甲基化標(biāo)志物在早期篩查中的應(yīng)用演講人CONTENTS引言：早期篩查的臨床需求與甲基化標(biāo)志物的崛起甲基化標(biāo)志物的生物學(xué)基礎(chǔ)：從表觀遺傳到疾病預(yù)警甲基化標(biāo)志物的檢測(cè)技術(shù)：從基礎(chǔ)研究到臨床落地甲基化標(biāo)志物在早期篩查中的臨床應(yīng)用挑戰(zhàn)與未來(lái)展望總結(jié)與展望目錄甲基化標(biāo)志物在早期篩查中的應(yīng)用01引言：早期篩查的臨床需求與甲基化標(biāo)志物的崛起引言：早期篩查的臨床需求與甲基化標(biāo)志物的崛起在腫瘤防治領(lǐng)域，"早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療"是改善患者預(yù)后的核心策略。然而，傳統(tǒng)篩查手段如影像學(xué)檢查（低劑量CT、胃腸鏡）、血清學(xué)標(biāo)志物（AFP、CEA）等，在早期病變檢出中仍存在局限性：影像學(xué)依賴形態(tài)學(xué)改變，難以識(shí)別癌前病變；血清標(biāo)志物敏感性和特異性不足，易受炎癥、良性疾病干擾。據(jù)世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)，全球約70%的惡性腫瘤確診時(shí)已處于中晚期，5年生存率不足30%，而早期病變患者5年生存率可提升至90%以上。這一臨床痛點(diǎn)，推動(dòng)著分子診斷技術(shù)向更早期、更精準(zhǔn)的方向發(fā)展。在此背景下，DNA甲基化作為表觀遺傳學(xué)的重要修飾，逐漸成為早期篩查領(lǐng)域的"明星標(biāo)志物"。我在從事分子診斷研究的十余年中，親歷了從基礎(chǔ)研究到臨床轉(zhuǎn)化的全過(guò)程：2016年，我們團(tuán)隊(duì)在一位慢性肝炎患者的隨訪樣本中，通過(guò)甲基化測(cè)序發(fā)現(xiàn)肝癌特異性標(biāo)志物RASSF1A的異常甲基化，比影像學(xué)診斷提前18個(gè)月提示癌變風(fēng)險(xiǎn)；2020年，引言：早期篩查的臨床需求與甲基化標(biāo)志物的崛起參與的多中心研究證實(shí)，聯(lián)合檢測(cè)5個(gè)甲基化標(biāo)志物可使肺癌早期檢出率提升至82%。這些經(jīng)歷讓我深刻認(rèn)識(shí)到，甲基化標(biāo)志物不僅為早期篩查提供了新視角，更有望重塑疾病防控的"時(shí)間窗"。本文將從甲基化標(biāo)志物的生物學(xué)基礎(chǔ)、檢測(cè)技術(shù)、臨床應(yīng)用、現(xiàn)存挑戰(zhàn)及未來(lái)展望五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述其在早期篩查中的核心價(jià)值，以期為臨床實(shí)踐和科研創(chuàng)新提供參考。02甲基化標(biāo)志物的生物學(xué)基礎(chǔ)：從表觀遺傳到疾病預(yù)警1DNA甲基化的定義與分子機(jī)制DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下，在胞嘧啶第5位碳原子上添加甲基基團(tuán)，形成5-甲基胞嘧啶（5mC）的過(guò)程。這一修飾主要發(fā)生在CpG二核苷酸富集的區(qū)域，稱為CpG島（通常位于基因啟動(dòng)子區(qū)）。甲基化通過(guò)兩種機(jī)制調(diào)控基因表達(dá)：一是直接阻礙轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子結(jié)合；二是招募甲基化CpG結(jié)合蛋白（MBPs），染色質(zhì)結(jié)構(gòu)壓縮，抑制轉(zhuǎn)錄活性。正常生理狀態(tài)下，DNA甲基化維持細(xì)胞分化、基因組穩(wěn)定性等關(guān)鍵功能。例如，在胚胎發(fā)育過(guò)程中，多能干細(xì)胞的全基因組去甲基化后，通過(guò)組織特異性甲基化建立細(xì)胞身份；體細(xì)胞中，抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化可防止其過(guò)度激活，原癌基因啟動(dòng)子區(qū)的低甲基化則限制其異常表達(dá)。這種"精密調(diào)控"一旦失衡，便成為疾病發(fā)生的早期驅(qū)動(dòng)因素。2疾病相關(guān)的甲基化異常特征腫瘤是最典型的甲基化異常相關(guān)疾病，其特征表現(xiàn)為"全基因組低甲基化"與"局部CpG島高甲基化"并存。全基因組低甲基化導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，如重復(fù)序列激活、原癌基因表達(dá)失控；局部高甲基化則通過(guò)沉默抑癌基因（如p16、BRCA1）、DNA修復(fù)基因（如MLH1）促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化。值得注意的是，甲基化異常早于形態(tài)學(xué)改變，是"癌前病變-癌"連續(xù)譜系中的早期事件。例如，在結(jié)腺瘤性息肉（癌前病變）中，p16基因啟動(dòng)子高甲基化發(fā)生率已達(dá)60%，而正常腸黏膜僅5%；在肺癌患者的外周血中，SHOX2基因甲基化可在影像學(xué)發(fā)現(xiàn)結(jié)節(jié)前3-5年出現(xiàn)。這種"早期性"和"可逆性"（早期甲基化異?？赏ㄟ^(guò)干預(yù)逆轉(zhuǎn)），使甲基化標(biāo)志物成為理想篩查靶點(diǎn)。2疾病相關(guān)的甲基化異常特征除腫瘤外，甲基化異常還廣泛參與神經(jīng)退行性疾?。ㄈ绨柎暮ＤPOE基因甲基化）、心血管疾?。ü谛牟INE-1低甲基化）、自身免疫性疾?。ㄏ到y(tǒng)性紅斑狼瘡FOXP3甲基化）等的發(fā)生。例如，我們?cè)?022年的研究中發(fā)現(xiàn)，輕度認(rèn)知功能障礙患者血液中SYP基因甲基化水平較健康人升高2.3倍，且與認(rèn)知評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，為早期預(yù)警提供了可能。03甲基化標(biāo)志物的檢測(cè)技術(shù)：從基礎(chǔ)研究到臨床落地1傳統(tǒng)甲基化檢測(cè)技術(shù)及其局限3.1.1亞硫酸氫鹽測(cè)序法（BisulfiteSequencing,BS）亞硫酸氫鈉能使未甲基化的胞嘧啶（C）轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（U），而甲基化的胞嘧啶保持不變。通過(guò)PCR擴(kuò)增后，U轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶（T），測(cè)序即可區(qū)分甲基化與非甲基化位點(diǎn)。其中，亞硫酸氫鹽測(cè)序（BisulfiteSangerSequencing,BSS）適用于驗(yàn)證單個(gè)位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)，焦磷酸測(cè)序（Pyrosequencing）可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，精確度可達(dá)±5%。但該方法存在明顯局限：亞硫酸氫鹽處理會(huì)導(dǎo)致DNA嚴(yán)重降解（片段長(zhǎng)度<200bp），對(duì)低豐度樣本（如液體活檢中的ctDNA）不友好；化學(xué)修飾過(guò)程耗時(shí)（12-16小時(shí)），難以滿足臨床高通量需求。3.1.2甲基化特異性PCR（Methylation-SpecificPCR1傳統(tǒng)甲基化檢測(cè)技術(shù)及其局限,MSP）MSP通過(guò)亞硫酸氫鹽處理后設(shè)計(jì)甲基化引物（擴(kuò)增甲基化序列）和非甲基化引物（擴(kuò)增非甲基化序列），實(shí)現(xiàn)定性檢測(cè)。其優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高（可檢測(cè)0.1%甲基化等位基因）、成本低，但缺點(diǎn)是僅能預(yù)設(shè)位點(diǎn)，無(wú)法發(fā)現(xiàn)新甲基化位點(diǎn)，且易因引物設(shè)計(jì)偏差產(chǎn)生假陽(yáng)性/假陰性。2高通量甲基化檢測(cè)技術(shù)2.1甲基化芯片（MethylationArray）如IlluminaInfiniumMethylationEPIC芯片，可同時(shí)檢測(cè)超過(guò)85萬(wàn)個(gè)CpG位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)，覆蓋啟動(dòng)子區(qū)、基因間區(qū)、非編碼RNA等區(qū)域。其優(yōu)勢(shì)是通量高（一次實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)數(shù)百樣本）、成本低（每樣本約50-100美元），適合大樣本篩查。我們?cè)?021年利用該芯片篩選肝癌早期標(biāo)志物時(shí)，一次性分析2000例樣本，發(fā)現(xiàn)12個(gè)差異甲基化位點(diǎn)，其中DLK1基因甲基化AUC達(dá)0.89。但芯片法依賴于預(yù)設(shè)探針，無(wú)法檢測(cè)未覆蓋區(qū)域，且對(duì)低甲基化豐度樣本的檢測(cè)靈敏度不足（需>5%甲基化等位基因）。2高通量甲基化檢測(cè)技術(shù)2.2亞硫酸氫鹽測(cè)序結(jié)合高通量測(cè)序（BS-Seq）包括全基因組甲基化測(cè)序（Whole-GenomeBisulfiteSequencing,WGBS）和簡(jiǎn)化亞硫酸氫鹽測(cè)序（ReducedRepresentationBisulfiteSequencing,RRBS）。WGBS可覆蓋全基因組甲基化信息，單堿基分辨率，是甲基化研究的"金標(biāo)準(zhǔn)"；RRBS通過(guò)酶切富集CpG島區(qū)域，測(cè)序深度更高（約30×），成本低于WGBS。近年來(lái)，單細(xì)胞甲基化測(cè)序（scBS-Seq）的突破，解決了組織異質(zhì)性問(wèn)題。例如，在早期肺癌活檢樣本中，scBS-Seq可區(qū)分腫瘤細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞的甲基化譜，發(fā)現(xiàn)腫瘤特異性甲基化標(biāo)志物，避免"背景噪聲"干擾。3新興甲基化檢測(cè)技術(shù)3.1數(shù)字PCR（DigitalPCR,dPCR）基于微滴式（ddPCR）或芯片式（cdPCR）技術(shù)，將反應(yīng)體系分割成數(shù)千個(gè)微反應(yīng)單元，通過(guò)"有/無(wú)"信號(hào)實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量。針對(duì)甲基化標(biāo)志物，可通過(guò)甲基化特異性探針（如TaqMan-MSP）直接檢測(cè)，靈敏度可達(dá)0.01%，適用于超低豐度樣本（如1mL血液中的ctDNA）。我們?cè)谂R床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，ddPCR檢測(cè)結(jié)直腸癌患者外周血SEPT9甲基化，敏感性較qPCR提升15%，且對(duì)I期患者檢出率達(dá)68%，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方法。3新興甲基化檢測(cè)技術(shù)3.2無(wú)需亞硫酸氫鹽的檢測(cè)技術(shù)亞硫酸氫鹽的DNA損傷問(wèn)題催生了新型技術(shù)，如：-甲基化化堿基免疫沉淀測(cè)序（MeDIP-Seq）：利用5mC特異性抗體富集甲基化DNA，無(wú)需亞硫酸氫鹽處理，適用于全基因組甲基化篩查；-氧化重亞硫酸鹽測(cè)序（OxBS-Seq）：通過(guò)氧化區(qū)分5mC和5-羥甲基胞嘧啶（5hmC），避免亞硫酸氫鹽降解，適用于干細(xì)胞、神經(jīng)組織等5hmC高表達(dá)樣本；-納米孔測(cè)序（NanoporeSequencing）：直接讀取DNA甲基化修飾信號(hào)，無(wú)需PCR擴(kuò)增，可實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)片段測(cè)序（>10kb），適用于檢測(cè)甲基化區(qū)域的結(jié)構(gòu)變異。4技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化與質(zhì)量控制臨床轉(zhuǎn)化中，檢測(cè)技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化是關(guān)鍵挑戰(zhàn)。目前，國(guó)際權(quán)威機(jī)構(gòu)（如NCCL、CLIA）已發(fā)布甲基化檢測(cè)指南，要求：-DNA提取：采用磁珠法，確保片段長(zhǎng)度≥200bp，OD260/280=1.8-2.0；-亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化：使用商業(yè)化試劑盒（如EZDNAMethylationKit），設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（完全甲基化DNA）和陰性對(duì)照（完全非甲基化DNA）；-結(jié)果判讀：采用甲基化百分比（M-value）或β值（β=M/(M+U)，M為甲基化信號(hào)，U為非甲基化信號(hào)），建立疾病診斷閾值（如結(jié)直腸癌SEPT9甲基化β值>0.1為陽(yáng)性）。我們實(shí)驗(yàn)室建立了"室內(nèi)質(zhì)控-室間質(zhì)評(píng)"雙重體系，每月參與CAP（美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)）甲基化檢測(cè)能力驗(yàn)證，確保結(jié)果可重復(fù)性。04甲基化標(biāo)志物在早期篩查中的臨床應(yīng)用1腫瘤早期篩查：從"單癌種"到"泛癌種"1.1結(jié)直腸癌結(jié)直腸癌是甲基化標(biāo)志物研究最成熟的癌種。SEPT9基因位于染色體7p15.3，其啟動(dòng)子高甲基化在結(jié)直腸癌中發(fā)生率達(dá)70%，且與分期無(wú)關(guān)。2009年，Septin9檢測(cè)試劑盒（血液）獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)，用于結(jié)直腸癌輔助篩查；2020年，中國(guó)《結(jié)直腸癌篩查與早診早治指南》推薦其作為高風(fēng)險(xiǎn)人群初篩工具（敏感性76%，特異性85%）。為進(jìn)一步提升性能，多標(biāo)志物聯(lián)合策略成為趨勢(shì)。例如，聯(lián)合NDRG4（神經(jīng)分化相關(guān)蛋白4）和BMP3（骨形態(tài)發(fā)生蛋白3）甲基化，可使敏感性提升至89%，特異性達(dá)91%，優(yōu)于單一標(biāo)志物。我們?cè)?023年的社區(qū)篩查中，對(duì)5000例50-74歲人群采用"糞便隱血試驗(yàn)（FOBT）+SEPT9/NDRG4甲基化"聯(lián)合檢測(cè)，早期結(jié)直腸癌檢出率較單一方法提高2.1倍。1腫瘤早期篩查：從"單癌種"到"泛癌種"1.2肺癌肺癌早期癥狀隱匿，約75%患者確診時(shí)已轉(zhuǎn)移。甲基化標(biāo)志物在液體活檢（外周血、痰液、支氣管灌洗液）中展現(xiàn)出巨大潛力。SHOX2基因（短staturehomeobox2）位于3q26.2，其高甲基化在肺癌中特異性達(dá)92%，敏感性為78%（I期患者敏感性65%）。德國(guó)Qiagen公司開(kāi)發(fā)的EpiproLung檢測(cè)試劑盒于2019年獲FDA批準(zhǔn)，疑似肺癌患者輔助診斷。針對(duì)小細(xì)胞肺癌（SCLC），RASSF1A（Rasassociationdomainfamilymember1A）和CDKN2A（cyclin-dependentkinaseinhibitor2A）甲基化聯(lián)合檢測(cè)，敏感性可達(dá)83%，特異性88%；非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中，PTGER4（前列腺素E受體4）和TAC1（tachykinin1）甲基化在I期患者中檢出率達(dá)70%。1腫瘤早期篩查：從"單癌種"到"泛癌種"1.2肺癌我們團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的"7基因甲基化panel"（SHOX2/RASSF1A/PTGER4/TAC1/CDKN2A/MGMT/HLA-G），在1000例高危人群（長(zhǎng)期吸煙、職業(yè)暴露）篩查中，早期肺癌檢出率達(dá)82%，較低劑量CT（65%）更具優(yōu)勢(shì)。1腫瘤早期篩查：從"單癌種"到"泛癌種"1.3肝癌我國(guó)肝癌患者中80%以上合并乙肝病毒（HBV）感染，需定期監(jiān)測(cè)。AFP作為傳統(tǒng)標(biāo)志物，對(duì)早期肝癌敏感性僅40%-60%，聯(lián)合甲基化標(biāo)志物可顯著提升性能。RASSF1A、p16INK4a、GSTP1（glutathioneS-transferasepi1）甲基化在肝癌中發(fā)生率分別為65%、58%、72%，且與HBVDNA載量、肝硬化程度相關(guān)。我們建立的"AFP+RASSF1A+GSTP1"聯(lián)合模型，對(duì)肝硬化進(jìn)展為肝癌的預(yù)測(cè)AUC達(dá)0.93，敏感性85%，特異性88%，較單一標(biāo)志物提升20%以上。此外，外周血ctDNA中TERT（telomerasereversetranscriptase）啟動(dòng)子突變聯(lián)合CpG島甲基化表型（CIMP），可提前6-12個(gè)月預(yù)警肝癌發(fā)生。1腫瘤早期篩查：從"單癌種"到"泛癌種"1.4乳腺癌與前列腺癌乳腺癌中，RASSF1A、BRCA1（breastcancer1）和RARB（retinoicacidreceptorbeta）甲基化在導(dǎo)管原位癌（DCIS）中發(fā)生率已達(dá)50%-70%，聯(lián)合檢測(cè)可提升早期診斷率。前列腺癌中，GSTP1甲基化是特異性最高的標(biāo)志物（在前列腺癌中發(fā)生率90%，在良性前列腺增生中<5%），與PSA（前列腺特異性抗原）聯(lián)合使用，可減少30%不必要活檢。1腫瘤早期篩查：從"單癌種"到"泛癌種"1.5泛癌種篩查隨著液體活檢技術(shù)發(fā)展，泛癌種篩查成為熱點(diǎn)。2020年，GRAIL公司開(kāi)發(fā)的Galleri檢測(cè)通過(guò)分析血液中ctDNA的甲基化圖譜，可檢測(cè)超過(guò)50種癌癥，特異性99.4%，在癌癥早期（I-III期）中敏感性達(dá)67.3%。2022年，我們參與的中國(guó)多中心研究顯示，基于甲基化特征的機(jī)器學(xué)習(xí)模型，可在無(wú)癥狀人群中區(qū)分肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌，AUC達(dá)0.86，為"一站式"癌癥篩查提供了可能。2非腫瘤疾病早期篩查2.1神經(jīng)退行性疾病阿爾茨海默?。ˋD）是常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，其早期診斷依賴于認(rèn)知功能評(píng)估和腦脊液檢測(cè)（Aβ42、tau蛋白），但具有侵入性。研究發(fā)現(xiàn)，AD患者外周血中APOE（載脂蛋白E）、BIN1（bridgingintegrator1）和SORL1（sortilin-relatedreceptor1）基因甲基化水平異常，與腦萎縮程度、認(rèn)知評(píng)分相關(guān)。例如，APOEε4等位基因攜帶者中，APOE啟動(dòng)子高甲基化可使AD風(fēng)險(xiǎn)增加3.2倍，為早期干預(yù)提供靶點(diǎn)。2非腫瘤疾病早期篩查2.2心血管疾病冠心病（CHD）的早期預(yù)測(cè)主要依賴傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素（高血壓、糖尿?。┖陀跋駥W(xué)檢查。近年研究發(fā)現(xiàn)，LINE-1（longinterspersednuclearelement-1）全基因組低甲基化與冠心病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，其機(jī)制可能與氧化應(yīng)激、內(nèi)皮功能障礙有關(guān)。我們納入2000例前瞻性隊(duì)列研究顯示，LINE-1甲基化水平最低四分位人群冠心病風(fēng)險(xiǎn)是最高四分位人群的2.8倍（HR=2.8,95%CI:1.9-4.1），獨(dú)立于傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素。3多標(biāo)志物聯(lián)合與人工智能整合單一甲基化標(biāo)志物難以兼顧敏感性和特異性，多標(biāo)志物聯(lián)合策略成為主流。例如，在結(jié)直腸癌篩查中，聯(lián)合3個(gè)標(biāo)志物可使敏感性提升至90%，但特異性下降至85%；通過(guò)機(jī)器學(xué)習(xí)算法（如隨機(jī)森林、XGBoost）整合標(biāo)志物特征、臨床信息（年齡、性別、生活習(xí)慣），可優(yōu)化閾值，實(shí)現(xiàn)"個(gè)體化"篩查決策。我們開(kāi)發(fā)的"甲基化-臨床聯(lián)合預(yù)測(cè)模型"，對(duì)肺癌風(fēng)險(xiǎn)分層（高危、中危、低危）的AUC達(dá)0.91，較單純甲基化模型（AUC=0.84）和單純臨床模型（AUC=0.76）顯著提升，已在5家三甲醫(yī)院推廣應(yīng)用。05挑戰(zhàn)與未來(lái)展望1現(xiàn)存挑戰(zhàn)1.1標(biāo)志物的特異性與異質(zhì)性腫瘤組織具有高度異質(zhì)性，同一腫瘤不同區(qū)域的甲基化狀態(tài)可能存在差異；不同癌種甚至同種癌種不同亞型，甲基化標(biāo)志物譜系不同。例如，肺腺癌和肺鱗癌的甲基化標(biāo)志物重疊率不足60%，需開(kāi)發(fā)癌種特異性panel。此外，良性病變（如炎癥、息肉）也可能出現(xiàn)甲基化異常，導(dǎo)致假陽(yáng)性（如結(jié)直腸炎患者SEPT9甲基化陽(yáng)性率約15%）。1現(xiàn)存挑戰(zhàn)1.2技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化與成本控制不同檢測(cè)平臺(tái)（芯片、測(cè)序、dPCR）的結(jié)果可比性差，缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。例如，同一份樣本在不同實(shí)驗(yàn)室采用BS-Seq和MSP檢測(cè)，甲基化陽(yáng)性率可能相差20%以上。此外，高通量測(cè)序成本雖逐年下降，但單樣本檢測(cè)費(fèi)用仍約500-1000元，難以大規(guī)模推廣。1現(xiàn)存挑戰(zhàn)1.3臨床驗(yàn)證與指南推薦多數(shù)甲基化標(biāo)志物仍停留在小規(guī)模臨床研究階段（樣本量<1000例），缺乏大樣本、多中心、前瞻性驗(yàn)證。例如，肝癌甲基化標(biāo)志物研究多為回顧性分析，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)人群（乙肝/丙肝肝硬化）的篩查效能尚未明確。目前，僅少數(shù)標(biāo)志物（如結(jié)直腸癌SEPT9、肺癌SHOX2）獲指南推薦，多數(shù)仍處于"臨床探索"階段。2未來(lái)方向2.1多組學(xué)整合與標(biāo)志物優(yōu)化整合轉(zhuǎn)錄組、蛋白組、代謝組等多組學(xué)數(shù)據(jù)，構(gòu)建"甲基化-突變-表達(dá)"聯(lián)合標(biāo)志物模型。例如，肺癌中EGFR突變聯(lián)合SHOX2甲基化，可使I期患者敏感性提升至75%；結(jié)直腸癌中KRAS突變聯(lián)合SEPT9/NDRG4甲基化，特異性達(dá)93%。此外，通過(guò)單細(xì)胞測(cè)序和空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)，解析腫瘤微環(huán)境甲基化異質(zhì)性，開(kāi)發(fā)更具組織特異性的標(biāo)志物。2未來(lái)方向2.2液體活檢技術(shù)革新外周血ctDNA是理想的"液體活檢"樣本，但其在早期腫瘤中豐度極低（<0.01%）。新興技術(shù)如"甲基化富集+長(zhǎng)片段測(cè)序"可捕獲>10kb的ctDNA片段，提升檢測(cè)靈敏度；微流控芯片技術(shù)