已處于中晚期，治療難度大，預(yù)后效果差。肝癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，加上肝臟本身沒有痛覺神經(jīng)，使得患者在疾病早期很難察覺，一旦出現(xiàn)明顯癥狀，病情往往已進(jìn)展到較為嚴(yán)重的階段，錯(cuò)過了最佳治療時(shí)機(jī)。此外，肝癌具有易于發(fā)生肝內(nèi)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，這也進(jìn)一步增加了治療的復(fù)雜性和挑戰(zhàn)性，導(dǎo)致患者的5年生存率僅為12.1%，嚴(yán)重制約了患者的生存預(yù)期和生活質(zhì)量。傳統(tǒng)的治療方法，如手術(shù)切除、化療和放療，對(duì)于晚期肝癌患者的療效有限，無法滿足臨床需求，因此，尋找新的治療靶點(diǎn)和策略成為肝癌研究領(lǐng)域的當(dāng)務(wù)之急。在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中，腫瘤微環(huán)境起著至關(guān)重要的作用。腫瘤微環(huán)境是一個(gè)復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，由腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)等多種成分共同構(gòu)成。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞作為腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，在肝癌的進(jìn)展中扮演著不可或缺的角色。巨噬細(xì)胞是實(shí)體瘤的重要組分，也是腫瘤間質(zhì)中數(shù)量最多的抗原遞呈細(xì)胞。根據(jù)其功能和表型的不同，巨噬細(xì)胞可分為經(jīng)典活化的M1型巨噬細(xì)胞和替代活化的M2型巨噬細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，能夠分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，激活免疫反應(yīng)，殺傷腫瘤細(xì)胞；而M2型巨噬細(xì)胞則主要發(fā)揮促腫瘤作用，通過分泌免疫抑制因子、促進(jìn)血管生成和腫瘤細(xì)胞遷移等方式，為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供有利條件。在肝癌組織中，巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)情況和表型特征與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移潛能以及患者的預(yù)后密切相關(guān)。研究巨噬細(xì)胞在肝癌中的作用機(jī)制，有助于深入了解肝癌的發(fā)病機(jī)制，為肝癌的治療提供新的思路和靶點(diǎn)。內(nèi)皮細(xì)胞則是構(gòu)成血管壁的主要細(xì)胞，在腫瘤血管生成過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于充足的血液供應(yīng)，而腫瘤血管生成是腫瘤獲取營(yíng)養(yǎng)和氧氣的重要途徑。內(nèi)皮細(xì)胞通過增殖、遷移和分化，形成新的血管網(wǎng)絡(luò)，為腫瘤細(xì)胞提供必要的物質(zhì)支持，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。同時(shí)，腫瘤血管的異常結(jié)構(gòu)和功能也使得腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入血液循環(huán)，從而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。此外，內(nèi)皮細(xì)胞還可以通過與腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞等相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的免疫狀態(tài)，影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此，研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞在肝癌血管生成和腫瘤進(jìn)展中的作用機(jī)制，對(duì)于開發(fā)針對(duì)腫瘤血管的治療策略具有重要意義。深入探究巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的臨床意義及相關(guān)機(jī)制，不僅有助于我們更好地理解肝癌的發(fā)病機(jī)制，揭示腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞間相互作用的奧秘，還能為肝癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和治療提供新的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。通過精準(zhǔn)干預(yù)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的功能，有望開發(fā)出更加有效的肝癌治療方法，提高患者的生存率和生活質(zhì)量，為肝癌患者帶來新的希望。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在肝癌研究領(lǐng)域，巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞與肝癌進(jìn)展的關(guān)系一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)。國(guó)外諸多研究已深入探討了巨噬細(xì)胞在肝癌中的作用機(jī)制。例如，有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）在肝癌微環(huán)境中大量存在，且其表型和功能狀態(tài)對(duì)肝癌的發(fā)展具有顯著影響。TAMs主要具有M2型巨噬細(xì)胞表型，能夠分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，這些因子可抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活創(chuàng)造有利條件。同時(shí)，M2型巨噬細(xì)胞還能通過分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等促進(jìn)肝癌血管生成，為腫瘤的快速生長(zhǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。在對(duì)肝癌動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，抑制TAMs的M2型極化或減少其數(shù)量，能夠有效抑制肝癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，這為肝癌的治療提供了新的潛在靶點(diǎn)。國(guó)內(nèi)學(xué)者在巨噬細(xì)胞與肝癌關(guān)系的研究方面也取得了重要成果。通過對(duì)臨床肝癌樣本的分析，發(fā)現(xiàn)肝癌組織中巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量與患者的預(yù)后密切相關(guān)，癌巢內(nèi)和侵襲邊緣處較多的巨噬細(xì)胞數(shù)量往往預(yù)示著患者較差的整體生存和無瘤生存。進(jìn)一步研究表明，癌巢內(nèi)的巨噬細(xì)胞多呈免疫抑制表型，與同一區(qū)域調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量呈正相關(guān)，在體外實(shí)驗(yàn)中具有促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞擴(kuò)增的能力，提示其在肝癌免疫逃逸過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。而癌旁間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞多呈免疫活化表型，與肝癌的血管侵犯和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，體外實(shí)驗(yàn)證明其可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲。這些研究成果揭示了巨噬細(xì)胞在肝癌不同部位通過不同機(jī)制影響疾病進(jìn)展的現(xiàn)象，為深入理解肝癌的發(fā)病機(jī)制提供了重要依據(jù)。關(guān)于內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌中的研究，國(guó)外有研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤血管生成過程中扮演著核心角色。在肝癌的發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)分泌多種促血管生成因子，如VEGF、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）等，這些因子與內(nèi)皮細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，激活一系列信號(hào)通路，促使內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和分化，形成新的血管網(wǎng)絡(luò)。腫瘤血管不僅為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，還為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了條件。此外，內(nèi)皮細(xì)胞還可以通過與腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞等的相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的免疫狀態(tài)，影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。通過抗血管生成治療抑制內(nèi)皮細(xì)胞的功能，能夠顯著抑制肝癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，這已成為肝癌治療的重要策略之一。國(guó)內(nèi)的相關(guān)研究則側(cè)重于內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)分子標(biāo)志物在肝癌診斷和預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)，一些內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，如血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）、血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1（PECAM-1）等，在肝癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度、血管侵犯和患者預(yù)后密切相關(guān)。檢測(cè)這些標(biāo)志物的表達(dá)情況，有助于肝癌的早期診斷和預(yù)后判斷。同時(shí)，國(guó)內(nèi)學(xué)者還在探索針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的新型治療靶點(diǎn)和策略，以期提高肝癌的治療效果。盡管國(guó)內(nèi)外在巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞與肝癌進(jìn)展關(guān)系的研究方面取得了一定的成果，但仍存在一些不足之處?，F(xiàn)有研究對(duì)于巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌微環(huán)境中相互作用的機(jī)制探討相對(duì)較少，二者之間的協(xié)同或拮抗作用如何影響肝癌的進(jìn)展尚不完全清楚。目前針對(duì)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的治療策略大多處于實(shí)驗(yàn)室研究或臨床試驗(yàn)階段，尚未廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐，且部分治療方法存在一定的副作用和局限性。此外，由于肝癌的異質(zhì)性和復(fù)雜性，不同研究結(jié)果之間可能存在一定的差異，需要進(jìn)一步深入研究和驗(yàn)證。因此，本研究旨在通過深入探究巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的臨床意義及相關(guān)機(jī)制，填補(bǔ)現(xiàn)有研究的空白，為肝癌的精準(zhǔn)治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和新的治療思路。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究綜合運(yùn)用多種研究方法，全面深入地探究巨噬細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的臨床意義及相關(guān)機(jī)制。在臨床樣本分析方面，收集了大量的肝癌患者組織樣本和臨床資料，涵蓋不同分期、病理類型及治療情況的患者。通過免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測(cè)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物在肝癌組織中的表達(dá)情況，如CD68用于標(biāo)記巨噬細(xì)胞，CD31用于標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)合患者的臨床病理特征和生存數(shù)據(jù)，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量、分布、表型與肝癌患者的預(yù)后，如總生存期、無瘤生存期等之間的相關(guān)性，從而明確其在肝癌進(jìn)展中的臨床意義。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也是本研究的重要組成部分。體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系以及巨噬細(xì)胞系和內(nèi)皮細(xì)胞系，構(gòu)建細(xì)胞共培養(yǎng)體系。例如，將肝癌細(xì)胞與巨噬細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，模擬腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞間的相互作用。通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力，研究巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。利用RNA干擾、基因編輯等技術(shù)，調(diào)控巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中關(guān)鍵基因的表達(dá)，進(jìn)一步探究其作用機(jī)制。例如，通過siRNA干擾巨噬細(xì)胞中與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，觀察對(duì)肝癌細(xì)胞免疫逃逸能力的影響；利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除內(nèi)皮細(xì)胞中與血管生成相關(guān)的基因，研究對(duì)腫瘤血管生成的影響。為了更真實(shí)地模擬肝癌在體內(nèi)的發(fā)生發(fā)展過程，本研究構(gòu)建了多種肝癌動(dòng)物模型，如小鼠原位肝癌模型、裸鼠肝癌移植瘤模型等。通過尾靜脈注射、肝內(nèi)注射等方式將肝癌細(xì)胞接種到動(dòng)物體內(nèi)，建立腫瘤模型。在動(dòng)物模型中，觀察巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤組織中的動(dòng)態(tài)變化，以及對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的影響。運(yùn)用活體成像技術(shù)，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況；通過組織病理學(xué)分析，觀察腫瘤組織中巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的浸潤(rùn)、分布及形態(tài)變化；采用免疫熒光染色、Westernblot等技術(shù)檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，深入研究其作用機(jī)制。本研究在機(jī)制探索和多維度分析方面具有顯著的創(chuàng)新之處。在機(jī)制探索上，不僅關(guān)注巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞各自對(duì)肝癌進(jìn)展的影響，更深入探究?jī)烧咧g的相互作用機(jī)制。研究巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子、趨化因子等如何調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的功能，進(jìn)而影響腫瘤血管生成；以及內(nèi)皮細(xì)胞如何通過與巨噬細(xì)胞的直接接觸或旁分泌信號(hào)，影響巨噬細(xì)胞的極化和功能，為揭示肝癌進(jìn)展的復(fù)雜機(jī)制提供新的視角。在多維度分析方面，將臨床樣本分析、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型研究有機(jī)結(jié)合，從臨床、細(xì)胞和動(dòng)物三個(gè)層面進(jìn)行全方位的研究。綜合分析不同層面的數(shù)據(jù)，更全面、深入地理解巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的作用，為肝癌的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供更全面、準(zhǔn)確的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。二、巨噬細(xì)胞與肝癌進(jìn)展2.1巨噬細(xì)胞在肝癌組織中的分布特征2.1.1不同部位巨噬細(xì)胞數(shù)量分析肝癌組織是一個(gè)復(fù)雜的異質(zhì)性結(jié)構(gòu)，通常由癌巢、侵襲邊緣和癌旁間質(zhì)等多個(gè)不同區(qū)域組成，各區(qū)域的細(xì)胞組成和微環(huán)境存在顯著差異，巨噬細(xì)胞在這些不同部位的數(shù)量分布也不盡相同，且對(duì)肝癌的進(jìn)展產(chǎn)生著不同程度的影響。癌巢作為肝癌組織的核心區(qū)域，其中的巨噬細(xì)胞數(shù)量與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。大量臨床樣本研究表明，癌巢內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量與肝癌患者的整體生存和無瘤生存呈負(fù)相關(guān)。一項(xiàng)納入了[X]例肝癌患者的研究中，通過免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)癌巢內(nèi)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD68的表達(dá)，對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)分析，結(jié)果顯示，癌巢內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量高的患者組，其5年總生存率僅為[X]%，顯著低于巨噬細(xì)胞數(shù)量低的患者組（5年總生存率為[X]%）；同時(shí)，癌巢內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量高的患者組無瘤生存率也明顯更低。進(jìn)一步的多因素分析顯示，癌巢內(nèi)巨噬細(xì)胞的數(shù)量可以作為獨(dú)立的預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)，這意味著無論其他臨床病理因素如何，癌巢內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量的增加都預(yù)示著患者預(yù)后不良，提示癌巢內(nèi)的巨噬細(xì)胞可能在肝癌的發(fā)展過程中發(fā)揮著促進(jìn)作用。侵襲邊緣是腫瘤細(xì)胞與周圍正常組織相互作用的區(qū)域，也是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的前沿陣地。研究發(fā)現(xiàn)，侵襲邊緣處的巨噬細(xì)胞數(shù)量同樣與肝癌患者的整體生存和無瘤生存呈負(fù)相關(guān)。在對(duì)[X]例肝癌患者手術(shù)切除標(biāo)本的研究中，對(duì)侵襲邊緣區(qū)域的巨噬細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞數(shù)量較多的患者，其術(shù)后復(fù)發(fā)率顯著升高，無瘤生存時(shí)間明顯縮短。這表明侵襲邊緣的巨噬細(xì)胞可能參與了肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程，促進(jìn)了腫瘤的擴(kuò)散，從而影響患者的預(yù)后。癌旁間質(zhì)是肝癌組織周圍的間質(zhì)組織，其中的巨噬細(xì)胞也在肝癌進(jìn)展中扮演著重要角色。與癌巢和侵襲邊緣不同，癌旁間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞多呈免疫活化表型。有研究表明，這些巨噬細(xì)胞選擇性地與肝癌的血管侵犯和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。對(duì)[X]例伴有血管侵犯的肝癌患者和[X]例無血管侵犯的肝癌患者的癌旁間質(zhì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)伴有血管侵犯的患者癌旁間質(zhì)中巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增多。體外實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)，將癌旁間質(zhì)來源的巨噬細(xì)胞與肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)，可顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。這說明癌旁間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞可能通過促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲，以及參與腫瘤血管生成等方式，在肝癌的血管侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。2.1.2巨噬細(xì)胞的聚集現(xiàn)象及原因在肝癌的癌巢中，常常觀察到較多的巨噬細(xì)胞局部聚集現(xiàn)象。這種聚集并非隨機(jī)發(fā)生，而是與肝癌組織的局部微環(huán)境變化密切相關(guān)。研究表明，巨噬細(xì)胞在癌巢中的局部聚集很可能是由于局部缺血導(dǎo)致的微小壞死引起的。在腫瘤快速生長(zhǎng)過程中，癌巢內(nèi)部的血管生成往往無法滿足腫瘤細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需求，導(dǎo)致局部區(qū)域出現(xiàn)缺血缺氧狀態(tài)，進(jìn)而引發(fā)微小壞死。這些微小壞死區(qū)域會(huì)釋放出一系列趨化因子和細(xì)胞因子，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些因子能夠吸引血液中的單核細(xì)胞向壞死區(qū)域募集，并分化為巨噬細(xì)胞，從而導(dǎo)致巨噬細(xì)胞在局部浸潤(rùn)和聚集。統(tǒng)計(jì)分析顯示，巨噬細(xì)胞的局部大量聚集與肝癌患者的不良預(yù)后之間具有非常顯著的相關(guān)性。在對(duì)[X]例肝癌患者的隨訪研究中，發(fā)現(xiàn)癌巢中存在巨噬細(xì)胞局部大量聚集的患者，其總生存期和無瘤生存期均顯著短于無巨噬細(xì)胞聚集的患者。多因素分析進(jìn)一步表明，巨噬細(xì)胞局部大量聚集是肝癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這可能是因?yàn)榫奂木奘杉?xì)胞會(huì)分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等，這些因子一方面可以抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，幫助肝癌細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視；另一方面可以促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供充足的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和轉(zhuǎn)移途徑，從而加速肝癌的進(jìn)展，導(dǎo)致患者預(yù)后不良。2.2巨噬細(xì)胞的表型及功能2.2.1免疫抑制表型巨噬細(xì)胞在肝癌的癌巢中，巨噬細(xì)胞多呈現(xiàn)出免疫抑制表型。這種表型的巨噬細(xì)胞具有獨(dú)特的特征，它們能夠分泌一系列免疫抑制因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等。IL-10是一種重要的免疫抑制細(xì)胞因子，它可以抑制T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等免疫細(xì)胞的活性，降低機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。TGF-β則不僅可以抑制免疫細(xì)胞的增殖和活化，還能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。這些免疫抑制因子的分泌使得癌巢中的免疫環(huán)境偏向于抑制免疫反應(yīng)，為肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活提供了有利條件。研究表明，癌巢中免疫抑制表型巨噬細(xì)胞的數(shù)量與同一區(qū)域調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量呈正相關(guān)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一類具有免疫抑制功能的T細(xì)胞亞群，能夠抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答，在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。免疫抑制表型巨噬細(xì)胞在體外實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞擴(kuò)增的能力。在一項(xiàng)體外研究中，將免疫抑制表型巨噬細(xì)胞與初始T細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量顯著增加，且這種促進(jìn)作用呈劑量依賴性。這一結(jié)果提示，癌巢中的免疫抑制表型巨噬細(xì)胞可能通過促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增，進(jìn)一步抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，協(xié)助肝癌細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。具體來說，免疫抑制表型巨噬細(xì)胞可能通過分泌IL-10、TGF-β等細(xì)胞因子，誘導(dǎo)初始T細(xì)胞向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化，或者直接與初始T細(xì)胞相互作用，通過細(xì)胞表面分子的信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增。這種協(xié)同作用使得肝癌細(xì)胞能夠逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，從而在體內(nèi)不斷增殖和擴(kuò)散，加速肝癌的進(jìn)展。2.2.2免疫活化表型巨噬細(xì)胞癌旁間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞多呈免疫活化表型。這些巨噬細(xì)胞具有與免疫抑制表型巨噬細(xì)胞不同的功能和特征，它們?cè)诟伟┑倪M(jìn)展過程中，尤其是在血管侵犯和轉(zhuǎn)移方面，發(fā)揮著獨(dú)特的作用。研究發(fā)現(xiàn)，癌旁間質(zhì)中免疫活化表型的巨噬細(xì)胞選擇性地與肝癌的血管侵犯和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。對(duì)[X]例伴有血管侵犯的肝癌患者和[X]例無血管侵犯的肝癌患者的癌旁間質(zhì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)伴有血管侵犯的患者癌旁間質(zhì)中巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增多。這一現(xiàn)象提示，免疫活化表型的巨噬細(xì)胞可能參與了肝癌細(xì)胞的血管侵犯過程，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了條件。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了免疫活化表型巨噬細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的促進(jìn)作用。將癌旁間質(zhì)來源的巨噬細(xì)胞與肝癌細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，結(jié)果顯示，與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞遷移和侵襲到下室的數(shù)量顯著多于對(duì)照組。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，免疫活化表型巨噬細(xì)胞可能通過分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等，來促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲。MMPs可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，為肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲開辟道路；VEGF則不僅可以促進(jìn)腫瘤血管生成，還能增強(qiáng)血管通透性，使得肝癌細(xì)胞更容易進(jìn)入血液循環(huán)；MCP-1可以招募更多的免疫細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞到腫瘤微環(huán)境中，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。此外，免疫活化表型巨噬細(xì)胞還可能通過與肝癌細(xì)胞直接接觸，通過細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)，激活肝癌細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)信號(hào)通路，如PI3K/Akt、MAPK等，從而增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。這些研究結(jié)果表明，癌旁間質(zhì)中的免疫活化表型巨噬細(xì)胞在肝癌的血管侵犯和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，為深入理解肝癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了重要線索。2.3巨噬細(xì)胞相關(guān)的分子機(jī)制2.3.1FABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞的免疫抑制機(jī)制腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）在肝細(xì)胞癌（HCC）腫瘤微環(huán)境中廣泛存在，是一類具有顯著功能和表型異質(zhì)性的先天免疫細(xì)胞，對(duì)T細(xì)胞的募集和反應(yīng)具有抑制作用。近年來，研究發(fā)現(xiàn)TAMs中的FABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞亞群在肝癌的免疫抑制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。通過單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)，研究人員揭示了HCC腫瘤組織中巨噬細(xì)胞亞群的顯著異質(zhì)性，并成功鑒定出FABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞亞群。這類巨噬細(xì)胞具有獨(dú)特的免疫抑制功能，其作用機(jī)制與腫瘤微環(huán)境中的脂質(zhì)代謝異常密切相關(guān)。在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中，HCC細(xì)胞的脂質(zhì)代謝發(fā)生顯著改變，會(huì)釋放出更多的長(zhǎng)鏈不飽和脂肪酸，如二十二碳六烯酸（DHA）和油酸等，這些不飽和脂肪酸被釋放到腫瘤微環(huán)境中。TAMs能夠吸收來自腫瘤細(xì)胞的不飽和脂肪酸，而FABP5在這一過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。FABP5是一種脂肪酸結(jié)合蛋白，它可以與不飽和脂肪酸特異性結(jié)合，幫助TAMs處理這些來自腫瘤細(xì)胞的不飽和脂肪酸信號(hào)。當(dāng)FABP5與不飽和脂肪酸結(jié)合后，會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)其與過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）的結(jié)合。PPARγ是一種核受體，在細(xì)胞代謝和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。FABP5與PPARγ的結(jié)合能夠增強(qiáng)PPARγ在巨噬細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄活性，從而促使TAMs向免疫抑制型表型轉(zhuǎn)變。在這一轉(zhuǎn)變過程中，TAMs會(huì)上調(diào)多種免疫抑制分子的表達(dá)，如半乳糖凝集素-1（GAL1）、半乳糖凝集素-3（GAL3）、半乳糖凝集素-9（GAL9）、程序性死亡受體配體1（PD-L1）及程序性死亡受體配體2（PD-L2）等。這些免疫抑制分子可以通過多種途徑抑制T細(xì)胞的活化，從而削弱機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。例如，PD-L1和PD-L2可以與T細(xì)胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合，抑制T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子分泌和細(xì)胞毒性，使T細(xì)胞處于失活狀態(tài)，無法有效地發(fā)揮抗腫瘤作用；GAL1和GAL9則可以通過與T細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，減少腫瘤微環(huán)境中具有抗腫瘤活性的T細(xì)胞數(shù)量。研究還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞與功能耗竭T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞之間存在增強(qiáng)的配體-受體相互作用。通過CellChat分析結(jié)果指出，這些FABP5+TAMs能夠通過與T細(xì)胞的直接相互作用來協(xié)調(diào)免疫抑制效應(yīng)。具體來說，F(xiàn)ABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞可能通過表面的特定配體與T細(xì)胞表面的受體結(jié)合，傳遞抑制性信號(hào)，抑制T細(xì)胞的功能，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸。在小鼠HCC模型中進(jìn)行的體內(nèi)和體外研究充分驗(yàn)證了FABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞的免疫抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)ABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞之間的相互作用是導(dǎo)致T細(xì)胞功能受損的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當(dāng)敲除巨噬細(xì)胞中的FABP5時(shí)，可以顯著抑制HCC小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，并增強(qiáng)PD-1抑制劑治療的效果。在缺乏FABP5的巨噬細(xì)胞小鼠模型中，腫瘤明顯縮小，小鼠的生存率提高。尤其在接受PD-1抑制劑（索拉非尼）治療的小鼠中，抗腫瘤免疫反應(yīng)顯著增強(qiáng)，具體表現(xiàn)為CD4+、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的腫瘤浸潤(rùn)和增殖能力增加，表達(dá)干擾素-γ（IFN-γ）和顆粒酶B的T細(xì)胞占比提高。同時(shí)，缺乏FABP5的巨噬細(xì)胞的抗原處理能力也得到增強(qiáng)，IL-10、TGF-β等免疫抑制分子表達(dá)減少。此外，巨噬細(xì)胞的FABP5表達(dá)缺陷還能夠有效逆轉(zhuǎn)小鼠脂肪肝相關(guān)的HCC進(jìn)展，并增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。對(duì)癌癥基因組圖譜計(jì)劃（TCGA）數(shù)據(jù)集和近200名患者的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，F(xiàn)ABP5在肝癌、膽管癌、宮頸癌和胰腺癌等多種腫瘤類型中mRNA表達(dá)水平升高。與正常組織相比，代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝?。∕ASLD）患者和脂肪肝病患者的病灶中FABP5+巨噬細(xì)胞數(shù)量也增加。與小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，表達(dá)FABP5的巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出脂質(zhì)代謝增加和免疫抑制特征，并且較高水平與HCC患者的較差總生存期呈正相關(guān)。這表明FABP5+脂質(zhì)負(fù)載巨噬細(xì)胞在肝癌的免疫抑制和疾病進(jìn)展中具有重要的臨床意義，有望成為肝癌免疫治療的新靶點(diǎn)。2.3.2腺苷與GM-CSF對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的調(diào)控機(jī)制在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中，肝癌細(xì)胞能夠通過多種機(jī)制對(duì)巨噬細(xì)胞的增殖進(jìn)行調(diào)控，其中腺苷和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）發(fā)揮著重要作用。研究表明，肝癌細(xì)胞可以分泌大量的腺苷，腺苷作為一種重要的細(xì)胞外信號(hào)分子，能夠與巨噬細(xì)胞表面的腺苷受體結(jié)合，從而調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的增殖。巨噬細(xì)胞表面存在多種腺苷受體亞型，如A1、A2A、A2B和A3受體，不同亞型的腺苷受體在巨噬細(xì)胞增殖調(diào)控中發(fā)揮著不同的作用。當(dāng)腺苷與巨噬細(xì)胞表面的A2B受體結(jié)合后，會(huì)激活細(xì)胞內(nèi)的一系列信號(hào)通路。A2B受體與腺苷結(jié)合后，會(huì)通過G蛋白偶聯(lián)激活腺苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平升高。cAMP作為第二信使，能夠激活蛋白激酶A（PKA），PKA進(jìn)一步磷酸化下游的靶蛋白，如cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）。磷酸化的CREB可以進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）等基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。CyclinD1是細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)鍵蛋白，它可以與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）結(jié)合，形成CyclinD1/CDK4復(fù)合物，該復(fù)合物能夠磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（Rb），使Rb蛋白失活，從而釋放出轉(zhuǎn)錄因子E2F，E2F可以促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)，推動(dòng)巨噬細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖。GM-CSF也是肝癌細(xì)胞調(diào)控巨噬細(xì)胞增殖的重要因子。肝癌細(xì)胞可以分泌GM-CSF，GM-CSF與巨噬細(xì)胞表面的GM-CSF受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號(hào)通路。GM-CSF受體由α和β兩條鏈組成，當(dāng)GM-CSF與受體結(jié)合后，會(huì)導(dǎo)致受體二聚化，激活與之結(jié)合的Janus激酶（JAK）。JAK被激活后，會(huì)磷酸化受體上的酪氨酸殘基，形成磷酸酪氨酸位點(diǎn)，這些位點(diǎn)可以招募信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT）家族成員。在巨噬細(xì)胞中，主要是STAT3和STAT5被招募并磷酸化。磷酸化的STAT3和STAT5會(huì)形成二聚體，然后進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如c-Myc、Bcl-xL等。c-Myc是一種原癌基因，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程；Bcl-xL則是一種抗凋亡蛋白，能夠抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活和增殖。通過激活JAK-STAT信號(hào)通路，GM-CSF能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖和存活，為腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展提供有利條件。腺苷和GM-CSF對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的調(diào)控并非孤立進(jìn)行，兩者之間還存在相互作用。研究發(fā)現(xiàn)，腺苷可以增強(qiáng)GM-CSF對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。在同時(shí)存在腺苷和GM-CSF的情況下，巨噬細(xì)胞的增殖能力明顯高于單獨(dú)使用GM-CSF時(shí)。這可能是因?yàn)橄佘占せ畹男盘?hào)通路與GM-CSF激活的JAK-STAT信號(hào)通路之間存在協(xié)同作用，共同促進(jìn)了細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)和細(xì)胞周期的進(jìn)程。例如，腺苷激活的PKA可以磷酸化STAT3，增強(qiáng)STAT3的活性，使其與DNA的結(jié)合能力增強(qiáng)，從而進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。肝癌細(xì)胞通過分泌腺苷和GM-CSF，分別通過與巨噬細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，激活不同的信號(hào)通路，共同調(diào)控巨噬細(xì)胞的增殖。這種調(diào)控機(jī)制不僅促進(jìn)了巨噬細(xì)胞的增殖和存活，還為腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了有利的微環(huán)境。深入研究腺苷和GM-CSF對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的調(diào)控機(jī)制，有助于揭示肝癌的發(fā)病機(jī)制，為開發(fā)新的肝癌治療策略提供理論依據(jù)。三、內(nèi)皮細(xì)胞與肝癌進(jìn)展3.1內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌中的臨床意義3.1.1內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子1（ESM-1）的表達(dá)及意義內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子1（ESM-1），又稱內(nèi)動(dòng)蛋白（Endocan），是一種由內(nèi)皮細(xì)胞分泌的可溶性蛋白聚糖，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。研究表明，ESM-1在肝癌組織中的表達(dá)水平顯著高于正常肝組織和癌旁組織。一項(xiàng)對(duì)[X]例肝癌患者的研究中，通過免疫組織化學(xué)染色和熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中ESM-1的陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%，而正常肝組織中幾乎無表達(dá)。同時(shí)，肝癌組織中ESM-1的mRNA水平也明顯高于正常肝組織和癌旁組織，分別為正常肝組織的[X]倍和癌旁組織的[X]倍。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，ESM-1的表達(dá)與肝癌的TNM分期密切相關(guān)。在TNM分期為Ⅰ-Ⅱ期的肝癌患者中，ESM-1的陽性表達(dá)率為[X]%；而在Ⅲ-Ⅳ期的患者中，陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%。隨著TNM分期的升高，ESM-1的表達(dá)水平逐漸增加，提示ESM-1可能參與了肝癌的進(jìn)展過程，其高表達(dá)與肝癌的晚期階段相關(guān)。這可能是因?yàn)樵诟伟┑倪M(jìn)展過程中，腫瘤細(xì)胞不斷增殖和侵襲，需要更多的血管生成來提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，而ESM-1作為一種與血管生成密切相關(guān)的分子，其表達(dá)水平也隨之升高。ESM-1的表達(dá)還與肝癌的血管侵犯顯著相關(guān)。伴有血管侵犯的肝癌患者，其腫瘤組織中ESM-1的表達(dá)水平明顯高于無血管侵犯的患者。在對(duì)[X]例伴有血管侵犯和[X]例無血管侵犯的肝癌患者的研究中，發(fā)現(xiàn)伴有血管侵犯患者的ESM-1陽性表達(dá)率為[X]%，而無血管侵犯患者僅為[X]%。這表明ESM-1可能在肝癌細(xì)胞的血管侵犯過程中發(fā)揮重要作用。ESM-1可能通過促進(jìn)腫瘤血管生成，增加腫瘤血管的通透性，使得肝癌細(xì)胞更容易進(jìn)入血管，從而促進(jìn)血管侵犯。此外，ESM-1還可能通過與肝癌細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活相關(guān)信號(hào)通路，增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，進(jìn)而促進(jìn)血管侵犯。研究還發(fā)現(xiàn)，ESM-1在肝癌患者血清中的水平也明顯升高。肝癌患者血清ESM-1的含量為（[X]±[X]）ng/mL，而正常對(duì)照組僅為（[X]±[X]）ng/mL。血清ESM-1水平的升高與腫瘤組織中ESM-1的表達(dá)呈正相關(guān)。這提示血清ESM-1水平有可能作為肝癌診斷和病情監(jiān)測(cè)的潛在標(biāo)志物。通過檢測(cè)血清ESM-1水平，可以輔助肝癌的早期診斷，并且在治療過程中，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清ESM-1水平的變化，有助于評(píng)估治療效果和判斷疾病的進(jìn)展情況。綜上所述，ESM-1在肝癌組織和血清中的高表達(dá)，以及其與肝癌TNM分期、血管侵犯的相關(guān)性，表明ESM-1可能在肝癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，有望成為肝癌診斷和治療的新靶點(diǎn)。深入研究ESM-1的作用機(jī)制，對(duì)于揭示肝癌的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)新的治療策略具有重要意義。3.1.2內(nèi)皮細(xì)胞與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌患者預(yù)后中扮演著重要角色，其特征與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。研究表明，腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的一些分子標(biāo)志物和功能狀態(tài)能夠反映肝癌患者的預(yù)后情況。以CD105為例，作為一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性的細(xì)胞表面蛋白，CD105在腫瘤新生血管內(nèi)高表達(dá)，并具有強(qiáng)烈的血管新生促進(jìn)作用。在原發(fā)性肝癌的研究中，CD105的表達(dá)與腫瘤新生血管形成、癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移緊密相關(guān)。一項(xiàng)對(duì)[X]例肝癌患者的研究顯示，CD105在肝癌組織中的陽性表達(dá)率為[X]%，而在正常肝組織樣本中，陽性表達(dá)率僅為[X]%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，CD105表達(dá)陽性的患者平均無病生存期明顯低于CD105表達(dá)陰性的患者。這表明CD105的高表達(dá)可能預(yù)示著肝癌患者的不良預(yù)后，提示CD105在肝癌患者的預(yù)后評(píng)估中具有一定價(jià)值。CD105可能通過促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，從而加速腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者預(yù)后較差。骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）也與肝癌患者的預(yù)后相關(guān)。香港大學(xué)的研究團(tuán)隊(duì)分析了80名肝細(xì)胞癌患者治療前的血樣，并與16名肝硬化患者和14名健康者的血樣作對(duì)比。通過培養(yǎng)外周血內(nèi)皮細(xì)胞并計(jì)算其形成的集落來計(jì)算EPCs水平，結(jié)果顯示，肝細(xì)胞癌患者的集落數(shù)顯著高于對(duì)照組，且無手術(shù)指征的肝細(xì)胞癌患者的集落數(shù)又顯著高于可手術(shù)的患者。在17名接受手術(shù)并被隨訪至少一年的患者中，一年內(nèi)復(fù)發(fā)的患者其手術(shù)前的集落數(shù)得分明顯更高。這表明EPCs水平可能與肝癌的進(jìn)展程度相關(guān)，高水平的EPCs可能預(yù)示著肝癌患者較差的預(yù)后。腫瘤產(chǎn)生的某些蛋白可能激活EPCs，使其通過血流遷徙到腫瘤部位，促進(jìn)腫瘤血管生成，從而加速腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，影響患者的預(yù)后。腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài)也會(huì)影響肝癌患者的預(yù)后。腫瘤血管的異常結(jié)構(gòu)和功能會(huì)損害腫瘤氧合，為腫瘤細(xì)胞提供轉(zhuǎn)移通道，抑制抗癌藥物的傳遞和療效。有研究表明，腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中SHP2缺失或S1PR1信號(hào)增強(qiáng)可促進(jìn)血管正?；?，改善腫瘤微環(huán)境，從而提高患者的預(yù)后。這提示通過調(diào)節(jié)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，有可能改善肝癌患者的預(yù)后。例如，針對(duì)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗血管生成治療，可以抑制腫瘤血管生成，減少腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，提高患者的生存率。內(nèi)皮細(xì)胞的特征，包括分子標(biāo)志物的表達(dá)和功能狀態(tài)，與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。通過檢測(cè)這些特征，可以為肝癌患者的預(yù)后評(píng)估提供重要依據(jù)，同時(shí)也為肝癌的治療提供新的靶點(diǎn)和策略。未來的研究需要進(jìn)一步深入探討內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌預(yù)后中的作用機(jī)制，以及如何通過干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞來改善肝癌患者的預(yù)后。三、內(nèi)皮細(xì)胞與肝癌進(jìn)展3.2內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)肝癌進(jìn)展的機(jī)制3.2.1ICAM-1與血小板相互作用促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制肝癌不完全射頻消融后，腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1與血小板的相互作用在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。肝細(xì)胞癌（HCC）是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，肝移植、手術(shù)切除和射頻消融（RFA）是早期HCC的一線治療方法。然而，由于腫瘤體積大和“熱沉降效應(yīng)”，RFA后常出現(xiàn)病灶殘留（不完全RFA），這會(huì)導(dǎo)致局部侵襲增強(qiáng)和轉(zhuǎn)移增加，嚴(yán)重影響患者預(yù)后。研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，HCC患者不完全RFA后血小板被激活。在腫瘤不完全RFA的小鼠模型中，腫瘤血管的通透性增加。進(jìn)一步的體外試驗(yàn)表明，熱處理可引起腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1上調(diào)。ICAM-1，即細(xì)胞間黏附分子-1，是一種重要的黏附分子，在內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受到熱處理等刺激后，ICAM-1表達(dá)上調(diào)，其可與血小板表面的相應(yīng)受體結(jié)合，從而激活血小板。激活的血小板發(fā)生一系列變化，一方面，血小板會(huì)發(fā)生脫顆粒反應(yīng)，釋放血栓素A2（TXA2）、二磷酸腺苷（ADP）、纖維蛋白原（fibrinogen）、花生四烯酸（AA）和Ca2+等物質(zhì)，這些物質(zhì)進(jìn)一步促進(jìn)血小板的聚集；另一方面，激活的血小板可與腫瘤細(xì)胞發(fā)生黏附，形成瘤栓。瘤栓的形成不僅保護(hù)腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，還能幫助腫瘤細(xì)胞與轉(zhuǎn)移部位的血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附。ICAM-1激活血小板后，還會(huì)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞間的VE-鈣黏素產(chǎn)生影響。VE-鈣黏素是一種重要的細(xì)胞黏附分子，主要存在于內(nèi)皮細(xì)胞之間，對(duì)維持血管內(nèi)皮的完整性和穩(wěn)定性起著關(guān)鍵作用。當(dāng)ICAM-1激活血小板后，會(huì)降低內(nèi)皮細(xì)胞間VE-鈣黏素的表達(dá)或功能。這可能是通過激活血小板釋放的某些因子，如TXA2、ADP等，作用于內(nèi)皮細(xì)胞，影響VE-鈣黏素的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)或降解過程，從而導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞間的連接松散。內(nèi)皮細(xì)胞間連接的松散使得血管通透性增加，腫瘤細(xì)胞更容易穿過血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。抑制血小板或使用ICAM-1抗體可有效抑制不完全RFA后腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在相關(guān)實(shí)驗(yàn)中，通過使用抗血小板藥物抑制血小板的功能，或者使用ICAM-1抗體阻斷ICAM-1與血小板的結(jié)合，發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長(zhǎng)速度明顯減緩，轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量也顯著減少。這表明抗血小板和抗ICAM-1治療可以作為阻止HCC不完全RFA后腫瘤進(jìn)展的潛在策略。通過抑制ICAM-1與血小板的相互作用，可以減少血小板的激活和瘤栓的形成，維持血管內(nèi)皮的完整性，降低血管通透性，從而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。這一發(fā)現(xiàn)為治療肝癌不完全射頻消融后腫瘤進(jìn)展提供了新的靶點(diǎn)，具有重要的臨床意義。3.2.2DGKG促進(jìn)肝癌血管生成和免疫逃逸機(jī)制內(nèi)皮細(xì)胞中DGKG的高表達(dá)在肝癌血管生成和免疫逃逸中發(fā)揮著重要作用，其作用機(jī)制與缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）及相關(guān)信號(hào)通路密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，二?；视图っ甫茫―GKG）在肝細(xì)胞癌（HCC）腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與HCC患者的生存率呈負(fù)相關(guān)。在肝癌的發(fā)展過程中，腫瘤組織常處于缺氧微環(huán)境。缺氧通常發(fā)生在HCC中，并且與腫瘤進(jìn)展和不良臨床結(jié)果密切相關(guān)。在缺氧條件下，HIF-1α穩(wěn)定并促進(jìn)下游基因的轉(zhuǎn)錄。多重免疫組織化學(xué)（mIHC）染色顯示HIF-1α表達(dá)與內(nèi)皮DGKG正相關(guān)。進(jìn)一步研究表明，HIF-1α在缺氧條件下通過直接與DGKG的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合來激活DGKG的轉(zhuǎn)錄。使用在線工具Jaspar預(yù)測(cè)DGKG啟動(dòng)子中潛在的HIF-1α結(jié)合位點(diǎn)（HBS），揭示4個(gè)推定的HBS。通過HBS位點(diǎn)缺失或定點(diǎn)誘變的熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定以及染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DGKG啟動(dòng)子中的HBS2和3誘導(dǎo)HIF-1α增強(qiáng)的啟動(dòng)子活性，HIF-1α僅被募集到含有HBS2和3的啟動(dòng)子區(qū)，表明HBS2和3對(duì)于HIF-1α轉(zhuǎn)錄激活DGKG是必需的。上調(diào)的DGKG通過募集泛素特異性肽酶16（USP16）促進(jìn)鋅指E盒結(jié)合同源盒2（ZEB2）去泛素化和細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）正反饋環(huán)激活。DGKG與USP16相互作用，使得USP16能夠特異性地作用于ZEB2，促進(jìn)ZEB2的去泛素化。去泛素化的ZEB2穩(wěn)定性增加，從而能夠持續(xù)發(fā)揮其生物學(xué)功能。ZEB2可以促進(jìn)TGF-β1的表達(dá)和分泌，而TGF-β1又能反過來進(jìn)一步激活ZEB2，形成正反饋環(huán)。TGF-β1是一種重要的細(xì)胞因子，在腫瘤血管生成和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在腫瘤血管生成方面，TGF-β1可以作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、遷移和管腔形成，從而促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤的生長(zhǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣。在免疫調(diào)節(jié)方面，TGF-β1可以抑制免疫細(xì)胞的活性，如T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等，促進(jìn)免疫抑制調(diào)節(jié)性T（Treg）細(xì)胞分化，從而幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。為了驗(yàn)證內(nèi)皮DGKG的功能，構(gòu)建了內(nèi)皮特異性DGKG敲除小鼠和腺相關(guān)病毒（AAV）遞送的內(nèi)皮特異性DGKG敲減小鼠。在肝毒素誘導(dǎo)的肝癌發(fā)生模型和HCC的原位移植模型中，驗(yàn)證了DGKG敲除或敲低在攜帶HCC的小鼠中導(dǎo)致較低的腫瘤數(shù)量、較小的腫瘤體積和最大化的總生存期（OS）。通過單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-seq）分析發(fā)現(xiàn)，與上皮細(xì)胞遷移和粘著斑相關(guān)的生物過程和途徑在DGKG正常表達(dá)組中富集，表明DGKG是侵襲性腫瘤血管生成所需的。利用質(zhì)譜流式細(xì)胞術(shù)（CyTOF）分析DGKG在腫瘤微環(huán)境（TME）重構(gòu)中的作用，結(jié)果顯示，DGKG敲除小鼠中的Tregs顯著降低。這些結(jié)果表明，內(nèi)皮DGKG表達(dá)與腫瘤血管生成和免疫逃避之間呈正相關(guān)，缺氧誘導(dǎo)的EC特異性DGKG高表達(dá)通過ZEB2/TGF-β1軸促進(jìn)腫瘤血管生成和免疫逃避，提示EC特異性DGKG是HCC的潛在治療靶點(diǎn)。四、巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的協(xié)同作用及對(duì)肝癌的影響4.1細(xì)胞間相互作用的研究方法與模型構(gòu)建在探究巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的協(xié)同作用時(shí)，研究人員運(yùn)用了多種科學(xué)有效的實(shí)驗(yàn)方法，構(gòu)建了體外共培養(yǎng)模型和體內(nèi)動(dòng)物模型，為深入研究細(xì)胞間相互作用提供了有力的工具和平臺(tái)。體外共培養(yǎng)模型是研究巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用的重要手段之一。在構(gòu)建該模型時(shí)，通常選用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）作為內(nèi)皮細(xì)胞的代表，以及單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞或腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）作為巨噬細(xì)胞的來源。以研究M2型巨噬細(xì)胞對(duì)肝癌腫瘤血管生成的作用為例，通過磁珠分選法分離得到人脾臟CD68+M0巨噬細(xì)胞，在體外采用IL-4和IL-13誘導(dǎo)為CD68+CD163+M2型巨噬細(xì)胞。將HUVEC分別與CD68+M0和CD68+CD163+M2型巨噬細(xì)胞進(jìn)行體外共培養(yǎng)。這種模型能夠在相對(duì)簡(jiǎn)單和可控的環(huán)境中，模擬腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用。在該共培養(yǎng)模型中，研究人員運(yùn)用多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)來檢測(cè)細(xì)胞間相互作用對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。CCK-8法可用于檢測(cè)HUVEC的細(xì)胞活力，通過測(cè)量細(xì)胞對(duì)CCK-8試劑的還原能力，反映細(xì)胞的增殖情況。劃痕試驗(yàn)則用于檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力，在培養(yǎng)皿中制造劃痕，觀察內(nèi)皮細(xì)胞在巨噬細(xì)胞存在下向劃痕區(qū)域遷移的速度和距離。體外成管試驗(yàn)可直觀地檢測(cè)血管形成的能力，將內(nèi)皮細(xì)胞接種在基質(zhì)膠上，觀察其在巨噬細(xì)胞的影響下形成血管樣結(jié)構(gòu)的情況。此外，通過Westernblot檢測(cè)HUVEC中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR2）、Notch1、Dll4等與血管生成相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，以及利用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)培養(yǎng)基中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和IL-8等促血管生成因子的表達(dá)水平，從分子層面揭示巨噬細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響機(jī)制。體內(nèi)動(dòng)物模型的構(gòu)建對(duì)于研究巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的協(xié)同作用同樣至關(guān)重要。常用的動(dòng)物模型包括BALB/c裸鼠構(gòu)建的HepG2移植瘤肝癌模型。在構(gòu)建該模型時(shí)，將人肝癌細(xì)胞系HepG2接種到BALB/c裸鼠體內(nèi)，待腫瘤生長(zhǎng)到一定大小后，分別注射CD68+M0和CD68+CD163+M2型巨噬細(xì)胞。通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤組織中CD105的表達(dá)，CD105是一種內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，其表達(dá)水平可反映腫瘤血管生成情況。同時(shí)，利用Westernblot檢測(cè)VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4等蛋白的表達(dá)水平，進(jìn)一步探究巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤血管生成相關(guān)信號(hào)通路的影響。體內(nèi)動(dòng)物模型能夠更真實(shí)地反映肝癌在體內(nèi)的發(fā)生發(fā)展過程，以及巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的相互作用。與體外共培養(yǎng)模型相比，體內(nèi)模型考慮了機(jī)體的整體生理狀態(tài)、免疫系統(tǒng)以及其他細(xì)胞和分子的相互作用，為研究提供了更全面的信息。通過觀察腫瘤的生長(zhǎng)速度、體積變化、轉(zhuǎn)移情況等指標(biāo)，可以評(píng)估巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的協(xié)同作用對(duì)肝癌進(jìn)展的影響。例如，在上述HepG2移植瘤肝癌模型中，發(fā)現(xiàn)CD68+CD163+M2型巨噬細(xì)胞可以促進(jìn)CD105的表達(dá)和腫瘤血管的生成，同時(shí)提高VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信號(hào)的表達(dá)，表明M2型巨噬細(xì)胞在體內(nèi)能夠通過激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤血管生成，進(jìn)而推動(dòng)肝癌的進(jìn)展。體外共培養(yǎng)模型和體內(nèi)動(dòng)物模型各有優(yōu)勢(shì)，相互補(bǔ)充。體外共培養(yǎng)模型具有操作簡(jiǎn)單、條件可控、便于觀察和分析等優(yōu)點(diǎn)，能夠深入研究細(xì)胞間相互作用的具體機(jī)制和信號(hào)通路。而體內(nèi)動(dòng)物模型則更接近真實(shí)的生理病理狀態(tài)，能夠綜合考慮多種因素對(duì)肝癌進(jìn)展的影響。將兩者結(jié)合使用，可以從不同層面和角度深入探究巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌進(jìn)展中的協(xié)同作用及相關(guān)機(jī)制，為肝癌的治療提供更全面、準(zhǔn)確的理論依據(jù)和潛在的治療靶點(diǎn)。4.2協(xié)同作用對(duì)肝癌血管生成的影響巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌血管生成過程中存在緊密的協(xié)同作用，這種協(xié)同作用對(duì)肝癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移具有重要影響，涉及多種細(xì)胞因子和復(fù)雜的信號(hào)通路。在腫瘤微環(huán)境中，巨噬細(xì)胞能夠分泌多種細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的功能產(chǎn)生顯著影響，進(jìn)而促進(jìn)肝癌血管生成。以血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）為例，巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中VEGF的重要來源之一。研究表明，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs），尤其是M2型巨噬細(xì)胞，能夠大量分泌VEGF。在對(duì)肝癌組織的研究中發(fā)現(xiàn)，M2型巨噬細(xì)胞聚集較多的區(qū)域，VEGF的表達(dá)水平明顯升高。VEGF是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，它與內(nèi)皮細(xì)胞表面的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR2）結(jié)合，激活一系列下游信號(hào)通路。VEGF與VEGFR2結(jié)合后，會(huì)激活磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路。PI3K被激活后，會(huì)使磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3可以招募Akt到細(xì)胞膜上，并使其磷酸化而激活。激活的Akt可以調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活相關(guān)的基因表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。VEGF還能激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，使細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）磷酸化，磷酸化的ERK進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和血管生成。巨噬細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-8（IL-8）也在肝癌血管生成中發(fā)揮重要作用。IL-8是一種趨化因子，它可以與內(nèi)皮細(xì)胞表面的趨化因子受體CXCR1和CXCR2結(jié)合。當(dāng)IL-8與CXCR1或CXCR2結(jié)合后，會(huì)激活下游的磷脂酶C（PLC）/蛋白激酶C（PKC）信號(hào)通路。PLC被激活后，會(huì)水解PIP2產(chǎn)生二?；视停―AG）和三磷酸肌醇（IP3），DAG可以激活PKC，IP3則可以促使細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放。激活的PKC可以調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的骨架重排和遷移相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。IL-8還能通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和存活，從而促進(jìn)肝癌血管生成。內(nèi)皮細(xì)胞也可以通過與巨噬細(xì)胞的相互作用，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的功能，進(jìn)一步促進(jìn)肝癌血管生成。內(nèi)皮細(xì)胞可以分泌一些細(xì)胞因子和趨化因子，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）等，這些因子可以招募巨噬細(xì)胞到腫瘤微環(huán)境中，并促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化和增殖。MCP-1可以與巨噬細(xì)胞表面的CCR2受體結(jié)合，通過激活G蛋白偶聯(lián)的信號(hào)通路，促使巨噬細(xì)胞向腫瘤部位遷移。GM-CSF則可以與巨噬細(xì)胞表面的GM-CSF受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號(hào)通路，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖和存活?；罨木奘杉?xì)胞會(huì)分泌更多的促血管生成因子，如VEGF、IL-8等，形成一個(gè)正反饋環(huán)路，進(jìn)一步促進(jìn)肝癌血管生成。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間還可以通過直接接觸進(jìn)行相互作用。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞表面的一些黏附分子，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）等，能夠與巨噬細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，這種直接接觸可以激活巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌和血管生成相關(guān)基因的表達(dá)。當(dāng)VCAM-1與巨噬細(xì)胞表面的整合素α4β1結(jié)合后，會(huì)激活巨噬細(xì)胞內(nèi)的Src激酶，Src激酶可以進(jìn)一步激活PI3K/Akt和MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌VEGF等促血管生成因子。ICAM-1與巨噬細(xì)胞表面的整合素β2結(jié)合后，也能激活類似的信號(hào)通路，促進(jìn)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用，共同促進(jìn)肝癌血管生成。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子、直接接觸等方式相互作用，激活多種信號(hào)通路，共同促進(jìn)肝癌血管生成。深入研究它們之間的協(xié)同作用機(jī)制，對(duì)于揭示肝癌的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)新的治療策略具有重要意義。通過阻斷它們之間的相互作用和相關(guān)信號(hào)通路，有可能抑制肝癌血管生成，從而為肝癌的治療提供新的靶點(diǎn)。4.3協(xié)同作用對(duì)肝癌免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在肝癌免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)中存在緊密的協(xié)同作用，它們通過多種方式相互影響，共同塑造了肝癌免疫微環(huán)境，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、免疫逃逸和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生重要影響。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞能夠分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，這些因子可以招募和調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，從而影響肝癌免疫微環(huán)境。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs），尤其是M2型巨噬細(xì)胞，能夠分泌大量的免疫抑制因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等。IL-10可以抑制T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等免疫細(xì)胞的活性，降低機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。TGF-β不僅可以抑制免疫細(xì)胞的增殖和活化，還能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。內(nèi)皮細(xì)胞也可以分泌一些細(xì)胞因子，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）等，這些因子可以招募巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞到腫瘤微環(huán)境中。MCP-1可以與巨噬細(xì)胞表面的CCR2受體結(jié)合，促使巨噬細(xì)胞向腫瘤部位遷移。GM-CSF則可以與巨噬細(xì)胞表面的GM-CSF受體結(jié)合，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖和存活。這些被招募到腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞，在巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的作用下，其功能會(huì)發(fā)生改變，進(jìn)一步影響肝癌免疫微環(huán)境。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的直接接觸也在肝癌免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞表面的一些黏附分子，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）等，能夠與巨噬細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合。當(dāng)VCAM-1與巨噬細(xì)胞表面的整合素α4β1結(jié)合后，會(huì)激活巨噬細(xì)胞內(nèi)的Src激酶，Src激酶可以進(jìn)一步激活PI3K/Akt和MAPK信號(hào)通路。這些信號(hào)通路的激活可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的功能，使其分泌更多的細(xì)胞因子和趨化因子，從而影響免疫細(xì)胞的招募和活化。ICAM-1與巨噬細(xì)胞表面的整合素β2結(jié)合后，也能激活類似的信號(hào)通路，促進(jìn)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用，共同調(diào)節(jié)肝癌免疫微環(huán)境。這種直接接觸還可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的信息交流，協(xié)調(diào)它們對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的協(xié)同作用還會(huì)影響免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)和分布。在肝癌組織中，巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞可以通過分泌細(xì)胞因子和趨化因子，改變腫瘤微環(huán)境的化學(xué)梯度，引導(dǎo)免疫細(xì)胞向腫瘤部位浸潤(rùn)。它們還可以通過調(diào)節(jié)血管的通透性和結(jié)構(gòu)，影響免疫細(xì)胞進(jìn)入腫瘤組織的能力。腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的異常結(jié)構(gòu)和功能會(huì)導(dǎo)致血管通透性增加，使得免疫細(xì)胞更容易進(jìn)入腫瘤組織。然而，巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一些細(xì)胞因子，如TGF-β等，又可以抑制免疫細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤(rùn)和活化，使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避免疫監(jiān)視。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞還可以通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的歸巢和滯留，影響免疫細(xì)胞在腫瘤組織中的分布。它們可以分泌一些趨化因子，吸引免疫細(xì)胞到腫瘤組織的特定區(qū)域，或者抑制免疫細(xì)胞從腫瘤組織中離開，從而改變免疫細(xì)胞在腫瘤組織中的分布格局，影響肝癌免疫微環(huán)境。巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的協(xié)同作用通過分泌細(xì)胞因子、直接接觸以及影響免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)和分布等多種方式，對(duì)肝癌免疫微環(huán)境進(jìn)行調(diào)節(jié)。這種調(diào)節(jié)作用使得肝癌免疫微環(huán)境偏向于免疫抑制，有利于腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、免疫逃逸和轉(zhuǎn)移。深入研究它們之間的協(xié)同作用機(jī)制，對(duì)于揭示肝癌的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)新的免疫治療策略具有重要意義。通過阻斷它們之間的協(xié)同作用，調(diào)節(jié)肝癌免疫微環(huán)境，有可能增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，為肝癌的治療提供新