枸杞中15種真菌毒素的測(cè)定

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

1范圍

本文件規(guī)定了枸杞中15種真菌毒素的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定方法。

本文件適用于枸杞中15種真菌毒素（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、伏馬

毒素B1、B2、B3、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（3-AcDON）、

15-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（15-AcDON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、T-2毒素、赭曲霉毒

素A（OTA））的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所

有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3術(shù)語(yǔ)和定義

無(wú)。

4原理

試樣用乙腈溶液提取，提取液經(jīng)填料凈化后，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

5試劑與材料

除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。

5.1試劑

5.1.1甲醇（CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1）：色譜純。

5.1.2乙腈（CH3CN，CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。

5.1.3甲酸（HCOOH，CAS號(hào)：64-18-6）：色譜純。

5.1.4氯化鈉（NaCl，CAS號(hào)：7647-14-5）。

5.1.5無(wú)水硫酸鎂（MgSO4，CAS號(hào)：7487-88-9）。

5.1.6乙酸銨（CH3COONH4，CAS號(hào)：631-61-8）。

5.2溶液配制

5.2.180%乙腈溶液（80+20，體積比）：量取20mL水加入80mL乙腈中，混勻。

5.2.20.1%甲酸80%乙腈溶液：量取1.0mL甲酸于容量瓶中，用80%乙腈溶液定容至1000

mL，搖勻。

5.2.350%乙腈溶液（50+50，體積比）：量取50mL水加入50mL乙腈中，混勻。

5.2.4乙酸銨-甲酸水溶液（2mmol/L）：稱(chēng)取0.1541g乙酸銨，用0.1%甲酸水溶液溶解并

稀釋至1000mL，搖勻。

5.2.50.1%甲酸甲醇溶液：量取1.0mL甲酸于容量瓶中，用甲醇溶液定容至1000mL，搖

勻。

5.3標(biāo)準(zhǔn)品

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)1162-65-8，純度99.5%）、黃曲霉毒素B2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)7220-81-7，純度99.8%）、黃曲霉毒素G1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)1165-39-5，純度99.9%）、

黃曲霉毒素G2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)7241-98-7，純度99.9%）、黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)6795-23-9，純度91.0%）、黃曲霉毒素M2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)6885-57-0，純度99.8%）、

伏馬毒素FB1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)116355-83-0，純度99.6%）、伏馬毒素FB2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)116355-84-1，純度99.9%）、伏馬毒素FB3標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)1422359-85-0，純度99.8%）、

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)51481-10-8，純度99.9%）、3-乙酰脫氧

雪腐鐮刀菌烯醇（3-AcDON）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)50722-38-8，純度99.8%）、15-乙酰脫

氧雪腐鐮刀菌烯醇（15-AcDON）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)88337-96-6，純度99.9%）、玉米赤

霉烯酮（ZEN）標(biāo)準(zhǔn)品(CAS號(hào)17924-92-4，純度99.9%)、T-2毒素標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)

21259-20-1，純度99.5%）、赭曲霉毒素A（OTA）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)303-47-9，純度99.6%）。

5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱(chēng)取約10mg（精確至0.1mg）相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品，

用乙腈（5.1.2）溶解并定容至10mL，避光-18℃及以下條件保存。

5.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（20mg/L~50mg/L）：吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于容量瓶中用

乙腈（5.1.2）定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存。

5.4.3混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（5mg/L）：吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.4.2)于容量瓶中，用乙

腈（5.1.2）定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存。

5.5材料

5.5.1微孔濾膜（有機(jī)相）：13mm×0.22μm，或相當(dāng)者。

6儀器與設(shè)備

6.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源（ESI）。

6.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

6.3離心機(jī)：4000r/min。

6.4高速粉碎機(jī)：10000r/min。

6.5組織搗碎機(jī)。

6.6渦旋混合器。

7分析步驟

7.1試樣制備

鮮枸杞樣品隨機(jī)取樣1kg，充分混勻，全部用組織搗碎機(jī)勻漿后，放入聚乙烯瓶中，于

-18℃及以下條件保存。

干枸杞樣品隨機(jī)取樣500g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯袋中，于-18℃及以下條件保

存。

7.2樣品提取與凈化

7.2.1提取

將試樣充分混勻，鮮果試樣稱(chēng)取5g，干果試樣稱(chēng)取2g，精確至0.01g，置于50mL離

心管中，加入20.0mL乙腈溶液（5.5），經(jīng)振蕩提取40min后，4000r/min離心5min，待

凈化。

7.2.2凈化

吸取6.00mL上清液至15mL離心管中（1.5g無(wú)水硫酸鎂和1.0g氯化鈉），渦旋混

勻1min后，吸取4mL上清液經(jīng)氮?dú)獯蹈?，用乙腈溶液?.2.3）定容至1mL，過(guò)微孔濾膜

（5.5.1），待測(cè)定。

7.3測(cè)定

7.3.1液相色譜參考條件

a）色譜柱：C18柱，2.1mm（內(nèi)徑）×100mm，粒徑1.7μm，或相當(dāng)者；

b）流動(dòng)相：A相為乙酸銨-甲酸水溶液（5.2.4），B相為0.1%甲酸甲醇溶液（5.2.5），

流動(dòng)相梯度條件見(jiàn)表1；

c）流速：0.4mL/min；

d）柱溫：40℃；

e）進(jìn)樣量：2μL。

表1流動(dòng)相及其梯度條件（VA+VB）

時(shí)間VAVB

min%%

0.009010

1.008515

2.008020

6.004060

10.001783

11.009010

13.009010

7.3.2質(zhì)譜參考條件

a）離子源類(lèi)型：電噴霧離子源；

b）掃描方式：正離子和負(fù)離子同時(shí)掃描；

c）電噴霧電壓：正離子5500V，負(fù)離子-4500V；

d）離子源溫度：550℃；

e）噴霧氣流速：50L/h；

f）氣簾氣流速：50L/h；

g）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)：每種真菌毒素分別選擇至少2個(gè)子離子。所有需要檢測(cè)的子離子按照出

峰順序，分時(shí)段分別檢測(cè)。每種真菌毒素的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)，

參見(jiàn)附錄A。

7.3.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)

選擇空白枸杞樣品按照7.2部分進(jìn)行前處理，得到空白基質(zhì)溶液。精確吸取一定量的混

合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級(jí)用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.001mg/L、0.002mg/L、0.005mg/L、

0.01mg/L,0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L和0.5mg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，

根據(jù)儀器性能和檢測(cè)需要選擇不少于5個(gè)濃度點(diǎn)，供液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。以真菌毒素

定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度為橫

坐標(biāo)，繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。

7.3.4定性及定量

7.3.4.1保留時(shí)間

被測(cè)試樣中目標(biāo)物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)

在±2.5%之內(nèi)。

7.3.4.2離子豐度比

按照上述條件進(jìn)行樣品測(cè)定，若檢測(cè)樣品的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，且與質(zhì)量濃

度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度允許偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍，則可判

斷樣品中存在目標(biāo)被測(cè)物。

表2定性確證相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度>50%20%至50%10%至20%≤10%

允許的相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%

本方法的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖參見(jiàn)附錄B。

7.3.4.3定量

外標(biāo)法定量。

7.4空白試驗(yàn)

除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行操作。

8結(jié)果計(jì)算

試樣中各真菌毒素殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計(jì)，單位為毫克每千克（mg/kg），按公式(1)

計(jì)算。

ρ×V×V1000

13×（）

X=………1

m×V21000

式中：

X——試樣中被測(cè)物殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

ρ——基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L)；

V1——提取液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

V3——定容液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

V2——分取液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

m——試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留2位有效數(shù)

字，含量超1mg/kg時(shí)保留3位有效數(shù)字。

9精密度

在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值與其算術(shù)平均值的比值（百分

率），應(yīng)符合附錄C的要求。

10定量限

本方法對(duì)15種真菌毒素的定量限為0.001mg/kg～0.01mg/kg(見(jiàn)附錄D)。

附錄A

（資料性）

15種真菌毒素的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)

15種真菌毒素的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)，見(jiàn)表A.1。

表A.115種真菌毒素的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)

保留去簇

電離碰撞能碰撞能

序號(hào)中文名稱(chēng)英文名稱(chēng)時(shí)間電壓離子對(duì)Ⅰ離子對(duì)Ⅱ

方式VV

minV

1黃曲霉毒素B1AflatoxinB1正7.51142313.1/285.133313.1/241.151

2黃曲霉毒素B2AflatoxinB2正7.28135315.1/287.135315.1/259.140

3黃曲霉毒素G1AflatoxinG1正6.92100329.0/243.036329.0/200.140

4黃曲霉毒素G2AflatoxinG2正6.66100331.1/285.037331.1/245.040

5黃曲霉毒素M1AflatoxinM1正6.71120329.1/272.931329.1/258.935

6黃曲霉毒素M2AflatoxinM2正6.35120331.1/273.138331.1/258.138

7伏馬毒素B1FumonisinB1正8.5350722.4/334.454722.4/352.450

8伏馬毒素B2FumonisinB2正9.7885706.4/336.5150706.4/318.6154

9伏馬毒素B3FumonisinB3正9.2485706.4/336.5050706.4/318.6050

10脫氧雪腐鐮刀菌烯醇Deoxynivalenol正3.9165296.9/249.116296.9/231.115

3-乙酰脫氧雪腐鐮刀

113-acetyldeoxynivalenol正6.1865339.2/231.115339.2/203.220

菌烯醇

15-乙酰脫氧雪腐鐮

1215-acetyldeoxynivalenol正6.1865339.3/321.213339.3/137.119

刀菌烯醇

13玉米赤霉烯酮Zearalenone負(fù)9.74-130317.1/175.0-32317.1/131.0-30

14T-2毒素T-2toxin正9.1458484.2/305.119484.2/245.119

15赭曲霉毒素AOchratoxinA負(fù)9.82-90402.2/358.2-28402.2/211.0-38

附錄B

（資料性）

15種真菌毒素多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)量色譜圖

15種真菌毒素多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)量色譜圖見(jiàn)圖B.1。

圖B.115種真菌毒素多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)量色譜圖

附錄C

（規(guī)范性）

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求，見(jiàn)表C.1。

表C.1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求

被測(cè)組分含量精密度(RSD)

mg/kg%

>0.001≤0.01≤20

>0.01≤0.1≤15

>1≤10

附錄D

（資料性）

15種真菌毒素中英文名稱(chēng)和方法定量限

15種真菌毒素中英文名稱(chēng)和方法定量限，見(jiàn)表D.1。

表D.115種真菌毒素中英文名稱(chēng)和方法定量限

序號(hào)中文名英文名方法定量限，mg/kg

1黃曲霉毒素B1aflatoxinB10.001

2黃曲霉毒素B2aflatoxinB20.001

3黃曲霉毒素G1aflatoxinG10.001

4黃曲霉毒素G2aflatoxinG20.001

5黃曲霉毒素M1aflatoxinM10.001

6黃曲霉毒素M2aflatoxinM20.001

7伏馬毒素B1fumonisinB10.005

8伏馬毒素B2fumonisinB20.005

9伏馬毒素B3fumonisinB30.005

10脫氧雪腐鐮刀菌烯醇deoxynivalenol0.01

113-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇3-acetyldeoxynivalenol0.01

1215-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇15-acetyldeoxynivalenol0.01

13玉米赤霉烯酮zearalenone0.001

14T-2毒素T-2toxin0.001

15赭曲霉毒素AochratoxinA0.001

ICS01.040.65

CCSB04

TB

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/NAIA×××-××××

枸杞中15種真菌毒素的測(cè)定

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

Determinationof15mycotoxininwolfberry

Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod

2024-××-××發(fā)布2024-××-××實(shí)施

寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)發(fā)布

枸杞中15種真菌毒素的測(cè)定

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

1范圍

本文件規(guī)定了枸杞中15種真菌毒素的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定方法。

本文件適用于枸杞中15種真菌毒素（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、伏馬

毒素B1、B2、B3、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（3-AcDON）、

15-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（15-AcDON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、T-2毒素、赭曲霉毒

素A（OTA））的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所

有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3術(shù)語(yǔ)和定義

無(wú)。

4原理

試樣用乙腈溶液提取，提取液經(jīng)填料凈化后，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

5試劑與材料

除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。

5.1試劑

5.1.1甲醇（CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1）：色譜純。

5.1.2乙腈（CH3CN，CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。

5.1.3甲酸（HCOOH，CAS號(hào)：64-18-6）：色譜純。

5.1.4氯化鈉（NaCl，CAS號(hào)：7647-14-5）。

5.1.5無(wú)水硫酸鎂（MgSO4，CAS號(hào)：7487-88-9）。

5.1.6乙酸銨（CH3COONH4，CAS號(hào)：631-61-8）。

5.2溶液配制

5.2.180%乙腈溶液（80+20，體積比）：量取20mL水加入80mL乙腈中，混勻。

5.2.20.1%甲酸80%乙腈溶液：量取1.0mL甲酸于容量瓶中，用80%乙腈溶液定容至1000

mL，搖勻。

5.2.350%乙腈溶液（50+50，體積比）：量取50mL水加入50mL乙腈中，混勻。

5.2.4乙酸銨-甲酸水溶液（2mmol/L）：稱(chēng)取0.1541g乙酸銨，用0.1%甲酸水溶液溶解并

稀釋至1000mL，搖勻。

5.2.50.1%甲酸甲醇溶液：量取1.0mL甲酸于容量瓶中，用甲醇溶液定容至1000mL，搖

勻。

5.3標(biāo)準(zhǔn)品

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)1162-65-8，純度99.5%）、黃曲霉毒素B2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)7220-81-7，純度99.8%）、黃曲霉毒素G1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)1165-39-5，純度99.9%）、

黃曲霉毒素G2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)7241-98-7，純度99.9%）、黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)6795-23-9，純度91.0%）、黃曲霉毒素M2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)6885-57-0，純度99.8%）、

伏馬毒素FB1標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)116355-83-0，純度99.6%）、伏馬毒素FB2標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)116355-84-1，純度99.9%）、伏馬毒素FB3標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)1422359-85-0，純度99.8%）、

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)51481-10-8，純度99.9%）、3-乙酰脫氧

雪腐鐮刀菌烯醇（3-AcDON）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)50722-38-8，純度99.8%）、15-乙酰脫

氧雪腐鐮刀菌烯醇（15-AcDON）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)88337-96-6，純度99.9%）、玉米赤

霉烯酮（ZEN）標(biāo)準(zhǔn)品(CAS號(hào)17924-92-4，純度99.9%)、T-2毒素標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)

21259-20-1，純度99.5%）、赭曲霉毒素A（OTA）標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)303-47-9，純度99.6%）。

5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱(chēng)取約10mg（精確至0.1mg）相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品，

用乙腈（5.1.2）溶解并定容至10mL，避光-18℃及以下條件保存。

5.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（20mg/L~50mg/L）：吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于容量瓶中用

乙腈（5.1.2）定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存。

5.4.3混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（5mg/L）：吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.4.2)于容量瓶中，用乙

腈（5.1.2）定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存。

5.5材料

5.5.1微孔濾膜（有機(jī)相）：13mm×0.22μm，或相當(dāng)者。

6儀器與設(shè)備

6.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧