ICS

CCS

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/SSX002—2021

谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽的

測定液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)法

Determinationofselenomethionine,selenateandselenite

incerealsbyliquidchromatography-inductivelycoupled

plasmamassspectrometry

（征求意見稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

陜西省食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會發(fā)布

T/SSX002—2021

前??言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》和GB/T

20001.4—2015《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)》給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由陜西省食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：安康市富硒產(chǎn)品研發(fā)中心、北京市疾病預(yù)防控制中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：劉麗萍、唐德劍、陳紹占、孟莉、許亞麗、賀博、夏曾潤、劉鑫、卜賢盼、張珂、

黃波、杜小平、祁蒙。

本標(biāo)準(zhǔn)由安康市富硒產(chǎn)品研發(fā)中心負(fù)責(zé)解釋。

本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。

聯(lián)系信息如下：

單位：安康市富硒產(chǎn)品研發(fā)中心

電話/p>

地址：安康市高新區(qū)安康大道58號

郵編：725000

II

T/SSX002—2021

谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽的測定

液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜用法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法測定谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽

含量的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米和小麥中硒代蛋氨酸、亞硒酸鹽和硒酸鹽的測定；玉米中硒代蛋氨酸和硒酸鹽的

測定。

當(dāng)樣品稱樣量為0.3g，提取液體積為5mL時，硒代蛋氨酸方法定量限為0.015mg/kg、硒酸鹽方法

定量限為0.010mg/kg、亞硒酸鹽方法定量限為0.007mg/kg。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3方法原理

試樣中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽通過蛋白酶酶解后，經(jīng)離子交換色譜柱分離，電感耦合等離

子體質(zhì)譜儀測定，以色譜保留時間定性，外標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除另有說明外，本法所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1試劑

4.1.1磷酸氫二銨（(NH4)2HPO4）。

4.1.2蛋白酶XIV：生化試劑（酶活力≥3.5U/mg固體）。

4.1.3甲酸（HCOOH）：色譜純。

4.2試劑配制

4.2.1甲酸溶液（10%，v/v）：準(zhǔn)確量取10mL甲酸，緩慢加水稀釋至100mL，混勻。

4.2.2流動相配制（40mmol/L磷酸氫二銨溶液，pH=6.0）：稱取2.6412g磷酸氫二銨，用水稀釋至

500mL，用甲酸溶液（4.2.1）調(diào)節(jié)pH值至6.0，混勻，于超聲水浴中超聲脫氣10min，備用，臨用現(xiàn)配。

4.3標(biāo)準(zhǔn)品

4.3.1硒代蛋氨酸（C5H11NO2Se，CAS號：9001-05-2），純度≥98%。

4.3.2硒酸鈉（Na2O4Se，CAS號：13410-01-0），純度≥99%

4.3.3亞硒酸鈉（Na2O3Se，CAS號：10102-18-8），純度≥99%

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液

4.4.1硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0mg/mL，以Se計）：準(zhǔn)確稱取0.2480g硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，用水

溶解并定容至100mL，配制成1.0mg/mL硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個

月?；蛸徺I國家有證硒代蛋氨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（C5H11NO2Se，GBW10034）。

4.4.2硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0mg/mL，以Se計）：準(zhǔn)確稱取0.2393g硒酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并定

容至100mL，配制成1.0mg/mL硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個月?；蛸徺I國

家有證硒酸根溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（SeO42-，GBW10033）。

1

T/SSX002—2021

4.4.3亞硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0mg/mL，以Se計）：準(zhǔn)確稱取0.2190g亞硒酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解

并定容至100mL，配制成1.0mg/mL亞硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個月。或

購買國家有證亞硒酸根溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（SeO32-，GBW10032）。

4.4.4單標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10.0μg//mL，以Se計）：分別吸取一定量的硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4.1）、

硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4.2）、亞硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4.3），用水逐級稀釋配制成10.0μg/mL的單標(biāo)準(zhǔn)儲

備溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個月。

4.4.5混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：分別準(zhǔn)確吸取1.0mL濃度為10.0μg/mL的硒代蛋氨酸、硒酸根、亞硒

酸根（4.4.4）標(biāo)準(zhǔn)儲備液于10mL容量瓶中，用水稀釋定容至刻度，配制成1.0μg/mL的硒形態(tài)混合

標(biāo)準(zhǔn)溶液。再用水逐級稀釋濃度為1.0μg/mL的硒形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成濃度為0.0μg/L、2.0μg/L、

5.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L、200.0μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，臨用現(xiàn)配。

注：可根據(jù)樣品中硒代蛋氨酸、硒酸鹽、亞硒酸鹽的實(shí)際含量適當(dāng)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中硒代蛋氨酸、硒酸根、亞硒酸

根的質(zhì)量濃度。

5儀器與設(shè)備

5.1液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-ICP-MS）。

5.2天平：感量分別為0.01mg、0.1mg和1mg。

5.3低溫離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥9000r/min。

5.4恒溫超聲波清洗器：可控溫0℃～80℃（溫度精度±2℃）

5.5pH計：精度為0.01。

5.6高速粉碎機(jī)：轉(zhuǎn)速≥3000r/min。

5.7水系濾膜：0.22μm。

6分析步驟

6.1樣品預(yù)處理

大米、小麥、玉米等樣品去雜物后粉碎，并過60目篩混合均勻，裝入潔凈聚乙烯瓶中，于干燥處

密封保存?zhèn)溆谩?/p>

6.2試樣提取

稱取0.1g～0.5g（精確到0.001g）樣品，置于15mL離心管中，加入5mL水和20mg蛋白酶XIV，

渦旋30s，37℃水浴超聲3h，期間振搖數(shù)次。靜置10min，4℃下以9000r/min離心10min，取上清

液過0.22μm濾膜，待測。同時做空白試驗(yàn)。

注：樣品提取后可于4℃存儲，建議5h之內(nèi)完成測定（可根據(jù)樣品中硒形態(tài)含量不同適當(dāng)調(diào)整稱樣量、提取液體

積及蛋白酶XIV的量）。

6.3測定

6.3.1液相色譜參考條件

液相色譜參考條件如下：

——色譜柱：陰離子交換柱（250mm×4.1mm，10μm）或等效色譜柱；陰離子交換預(yù)柱（20mm×2.1

mm，10μm）或等效色譜預(yù)柱。

——流動相：40mmol/L(NH4)2HPO4，pH=6.0。

——流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：100μL。

6.3.2電感耦合等離子體質(zhì)譜儀參考條件

2

T/SSX002—2021

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀參考條件如下：

——射頻功率：1200W～1550W；采樣深度：8mm。

——霧化室溫度：2℃；載氣流量：0.65L/min。

——補(bǔ)償氣流量：0.45L/min；碰撞氣流量（He氣）：4.5mL/min。

——檢測質(zhì)量數(shù)：78；積分時間：0.5s；蠕動泵轉(zhuǎn)速：0.3r/s。

6.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

設(shè)定儀器最佳條件，待基線穩(wěn)定后，將硒代蛋氨酸、硒酸根和亞硒酸根混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（4.4.5）

按質(zhì)量濃度由低到高分別注入液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀中進(jìn)行測定，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中

目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6.3.4試樣測定

依次將空白溶液和試樣溶液注入液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀中，得到色譜圖，以色譜

保留時間進(jìn)行定性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中硒代蛋氨酸、硒酸根、亞硒酸根的濃度，平行測定次

數(shù)不少于兩次。硒形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與不同谷物樣品中的硒形態(tài)色譜圖參見附錄A。

7分析結(jié)果表述

試樣中硒代蛋氨酸含量按照公式（1）計算，硒酸鹽含量按照公式（2）計算，亞硒酸鹽含量按照公式

（3）計算。

f(c1c01)V1000

X1·······················（1）

m10001000

f(c2c02)V1000

X1······················（2）

m10001000

f(c3c03)V1000

X1·······················（3）

m10001000

式中：

X1——試樣中硒代蛋氨酸的含量（以Se計），單位為毫克每千克（mg/kg）；

X2——試樣中硒酸鹽的含量（以Se計），單位為毫克每千克（mg/kg）；

X3——試樣中亞硒酸的含量（以Se計），單位為毫克每千克（mg/kg）；

F——稀釋倍數(shù)；

c01——經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的空白溶液中硒代蛋氨酸的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

c02——經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的空白溶液中硒酸鹽的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

c03——經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的空白溶液中亞硒酸鹽的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

c1——經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的測定液中硒代蛋氨酸的濃度，單位為微克每升（μg/L）

c2——經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的測定液中硒酸鹽的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

c3——經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的測定液中亞硒酸鹽的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

V——加入提取試劑的體積，單位為毫升（mL）；

1000——換算系數(shù)；

m——試樣稱樣量，單位為克（g）。

當(dāng)硒代蛋氨酸、硒酸鹽、亞硒酸鹽含量≥1.00mg/kg時,計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字，當(dāng)硒代蛋氨

酸、硒酸鹽、亞硒酸鹽含量＜1.00mg/kg時，計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

3

T/SSX002—2021

8精密度

相同條件下，平行獨(dú)立測定結(jié)果的相對相差值應(yīng)符合表1規(guī)定。

表1平行樣測定的相對相差值

硒形態(tài)的含量（mg/kg）＜0.10.1～1.0＞1.0

平行樣的相對相差（%）＜25＜15＜10

4

T/SSX002—2021

附錄A

（規(guī)范性附錄）

硒形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與不同谷物樣品中的硒形態(tài)色譜圖

A.1硒形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖A.1。

注：1——硒代胱氨酸；2——亞硒酸根；3——硒代蛋氨酸；4——硒酸根。

圖A.1硒形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（50μg/L）

A.2玉米中硒形態(tài)色譜圖見圖A.2。

注：1——硒代胱氨酸；2——亞硒酸根；3——硒代蛋氨酸；4——硒酸根。

圖A.2玉米中硒形態(tài)色譜圖

5

T/SSX002—2021

A.3大米中硒形態(tài)色譜圖見圖A.3。

注：1——硒代胱氨酸；2——亞硒酸根；3——硒代蛋氨酸；4——硒酸根。

圖A.3大米中硒形態(tài)色譜圖

A.4小麥中硒形態(tài)色譜圖見圖A.4。

注：1——硒代胱氨酸；2——亞硒酸根；3——硒代蛋氨酸；4——硒酸根。

圖A.4小麥中硒形態(tài)色譜圖

6

T/SSX002—2021

目次

前??言.................................................................................................................................................................II

1范圍.....................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.................................................................................................................................................1

3方法原理.............................................................................................................................................................1

4試劑和材料.........................................................................................................................................................1

5儀器與設(shè)備.........................................................................................................................................................2

6分析步驟.............................................................................................................................................................2

7分析結(jié)果表述.....................................................................................................................................................3

8精密度.................................................................................................................................................................4

附錄A...................................................................................................................................................................5

I

T/SSX002—2021

谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽的測定

液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜用法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法測定谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽

含量的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米和小麥中硒代蛋氨酸、亞硒酸鹽和硒酸鹽的測定；玉米中硒代蛋氨酸和硒酸鹽的

測定。

當(dāng)樣品稱樣量為0.3g，提取液體積為5mL時，硒代蛋氨酸方法定量限為0.015mg/kg、硒酸鹽方法

定量限為0.010mg/kg、亞硒酸鹽方法定量限為0.007mg/kg。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3方法原理

試樣中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽通過蛋白酶酶解后，經(jīng)離子交換色譜柱分離，電感耦合等離

子體質(zhì)譜儀測定，以色譜保留時間定性，外標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除另有說明外，本法所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1試劑

4.1.1磷酸氫二銨（(NH4)2HPO4）。

4.1.2蛋白酶XIV：生化試劑（酶活力≥3.5U/mg固體）。

4.1.3甲酸（HCOOH）：色譜純。

4.2試劑配制

4.2.1甲酸溶液（10%，v/v）：準(zhǔn)確量取10mL甲酸，緩慢加水稀釋至100mL，混勻。

4.2.2流動相配制（40mmol/L磷酸氫二銨溶液，pH=6.0）：稱取2.6412g磷酸氫二銨，用水稀釋至

500mL，用甲酸溶液（4.2.1）調(diào)節(jié)pH值至6.0，混勻，于超聲水浴中超聲脫氣10min，備用，臨用現(xiàn)配。

4.3標(biāo)準(zhǔn)品

4.3.1硒代蛋氨酸（C5H11NO2Se，CAS號：9001-05-2），純度≥98%。

4.3.2硒酸鈉（Na2O4Se，CAS號：13410-01-0），純度≥99%

4.3.3亞硒酸鈉（Na2O3Se，CAS號：10102-18-8），純度≥99%

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液

4.4.1硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0mg/mL，以Se計）：準(zhǔn)確稱取0.2480g硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，用水

溶解并定容至100mL，配制成1.0mg/mL硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個

月?；蛸徺I國家有證硒代蛋氨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（C5H11NO2Se，GBW10034）。

4.4.2硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0mg/mL，以Se計）：準(zhǔn)確稱取0.2393g硒酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并定

容至100mL，配制成1.0mg/mL硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個月?；蛸徺I國

家有證硒酸根溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（SeO42-，GBW10033）。

1

T/SSX002—2021

4.4.3亞硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0mg/mL，以Se計）：準(zhǔn)確稱取0.2190g亞硒酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解

并定容至100mL，配制成1.0mg/mL亞硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個月。或

購買國家有證亞硒酸根溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（SeO32-，GBW10032）。

4.4.4單標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10.0μg//mL，以Se計）：分別吸取一定量的硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4.1）、

硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4.2）、亞硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4.3），用水逐級稀釋配制成10.0μg/mL的單標(biāo)準(zhǔn)儲

備溶液，2℃～8℃避光保存，保存期6個月。

4.4.5混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：分別準(zhǔn)確吸取1.0mL濃度為