一、細菌形態(tài)學(xué)檢查·

(一)顯微鏡：臨床微生物學(xué)檢查常用普通光學(xué)

顯微鏡、暗視野顯微鏡和熒光顯微鏡。(二)細菌染色標本檢查1.常用染料用于細菌染色的染料多為人工合成

的含苯環(huán)的化合物。染料分子帶有染色基團和助色基團。染色基團使

染料呈現(xiàn)一定的顏色，使細菌著色；助色基團使

染料分子與細菌結(jié)合，這樣細菌才能著色。助色

基團所含的化學(xué)結(jié)構(gòu)決定了染料的酸堿性。常用染料●(1)堿性染料：堿性染料電離后，染料的助色基團帶正電荷，可使帶負電荷的細菌染上顏色。堿

性染料常為氯化物、硫酸鹽、醋酸鹽或草酸鹽。染色基團一助色基團一酸根——→染色基團一

助色基團++酸根一由于細菌常處于中性或弱堿性環(huán)境，細菌等電點

為pH2-5,因此細菌帶負電荷，細菌染色常用的

染料是堿性染料。常用的堿性染料是堿性苯胺染

料，如美蘭、堿性復(fù)紅和結(jié)晶紫。常用染料·

(2)酸性染料：酸性染料電離后，助色基團帶

負電荷，因此不能使帶負電荷的細菌染上顏色，

不常用于細菌染色。如果使細菌懸液的pH降至等電

點

(pH2-5)以下，細菌帶正電荷，則可使細

菌染上顏色。酸性染料常為與Na+、K+、Ca2+、NH?+結(jié)合的鹽類。染色基團一助色基團一

染色基團一助

色基團

-

+Na+常用的酸性染料如伊紅、酸性復(fù)紅、剛果紅等。常用染料●(3)中性染料：又稱復(fù)合染料，是堿性染料與酸性染料結(jié)合形成的復(fù)合物

,如姬姆薩染料(伊紅天青)、瑞氏染料(伊紅美蘭)。細菌染色不用此

種染料，衣原體染色可用此種染料。2.常用染色方法(1)單染色法：單用一種堿性染料使細菌著色，常用美

蘭染色。用于觀察細菌的形態(tài)、大小及排列。(2)復(fù)合染色法(鑒別染色法):用兩種堿性染

料使細菌先后染色，即一種染料作為復(fù)染劑，并在初染

后用脫色劑脫色，然后再復(fù)染，以區(qū)別細菌的著色性(

細菌著上哪種顏色),從而鑒別細菌。復(fù)合染色法常用

來觀察細菌的形態(tài)、大小、排列和著色性。臨床常用的復(fù)合染色法有革蘭染色法和抗酸染色法。革蘭染色法

紫色一革蘭陽性菌紅色一革蘭陰性菌抗酸染色法

紅色一抗酸性細菌蘭色一非抗酸性細菌(三)不染色標本檢查·1.懸滴法用普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡觀察細菌的形

態(tài)和運動方式·2.壓滴法用普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡觀察細菌的形

態(tài)和運動方式二

、細菌的人工培養(yǎng)及生化試驗●(一)培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基的概念：人工配制的適合細菌生長繁殖需要的營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基

必須具備細菌生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)和適宜的pH(一般pH7.2—7.4)0培養(yǎng)基的種類一按用途分類●(1)基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有細菌生長繁殖所需要的基本營養(yǎng)

成分，主要用于營養(yǎng)要求不高的細菌的生長。臨床常用

牛肉浸湯、普通瓊脂平板、普通瓊脂斜面和普通瓊脂半

固

體

。(2)普通培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入葡萄糖、血液(

兔脫纖維蛋白血、羊脫纖維蛋白血)、血清(兔血清、牛血清、馬血清等)、生長因子(維生素B族一酵母浸膏

,X

因子一氯化高鐵血紅素、V

因子一輔酶I和輔助IⅡ等)

等特殊營養(yǎng)物質(zhì)，即為營養(yǎng)培養(yǎng)基。主要用于營養(yǎng)要求

較高的細菌的生長。臨床常用葡萄糖肉湯、血清肉湯、

血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板。臨床最常用的是血瓊脂

平

板

。培養(yǎng)基的種類一按用途分類·

(3)鑒別培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入特定的底物

和指示劑，即為鑒別培養(yǎng)基。鑒別培養(yǎng)基用來作

細菌的生化試驗，以便鑒定細菌，因此這類培養(yǎng)

基是臨床細菌檢驗常的培養(yǎng)基。如糖發(fā)酵培養(yǎng)基

、克氏雙糖鐵培養(yǎng)基

(KIA)

、動力一吲哚一尿素(MIU)

培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基的種類一按用途分類●(4)選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)或

抗生素，以抑制某些細菌種類生長，有助于需要的

細菌種類生長。此類培養(yǎng)基主要用于從含菌種類(

主要是正常菌群)較多的標本(如糞便)中分離培

養(yǎng)專性病原菌。如膽鹽培養(yǎng)基、SS瓊脂、麥康凱瓊

脂、中國蘭瓊脂、伊紅一美蘭瓊脂用于從糞便中分

離培養(yǎng)志賀菌和沙門菌；慶大霉素瓊脂、堿性瓊脂

用于從糞便中分離培養(yǎng)霍亂弧菌。(5)特殊培養(yǎng)基：包括培養(yǎng)細菌L型的培養(yǎng)基，培

養(yǎng)厭氧菌的厭氧培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基用于培養(yǎng)營養(yǎng)

要求和生長條件較特殊的細菌。培養(yǎng)基的種類一按物理性狀分類●

(1)液體培養(yǎng)基：常用于增菌培養(yǎng)和做生化試驗。(2)固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入1.5-2.0%瓊

脂，高壓熱溶后冷凝即為固體培養(yǎng)基。瓊脂平板：常用于細菌的分離培養(yǎng)、鑒定、純

化和藥敏試驗。瓊脂斜面：常用于菌種短期保存(3)半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2-0.5%

瓊脂，高壓熱溶后冷凝即為半固體培養(yǎng)基。主要用

于細菌的動力試驗和菌種保存。(二)標本(或細菌)接種方法●

P106.

根據(jù)標本的性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所使用培養(yǎng)基的種類(物理性狀)選

用適宜的接種方法。具體的方法在實驗室中講授和操作。細菌培養(yǎng)方法(一)·1、普通培養(yǎng)法：利用細菌培養(yǎng)箱，箱內(nèi)溫度調(diào)到37℃,箱內(nèi)

為大氣，含氧量在22%左右，將已接種的培養(yǎng)基置于箱內(nèi)培養(yǎng)

18-24h

或數(shù)天，觀察有無細菌生長現(xiàn)象。2

、二氧化碳培養(yǎng)法培養(yǎng)的環(huán)境中CO?含量5-10%,溫度35-37℃

。常用的方法有以下三種：(1)二氧化碳孵育箱法(2)燭缸法：用磨口標本缸或玻璃干燥器，缸蓋緣或缸口涂

以凡士林，將已接種的培養(yǎng)皿放入缸內(nèi)，并在缸內(nèi)點燃蠟燭，

蓋嚴缸蓋，待蠟燭火焰熄滅后，缸內(nèi)CO?含量約為5-10%,將燭

缸放入37°?

與3.5mlHCL的比例并在密閉容器后進行化學(xué)反應(yīng)，

使容器內(nèi)CO?含量約為5-10%,將燭缸放入37℃細菌培養(yǎng)箱內(nèi)進

行培養(yǎng)。細菌L型檢查--培養(yǎng)及鑒定·1.標本采集、保存和接種、培養(yǎng)(1)組織、體液、滲出液：無菌技術(shù)采集后，

一部份標本放入無菌20%蔗糖溶液以保持高滲透壓環(huán)境，

一部份標本放入無菌生理鹽水中作為對照標本。用常規(guī)方法接

種培養(yǎng)基，高滲保存的標本接種細菌L型固體培養(yǎng)基，對

照標本接種常用的非高滲培養(yǎng)基(血平板)。37℃培養(yǎng)

1-4天，逐日低倍鏡觀察有無L型菌落。(2)血液、骨髓：無菌技術(shù)采集后，一部份標本放入高

滲增菌液中，一部份標本放入等滲增菌液中，37℃培養(yǎng)

1-7天，此后，分別劃線接種于細菌L型平板和血平板，37℃培養(yǎng)1-4天，逐日低倍鏡觀察有無L型菌落。L型菌落有三種類型：①油煎蛋樣菌落；②顆粒型菌落；③絲狀菌落。鱟試驗·鱟試驗的方法比較多，目前比較常用是凝膠法(經(jīng)

典方法)、比濁法或動力學(xué)比濁法、顯色基質(zhì)法(

用合成的顯色底物代替天然底物凝固蛋白原