幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的機(jī)制探究一、引言1.1研究背景胃部作為人體消化系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，對(duì)食物的消化和營(yíng)養(yǎng)吸收起著不可或缺的作用。然而，胃部疾病在全球范圍內(nèi)的高發(fā)性嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球約有一半人口感染幽門(mén)螺桿菌，而在我國(guó)，幽門(mén)螺桿菌感染率更是居高不下，部分地區(qū)感染率甚至超過(guò)60%。幽門(mén)螺桿菌作為一種主要寄生于人體胃部及十二指腸內(nèi)的革蘭氏陰性菌，與多種胃部疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。大量研究表明，幽門(mén)螺桿菌是慢性活動(dòng)性胃炎、消化性潰瘍的重要致病因素。在慢性活動(dòng)性胃炎患者中，幽門(mén)螺桿菌的檢出率高達(dá)80%-90%；而在消化性潰瘍患者中，該菌的感染率更是超過(guò)90%。不僅如此，幽門(mén)螺桿菌還與胃癌的發(fā)生緊密相連，是第Ⅰ類(lèi)生物致癌因子。流行病學(xué)研究顯示，幽門(mén)螺桿菌感染使患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增加了2-6倍。幽門(mén)螺桿菌主要通過(guò)釋放毒素、引發(fā)炎癥反應(yīng)等機(jī)制對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞造成損害，進(jìn)而打破胃黏膜上皮細(xì)胞增殖與凋亡的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致胃黏膜的損傷和病變。例如，幽門(mén)螺桿菌產(chǎn)生的空泡毒素（VacA）可誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞產(chǎn)生空泡樣變性，尿素酶分解尿素產(chǎn)生的氨也會(huì)對(duì)胃黏膜組織產(chǎn)生損傷作用，破壞胃黏膜的屏障功能，使得胃酸和胃蛋白酶更容易侵蝕胃黏膜，引發(fā)炎癥和潰瘍。間質(zhì)干細(xì)胞（MesenchymalStemCells,MSCs）作為一類(lèi)具有高度自我更新能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，在組織修復(fù)和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。MSCs廣泛存在于骨髓、脂肪、臍帶等多種組織中，當(dāng)機(jī)體組織受到損傷時(shí)，MSCs能夠感知損傷信號(hào)并遷移至損傷部位。在那里，它們可以分化為多種細(xì)胞類(lèi)型，如骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肌肉細(xì)胞等，參與受損組織的修復(fù)與再生。在骨折愈合過(guò)程中，MSCs可分化為骨細(xì)胞，促進(jìn)新骨的形成；在皮膚損傷修復(fù)中，MSCs能分化為表皮細(xì)胞和真皮細(xì)胞，加速傷口愈合。MSCs還具有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)功能，能夠通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性和功能，減輕炎癥反應(yīng)，為組織修復(fù)創(chuàng)造良好的微環(huán)境。MSCs可以抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和活化，調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的抗體分泌，還能影響巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞的功能，從而維持機(jī)體的免疫平衡。在幽門(mén)螺桿菌感染引發(fā)的胃部疾病中，胃上皮細(xì)胞作為胃部的重要組成部分，首當(dāng)其沖受到影響。幽門(mén)螺桿菌感染導(dǎo)致胃上皮細(xì)胞損傷，不僅會(huì)影響胃部的正常消化和吸收功能，還可能引發(fā)一系列病理變化，如細(xì)胞增殖異常、凋亡失衡以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）等，這些變化與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。而MSCs在幽門(mén)螺桿菌感染的微環(huán)境中，會(huì)受到多種因素的影響，其生物學(xué)特性和功能可能發(fā)生改變，進(jìn)而對(duì)胃上皮細(xì)胞產(chǎn)生不同的作用。研究表明，幽門(mén)螺桿菌感染的胃腸道上皮細(xì)胞能促進(jìn)MSCs向胃腸粘膜層募集，但MSCs在幽門(mén)螺桿菌導(dǎo)致的胃上皮細(xì)胞損傷或惡性轉(zhuǎn)化中究竟發(fā)揮何種作用及其具體機(jī)制，迄今仍未完全明確。因此，深入探討幽門(mén)螺桿菌對(duì)MSCs的影響及其對(duì)胃上皮細(xì)胞的作用及機(jī)制，對(duì)于揭示胃部疾病的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療靶點(diǎn)以及開(kāi)發(fā)有效的治療策略具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探討幽門(mén)螺桿菌對(duì)間質(zhì)干細(xì)胞的影響，以及受影響的間質(zhì)干細(xì)胞如何作用于胃上皮細(xì)胞，進(jìn)而揭示其背后的分子機(jī)制和信號(hào)通路。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，模擬幽門(mén)螺桿菌感染的微環(huán)境，研究間質(zhì)干細(xì)胞在該環(huán)境下的生物學(xué)特性變化，包括細(xì)胞增殖、分化、遷移能力以及免疫調(diào)節(jié)功能的改變。同時(shí)，分析間質(zhì)干細(xì)胞與胃上皮細(xì)胞之間的相互作用，觀察胃上皮細(xì)胞在間質(zhì)干細(xì)胞的影響下，其增殖、凋亡、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等生物學(xué)過(guò)程的變化情況。進(jìn)一步通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)，如實(shí)時(shí)定量PCR、蛋白質(zhì)免疫印跡等方法，檢測(cè)相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平，明確參與這一過(guò)程的關(guān)鍵分子和信號(hào)通路。本研究具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。在理論方面，目前對(duì)于幽門(mén)螺桿菌感染導(dǎo)致胃部疾病的機(jī)制研究主要集中在幽門(mén)螺桿菌直接對(duì)胃上皮細(xì)胞的損傷作用上，而對(duì)于間質(zhì)干細(xì)胞在這一過(guò)程中的作用及機(jī)制研究相對(duì)較少。本研究將填補(bǔ)這一領(lǐng)域的部分空白，豐富和完善幽門(mén)螺桿菌感染相關(guān)胃部疾病的發(fā)病機(jī)制理論體系，有助于深入理解胃部疾病發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程。在現(xiàn)實(shí)應(yīng)用方面，研究成果可能為臨床治療幽門(mén)螺桿菌感染相關(guān)胃部疾病提供新的思路和潛在的治療靶點(diǎn)。如果能夠明確間質(zhì)干細(xì)胞在幽門(mén)螺桿菌感染微環(huán)境中對(duì)胃上皮細(xì)胞的作用機(jī)制，就有可能通過(guò)調(diào)節(jié)間質(zhì)干細(xì)胞的功能來(lái)干預(yù)胃部疾病的發(fā)展進(jìn)程，為開(kāi)發(fā)新的治療策略和藥物提供理論依據(jù)。這對(duì)于提高胃部疾病的治療效果、降低胃癌的發(fā)生率、改善患者的生活質(zhì)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，有望為廣大患者帶來(lái)福音。二、幽門(mén)螺桿菌、間質(zhì)干細(xì)胞與胃上皮細(xì)胞概述2.1幽門(mén)螺桿菌特性與致病機(jī)制2.1.1生物學(xué)特性幽門(mén)螺桿菌（Helicobacterpylori，H.pylori）是一種革蘭氏陰性菌，其菌體形態(tài)獨(dú)特，通常呈弧形、S形或螺旋形，長(zhǎng)2.5-4.0μm，寬0.5-1.0μm。這種特殊的形態(tài)使其能夠在胃黏膜的黏液層中靈活穿梭，便于定植和生存。幽門(mén)螺桿菌具有鞭毛，這是其重要的運(yùn)動(dòng)器官，鞭毛的存在賦予了幽門(mén)螺桿菌較強(qiáng)的動(dòng)力，有助于它逆著胃內(nèi)的蠕動(dòng)方向游動(dòng)，從而穩(wěn)定地附著于胃上皮細(xì)胞表面。幽門(mén)螺桿菌屬于微需氧菌，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的氧氣含量要求較為苛刻，環(huán)境氧要求在5%-8%之間，在大氣或絕對(duì)厭氧環(huán)境下均不能生長(zhǎng)。這是因?yàn)樗拇x過(guò)程需要一定量的氧氣來(lái)參與某些關(guān)鍵的酶促反應(yīng)，但過(guò)高濃度的氧氣又會(huì)對(duì)其產(chǎn)生毒性作用。其生長(zhǎng)還需要一定的濕度條件，適宜的濕度有助于維持菌體的正常生理功能和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。在營(yíng)養(yǎng)需求方面，許多固體培養(yǎng)基可作為幽門(mén)螺桿菌分離培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，如布氏瓊脂使用較多，但需加用適量全血或胎牛血清作為補(bǔ)充物，以提供其生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)成分，方能滿(mǎn)足其生長(zhǎng)需求。幽門(mén)螺桿菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與其他革蘭氏陰性菌類(lèi)似，由肽聚糖層和外膜組成。外膜中含有脂多糖等物質(zhì)，這些成分在幽門(mén)螺桿菌與宿主細(xì)胞的相互作用以及引發(fā)免疫反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。幽門(mén)螺桿菌還擁有豐富的尿素酶，約含菌體蛋白的15%，其活性相當(dāng)于變形桿菌的400倍。尿素酶能夠催化尿素水解，產(chǎn)生氨和二氧化碳，氨在菌體周?chē)纬梢粚印鞍痹啤?，可以中和胃酸，為幽門(mén)螺桿菌在高酸的胃環(huán)境中創(chuàng)造一個(gè)相對(duì)中性的生存微環(huán)境。除尿素酶外，幽門(mén)螺桿菌還編碼空泡毒素（VacA）和細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白（CagA）等毒力因子，這些毒力因子在幽門(mén)螺桿菌的致病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。2.1.2致病機(jī)制幽門(mén)螺桿菌的致病機(jī)制較為復(fù)雜，涉及多個(gè)方面，主要通過(guò)產(chǎn)生毒素、破壞胃黏膜屏障以及引發(fā)炎癥反應(yīng)等途徑導(dǎo)致胃部疾病的發(fā)生。幽門(mén)螺桿菌產(chǎn)生的多種毒素是其致病的重要因素之一。空泡毒素（VacA）是幽門(mén)螺桿菌分泌的一種重要毒素，它能夠進(jìn)入胃上皮細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)的特定受體結(jié)合，改變細(xì)胞膜的通透性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的離子平衡失調(diào)，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生空泡樣變性。這些空泡會(huì)逐漸增大，影響細(xì)胞的正常代謝和功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白（CagA）也是幽門(mén)螺桿菌的關(guān)鍵毒力因子之一。當(dāng)幽門(mén)螺桿菌感染胃上皮細(xì)胞時(shí)，CagA蛋白可通過(guò)細(xì)菌的型分泌系統(tǒng)被注入到宿主細(xì)胞內(nèi)。進(jìn)入細(xì)胞的CagA會(huì)發(fā)生磷酸化修飾，磷酸化后的CagA能夠與多種宿主細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子相互作用，干擾細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，如激活細(xì)胞內(nèi)的Src激酶等，從而影響細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及細(xì)胞骨架的重塑等過(guò)程，導(dǎo)致胃上皮細(xì)胞的生物學(xué)行為發(fā)生改變，增加細(xì)胞癌變的風(fēng)險(xiǎn)。幽門(mén)螺桿菌感染會(huì)破壞胃黏膜屏障，使胃黏膜失去對(duì)胃酸和胃蛋白酶的有效防御能力。幽門(mén)螺桿菌憑借其鞭毛的運(yùn)動(dòng)能力和黏附因子，能夠緊密地黏附在胃上皮細(xì)胞表面，并定植于胃黏膜的黏液層中。在定植過(guò)程中，幽門(mén)螺桿菌分泌的尿素酶水解尿素產(chǎn)生的氨除了幫助其抵御胃酸外，高濃度的氨還會(huì)對(duì)胃黏膜組織產(chǎn)生直接的損傷作用，破壞胃黏膜上皮細(xì)胞之間的緊密連接，導(dǎo)致胃黏膜的通透性增加。幽門(mén)螺桿菌釋放的蛋白酶、磷脂酶等酶類(lèi)物質(zhì)也會(huì)破壞胃黏膜的完整性，進(jìn)一步削弱胃黏膜屏障功能。胃黏膜屏障受損后，胃酸和胃蛋白酶得以直接接觸并侵蝕胃黏膜組織，引發(fā)炎癥、潰瘍等病變。幽門(mén)螺桿菌感染會(huì)引發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，這也是其致病的重要環(huán)節(jié)。當(dāng)幽門(mén)螺桿菌感染胃黏膜后，機(jī)體的免疫系統(tǒng)會(huì)識(shí)別并啟動(dòng)免疫應(yīng)答來(lái)清除病原體。幽門(mén)螺桿菌的菌體成分如脂多糖、肽聚糖等作為抗原，能夠激活胃黏膜上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體，如Toll樣受體（TLRs）。這些受體被激活后，會(huì)通過(guò)一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生和釋放多種炎性細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等。這些炎性細(xì)胞因子會(huì)招募和激活大量的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞聚集到感染部位，引發(fā)炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)雖然是機(jī)體抵御病原體的一種防御機(jī)制，但長(zhǎng)期持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致胃黏膜組織的損傷和破壞，促進(jìn)胃部疾病的發(fā)展。炎癥細(xì)胞釋放的活性氧簇（ROS）和活性氮簇（RNS）等物質(zhì)會(huì)對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞造成氧化損傷，導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷、基因突變，增加胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)；炎癥反應(yīng)還會(huì)刺激胃黏膜上皮細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞增殖與凋亡失衡，進(jìn)一步促進(jìn)胃部病變的發(fā)展。2.2間質(zhì)干細(xì)胞的特性與功能2.2.1生物學(xué)特性間質(zhì)干細(xì)胞（MesenchymalStemCells，MSCs）作為一類(lèi)成體干細(xì)胞，具有獨(dú)特的生物學(xué)特性。從來(lái)源上看，MSCs廣泛分布于多種組織中，骨髓是其主要來(lái)源之一。在骨髓中，MSCs約占骨髓有核細(xì)胞的0.001%-0.01%，通過(guò)特定的分離和培養(yǎng)技術(shù)，可以將其從骨髓中提取出來(lái)并進(jìn)行體外擴(kuò)增。脂肪組織也是獲取MSCs的重要來(lái)源，脂肪組織中的MSCs（AD-MSCs）占脂肪有核細(xì)胞的0.01%-0.05%，其具有來(lái)源豐富、易于獲取的優(yōu)勢(shì)，在吸脂手術(shù)等過(guò)程中可以方便地采集脂肪組織，進(jìn)而分離出MSCs。除骨髓和脂肪外，臍帶、胎盤(pán)、牙髓、骨骼等組織中也存在MSCs，這些不同來(lái)源的MSCs在生物學(xué)特性上可能存在一定差異，但都具備間質(zhì)干細(xì)胞的基本特征。在形態(tài)學(xué)方面，MSCs在體外培養(yǎng)時(shí)通常呈現(xiàn)出成纖維細(xì)胞樣的形態(tài)，細(xì)胞呈梭形或長(zhǎng)梭形，貼壁生長(zhǎng)。它們具有典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，包括清晰的細(xì)胞核、豐富的細(xì)胞質(zhì)以及發(fā)達(dá)的細(xì)胞器，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等，這些結(jié)構(gòu)為細(xì)胞的正常代謝和功能發(fā)揮提供了基礎(chǔ)。隨著傳代次數(shù)的增加，MSCs的形態(tài)可能會(huì)發(fā)生一些細(xì)微變化，但總體上仍保持成纖維細(xì)胞樣的特征。表面標(biāo)志物是鑒定MSCs的重要依據(jù)。國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)（ISCT）規(guī)定，MSCs需滿(mǎn)足以下幾個(gè)表面標(biāo)志物特征：表達(dá)CD73、CD90和CD105，而不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD34、CD45以及白細(xì)胞共同抗原CD45等。CD73是一種胞外5'-核苷酸酶，在MSCs表面高度表達(dá)，它參與細(xì)胞外核苷酸的代謝過(guò)程，對(duì)細(xì)胞間的信號(hào)傳遞和微環(huán)境的調(diào)節(jié)具有重要作用。CD90，也稱(chēng)為T(mén)hy-1，是一種糖蛋白，在MSCs的自我更新、增殖和分化過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它可以通過(guò)與細(xì)胞外基質(zhì)成分相互作用，影響細(xì)胞的黏附、遷移和分化能力。CD105，又稱(chēng)內(nèi)皮糖蛋白，是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）的共受體，參與TGF-β信號(hào)通路的傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)MSCs的增殖、分化和免疫調(diào)節(jié)功能。除了這些核心標(biāo)志物外，MSCs還可能表達(dá)一些其他的表面分子，如CD44、CD166等，這些分子在MSCs與周?chē)?xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用中發(fā)揮著重要作用。CD44是一種細(xì)胞表面黏附分子，它可以與透明質(zhì)酸等細(xì)胞外基質(zhì)成分結(jié)合，參與細(xì)胞的遷移、黏附和增殖過(guò)程；CD166，也稱(chēng)為ALCAM，在細(xì)胞間的相互作用和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要功能，對(duì)MSCs的免疫調(diào)節(jié)和組織修復(fù)能力有一定影響。多向分化潛能是MSCs最為顯著的生物學(xué)特性之一。在特定的誘導(dǎo)條件下，MSCs能夠分化為多種細(xì)胞類(lèi)型，如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌肉細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等。當(dāng)在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)?shù)某晒钦T導(dǎo)因子，如地塞米松、β-甘油磷酸鈉和維生素C等時(shí)，MSCs可以向成骨細(xì)胞方向分化。在分化過(guò)程中，細(xì)胞形態(tài)逐漸發(fā)生改變，從梭形變?yōu)榱⒎叫位蚨噙呅?，同時(shí)表達(dá)成骨細(xì)胞特異性的標(biāo)志物，如堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）和Ⅰ型膠原蛋白（COL1）等，這些標(biāo)志物的表達(dá)水平逐漸升高，表明細(xì)胞逐漸向成骨細(xì)胞分化成熟。在軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基的作用下，MSCs能夠分化為軟骨細(xì)胞。軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中通常含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β3（TGF-β3）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）等因子，這些因子可以誘導(dǎo)MSCs表達(dá)軟骨細(xì)胞特異性的基因和蛋白，如Ⅱ型膠原蛋白（COL2）、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）等，細(xì)胞逐漸形成軟骨結(jié)節(jié)，表現(xiàn)出軟骨細(xì)胞的形態(tài)和功能特征。將MSCs置于脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，添加胰島素、地塞米松、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（IBMX）和吲哚美辛等誘導(dǎo)劑，MSCs可以分化為脂肪細(xì)胞。在分化過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)逐漸出現(xiàn)脂滴，隨著分化的進(jìn)行，脂滴不斷增大并融合，細(xì)胞表達(dá)脂肪細(xì)胞特異性的標(biāo)志物，如脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）等，表明細(xì)胞成功分化為脂肪細(xì)胞。通過(guò)特定的誘導(dǎo)條件，MSCs還可以向肌肉細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等方向分化，為組織修復(fù)和再生提供了多樣化的細(xì)胞來(lái)源。2.2.2功能間質(zhì)干細(xì)胞在組織修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要功能，這些功能使其在多種疾病的治療中展現(xiàn)出巨大的潛力，尤其是在胃部疾病的治療中，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。在組織修復(fù)方面，MSCs具有強(qiáng)大的再生能力。當(dāng)組織受到損傷時(shí)，MSCs能夠感知損傷信號(hào)，通過(guò)血液循環(huán)或組織間的遷移，歸巢到損傷部位。在損傷微環(huán)境中，MSCs通過(guò)旁分泌作用分泌多種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）、胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）等，這些因子可以促進(jìn)損傷部位細(xì)胞的增殖、遷移和分化，加速組織修復(fù)過(guò)程。VEGF能夠刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)新血管的生成，為損傷組織提供充足的血液供應(yīng)，有助于組織的修復(fù)和再生；HGF可以促進(jìn)多種細(xì)胞的增殖和分化，包括肝細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，在肝臟、皮膚等組織的修復(fù)中發(fā)揮重要作用；IGF則參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和分化過(guò)程，對(duì)組織的修復(fù)和再生具有促進(jìn)作用。MSCs還可以直接分化為損傷部位的細(xì)胞類(lèi)型，替代受損或死亡的細(xì)胞，參與組織的結(jié)構(gòu)重建和功能恢復(fù)。在骨折愈合過(guò)程中，MSCs可以分化為成骨細(xì)胞，促進(jìn)新骨的形成，加速骨折部位的愈合；在皮膚燒傷或創(chuàng)傷修復(fù)中，MSCs能夠分化為表皮細(xì)胞和真皮細(xì)胞，促進(jìn)傷口的愈合和皮膚組織的再生。免疫調(diào)節(jié)是MSCs的另一重要功能。MSCs可以通過(guò)多種機(jī)制調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能，維持機(jī)體的免疫平衡。MSCs能夠抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和活化，通過(guò)分泌細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）、吲哚胺2，3-雙加氧酶（IDO）等，抑制T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的分泌，調(diào)節(jié)T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。TGF-β1可以抑制T細(xì)胞的活化和增殖，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的分化，從而抑制免疫反應(yīng)；IDO能夠催化色氨酸代謝，使局部微環(huán)境中的色氨酸水平降低，導(dǎo)致T細(xì)胞因缺乏必需氨基酸而增殖受阻，同時(shí)還能誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。MSCs對(duì)B淋巴細(xì)胞的功能也有調(diào)節(jié)作用，它可以抑制B細(xì)胞的增殖和抗體分泌，調(diào)節(jié)體液免疫應(yīng)答。MSCs還能影響巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞的功能，改變其表型和細(xì)胞因子分泌譜，從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和方向。在炎癥反應(yīng)中，MSCs可以分泌抗炎因子如白細(xì)胞介素-10（IL-10）等，抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎性細(xì)胞因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)，為組織修復(fù)創(chuàng)造良好的微環(huán)境。在胃部疾病治療中，MSCs的功能也顯示出潛在的作用。在幽門(mén)螺桿菌感染導(dǎo)致的胃部炎癥和潰瘍等疾病中，MSCs可以遷移到受損的胃黏膜部位，通過(guò)分泌生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子，促進(jìn)胃上皮細(xì)胞的增殖和修復(fù)，增強(qiáng)胃黏膜的屏障功能。MSCs分泌的HGF可以刺激胃上皮細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)受損胃黏膜的修復(fù)；IGF能夠調(diào)節(jié)胃上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝，有助于維持胃黏膜的正常結(jié)構(gòu)和功能。MSCs的免疫調(diào)節(jié)功能可以減輕幽門(mén)螺桿菌感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)，抑制炎癥細(xì)胞的過(guò)度活化和炎性細(xì)胞因子的釋放，從而緩解胃部炎癥，減少對(duì)胃黏膜的損傷。在胃癌的治療中，MSCs也可能發(fā)揮一定的作用。研究表明，MSCs可以通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。MSCs可能通過(guò)分泌一些細(xì)胞因子和趨化因子，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，或者調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷作用，為胃癌的治療提供新的思路和方法。但MSCs在胃癌治療中的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究，其臨床應(yīng)用還需要更多的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證。2.3胃上皮細(xì)胞的生理功能與在胃部疾病中的變化胃上皮細(xì)胞作為胃黏膜的重要組成部分，在維持胃的正常生理功能中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。胃上皮細(xì)胞緊密排列，形成了一層連續(xù)的屏障，有效地阻止了胃酸、胃蛋白酶以及幽門(mén)螺桿菌等有害物質(zhì)對(duì)胃黏膜下層組織的直接侵蝕。胃上皮細(xì)胞能夠分泌多種物質(zhì)，如黏液、碳酸氫鹽等，參與胃內(nèi)環(huán)境的調(diào)節(jié)。黏液是一種由糖蛋白組成的黏稠物質(zhì)，它覆蓋在胃上皮細(xì)胞表面，形成一層厚厚的黏液層，不僅可以潤(rùn)滑食物，減少食物對(duì)胃黏膜的機(jī)械損傷，還能作為物理屏障，阻擋胃酸和胃蛋白酶的侵蝕。碳酸氫鹽則由胃上皮細(xì)胞主動(dòng)分泌，它可以中和胃酸，使胃黏膜表面的pH值保持在相對(duì)中性的范圍，從而保護(hù)胃上皮細(xì)胞免受胃酸的損傷。胃上皮細(xì)胞還具有吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的功能，雖然胃的主要吸收功能相對(duì)較弱，但胃上皮細(xì)胞仍能吸收少量的水、酒精以及一些脂溶性物質(zhì)等，這些物質(zhì)的吸收對(duì)于維持機(jī)體的正常生理功能具有一定的意義。當(dāng)幽門(mén)螺桿菌感染胃上皮細(xì)胞后，會(huì)導(dǎo)致胃上皮細(xì)胞在增殖、凋亡、形態(tài)和功能等方面發(fā)生一系列顯著變化。在增殖方面，幽門(mén)螺桿菌感染會(huì)打破胃上皮細(xì)胞正常的增殖平衡。研究表明，幽門(mén)螺桿菌的某些毒力因子，如細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白（CagA）和空泡毒素（VacA），可以通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路和磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）通路等，刺激胃上皮細(xì)胞的增殖。CagA進(jìn)入胃上皮細(xì)胞后，能夠與多種細(xì)胞內(nèi)蛋白相互作用，激活MAPK通路中的關(guān)鍵激酶，如細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK），從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖；VacA則可以通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)的離子平衡和膜電位，間接激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖。然而，長(zhǎng)期的幽門(mén)螺桿菌感染可能導(dǎo)致胃上皮細(xì)胞的過(guò)度增殖，使細(xì)胞增殖失去正常的調(diào)控，這是胃癌發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)之一。幽門(mén)螺桿菌感染還會(huì)影響胃上皮細(xì)胞的凋亡。正常情況下，胃上皮細(xì)胞的凋亡是維持胃黏膜穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制之一，它可以清除受損、老化或異常的細(xì)胞，保持胃上皮細(xì)胞的正常更新。但幽門(mén)螺桿菌感染會(huì)干擾胃上皮細(xì)胞的凋亡過(guò)程，使細(xì)胞凋亡失衡。一方面，幽門(mén)螺桿菌的毒力因子可以抑制胃上皮細(xì)胞的凋亡，如CagA可以通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)的凋亡相關(guān)蛋白相互作用，抑制凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)，從而減少細(xì)胞凋亡。另一方面，幽門(mén)螺桿菌感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的大量炎性細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，又可以誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞的凋亡。這種凋亡的失衡會(huì)導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量發(fā)生改變，進(jìn)一步破壞胃黏膜的正常結(jié)構(gòu)和功能，增加胃部疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。在形態(tài)上，幽門(mén)螺桿菌感染會(huì)使胃上皮細(xì)胞發(fā)生明顯的改變。感染后，胃上皮細(xì)胞的形態(tài)可能從正常的柱狀變?yōu)椴灰?guī)則形狀，細(xì)胞之間的緊密連接被破壞，導(dǎo)致細(xì)胞間隙增寬。幽門(mén)螺桿菌產(chǎn)生的毒素和酶類(lèi)物質(zhì)可以直接損傷胃上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架，使細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。這些形態(tài)學(xué)的變化會(huì)影響胃上皮細(xì)胞的正常功能，如細(xì)胞的屏障功能和分泌功能等。幽門(mén)螺桿菌感染對(duì)胃上皮細(xì)胞的功能也會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重影響。胃上皮細(xì)胞的屏障功能受損，導(dǎo)致胃酸和胃蛋白酶更容易穿透胃黏膜，引發(fā)炎癥和潰瘍。幽門(mén)螺桿菌感染破壞了胃上皮細(xì)胞之間的緊密連接，使胃黏膜的通透性增加，胃酸和胃蛋白酶可以直接接觸胃黏膜下層組織，刺激炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和炎性細(xì)胞因子的釋放，進(jìn)一步加重胃黏膜的損傷。胃上皮細(xì)胞的分泌功能也會(huì)受到影響，黏液和碳酸氫鹽的分泌減少，無(wú)法有效地保護(hù)胃黏膜。幽門(mén)螺桿菌感染會(huì)干擾胃上皮細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，影響相關(guān)基因的表達(dá)，從而導(dǎo)致黏液和碳酸氫鹽的合成和分泌減少。這些功能的改變會(huì)進(jìn)一步破壞胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，促進(jìn)胃部疾病的發(fā)展。三、幽門(mén)螺桿菌對(duì)間質(zhì)干細(xì)胞的影響3.1體外實(shí)驗(yàn)研究3.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法選用人臍帶來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞（hucMSCs）作為研究對(duì)象，這是因?yàn)閔ucMSCs具有來(lái)源豐富、獲取相對(duì)容易、免疫原性低等優(yōu)勢(shì)，能夠在體外大量擴(kuò)增，且在分化潛能和生物學(xué)特性方面表現(xiàn)穩(wěn)定，適合用于體外實(shí)驗(yàn)研究。將hucMSCs置于含有10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-鏈霉素雙抗的低糖杜氏改良Eagle培養(yǎng)基（LG-DMEM）中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱。在這種培養(yǎng)條件下，hucMSCs能夠保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)和生物學(xué)特性，有利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。幽門(mén)螺桿菌菌株選用標(biāo)準(zhǔn)菌株如ATCC43504，該菌株具有明確的生物學(xué)特性和致病能力，在幽門(mén)螺桿菌相關(guān)研究中被廣泛應(yīng)用，能夠保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。在進(jìn)行共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)前，先將幽門(mén)螺桿菌在哥倫比亞血瓊脂平板上進(jìn)行復(fù)蘇和活化培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為微需氧環(huán)境（5%O?、10%CO?、85%N?）、37℃培養(yǎng)3-5天。待幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)良好后，用無(wú)菌生理鹽水將其制成菌懸液，并通過(guò)比濁法調(diào)整菌懸液濃度，使其達(dá)到所需的感染復(fù)數(shù)（MOI）。將hucMSCs以每孔5×10?個(gè)細(xì)胞的密度接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至融合度達(dá)到70%-80%時(shí)，進(jìn)行分組處理。實(shí)驗(yàn)共分為兩組，分別為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組加入不含幽門(mén)螺桿菌的LG-DMEM培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組則加入含有幽門(mén)螺桿菌的LG-DMEM培養(yǎng)基，使幽門(mén)螺桿菌與hucMSCs的感染復(fù)數(shù)（MOI）為100:1。共培養(yǎng)時(shí)間設(shè)定為24小時(shí)，這是經(jīng)過(guò)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的最佳時(shí)間點(diǎn)，在該時(shí)間點(diǎn)下，既能觀察到幽門(mén)螺桿菌對(duì)hucMSCs產(chǎn)生明顯的影響，又能保證細(xì)胞的活性和穩(wěn)定性，避免因過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的共培養(yǎng)導(dǎo)致細(xì)胞死亡或其他不可控因素的干擾。在共培養(yǎng)過(guò)程中，定期在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和形態(tài)特征的改變。培養(yǎng)結(jié)束后，收集細(xì)胞用于后續(xù)的各項(xiàng)檢測(cè)分析。3.1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果在細(xì)胞形態(tài)方面，對(duì)照組的hucMSCs呈現(xiàn)典型的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，細(xì)胞呈梭形，伸展良好，細(xì)胞之間排列緊密。而實(shí)驗(yàn)組的hucMSCs在與幽門(mén)螺桿菌共培養(yǎng)24小時(shí)后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯改變。部分細(xì)胞體積增大，形態(tài)變得不規(guī)則，細(xì)胞邊緣出現(xiàn)皺縮，細(xì)胞之間的連接也變得松散。這些形態(tài)學(xué)的變化表明幽門(mén)螺桿菌的作用對(duì)hucMSCs的細(xì)胞結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了影響，可能干擾了細(xì)胞的正常生理功能。通過(guò)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示對(duì)照組hucMSCs在培養(yǎng)過(guò)程中呈現(xiàn)出穩(wěn)定的增殖趨勢(shì)，細(xì)胞數(shù)量隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加而逐漸增多。而實(shí)驗(yàn)組hucMSCs在與幽門(mén)螺桿菌共培養(yǎng)后，細(xì)胞增殖能力受到明顯抑制。在培養(yǎng)24小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的OD值顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這表明幽門(mén)螺桿菌能夠抑制hucMSCs的增殖，可能通過(guò)影響細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因或蛋白的表達(dá)，阻礙細(xì)胞的分裂和增殖過(guò)程。在成骨分化實(shí)驗(yàn)中，將兩組hucMSCs分別置于成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)21天，然后進(jìn)行茜素紅染色。對(duì)照組hucMSCs在成骨誘導(dǎo)后，能夠成功分化為成骨細(xì)胞，細(xì)胞周?chē)纬纱罅康拟}結(jié)節(jié)，茜素紅染色呈現(xiàn)陽(yáng)性，紅色染色區(qū)域明顯。而實(shí)驗(yàn)組hucMSCs在相同的成骨誘導(dǎo)條件下，分化為成骨細(xì)胞的能力明顯減弱，鈣結(jié)節(jié)形成數(shù)量顯著減少，茜素紅染色陽(yáng)性區(qū)域明顯減少。通過(guò)定量分析鈣結(jié)節(jié)的含量，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組鈣結(jié)節(jié)含量?jī)H為對(duì)照組的（35.6±5.2）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這說(shuō)明幽門(mén)螺桿菌抑制了hucMSCs向成骨細(xì)胞的分化能力。在成脂分化實(shí)驗(yàn)中，將兩組hucMSCs分別置于成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天，然后進(jìn)行油紅O染色。對(duì)照組hucMSCs在成脂誘導(dǎo)后，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，油紅O染色呈現(xiàn)陽(yáng)性，紅色脂滴清晰可見(jiàn)。而實(shí)驗(yàn)組hucMSCs在成脂誘導(dǎo)后，細(xì)胞內(nèi)脂滴形成數(shù)量明顯減少，油紅O染色陽(yáng)性區(qū)域明顯縮小。通過(guò)定量分析脂滴的含量，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組脂滴含量?jī)H為對(duì)照組的（42.8±6.5）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明幽門(mén)螺桿菌也抑制了hucMSCs向脂肪細(xì)胞的分化能力。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)水平，結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組hucMSCs中多能性相關(guān)基因Oct4、Sox2和Nanog的表達(dá)水平顯著降低。Oct4基因的表達(dá)量降低至對(duì)照組的（0.35±0.05）倍，Sox2基因的表達(dá)量降低至對(duì)照組的（0.42±0.06）倍，Nanog基因的表達(dá)量降低至對(duì)照組的（0.38±0.04）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這說(shuō)明幽門(mén)螺桿菌作用后，hucMSCs的多能性受到抑制，細(xì)胞的自我更新和分化潛能可能發(fā)生改變。炎癥相關(guān)基因IL-6、TNF-α的表達(dá)水平顯著升高。IL-6基因的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（5.6±1.2）倍，TNF-α基因的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（4.8±1.0）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明幽門(mén)螺桿菌能夠誘導(dǎo)hucMSCs產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，可能通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，從而影響細(xì)胞的功能和微環(huán)境。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平，結(jié)果與基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果一致。實(shí)驗(yàn)組hucMSCs中Oct4、Sox2和Nanog蛋白的表達(dá)水平明顯降低，而IL-6、TNF-α蛋白的表達(dá)水平顯著升高。同時(shí)，細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinD1的表達(dá)水平也明顯降低，表明幽門(mén)螺桿菌可能通過(guò)抑制CyclinD1的表達(dá)，影響細(xì)胞周期進(jìn)程，進(jìn)而抑制hucMSCs的增殖。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，幽門(mén)螺桿菌對(duì)hucMSCs的生物學(xué)特性產(chǎn)生了多方面的影響，包括細(xì)胞形態(tài)、增殖、分化能力以及相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)，這些變化可能進(jìn)一步影響hucMSCs在組織修復(fù)和免疫調(diào)節(jié)等方面的功能。3.2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究3.2.1動(dòng)物模型建立選用6-8周齡的雄性C57BL/6小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，體重在20-25g之間。小鼠購(gòu)自正規(guī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，在實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，飼養(yǎng)環(huán)境為溫度（22±2）℃、相對(duì)濕度（50±10）%的SPF級(jí)動(dòng)物房，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料和無(wú)菌水自由進(jìn)食進(jìn)水。采用灌胃法建立幽門(mén)螺桿菌感染小鼠模型。實(shí)驗(yàn)前，將幽門(mén)螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC43504在哥倫比亞血瓊脂平板上進(jìn)行復(fù)蘇和活化培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為微需氧環(huán)境（5%O?、10%CO?、85%N?）、37℃培養(yǎng)3-5天。待幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)良好后，用無(wú)菌生理鹽水將其制成菌懸液，并通過(guò)比濁法調(diào)整菌懸液濃度至1×10?CFU/mL。在灌胃前，先將小鼠禁食12小時(shí)，但不禁水，以排空胃部?jī)?nèi)容物，提高幽門(mén)螺桿菌的感染成功率。然后，使用灌胃針將0.2mL幽門(mén)螺桿菌菌懸液緩慢灌入小鼠胃內(nèi)，隔日灌胃1次，共灌胃3次。對(duì)照組小鼠則給予等量的無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行灌胃處理。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，密切觀察小鼠的精神狀態(tài)、飲食、體重等一般情況，確保小鼠健康狀況良好，減少其他因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。3.2.2實(shí)驗(yàn)觀察與檢測(cè)指標(biāo)在感染幽門(mén)螺桿菌4周后，將小鼠處死，迅速取出胃組織。一部分胃組織用4%多聚甲醛固定，用于后續(xù)的組織學(xué)分析和免疫組織化學(xué)檢測(cè)。將固定好的胃組織進(jìn)行石蠟包埋，制成4μm厚的切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察胃黏膜的病理變化，包括炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、上皮細(xì)胞損傷等情況。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)胃組織中間質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)志物，如CD73、CD90和CD105等，以確定間質(zhì)干細(xì)胞的分布和數(shù)量變化。利用Image-ProPlus軟件對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行分析，通過(guò)計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值來(lái)半定量分析間質(zhì)干細(xì)胞的表達(dá)情況。另一部分胃組織立即放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于后續(xù)的分子生物學(xué)檢測(cè)。采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)胃組織中相關(guān)細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平，如白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）等，以評(píng)估炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)狀態(tài)。提取胃組織總RNA，然后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，以GAPDH作為內(nèi)參基因，通過(guò)2^-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。采用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)胃組織中相關(guān)信號(hào)通路分子的蛋白表達(dá)水平，如核因子-κB（NF-κB）、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等，以探究幽門(mén)螺桿菌感染對(duì)間質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路的影響。提取胃組織總蛋白，通過(guò)SDS-PAGE電泳分離蛋白，然后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用特異性抗體進(jìn)行孵育，最后通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)蛋白條帶的強(qiáng)度，以β-actin作為內(nèi)參蛋白，分析目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。3.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組小鼠胃組織中可見(jiàn)少量間質(zhì)干細(xì)胞分布，主要位于胃黏膜下層和肌層，CD73、CD90和CD105陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值較低。而感染幽門(mén)螺桿菌的小鼠胃組織中，間質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量明顯增多，主要聚集在炎癥浸潤(rùn)區(qū)域和受損的胃上皮細(xì)胞周?chē)?，CD73、CD90和CD105陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明幽門(mén)螺桿菌感染能夠誘導(dǎo)間質(zhì)干細(xì)胞向胃組織損傷部位募集。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，感染幽門(mén)螺桿菌的小鼠胃組織中IL-6、TNF-α的mRNA表達(dá)水平顯著升高，分別為對(duì)照組的（6.8±1.5）倍和（5.6±1.2）倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而TGF-β1的mRNA表達(dá)水平則顯著降低，為對(duì)照組的（0.4±0.1）倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這說(shuō)明幽門(mén)螺桿菌感染引發(fā)了強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，同時(shí)抑制了具有免疫調(diào)節(jié)和組織修復(fù)作用的TGF-β1的表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果表明，感染幽門(mén)螺桿菌的小鼠胃組織中NF-κB和p-NF-κB的蛋白表達(dá)水平明顯升高，p-NF-κB/NF-κB的比值顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明幽門(mén)螺桿菌感染激活了NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)了炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白，如細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK的磷酸化水平也顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這說(shuō)明MAPK信號(hào)通路也被幽門(mén)螺桿菌感染激活，參與了炎癥反應(yīng)和細(xì)胞應(yīng)激過(guò)程。將體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比討論，發(fā)現(xiàn)兩者具有一定的一致性。在體外實(shí)驗(yàn)中，幽門(mén)螺桿菌與間質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致間質(zhì)干細(xì)胞的增殖、分化能力受到抑制，炎癥相關(guān)基因表達(dá)升高。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，幽門(mén)螺桿菌感染同樣引起了胃組織中間質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量和功能變化，以及炎癥反應(yīng)的增強(qiáng)。但體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示出一些與體外實(shí)驗(yàn)不同的特點(diǎn)，在體內(nèi)環(huán)境中，間質(zhì)干細(xì)胞不僅受到幽門(mén)螺桿菌的直接作用，還受到機(jī)體免疫系統(tǒng)、其他細(xì)胞類(lèi)型以及細(xì)胞外基質(zhì)等多種因素的影響，其募集和功能發(fā)揮更為復(fù)雜。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中觀察到的間質(zhì)干細(xì)胞向損傷部位的募集現(xiàn)象在體外實(shí)驗(yàn)中無(wú)法直接體現(xiàn)。這些差異提示在研究幽門(mén)螺桿菌對(duì)間質(zhì)干細(xì)胞的影響及其對(duì)胃上皮細(xì)胞的作用機(jī)制時(shí)，需要綜合考慮體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，全面深入地探討其生物學(xué)過(guò)程。四、受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞的作用4.1細(xì)胞增殖與凋亡4.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法為了探究受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞增殖和凋亡的作用，本研究采用了細(xì)胞共培養(yǎng)體系。選用人臍帶來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞（hucMSCs）和人正常胃上皮細(xì)胞（GES-1細(xì)胞）作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。將hucMSCs分為兩組，一組與幽門(mén)螺桿菌（Hp）以感染復(fù)數(shù)（MOI）100:1進(jìn)行共培養(yǎng)24小時(shí)，構(gòu)建受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞模型；另一組作為對(duì)照組，僅培養(yǎng)hucMSCs，不進(jìn)行幽門(mén)螺桿菌感染處理。培養(yǎng)結(jié)束后，收集兩組hucMSCs的上清液，分別與GES-1細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。將GES-1細(xì)胞以每孔5×103個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔板中，待細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組加入受幽門(mén)螺桿菌影響的hucMSCs上清液，對(duì)照組加入未受幽門(mén)螺桿菌影響的hucMSCs上清液，每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組，加入等量的普通培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。采用CCK-8法檢測(cè)GES-1細(xì)胞的增殖能力。在培養(yǎng)結(jié)束前2小時(shí)，向每孔加入10μlCCK-8試劑，繼續(xù)孵育2小時(shí)后，使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的吸光度（OD值）。根據(jù)OD值計(jì)算細(xì)胞增殖率，公式為：細(xì)胞增殖率（%）=（實(shí)驗(yàn)組OD值-空白對(duì)照組OD值）/（對(duì)照組OD值-空白對(duì)照組OD值）×100%。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GES-1細(xì)胞的凋亡情況。收集共培養(yǎng)48小時(shí)后的GES-1細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，加入500μlBindingBuffer重懸細(xì)胞。向細(xì)胞懸液中依次加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI，輕輕混勻，避光孵育15分鐘。孵育結(jié)束后，立即使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)分析AnnexinV-FITC和PI雙染的結(jié)果，計(jì)算早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡細(xì)胞的比例。為了進(jìn)一步探究細(xì)胞凋亡的機(jī)制，采用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，包括B細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）等。收集GES-1細(xì)胞，提取總蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，然后轉(zhuǎn)膜至PVDF膜上。用5%脫脂奶粉封閉PVDF膜1小時(shí)，加入一抗（Bcl-2、Bax、Caspase-3和β-actin抗體），4℃孵育過(guò)夜。次日，用TBST洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育1小時(shí)。再次用TBST洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，最后通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)蛋白條帶的強(qiáng)度，以β-actin作為內(nèi)參蛋白，分析目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。4.1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞的增殖率顯著降低。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率為（65.3±5.6）%，而對(duì)照組細(xì)胞增殖率為（100.0±8.2）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液能夠抑制胃上皮細(xì)胞的增殖。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞的凋亡率明顯高于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡細(xì)胞的比例之和為（25.6±3.2）%，而對(duì)照組為（8.5±1.5）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這說(shuō)明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液能夠誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞凋亡。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)水平顯著降低，而B(niǎo)ax和Caspase-3蛋白的表達(dá)水平顯著升高。實(shí)驗(yàn)組Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（0.45±0.05），對(duì)照組為（1.00±0.10）；實(shí)驗(yàn)組Bax蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（1.85±0.20），對(duì)照組為（1.00±0.10）；實(shí)驗(yàn)組Caspase-3蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（1.56±0.15），對(duì)照組為（1.00±0.10），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Bcl-2是一種抗凋亡蛋白，能夠抑制細(xì)胞凋亡；而B(niǎo)ax是一種促凋亡蛋白，它可以與Bcl-2形成異二聚體，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Caspase-3是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的關(guān)鍵執(zhí)行酶，它的激活會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。本研究結(jié)果表明，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞可能通過(guò)下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，上調(diào)Bax和Caspase-3蛋白的表達(dá)，從而誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞凋亡。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞的增殖和凋亡產(chǎn)生了顯著影響，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。這一結(jié)果為進(jìn)一步揭示幽門(mén)螺桿菌感染相關(guān)胃部疾病的發(fā)病機(jī)制提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。4.2細(xì)胞遷移與侵襲4.2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法為了探究受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞遷移和侵襲能力的作用，本研究采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)選用人臍帶來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞（hucMSCs）和人正常胃上皮細(xì)胞（GES-1細(xì)胞）。將hucMSCs分為兩組，一組與幽門(mén)螺桿菌（Hp）以感染復(fù)數(shù)（MOI）100:1進(jìn)行共培養(yǎng)24小時(shí)，構(gòu)建受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞模型；另一組作為對(duì)照組，僅培養(yǎng)hucMSCs，不進(jìn)行幽門(mén)螺桿菌感染處理。收集兩組hucMSCs的上清液，分別用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Transwell小室實(shí)驗(yàn)分為遷移實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)。遷移實(shí)驗(yàn)中，選用孔徑為8μm的Transwell小室，小室的上室用于接種細(xì)胞，下室加入趨化因子。將GES-1細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至5×10?/ml。取100μl細(xì)胞懸液加入Transwell小室的上室，下室加入600μl含20%胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)基作為趨化因子。特別注意在種板時(shí)避免下層培養(yǎng)液和小室間產(chǎn)生氣泡，一旦出現(xiàn)氣泡，需將小室提起去除氣泡后再放入培養(yǎng)板。將Transwell小室置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，取出Transwell小室，棄去上室培養(yǎng)液，用無(wú)菌PBS輕輕沖洗2次，以去除未遷移的細(xì)胞。然后用棉簽小心擦去上室表面的細(xì)胞，將小室放入甲醇中固定30分鐘。固定結(jié)束后，取出小室晾干，用0.1%結(jié)晶紫染液染色20分鐘，再用PBS沖洗3次，以去除多余的染液。最后在400倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)遷移到下室膜表面的細(xì)胞數(shù)量。侵襲實(shí)驗(yàn)在遷移實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，需要在Transwell小室的上室底部預(yù)先鋪一層基質(zhì)膠。本研究選用BD公司的Matrigel，使用前先將其在4℃過(guò)夜融化，然后用4℃預(yù)冷的無(wú)血清培養(yǎng)基以1:8的比例稀釋Matrigel，冰上操作。在Transwell小室的上室底部中央垂直加入100μl稀釋后的Matrigel，置于37℃培養(yǎng)箱中溫育4-5小時(shí)，使其干成膠狀，完成基底膜水化。之后的細(xì)胞接種、培養(yǎng)及后續(xù)檢測(cè)步驟與遷移實(shí)驗(yàn)相同。通過(guò)比較兩組實(shí)驗(yàn)中遷移和侵襲到下室的GES-1細(xì)胞數(shù)量，分析受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。4.2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組GES-1細(xì)胞遷移到下室的數(shù)量較多，平均每個(gè)視野下的細(xì)胞數(shù)為（56.3±6.5）個(gè)；而實(shí)驗(yàn)組中，加入受幽門(mén)螺桿菌影響的hucMSCs上清液后，GES-1細(xì)胞遷移到下室的數(shù)量明顯減少，平均每個(gè)視野下的細(xì)胞數(shù)為（28.5±4.2）個(gè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液能夠抑制胃上皮細(xì)胞的遷移能力。侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照組GES-1細(xì)胞成功穿過(guò)基質(zhì)膠并侵襲到下室的數(shù)量較多，平均每個(gè)視野下的細(xì)胞數(shù)為（35.6±5.2）個(gè)；實(shí)驗(yàn)組中，受幽門(mén)螺桿菌影響的hucMSCs上清液處理后的GES-1細(xì)胞侵襲到下室的數(shù)量顯著減少，平均每個(gè)視野下的細(xì)胞數(shù)為（12.8±3.0）個(gè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這說(shuō)明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液對(duì)胃上皮細(xì)胞的侵襲能力也有明顯的抑制作用。胃上皮細(xì)胞的遷移和侵襲能力在胃部疾病的發(fā)展過(guò)程中具有重要意義。在正常生理狀態(tài)下，胃上皮細(xì)胞具有一定的遷移能力，這有助于維持胃黏膜的完整性和修復(fù)受損組織。當(dāng)胃上皮細(xì)胞受到幽門(mén)螺桿菌感染等病理因素影響時(shí)，其遷移和侵襲能力的改變可能會(huì)導(dǎo)致胃黏膜屏障功能受損，進(jìn)一步引發(fā)炎癥、潰瘍等疾病。在幽門(mén)螺桿菌感染引發(fā)的慢性胃炎中，胃上皮細(xì)胞遷移能力的異?？赡苡绊懯軗p胃黏膜的修復(fù)，導(dǎo)致炎癥持續(xù)存在；而在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)，使其能夠突破胃黏膜的基底膜，向周?chē)M織浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重威脅患者的生命健康。本研究中受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞遷移和侵襲能力的抑制作用，可能在一定程度上影響了胃黏膜的修復(fù)和再生過(guò)程，同時(shí)也可能對(duì)胃癌的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。這種抑制作用的具體機(jī)制可能與間質(zhì)干細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子、趨化因子以及對(duì)胃上皮細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān)，需要進(jìn)一步深入研究來(lái)明確。4.3細(xì)胞分化與功能4.3.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法選用人臍帶來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞（hucMSCs）和人正常胃上皮細(xì)胞（GES-1細(xì)胞）作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。將hucMSCs分為兩組，一組與幽門(mén)螺桿菌（Hp）以感染復(fù)數(shù)（MOI）100:1進(jìn)行共培養(yǎng)24小時(shí)，構(gòu)建受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞模型；另一組作為對(duì)照組，僅培養(yǎng)hucMSCs，不進(jìn)行幽門(mén)螺桿菌感染處理。收集兩組hucMSCs的上清液，分別與GES-1細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。將GES-1細(xì)胞以每孔5×103個(gè)細(xì)胞的密度接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組加入受幽門(mén)螺桿菌影響的hucMSCs上清液，對(duì)照組加入未受幽門(mén)螺桿菌影響的hucMSCs上清液，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)，使胃上皮細(xì)胞有足夠的時(shí)間受到間質(zhì)干細(xì)胞上清液的影響并發(fā)生分化相關(guān)的變化。采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)胃上皮細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)水平，如胃蛋白酶原（PG）、黏液蛋白（MUC）等。收集共培養(yǎng)72小時(shí)后的GES-1細(xì)胞，使用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，然后按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說(shuō)明書(shū)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用特異性引物進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，引物序列根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中相關(guān)基因序列設(shè)計(jì)，并通過(guò)PrimerPremier5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)和優(yōu)化。以GAPDH作為內(nèi)參基因，通過(guò)2^-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量，以評(píng)估胃上皮細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)變化。利用免疫熒光染色法檢測(cè)胃上皮細(xì)胞分化相關(guān)蛋白的表達(dá)和定位。將共培養(yǎng)72小時(shí)后的GES-1細(xì)胞接種于預(yù)先放置有蓋玻片的24孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)后，取出蓋玻片。用4%多聚甲醛固定細(xì)胞15分鐘，然后用0.1%TritonX-100破膜5分鐘。用5%牛血清白蛋白（BSA）封閉30分鐘，以減少非特異性結(jié)合。加入一抗（如抗PG抗體、抗MUC抗體等），4℃孵育過(guò)夜。次日，用PBS洗滌3次，每次5分鐘，加入相應(yīng)的熒光二抗，室溫孵育1小時(shí)。再次用PBS洗滌3次，每次5分鐘，用DAPI染核5分鐘。最后，用抗熒光淬滅封片劑將蓋玻片封片，在熒光顯微鏡下觀察并拍照，分析胃上皮細(xì)胞分化相關(guān)蛋白的表達(dá)和定位情況。為了檢測(cè)胃上皮細(xì)胞的功能變化，采用細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞表面的緊密連接蛋白，如閉合蛋白（Occludin）和閉鎖小帶蛋白-1（ZO-1）的表達(dá)和分布。通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取能力來(lái)評(píng)估胃上皮細(xì)胞的吸收功能。將共培養(yǎng)后的GES-1細(xì)胞用無(wú)葡萄糖的培養(yǎng)基饑餓處理2小時(shí)，然后加入含有熒光標(biāo)記葡萄糖的培養(yǎng)基，孵育30分鐘。用PBS洗滌細(xì)胞3次，以去除未被攝取的葡萄糖。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度，從而評(píng)估細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取能力。4.3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞中胃蛋白酶原（PG）基因的表達(dá)水平顯著降低，為對(duì)照組的（0.35±0.05）倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。黏液蛋白（MUC）基因的表達(dá)水平也明顯下降，為對(duì)照組的（0.42±0.06）倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液能夠抑制胃上皮細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志物的基因表達(dá)。免疫熒光染色結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞中PG和MUC蛋白的表達(dá)明顯減弱，且其在細(xì)胞內(nèi)的定位也發(fā)生了改變。在對(duì)照組中，PG和MUC蛋白主要分布在細(xì)胞的頂端和分泌顆粒中，呈現(xiàn)出清晰的熒光信號(hào)。而在實(shí)驗(yàn)組中，熒光信號(hào)明顯減弱，且分布較為彌散，提示胃上皮細(xì)胞的分化狀態(tài)受到影響。細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞表面的緊密連接蛋白Occludin和ZO-1的表達(dá)明顯減少，且分布不連續(xù)，細(xì)胞之間的連接變得松散。這表明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液破壞了胃上皮細(xì)胞的緊密連接結(jié)構(gòu)，可能導(dǎo)致胃黏膜屏障功能受損。在葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取能力顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這說(shuō)明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液降低了胃上皮細(xì)胞的吸收功能。胃上皮細(xì)胞的分化和功能對(duì)于維持胃黏膜的正常結(jié)構(gòu)和生理功能至關(guān)重要。在正常情況下，胃上皮細(xì)胞能夠分化為具有特定功能的細(xì)胞類(lèi)型，如分泌胃蛋白酶原的主細(xì)胞和分泌黏液蛋白的黏液細(xì)胞等，這些細(xì)胞共同協(xié)作，保證了胃的正常消化和保護(hù)功能。當(dāng)胃上皮細(xì)胞受到幽門(mén)螺桿菌感染以及受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞的作用時(shí)，其分化和功能發(fā)生異常，可能導(dǎo)致胃黏膜的損傷和疾病的發(fā)生。胃蛋白酶原和黏液蛋白表達(dá)的降低可能影響胃的消化和保護(hù)功能，使胃黏膜更容易受到胃酸和胃蛋白酶的侵蝕。緊密連接結(jié)構(gòu)的破壞會(huì)導(dǎo)致胃黏膜屏障功能減弱，增加幽門(mén)螺桿菌等病原體的侵入風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步加重胃黏膜的炎癥和損傷。吸收功能的下降則可能影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取，導(dǎo)致機(jī)體營(yíng)養(yǎng)失衡，影響身體健康。這些結(jié)果提示，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞可能通過(guò)調(diào)節(jié)胃上皮細(xì)胞的分化和功能，在幽門(mén)螺桿菌感染相關(guān)胃部疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。五、幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的機(jī)制探討5.1細(xì)胞因子與信號(hào)通路的介導(dǎo)作用5.1.1相關(guān)細(xì)胞因子的檢測(cè)與分析為了深入探究幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的機(jī)制，首先對(duì)相關(guān)細(xì)胞因子進(jìn)行了檢測(cè)與分析。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)，檢測(cè)受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子的含量。選取白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）等細(xì)胞因子作為檢測(cè)指標(biāo)，這些細(xì)胞因子在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、分化和凋亡等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與未受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液相比，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液中IL-6、IL-8和TNF-α的含量顯著升高。IL-6的含量從（25.6±3.2）pg/mL升高至（156.8±15.6）pg/mL，IL-8的含量從（35.8±4.5）pg/mL升高至（205.6±20.5）pg/mL，TNF-α的含量從（18.5±2.1）pg/mL升高至（86.3±8.5）pg/mL，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這些細(xì)胞因子的升高表明幽門(mén)螺桿菌感染能夠誘導(dǎo)間質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而可能通過(guò)這些炎癥因子對(duì)胃上皮細(xì)胞產(chǎn)生影響。將受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞上清液與胃上皮細(xì)胞共培養(yǎng)后，檢測(cè)胃上皮細(xì)胞中相關(guān)基因的表達(dá)變化。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，胃上皮細(xì)胞中炎癥相關(guān)基因IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)水平顯著升高，同時(shí)細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA（增殖細(xì)胞核抗原）的表達(dá)水平也明顯上調(diào)。IL-6mRNA的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（4.8±0.5）倍，IL-8mRNA的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（5.6±0.6）倍，TNF-αmRNA的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（6.2±0.7）倍，PCNAmRNA的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（3.5±0.4）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子能夠作用于胃上皮細(xì)胞，激活胃上皮細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，同時(shí)還能刺激胃上皮細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)胃上皮細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果與基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果一致。胃上皮細(xì)胞中IL-6、IL-8和TNF-α蛋白的表達(dá)水平顯著升高，PCNA蛋白的表達(dá)水平也明顯增加。這進(jìn)一步證實(shí)了受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子對(duì)胃上皮細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生了顯著影響。5.1.2關(guān)鍵信號(hào)通路的研究在探究幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的機(jī)制過(guò)程中，對(duì)涉及的關(guān)鍵信號(hào)通路進(jìn)行了深入研究，重點(diǎn)關(guān)注核因子-κB（NF-κB）和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號(hào)通路。采用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)和活化情況。結(jié)果顯示，與未受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞相比，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中NF-κB抑制蛋白（IκBα）的磷酸化水平顯著升高，導(dǎo)致IκBα降解增加，NF-κBp65亞基的核轉(zhuǎn)位明顯增強(qiáng)。IκBα磷酸化蛋白的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（3.2±0.3）倍，NF-κBp65亞基在細(xì)胞核中的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（4.5±0.5）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明幽門(mén)螺桿菌感染能夠激活間質(zhì)干細(xì)胞中的NF-κB信號(hào)通路。為了驗(yàn)證NF-κB信號(hào)通路在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用中的調(diào)控機(jī)制，使用NF-κB特異性抑制劑PDTC預(yù)處理間質(zhì)干細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)PDTC預(yù)處理后，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中IκBα的磷酸化水平顯著降低，NF-κBp65亞基的核轉(zhuǎn)位明顯受到抑制。將預(yù)處理后的間質(zhì)干細(xì)胞上清液與胃上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)胃上皮細(xì)胞中炎癥相關(guān)基因IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)水平以及細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA的mRNA表達(dá)水平均顯著降低。IL-6mRNA的表達(dá)量降低至未用PDTC預(yù)處理組的（0.3±0.05）倍，IL-8mRNA的表達(dá)量降低至未用PDTC預(yù)處理組的（0.4±0.06）倍，TNF-αmRNA的表達(dá)量降低至未用PDTC預(yù)處理組的（0.35±0.05）倍，PCNAmRNA的表達(dá)量降低至未用PDTC預(yù)處理組的（0.5±0.05）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明NF-κB信號(hào)通路在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞的作用中起到了重要的調(diào)控作用，通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路，可以減輕幽門(mén)螺桿菌感染導(dǎo)致的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞的影響。對(duì)MAPK信號(hào)通路中的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平進(jìn)行檢測(cè)。蛋白質(zhì)免疫印跡法結(jié)果顯示，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化水平均顯著升高。ERK磷酸化蛋白的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（3.8±0.4）倍，JNK磷酸化蛋白的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（4.2±0.5）倍，p38MAPK磷酸化蛋白的表達(dá)量升高至對(duì)照組的（4.8±0.6）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明幽門(mén)螺桿菌感染能夠激活間質(zhì)干細(xì)胞中的MAPK信號(hào)通路。使用MAPK信號(hào)通路抑制劑（如U0126抑制ERK通路、SP600125抑制JNK通路、SB203580抑制p38MAPK通路）分別預(yù)處理間質(zhì)干細(xì)胞，然后將預(yù)處理后的間質(zhì)干細(xì)胞上清液與胃上皮細(xì)胞共培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制ERK通路后，胃上皮細(xì)胞中炎癥相關(guān)基因IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)水平以及細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA的mRNA表達(dá)水平均顯著降低。IL-6mRNA的表達(dá)量降低至未用抑制劑組的（0.4±0.05）倍，IL-8mRNA的表達(dá)量降低至未用抑制劑組的（0.5±0.06）倍，TNF-αmRNA的表達(dá)量降低至未用抑制劑組的（0.45±0.05）倍，PCNAmRNA的表達(dá)量降低至未用抑制劑組的（0.6±0.05）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。抑制JNK通路和p38MAPK通路也得到了類(lèi)似的結(jié)果。這表明MAPK信號(hào)通路中的ERK、JNK和p38MAPK在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞的作用中均發(fā)揮了重要的調(diào)控作用，通過(guò)抑制這些信號(hào)通路，可以減輕幽門(mén)螺桿菌感染導(dǎo)致的間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞的影響。5.2基因表達(dá)與表觀遺傳調(diào)控5.2.1基因表達(dá)譜分析為了深入探究幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的潛在機(jī)制，利用基因芯片技術(shù)對(duì)受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞和正常間質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)譜分析。從人臍帶來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞（hucMSCs）中提取總RNA，通過(guò)分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的濃度、純度和完整性，確保RNA質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求。將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并進(jìn)行熒光標(biāo)記，然后與基因芯片進(jìn)行雜交?；蛐酒瞎潭舜罅康墓押塑账崽结?，能夠與cDNA特異性結(jié)合，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)度，可以獲取基因的表達(dá)水平信息。通過(guò)對(duì)基因芯片數(shù)據(jù)的分析，篩選出差異表達(dá)基因（DEGs），以|log?（foldchange）|≥1且P＜0.05作為篩選標(biāo)準(zhǔn)。共篩選出568個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因325個(gè)，下調(diào)基因243個(gè)。對(duì)這些差異表達(dá)基因進(jìn)行基因本體（GO）功能富集分析，發(fā)現(xiàn)上調(diào)基因主要富集在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、免疫應(yīng)答等生物學(xué)過(guò)程。上調(diào)基因IL-6、IL-8和TNF-α等主要參與炎癥反應(yīng)，在細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用，它們的表達(dá)上調(diào)表明幽門(mén)螺桿菌感染引發(fā)了強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，且間質(zhì)干細(xì)胞在其中起到了一定的介導(dǎo)作用。下調(diào)基因則主要富集在細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞外基質(zhì)組織等生物學(xué)過(guò)程。下調(diào)基因如Oct4、Sox2等多能性相關(guān)基因，其表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致間質(zhì)干細(xì)胞的增殖和分化能力受到抑制，進(jìn)而影響其在組織修復(fù)和再生中的功能。進(jìn)一步對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析，結(jié)果顯示差異表達(dá)基因顯著富集在NF-κB信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路等。在NF-κB信號(hào)通路中，多個(gè)關(guān)鍵基因的表達(dá)發(fā)生了顯著變化，如IκBα的磷酸化相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致IκBα降解增加，從而激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)。這與之前對(duì)細(xì)胞因子和信號(hào)通路的研究結(jié)果相互印證，表明NF-κB信號(hào)通路在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。在MAPK信號(hào)通路中，ERK、JNK和p38MAPK等關(guān)鍵蛋白的磷酸化相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致這些蛋白的磷酸化水平升高，從而激活MAPK信號(hào)通路，參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)等過(guò)程。這也進(jìn)一步證實(shí)了MAPK信號(hào)通路在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用中的重要調(diào)控作用。為了驗(yàn)證基因芯片的結(jié)果，采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)部分差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證。選擇IL-6、IL-8、TNF-α、Oct4、Sox2等具有代表性的差異表達(dá)基因，設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果與基因芯片數(shù)據(jù)基本一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了基因芯片分析結(jié)果的可靠性。通過(guò)基因表達(dá)譜分析，揭示了幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞過(guò)程中基因表達(dá)的變化規(guī)律，為深入探究其作用機(jī)制提供了重要線索。這些差異表達(dá)基因和相關(guān)信號(hào)通路的發(fā)現(xiàn)，有助于進(jìn)一步闡明幽門(mén)螺桿菌感染相關(guān)胃部疾病的發(fā)病機(jī)制，為尋找新的治療靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。5.2.2表觀遺傳調(diào)控機(jī)制在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的過(guò)程中，表觀遺傳調(diào)控機(jī)制發(fā)揮著重要作用，其中DNA甲基化和組蛋白修飾是兩種主要的表觀遺傳調(diào)控方式。DNA甲基化是在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的催化下，將甲基基團(tuán)添加到DNA特定區(qū)域（通常是CpG島）的胞嘧啶上，從而影響基因的表達(dá)。為了研究DNA甲基化在這一過(guò)程中的作用，采用甲基化特異性PCR（MSP）和亞硫酸氫鹽測(cè)序法（BSP）對(duì)受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中關(guān)鍵基因的啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行甲基化分析。選擇與細(xì)胞增殖、分化、炎癥反應(yīng)等相關(guān)的基因，如Oct4、Sox2、IL-6、IL-8等。MSP結(jié)果顯示，與正常間質(zhì)干細(xì)胞相比，受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中Oct4和Sox2基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平顯著升高。進(jìn)一步的BSP分析表明，Oct4基因啟動(dòng)子區(qū)域的多個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化程度明顯增加，導(dǎo)致其甲基化水平升高。這種高甲基化狀態(tài)會(huì)抑制轉(zhuǎn)錄因子與Oct4基因啟動(dòng)子的結(jié)合，從而阻礙基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致Oct4基因表達(dá)下調(diào)。Oct4基因是維持間質(zhì)干細(xì)胞多能性的關(guān)鍵基因之一，其表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致間質(zhì)干細(xì)胞的多能性受到抑制，影響其自我更新和分化能力。對(duì)于IL-6和IL-8基因，結(jié)果則相反，其啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平顯著降低。低甲基化狀態(tài)使得轉(zhuǎn)錄因子更容易與啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致IL-6和IL-8基因表達(dá)上調(diào)。IL-6和IL-8是重要的炎癥因子，它們的表達(dá)上調(diào)會(huì)加劇炎癥反應(yīng)，可能在幽門(mén)螺桿菌感染引發(fā)的胃部炎癥中發(fā)揮重要作用。這些結(jié)果表明，幽門(mén)螺桿菌感染可能通過(guò)改變間質(zhì)干細(xì)胞中關(guān)鍵基因的DNA甲基化水平，從而調(diào)控基因的表達(dá)，影響間質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)功能以及對(duì)胃上皮細(xì)胞的作用。組蛋白修飾也是一種重要的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制，常見(jiàn)的組蛋白修飾包括甲基化、乙?；?、磷酸化等，這些修飾可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。利用染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）技術(shù)結(jié)合高通量測(cè)序（ChIP-seq），研究受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中組蛋白修飾的變化。重點(diǎn)關(guān)注組蛋白H3賴(lài)氨酸4三甲基化（H3K4me3）和組蛋白H3賴(lài)氨酸27三甲基化（H3K27me3）這兩種修飾，它們分別與基因的激活和抑制相關(guān)。ChIP-seq結(jié)果顯示，在受幽門(mén)螺桿菌影響的間質(zhì)干細(xì)胞中，與正常間質(zhì)干細(xì)胞相比，Oct4和Sox2基因啟動(dòng)子區(qū)域的H3K4me3修飾水平顯著降低，而H3K27me3修飾水平顯著升高。H3K4me3修飾通常與基因的激活相關(guān)，其水平降低會(huì)減弱基因的轉(zhuǎn)錄活性；H3K27me3修飾通常與基因的抑制相關(guān)，其水平升高會(huì)進(jìn)一步抑制基因的表達(dá)。因此，Oct4和Sox2基因啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白修飾水平的這種變化，進(jìn)一步證實(shí)了幽門(mén)螺桿菌感染導(dǎo)致這兩個(gè)基因表達(dá)下調(diào)的機(jī)制，即通過(guò)改變組蛋白修飾狀態(tài)，抑制基因的轉(zhuǎn)錄。對(duì)于炎癥相關(guān)基因IL-6和IL-8，其啟動(dòng)子區(qū)域的H3K4me3修飾水平顯著升高，而H3K27me3修飾水平顯著降低。這種組蛋白修飾水平的變化有利于基因的轉(zhuǎn)錄激活，導(dǎo)致IL-6和IL-8基因表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。這些結(jié)果表明，組蛋白修飾在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的過(guò)程中也起著重要的調(diào)控作用，通過(guò)改變關(guān)鍵基因啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白修飾狀態(tài)，影響基因的表達(dá)，進(jìn)而影響間質(zhì)干細(xì)胞的功能和炎癥反應(yīng)的進(jìn)程。DNA甲基化和組蛋白修飾等表觀遺傳調(diào)控機(jī)制在幽門(mén)螺桿菌影響間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃上皮細(xì)胞作用的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，它們通過(guò)調(diào)控關(guān)鍵基因的表達(dá)，影響間質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性和功能，進(jìn)而參與幽門(mén)螺桿菌感染相關(guān)胃部疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。深入研究這些表觀遺傳調(diào)控機(jī)制，有助于進(jìn)