2025年大學(xué)大四（基因工程）載體構(gòu)建畢業(yè)測(cè)試試題及答案

（考試時(shí)間：90分鐘滿分100分）班級(jí)______姓名______第I卷（選擇題共40分）（總共20題，每題2分，每題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題意，請(qǐng)將正確答案填寫在括號(hào)內(nèi)）1.以下哪種載體常用于基因工程中構(gòu)建表達(dá)載體？（）A.噬菌體載體B.質(zhì)粒載體C.人工染色體載體D.病毒載體2.構(gòu)建載體時(shí)，用于連接外源基因和載體的酶是（）。A.限制性內(nèi)切酶B.DNA聚合酶C.DNA連接酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶3.載體上的多克隆位點(diǎn)是（）。A.一段富含多種限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的區(qū)域B.用于篩選重組載體的標(biāo)記基因區(qū)域C.啟動(dòng)外源基因轉(zhuǎn)錄的區(qū)域D.增強(qiáng)外源基因表達(dá)的區(qū)域4.在載體構(gòu)建中，藍(lán)白斑篩選利用的是（）。A.抗性基因的表達(dá)差異B.熒光蛋白的表達(dá)C.β-半乳糖苷酶基因的功能D.綠色熒光蛋白的發(fā)光原理5.以下關(guān)于質(zhì)粒載體的特點(diǎn)，錯(cuò)誤的是（）。A.分子量較小B.能自主復(fù)制C.含有多個(gè)抗性基因D.通常是線性DNA6.構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，啟動(dòng)子的作用是（）。A.終止外源基因的轉(zhuǎn)錄B.啟動(dòng)外源基因的復(fù)制C.啟動(dòng)外源基因的轉(zhuǎn)錄D.增強(qiáng)外源基因的穩(wěn)定性7.載體上的抗性基因主要用于（）。A.篩選含有載體的細(xì)胞B.促進(jìn)外源基因的表達(dá)C.調(diào)控載體的復(fù)制D.提高載體的穩(wěn)定性8.人工染色體載體相比其他載體，優(yōu)勢(shì)在于（）。A.能容納更大的外源DNA片段B.更容易構(gòu)建C.復(fù)制效率更高D.表達(dá)效果更好9.構(gòu)建載體時(shí)，需要對(duì)載體進(jìn)行酶切處理，其目的是（）。A.破壞載體的抗性基因B.產(chǎn)生粘性末端便于連接外源基因C.促進(jìn)載體的自主復(fù)制D.增強(qiáng)載體的穩(wěn)定性10.以下哪種不是常用的限制性內(nèi)切酶類型？（）A.I型B.II型C.III型D.IV型11.在載體構(gòu)建中，連接反應(yīng)的最佳溫度通常是（）。A.4℃B.25℃C.37℃D.42℃12.載體構(gòu)建過(guò)程中，轉(zhuǎn)化的目的是（）。A.將重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞B.篩選含有重組載體的細(xì)胞C.鑒定重組載體的正確性D.擴(kuò)增重組載體13.用于篩選重組載體的方法不包括（）。A.抗性篩選B.藍(lán)白斑篩選C.核酸測(cè)序D.熒光定量PCR14.載體上的增強(qiáng)子元件可以（）。A.抑制外源基因的表達(dá)B.增強(qiáng)外源基因的表達(dá)C.調(diào)控載體的復(fù)制D.提高載體的穩(wěn)定性15.構(gòu)建基因文庫(kù)時(shí)，常用的載體是（）。A.質(zhì)粒載體B.噬菌體載體C.人工染色體載體D.病毒載體16.載體構(gòu)建中，感受態(tài)細(xì)胞的制備是為了（）。A.提高細(xì)胞對(duì)重組載體的攝取能力B.促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)C.增強(qiáng)細(xì)胞的抗性D.鑒定細(xì)胞的類型17.以下關(guān)于載體構(gòu)建流程的正確順序是（）。①酶切載體和外源基因②連接反應(yīng)③轉(zhuǎn)化④篩選重組載體⑤提取載體和外源基因A.⑤①②③④B.①②③④⑤C.⑤③①②④D.①⑤②③④18.載體構(gòu)建中，常用的宿主細(xì)胞不包括（）。A.大腸桿菌B.酵母菌C.植物細(xì)胞D.動(dòng)物病毒19.構(gòu)建載體時(shí)，如果外源基因與載體連接方向錯(cuò)誤，可能會(huì)導(dǎo)致（）。A.外源基因無(wú)法表達(dá)B.載體無(wú)法復(fù)制C.篩選結(jié)果錯(cuò)誤D.載體穩(wěn)定性降低20.以下哪種載體構(gòu)建方法適用于大片段DNA的克??？（）A.粘性末端連接法B.平端連接法C.同源重組法D.以上都不適用第II卷（非選擇題共60分）（總共3題，每題20分）21.簡(jiǎn)述載體構(gòu)建的基本流程及各步驟的關(guān)鍵要點(diǎn)。22.請(qǐng)說(shuō)明在載體構(gòu)建中，如何選擇合適的載體和限制性內(nèi)切酶？23.現(xiàn)有一段外源基因，設(shè)計(jì)構(gòu)建表達(dá)載體的方案，包括載體選擇、酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)、連接反應(yīng)條件等，并說(shuō)明如何篩選和鑒定重組載體。答案：1.B2.C3.A4.C5.D6.C7.A8.A9.B10.D11.B12.A13.D14.B15.B16.A17.A18.D19.A20.C21.載體構(gòu)建基本流程及關(guān)鍵要點(diǎn)：首先提取載體與外源基因，提取時(shí)要保證載體完整、外源基因純度高。然后用限制性內(nèi)切酶酶切載體和外源基因，關(guān)鍵是選擇合適酶切位點(diǎn)，保證產(chǎn)生匹配粘性末端。接著進(jìn)行連接反應(yīng)，控制反應(yīng)條件如溫度、時(shí)間等，提高連接效率。之后轉(zhuǎn)化，要制備感受態(tài)細(xì)胞，提高轉(zhuǎn)化成功率。最后篩選重組載體，利用抗性、藍(lán)白斑等方法準(zhǔn)確篩選出陽(yáng)性克隆。22.選擇合適載體：根據(jù)外源基因大小選擇，小片段選質(zhì)粒載體，大片段選人工染色體載體等?？紤]宿主細(xì)胞類型，如大腸桿菌選相應(yīng)質(zhì)粒。關(guān)注載體抗性基因、多克隆位點(diǎn)等元件。選擇限制性內(nèi)切酶：依據(jù)載體和外源基因上的酶切位點(diǎn)，選能產(chǎn)生匹配粘性末端的酶。避免載體自身環(huán)化，可選用雙酶切。考慮酶切效率、活性等因素，確保酶切效果良好。23.載體選擇：選高拷貝質(zhì)粒載體。酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)：在載體多克隆位點(diǎn)選合適