實體瘤分子殘留病灶檢測共識分子殘留病灶(molecularresidualdisease,MRD)也稱微小動國內(nèi)實體瘤MRD檢測技術(shù)的規(guī)范化臨床應(yīng)用，本共識對實體瘤MRD分子殘留病灶(molecularresidualdisease,MRD)也稱微小測技術(shù)的規(guī)范化臨床應(yīng)用。本共識采用的推薦級別見表1。1類基于低級別臨床研究證據(jù)，專家意見高度一致；或基于高級別證據(jù)，專家表1本共識采用的推薦級別及代表意義有學(xué)者提出用可測量殘留病灶的概念，意指初診或難治、復(fù)發(fā)狀態(tài)的白血病患者接受治療后，無論是否獲得完全緩解，體內(nèi)仍殘存白血病細胞的狀態(tài)。相對而言，微小殘留病灶是目前更為廣泛使用的概念，指血液系統(tǒng)腫瘤(白血病/淋巴瘤/骨髓瘤等)治療后疾病緩解狀態(tài)下，通過高靈敏度的檢測手段，如流式細胞術(shù)、定量聚合酶鏈反應(yīng) sequencing,NGS)等，從骨髓或外周血樣本中檢測出極微量的腫瘤之一，與患者疾病復(fù)發(fā)、預(yù)后分層顯著相關(guān)。在實體瘤中，MRD通常指分子殘留病灶，即通過循 (circulatingtumorDNA,ctDNA)等腫瘤來源的分子異常，發(fā)現(xiàn)影像學(xué)(包括正電子發(fā)射計算機斷層顯像)或傳統(tǒng)實驗室方法不能發(fā)現(xiàn)的潛在病灶，代表著腫瘤的持續(xù)存在和臨床進展可能。MRD檢測可輔助臨床醫(yī)師更早地識別復(fù)發(fā)高風(fēng)險患者，為后續(xù)臨床決策提供依據(jù)。推薦意見1:實體瘤MRD是指經(jīng)過治療后，影像學(xué)或傳統(tǒng)實驗室方法不能發(fā)現(xiàn)，但通過液體活檢發(fā)現(xiàn)的腫瘤來源分子異常，代表著腫瘤的持續(xù)存在和臨床進展可能(2A類)。二、MRD檢測的臨床價值和適用人群測能夠有效區(qū)分I～IV期(可切除肝轉(zhuǎn)移)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險。2022年《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表的一項前瞻性干預(yù)性研究顯不必要的輔助化療，并且不影響患者2年無復(fù)發(fā)生存率，首次證實了療反應(yīng)不佳，有助于優(yōu)化后續(xù)治療策略。近期發(fā)表的一項研究表明，在經(jīng)靶向聯(lián)合局部治療后實現(xiàn)無影像學(xué)可見病灶的IV期非小細胞肺治療以改善生存。正在進行中的前瞻性研究(I-SPY2等)將進一步范圍為70%～100%,陰性預(yù)測值范圍為80%～97%,在臨床應(yīng)用于預(yù)后推薦意見2:在結(jié)直腸癌、非小細胞肺癌和乳腺癌中，有充分證據(jù)表明MRD具有預(yù)后分層作用，臨床價值較明確(2A類);在胰腺癌、肝癌、食管癌、胃癌等其他實體瘤中，也有一些證據(jù)提示MRD具有預(yù)后分層作用(2B類)。推薦意見3:已有一定證據(jù)支持MRD可輔助實體瘤治療決策，更治療(聯(lián)合局部放療/手術(shù))后實現(xiàn)無影像學(xué)可見病灶且MRD、癌胚MRD或癌胚抗原陽性后仍可保持對靶向藥物的敏感性，中位無進展生存時間為18.4個月。此外，其他類型的晚期寡轉(zhuǎn)移實體瘤患者，在況下ctDNA檢測仍為陰性。的接受了根治性手術(shù)切除/放化療的患者(2A類)以及經(jīng)過系統(tǒng)治療后達到臨床完全緩解的晚期患者(2B類)。在未來的臨床實踐中，準確地檢測低豐度的ctDNA,但它同樣具有覆蓋突變位點有限的局限與血液腫瘤以顯微鏡下觀察到的腫瘤細胞和/或血液中的異常血檢測材料。ctDNA包含了豐富的來源于腫瘤失(insertionsanddeletion,Indel)等信息，較少關(guān)注拷貝數(shù)變較好的MRD檢測性能(表2)。在一項針對Ⅱ~IA期非小細胞肺癌腫瘤比例(tumorfraction)來實現(xiàn)MRD檢測。盡管以上方法顯示了否群體定制，197基因群體定制，338基因群體定制，139基因群體定制，769基因否突變(含拷貝數(shù)變異)的最常用方法(2A類)。個性化定制需要對腫瘤組織進行測序，根據(jù)檢測結(jié)果設(shè)計引物/高的分析靈敏度，且在長期監(jiān)測時總體檢測成本較低蓋突變位點相對有限?；贜GS雜交捕獲的個性擴增子的個性化定制panel,每個選擇的突變位點都需要即時設(shè)計引研究確認。標準panel。其優(yōu)點在于標準panel經(jīng)過嚴格設(shè)計、優(yōu)化和驗證，性瘤分別設(shè)計相應(yīng)的標準panel。推薦意見6:實體瘤MRD檢測按照是否進行個性化探針設(shè)計分為實體瘤MRD檢測根據(jù)是否參考腫瘤組織突變信息，分為析通常參考患者原發(fā)或轉(zhuǎn)移灶腫瘤組織中檢測到的突變信息(腫瘤組織基線突變檢測),在腫瘤組織不可及的情況下，治療前外周血中檢性化定制都可以采用tumor-informed分析策略(表2)。Tumor-agnostic/naive分析不依賴于特定患者的腫瘤突變信息，由于外周血中不僅含有腫瘤來源的ctDNA,還存在來自克隆性造血相關(guān)的特異度和靈敏度。相比之下，tumor-informed分析法通過參考患中顯著優(yōu)于tumor-agnostic/naive分析。一項針對IA~Ⅲ期非小細胞肺癌患者的前瞻性研究通過頭對頭比較tumor-informed分析和tumor-agnostic/naive分析(n=151)進一步證實了這一點。當前獲多采用tumor-informed分析策略。的技術(shù)和臨床證據(jù)基礎(chǔ)上，實體瘤MRD檢測應(yīng)優(yōu)先推薦使用推薦意見7:實體瘤MRD檢測根據(jù)是否參考腫瘤組織突變信息分為tumor-informed分析和tumor-agnostic/naive腫瘤組織突變的tumor-informed分析相對于tumor-agnostic/naive析策略(2B類)。在采用tumor-informed分析策略在實際應(yīng)用中面臨一定的挑戰(zhàn)。自2017年起，美國FDA相繼批準了elioTMtissuecompleteNGS(507基因，2.23M)等多個實體瘤適用的多基因NGS檢測panel。這些panel涵蓋數(shù)百個與癌癥發(fā)生發(fā)展密是一個很好的例證，它首先采用F1CDx這一包含關(guān)鍵驅(qū)動基因的大對基于WES個性化定制的SignateraTM和基于大panel個性化定制的FoundationOneTracker進行了對比研究，結(jié)果顯示，無論采用基于體瘤多基因檢測panel在國外獲得批準并被廣泛應(yīng)用于臨床實踐，它制定tumor-informed分析策略時，可以考慮采用實體瘤多基因檢測檢測需求。推薦意見8:采用tumor-informed分析策略時，腫瘤組織檢測臨床實踐中，需要綜合考慮進行選擇(2B類)。需要關(guān)注檢測時機。針對接受根治性切除早期非小細胞肺癌患者的準地預(yù)測復(fù)發(fā)風(fēng)險(風(fēng)險比分別為5.31和16.4)。針對非小細胞肺的時間窗通常為根治性治療后4個月內(nèi)，而對于根治性放化療后進行1周左右進行MRD檢測。在結(jié)直腸癌領(lǐng)域，研究表明術(shù)后4周內(nèi)游離DNA(cell-freeDNA,cfDNA)水平可能因手術(shù)創(chuàng)傷而升高，導(dǎo)致MRD檢測假陰性的可能性增大。因此，建議對術(shù)后4周內(nèi)MRD檢測結(jié)果為薦MRD的首次檢測時間窗一般設(shè)在根治性治療后1周至1個月之間，但具體時間窗口的選擇需結(jié)合不同實體瘤類型和臨床需求靈活調(diào)整。推薦意見9:實體瘤MRD的Landmark檢測(治療后首次檢測)突變，并且會進行連續(xù)動態(tài)監(jiān)測，因此需要從患者/樣本層面綜合考目前單次MRD檢測采血量通常為20mL。cfDNA輸入量相同的情況下，24h升高的cfDNA主要來自于白細胞和肝臟細胞，而腫瘤來源的克隆性造血突變背景庫過濾等方法有助于識別并去除克隆性造血造成的假陽性。測序深度是影響分析靈敏度的另一重要因素。在32ngcfDNA輸入量條件下，利用雜交捕獲NGS結(jié)合分子標簽(uniquemolecularidentifier)及背景噪音消除算法，當測序深度達到30000×以上時，可以在單個追蹤突變時實現(xiàn)低于0.2%的檢出限。因此，群體定制panel測序深度一般在30000×以上。個性化定制panel100000×,聯(lián)合生信算法優(yōu)化，可進一步提升MRD檢測的分析靈敏度。cfDNA輸入量及測序深度下，增加MRD的追蹤突變數(shù)量可提升分析靈的檢出限約為0.1%,而追蹤8個突變則可將檢出限提升至接近0.01%追蹤突變數(shù)量超過50個之后很難進一步提升分析靈敏度。因此在設(shè)不同類型的實體瘤DNA釋放入血能力不同，因此不同實體瘤的影像學(xué)可見腫瘤的狀態(tài)下，患者血漿cfDNA濃度中位數(shù)通常介于有10000～30000個單倍體基因組當量(humangenomeequivalents),支持突變豐度(variantallelefrequency,VAF)為0.01%～0.1%影響后續(xù)治療決策?；赟ignateraN的MRD檢測，對肺癌、結(jié)直腸現(xiàn)階段臨床需求。隨著腫瘤診療技術(shù)的不斷發(fā)展和優(yōu)化，未來對于測的性能(2A類)。推薦意見11:在相同的血漿游離DNA(cfDNA)輸入量下，在一薦追蹤多個突變，測序深度推薦>30000×,個性化定制panel測序深度可考慮>100000×,以提升MRD檢測性能(2B類)。物或探針設(shè)計及合成、核酸提取、文庫制備 (即生物信息學(xué)分析流程);分析后的結(jié)果報告及解讀、信息貯存及傳遞和保密(實驗室信息管理系統(tǒng))以及臨床有效性數(shù)據(jù)的收集等。質(zhì)量。此，MRD檢測質(zhì)控需要包含基于NGS的ctDNA檢測(±組織檢測)的的測序深度等進行質(zhì)控，如Signatera要求追蹤突變數(shù)量≥8,追蹤突變位點的測序深度至少為5000×。如使用已知陽性/陰性