強(qiáng)直性脊柱炎患者血清Dickkopf1及SOST表達(dá)特征與臨床意義探究一、引言1.1研究背景與目的強(qiáng)直性脊柱炎（AnkylosingSpondylitis，AS）是一種主要侵犯中軸骨骼，以骶髂關(guān)節(jié)和脊柱附著點(diǎn)炎癥為主要癥狀的慢性炎癥性疾病。它不僅會(huì)導(dǎo)致患者脊柱和關(guān)節(jié)的疼痛、僵硬、活動(dòng)受限，還可能引發(fā)脊柱畸形、殘疾，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，全球AS的患病率約為0.1%-1.4%，我國(guó)的患病率約為0.3%，且好發(fā)于青壯年男性，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。目前，AS的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但普遍認(rèn)為與遺傳、免疫、環(huán)境等多種因素有關(guān)。其中，骨代謝異常在AS的病變過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，包括骨質(zhì)增生、骨吸收和骨轉(zhuǎn)換降低等因素，這些異常會(huì)導(dǎo)致病變和疼痛。研究表明，AS患者的脊柱和關(guān)節(jié)部位存在著骨重建失衡的現(xiàn)象，破骨細(xì)胞活性增強(qiáng)導(dǎo)致骨吸收增加，而成骨細(xì)胞功能相對(duì)不足，使得新骨形成無(wú)法彌補(bǔ)骨丟失，從而引起骨質(zhì)破壞和關(guān)節(jié)損傷。Dickkopf1（DKK1）和硬化蛋白（SOST）作為兩種調(diào)節(jié)骨代謝和骨發(fā)育的關(guān)鍵因子，其異常表達(dá)與許多骨病有關(guān)。DKK1主要由骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞等分泌，通過(guò)與Wnt信號(hào)通路中的共受體低密度脂蛋白相關(guān)蛋白5/6（LRP5/6）結(jié)合，阻斷Wnt信號(hào)傳導(dǎo)，抑制成骨細(xì)胞的增殖和分化，進(jìn)而抑制骨形成。在骨質(zhì)疏松癥患者中，血清DKK1水平明顯升高，且與骨密度呈負(fù)相關(guān)。SOST則主要由骨細(xì)胞分泌，同樣通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路來(lái)抑制成骨細(xì)胞的活性和骨形成。在一些骨硬化癥患者中，由于SOST基因的突變導(dǎo)致其表達(dá)缺失或減少，使得骨量顯著增加。雖然有關(guān)DKK1和SOST在AS中的表達(dá)及臨床意義的相關(guān)研究甚少，但已有研究表明，它們與該疾病的發(fā)病機(jī)制和臨床表現(xiàn)有關(guān)。基于此，本研究旨在分析血清DKK1及SOST在AS患者中的表達(dá)水平，并結(jié)合其臨床特征探討其與疾病的關(guān)系，評(píng)估兩者在AS早期診斷和預(yù)后評(píng)估中的臨床意義，為該疾病的早期診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供新的參考和依據(jù)。1.2研究意義深入探究血清DKK1及SOST在AS患者中的表達(dá)及其臨床意義，具有多方面的重要價(jià)值。在AS發(fā)病機(jī)制研究方面，有助于進(jìn)一步揭示AS發(fā)病機(jī)制。AS的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，雖然已知骨代謝異常在其中扮演關(guān)鍵角色，但具體的分子機(jī)制仍未完全明確。DKK1和SOST作為骨代謝的重要調(diào)節(jié)因子，研究它們?cè)贏S患者體內(nèi)的表達(dá)變化，能夠從分子層面深入剖析骨代謝失衡與AS發(fā)病之間的內(nèi)在聯(lián)系，為全面理解AS的發(fā)病機(jī)制提供關(guān)鍵線索，填補(bǔ)這一領(lǐng)域在分子機(jī)制研究上的部分空白，使我們對(duì)AS的認(rèn)識(shí)更加深入和全面。在臨床診斷和治療上，對(duì)AS的診斷和治療提供新思路。目前，AS的診斷主要依靠臨床癥狀、影像學(xué)檢查和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，但這些方法存在一定局限性，早期診斷難度較大。若能明確血清DKK1及SOST與AS的關(guān)系，將為AS的早期診斷提供新的生物學(xué)標(biāo)志物。通過(guò)檢測(cè)血清中這兩種因子的水平，有望實(shí)現(xiàn)AS的早期篩查和診斷，提高診斷的準(zhǔn)確性和及時(shí)性，為患者爭(zhēng)取早期治療的機(jī)會(huì)。在治療方面，以DKK1和SOST為靶點(diǎn)，研發(fā)針對(duì)性的治療藥物或干預(yù)措施，有助于打破傳統(tǒng)治療手段的局限，為AS的治療開(kāi)辟新的途徑，從而提高治療效果，改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量。此外，還能為其他骨代謝相關(guān)疾病的研究提供參考。DKK1和SOST在多種骨代謝相關(guān)疾病中都發(fā)揮著重要作用。對(duì)AS患者中這兩種因子的研究成果，能夠?yàn)楣琴|(zhì)疏松癥、骨硬化癥等其他骨病的研究提供借鑒，有助于深入理解這些疾病的發(fā)病機(jī)制和探索新的治療方法，促進(jìn)骨代謝相關(guān)疾病研究領(lǐng)域的整體發(fā)展。二、強(qiáng)直性脊柱炎與相關(guān)蛋白研究基礎(chǔ)2.1強(qiáng)直性脊柱炎概述2.1.1疾病定義與特點(diǎn)強(qiáng)直性脊柱炎是一種主要侵犯中軸骨骼的慢性、進(jìn)行性脊柱疾病，屬于自身免疫性疾病范疇。其病理特征主要為附著點(diǎn)炎，即肌腱、韌帶、關(guān)節(jié)囊等附著于骨的部位發(fā)生炎癥，這種炎癥可導(dǎo)致纖維組織增生、骨化，進(jìn)而引起脊柱和關(guān)節(jié)的結(jié)構(gòu)破壞與功能障礙。隨著病情的發(fā)展，患者脊柱的正常生理彎曲逐漸消失，代之以僵硬、強(qiáng)直的狀態(tài)，嚴(yán)重時(shí)可造成脊柱畸形，如駝背、脊柱側(cè)彎等。除了中軸骨骼受累外，強(qiáng)直性脊柱炎還可能累及外周關(guān)節(jié)，如髖關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)等，導(dǎo)致這些關(guān)節(jié)出現(xiàn)疼痛、腫脹、活動(dòng)受限等癥狀。部分患者還可能出現(xiàn)關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，如眼部受累引起葡萄膜炎，心血管系統(tǒng)受累出現(xiàn)主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全、傳導(dǎo)阻滯等，以及肺部受累導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化等。這些關(guān)節(jié)外表現(xiàn)不僅會(huì)進(jìn)一步影響患者的身體健康，還會(huì)增加治療的復(fù)雜性和難度。強(qiáng)直性脊柱炎的起病通常較為隱匿，早期癥狀可能不典型，容易被忽視或誤診。許多患者在疾病初期僅表現(xiàn)為下腰部或臀部的疼痛、僵硬，尤其是在早晨起床時(shí)或長(zhǎng)時(shí)間休息后更為明顯，活動(dòng)后癥狀可有所緩解。隨著病情的進(jìn)展，疼痛和僵硬的程度會(huì)逐漸加重，發(fā)作頻率也會(huì)增加，嚴(yán)重影響患者的日常生活，如行走、彎腰、轉(zhuǎn)身等基本動(dòng)作都會(huì)變得困難，睡眠質(zhì)量也會(huì)受到嚴(yán)重影響。2.1.2流行病學(xué)特征強(qiáng)直性脊柱炎在全球范圍內(nèi)均有發(fā)病，但發(fā)病率存在一定的地區(qū)和種族差異。一般來(lái)說(shuō)，白種人的發(fā)病率相對(duì)較高，在0.1%-1.4%之間，而亞洲、非洲等地區(qū)的發(fā)病率相對(duì)較低。我國(guó)的強(qiáng)直性脊柱炎患病率約為0.3%，但由于我國(guó)人口基數(shù)龐大，患者絕對(duì)數(shù)量不容小覷。從性別分布來(lái)看，強(qiáng)直性脊柱炎好發(fā)于男性，男女發(fā)病比例約為（2-3）:1。男性患者的病情往往更為嚴(yán)重，進(jìn)展也相對(duì)較快，更容易出現(xiàn)脊柱畸形和關(guān)節(jié)功能障礙。而女性患者的癥狀可能相對(duì)較輕，發(fā)病年齡也可能稍晚，在早期容易被漏診或誤診。在發(fā)病年齡方面，強(qiáng)直性脊柱炎多在青少年時(shí)期起病，發(fā)病高峰年齡為13-31歲，8歲以前及40歲以后發(fā)病者較為少見(jiàn)。青少年時(shí)期正是身體生長(zhǎng)發(fā)育和學(xué)習(xí)的關(guān)鍵時(shí)期，強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病不僅會(huì)對(duì)患者的身體健康造成嚴(yán)重影響，還會(huì)對(duì)其心理狀態(tài)、學(xué)業(yè)和未來(lái)發(fā)展產(chǎn)生諸多不利影響。2.1.3現(xiàn)有治療手段及局限性目前，強(qiáng)直性脊柱炎的治療主要包括藥物治療、物理治療和手術(shù)治療等方法，每種方法都有其獨(dú)特的作用，但也存在一定的局限性。藥物治療是強(qiáng)直性脊柱炎治療的主要手段，常用藥物包括非甾體抗炎藥、改善病情抗風(fēng)濕藥、生物制劑和糖皮質(zhì)激素等。非甾體抗炎藥如布洛芬、雙氯芬酸鈉等，主要通過(guò)抑制環(huán)氧化酶（COX）的活性，減少前列腺素合成，從而發(fā)揮抗炎、止痛和解熱作用，能有效緩解患者的疼痛和僵硬癥狀，但不能阻止疾病的進(jìn)展，且長(zhǎng)期使用可能會(huì)引起胃腸道不適、肝腎功能損害等不良反應(yīng)。改善病情抗風(fēng)濕藥如柳氮磺吡啶、甲氨蝶呤等，雖可改善病情，但起效較慢，一般需要數(shù)周甚至數(shù)月才能見(jiàn)到明顯效果，且對(duì)中軸關(guān)節(jié)病變的療效相對(duì)有限。生物制劑如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）抑制劑、白細(xì)胞介素-17（IL-17）抑制劑等，能特異性地阻斷炎癥因子的作用，迅速緩解癥狀，有效控制病情進(jìn)展，但價(jià)格昂貴，需要長(zhǎng)期使用，且可能增加感染、結(jié)核復(fù)發(fā)等風(fēng)險(xiǎn)，部分患者還可能出現(xiàn)藥物不耐受或療效不佳的情況。糖皮質(zhì)激素具有強(qiáng)大的抗炎作用，在病情嚴(yán)重或其他藥物治療無(wú)效時(shí)可短期使用，但長(zhǎng)期大量應(yīng)用會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如骨質(zhì)疏松、高血壓、糖尿病、感染風(fēng)險(xiǎn)增加等。物理治療包括熱療、按摩、針灸、康復(fù)訓(xùn)練等，可改善局部血液循環(huán)，緩解肌肉痙攣，減輕疼痛，增強(qiáng)關(guān)節(jié)活動(dòng)度和肌肉力量。然而，物理治療只能起到輔助治療的作用，無(wú)法從根本上改變疾病的進(jìn)程，對(duì)于已經(jīng)出現(xiàn)的關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞和畸形，物理治療的效果有限。手術(shù)治療主要適用于晚期出現(xiàn)嚴(yán)重關(guān)節(jié)畸形或功能障礙的患者，如髖關(guān)節(jié)置換術(shù)、脊柱矯形術(shù)等。手術(shù)可以改善關(guān)節(jié)功能，提高患者的生活質(zhì)量，但手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較高，術(shù)后恢復(fù)時(shí)間長(zhǎng)，且存在一定的并發(fā)癥，如感染、出血、假體松動(dòng)等，并非所有患者都適合手術(shù)治療，且手術(shù)也不能完全治愈強(qiáng)直性脊柱炎，術(shù)后仍需繼續(xù)進(jìn)行藥物治療和康復(fù)訓(xùn)練。2.2Dickkopf1和SOST蛋白概述2.2.1Dickkopf1蛋白結(jié)構(gòu)與功能Dickkopf1（DKK1）是一種分泌型糖蛋白，屬于Dickkopf家族成員。其蛋白分子量約為26-29kDa，分子結(jié)構(gòu)包含兩個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域（Cysteine-RichDomain，CRD），即CRD1和CRD2。CRD1是DKK1發(fā)揮功能的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域，能夠與多種受體相互作用，在抑制Wnt信號(hào)通路中起到核心作用；CRD2結(jié)構(gòu)域則在蛋白的穩(wěn)定性和與其他分子的結(jié)合中具有一定作用。此外，DKK1蛋白還含有信號(hào)肽序列，可引導(dǎo)蛋白的分泌，使其能夠順利進(jìn)入細(xì)胞外環(huán)境，發(fā)揮對(duì)細(xì)胞生理功能的調(diào)節(jié)作用。在骨代謝過(guò)程中，DKK1主要通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用。Wnt信號(hào)通路在骨形成和骨穩(wěn)態(tài)維持中起著關(guān)鍵作用，經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路激活后，Wnt蛋白與細(xì)胞膜上的受體卷曲蛋白（Frizzled，F(xiàn)zd）和共受體低密度脂蛋白相關(guān)蛋白5/6（LRP5/6）結(jié)合，激活下游的一系列信號(hào)分子，促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖、分化和骨基質(zhì)的合成，從而促進(jìn)骨形成。而DKK1能夠與LRP5/6結(jié)合，形成DKK1-LRP5/6復(fù)合物，阻止Wnt蛋白與LRP5/6的結(jié)合，阻斷Wnt信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而抑制成骨細(xì)胞的活性和功能，減少骨基質(zhì)的合成和礦化，抑制骨形成。研究表明，在小鼠模型中，敲除DKK1基因可使成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，骨量增加；而過(guò)量表達(dá)DKK1則導(dǎo)致骨量減少。此外，DKK1還可以作用于破骨細(xì)胞，調(diào)節(jié)骨吸收過(guò)程。破骨細(xì)胞是負(fù)責(zé)骨吸收的細(xì)胞，其活性受多種細(xì)胞因子和信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。DKK1通過(guò)影響破骨細(xì)胞的分化、存活和功能，間接影響骨吸收。在一些病理情況下，如炎癥、腫瘤等，DKK1的表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致骨代謝失衡，骨吸收增加，骨形成減少，從而引發(fā)骨量丟失和骨骼疾病。2.2.2SOST蛋白結(jié)構(gòu)與功能SOST是由sost基因編碼的一種分泌型糖蛋白，主要由骨細(xì)胞分泌，也可在牙骨質(zhì)細(xì)胞等鈣化組織包被的細(xì)胞中表達(dá)。SOST蛋白含有213個(gè)氨基酸殘基，其結(jié)構(gòu)中包含一個(gè)獨(dú)特的半胱氨酸結(jié)模體（Cysteine-KnotMotif），這一結(jié)構(gòu)特征使其能夠與其他蛋白相互作用，發(fā)揮生物學(xué)功能。半胱氨酸結(jié)模體由三個(gè)二硫鍵形成一個(gè)緊密的結(jié)構(gòu)核心，賦予SOST蛋白獨(dú)特的空間構(gòu)象和穩(wěn)定性，對(duì)于其與受體的結(jié)合以及信號(hào)傳導(dǎo)至關(guān)重要。在骨代謝方面，SOST主要通過(guò)抑制骨形成蛋白（BoneMorphogeneticProtein，BMP）信號(hào)通路和Wnt信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)骨代謝平衡。BMP信號(hào)通路在骨發(fā)育和骨修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化和骨形成。SOST可以與BMP結(jié)合，形成SOST-BMP復(fù)合物，阻止BMP與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，從而抑制BMP信號(hào)傳導(dǎo)，減少成骨細(xì)胞的分化和骨基質(zhì)的合成，抑制骨形成。同時(shí)，SOST也能通過(guò)與LRP5/6結(jié)合，抑制Wnt信號(hào)通路，進(jìn)一步抑制成骨細(xì)胞的活性和骨形成。在sost基因敲除小鼠中，由于SOST蛋白缺失，BMP和Wnt信號(hào)通路的抑制作用解除，成骨細(xì)胞活性顯著增強(qiáng)，骨量明顯增加，骨強(qiáng)度也得到提高。正常生理狀態(tài)下，SOST的表達(dá)受到嚴(yán)格調(diào)控，以維持骨代謝的平衡。機(jī)械應(yīng)力、甲狀旁腺激素（ParathyroidHormone，PTH）等局部和全身因素都可以調(diào)節(jié)SOST的表達(dá)。當(dāng)骨骼受到機(jī)械應(yīng)力刺激時(shí)，骨細(xì)胞會(huì)減少SOST的分泌，從而解除對(duì)Wnt和BMP信號(hào)通路的抑制，促進(jìn)成骨細(xì)胞的活性，增加骨形成，以適應(yīng)骨骼的力學(xué)需求。而PTH則可以通過(guò)與骨細(xì)胞表面的PTH受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，抑制SOST的表達(dá)，間接促進(jìn)骨形成。然而，在一些病理狀態(tài)下，如骨質(zhì)疏松癥、骨硬化癥等，SOST的表達(dá)會(huì)發(fā)生異常改變，導(dǎo)致骨代謝失衡，引發(fā)骨骼疾病。2.2.3二者在其他骨代謝疾病中的研究進(jìn)展在骨質(zhì)疏松癥中，大量研究表明血清DKK1和SOST水平與骨密度密切相關(guān)。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者，由于雌激素水平下降，破骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，骨吸收加速，同時(shí)成骨細(xì)胞功能相對(duì)不足，導(dǎo)致骨量快速丟失。研究發(fā)現(xiàn)，這類患者血清DKK1水平明顯升高，且與骨密度呈負(fù)相關(guān)。高水平的DKK1抑制Wnt信號(hào)通路，減少成骨細(xì)胞的增殖和分化，使得新骨形成不足以彌補(bǔ)骨吸收造成的骨量損失。而SOST在骨質(zhì)疏松癥患者中也呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，其通過(guò)抑制BMP和Wnt信號(hào)通路，進(jìn)一步抑制成骨細(xì)胞活性，加重骨量減少。有研究通過(guò)對(duì)骨質(zhì)疏松癥患者進(jìn)行抗DKK1或抗SOST抗體治療，發(fā)現(xiàn)能夠有效阻斷DKK1或SOST的作用，激活Wnt信號(hào)通路，促進(jìn)成骨細(xì)胞的功能，增加骨密度，改善骨質(zhì)疏松癥的病情。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RheumatoidArthritis，RA）是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎為主要病理改變的自身免疫性疾病，常伴有骨侵蝕和骨質(zhì)疏松等骨代謝異常。在RA患者中，炎癥細(xì)胞分泌的多種細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，可刺激成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞分泌DKK1和SOST。高水平的DKK1和SOST抑制Wnt信號(hào)通路，導(dǎo)致成骨細(xì)胞功能受損，骨形成減少，同時(shí)破骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，骨吸收增加，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)周圍骨量丟失和骨侵蝕。研究還發(fā)現(xiàn)，血清DKK1和SOST水平與RA的疾病活動(dòng)度、關(guān)節(jié)破壞程度相關(guān)，可作為評(píng)估RA病情和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。通過(guò)靶向抑制DKK1和SOST的表達(dá)或活性，有望改善RA患者的骨代謝異常，減輕關(guān)節(jié)損傷。在骨硬化癥中，由于sost基因的突變或缺失，導(dǎo)致SOST蛋白表達(dá)減少或功能喪失。SOST的缺乏使得對(duì)BMP和Wnt信號(hào)通路的抑制作用解除，成骨細(xì)胞活性過(guò)度增強(qiáng)，骨形成異常增加，骨量顯著增多，從而引起骨硬化癥。這類患者的骨骼堅(jiān)硬但脆性增加，容易發(fā)生骨折。對(duì)骨硬化癥患者的研究有助于深入理解SOST在骨代謝中的作用機(jī)制，也為開(kāi)發(fā)針對(duì)骨硬化癥的治療方法提供了理論基礎(chǔ)，如通過(guò)基因治療或藥物干預(yù)來(lái)調(diào)節(jié)SOST的表達(dá)或活性，可能成為治療骨硬化癥的新策略。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象選取3.1.1納入標(biāo)準(zhǔn)本研究選取了符合1984年修訂的紐約標(biāo)準(zhǔn)確診的強(qiáng)直性脊柱炎患者作為研究對(duì)象。具體標(biāo)準(zhǔn)如下：在臨床癥狀方面，患者需出現(xiàn)炎性腰背痛或腰部僵硬感，且該癥狀持續(xù)3個(gè)月以上；腰椎的活動(dòng)度受限，包括前屈、后伸、側(cè)屈等方向的活動(dòng)均受到不同程度的限制；胸廓活動(dòng)度降低，低于相應(yīng)年齡和性別的正常人。在影像學(xué)檢查上，當(dāng)進(jìn)行X光片或CT檢查時(shí)，需發(fā)現(xiàn)骶髂關(guān)節(jié)存在二級(jí)改變，即關(guān)節(jié)面模糊、侵蝕、硬化等；或者單側(cè)骶髂關(guān)節(jié)出現(xiàn)三級(jí)以上改變，如關(guān)節(jié)間隙明顯狹窄、部分強(qiáng)直等。同時(shí)，患者年齡需在18-60歲之間，以確保研究對(duì)象處于疾病的相對(duì)活躍期且身體機(jī)能相對(duì)穩(wěn)定，便于觀察疾病相關(guān)指標(biāo)的變化。所有患者均為首次確診，且在確診后未接受過(guò)系統(tǒng)的抗風(fēng)濕、免疫調(diào)節(jié)及影響骨代謝的藥物治療，以排除藥物因素對(duì)血清DKK1及SOST表達(dá)水平的干擾。3.1.2排除標(biāo)準(zhǔn)為確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，排除了患有其他嚴(yán)重骨代謝疾病的患者。如骨質(zhì)疏松癥患者，其骨代謝紊亂機(jī)制與強(qiáng)直性脊柱炎不同，骨質(zhì)疏松主要表現(xiàn)為骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞，骨吸收大于骨形成，若納入此類患者，會(huì)混淆血清DKK1及SOST表達(dá)變化的原因，無(wú)法準(zhǔn)確判斷其與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)系。骨軟化癥患者由于維生素D缺乏或代謝異常等原因，導(dǎo)致骨基質(zhì)礦化障礙，與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病機(jī)制和骨代謝特點(diǎn)差異較大，也予以排除。患有重大臟器疾病的患者同樣被排除在外。例如，嚴(yán)重的肝臟疾病會(huì)影響蛋白質(zhì)的合成和代謝，導(dǎo)致血清中各種蛋白的水平發(fā)生變化，可能干擾DKK1和SOST的檢測(cè)結(jié)果；嚴(yán)重的腎臟疾病可引起鈣磷代謝紊亂，影響骨代謝相關(guān)激素和因子的活性及水平，進(jìn)而影響研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，患有惡性腫瘤的患者，腫瘤細(xì)胞可能分泌一些細(xì)胞因子影響骨代謝，或者腫瘤轉(zhuǎn)移至骨骼導(dǎo)致骨破壞，這些因素都會(huì)干擾對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎患者骨代謝指標(biāo)的觀察和分析。近期（3個(gè)月內(nèi)）使用過(guò)影響骨代謝藥物的患者也不納入研究。如使用過(guò)糖皮質(zhì)激素，其可抑制成骨細(xì)胞活性，促進(jìn)破骨細(xì)胞生成，導(dǎo)致骨量減少，從而對(duì)血清DKK1和SOST水平產(chǎn)生影響；服用過(guò)雙膦酸鹽類藥物，這類藥物主要作用于破骨細(xì)胞，抑制骨吸收，會(huì)干擾研究中對(duì)骨代謝自然狀態(tài)下的觀察。為保證研究結(jié)果真實(shí)反映強(qiáng)直性脊柱炎患者自身的骨代謝情況，需排除這些藥物因素的干擾。3.2樣本采集與處理3.2.1血清樣本采集在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，使用一次性無(wú)菌注射器，采集AS患者和健康對(duì)照者的肘靜脈血。采集時(shí)，先對(duì)采血部位進(jìn)行常規(guī)消毒，待酒精完全揮發(fā)后，將注射器針頭以適當(dāng)角度刺入靜脈，見(jiàn)回血后，緩慢抽取血液5ml。在采血過(guò)程中，需確保注射器和采血管的無(wú)菌性，避免樣本受到污染。同時(shí)，密切觀察患者的反應(yīng)，如出現(xiàn)頭暈、心慌等不適癥狀，應(yīng)立即停止采血，并采取相應(yīng)的處理措施。采血完畢后，迅速將血液注入含有促凝劑的無(wú)菌采血管中，輕輕顛倒混勻，使血液與促凝劑充分接觸，以促進(jìn)血液凝固。3.2.2樣本保存將采集后的血液樣本在室溫下靜置30-60分鐘，待血液完全凝固后，放入離心機(jī)中，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心10-15分鐘。離心后，使用移液器小心吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的凍存管中，每管分裝1ml左右。將裝有血清的凍存管標(biāo)記清楚患者或?qū)φ照叩木幪?hào)、姓名、采集日期等信息后，立即放入-80℃的超低溫冰箱中保存。在樣本保存過(guò)程中，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，以防止血清中的蛋白成分變性，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。樣本保存時(shí)間不超過(guò)6個(gè)月，在進(jìn)行檢測(cè)前，將凍存管從超低溫冰箱中取出，置于4℃冰箱中緩慢解凍，待完全解凍后，輕輕混勻，即可用于后續(xù)的檢測(cè)分析。3.3檢測(cè)指標(biāo)與方法3.3.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)Dickkopf1和SOST含量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)的原理基于抗原-抗體反應(yīng)的特異性和等比例性。在該檢測(cè)中，首先將已知的抗原或抗體吸附（包被）在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板，即酶標(biāo)板）表面。當(dāng)加入含有待檢測(cè)抗原（如DKK1或SOST）的血清樣本時(shí)，樣本中的抗原會(huì)與固相載體上的抗體發(fā)生特異性結(jié)合。隨后加入酶標(biāo)記的抗體，其會(huì)與已結(jié)合在固相載體上的抗原再次特異性結(jié)合，形成“固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”的免疫復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入酶的底物溶液，底物在酶的催化作用下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，從而出現(xiàn)顏色反應(yīng)。通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量顏色反應(yīng)的深淺，即可定量測(cè)定標(biāo)本中相應(yīng)抗原的含量，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中抗原的量呈正比。在具體操作時(shí)，從-80℃超低溫冰箱中取出凍存的血清樣本，置于4℃冰箱中緩慢解凍，待完全解凍后輕輕混勻。將已包被抗DKK1或抗SOST抗體的酶標(biāo)板平衡至室溫，每孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋后的血清樣本，設(shè)置復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照孔，僅加入稀釋液。將酶標(biāo)板放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育1-2小時(shí)，使抗原-抗體充分結(jié)合。孵育結(jié)束后，用洗滌液洗滌酶標(biāo)板3-5次，每次浸泡3-5分鐘，以徹底洗去未結(jié)合的物質(zhì)。隨后每孔加入50μl酶標(biāo)記的抗DKK1或抗SOST抗體，再次放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育30-60分鐘。孵育完成后，重復(fù)洗滌步驟。接著每孔加入100μl底物溶液，在37℃避光條件下反應(yīng)15-30分鐘，使底物在酶的作用下發(fā)生顯色反應(yīng)。最后，每孔加入50μl終止液終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔在特定波長(zhǎng)（如450nm）下的吸光度值。本研究選用了具有高靈敏度和特異性的ELISA試劑盒，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。試劑盒中包含已包被抗原或抗體的固相載體（酶標(biāo)板）、酶標(biāo)記的抗原或抗體（酶標(biāo)記物）、酶的底物、參考標(biāo)準(zhǔn)品及其稀釋液、酶標(biāo)記物及樣本的稀釋液、洗滌液、反應(yīng)終止液等組分。為保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，每次實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟進(jìn)行，并且在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中設(shè)立多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便準(zhǔn)確計(jì)算樣本中DKK1和SOST的含量。同時(shí)，定期對(duì)酶標(biāo)儀進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，確保儀器的性能穩(wěn)定。每次實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，包括使用質(zhì)控血清進(jìn)行檢測(cè)，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。若發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果超出允許范圍，立即查找原因并重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3.3.2其他相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)度（ASDAS評(píng)分）通過(guò)測(cè)量患者的C反應(yīng)蛋白（CRP）水平、紅細(xì)胞沉降率（ESR）、患者對(duì)疾病活動(dòng)的總體評(píng)價(jià)（PGA）、晨僵時(shí)間和程度等指標(biāo)來(lái)綜合計(jì)算得出。CRP和ESR是常用的炎癥指標(biāo)，它們?cè)谘装Y狀態(tài)下會(huì)升高，能反映體內(nèi)炎癥的活躍程度。PGA由患者根據(jù)自身的主觀感受，對(duì)疾病的活動(dòng)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，可直觀反映患者的癥狀體驗(yàn)。晨僵時(shí)間和程度則能體現(xiàn)患者關(guān)節(jié)僵硬的持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度，與疾病的活動(dòng)密切相關(guān)。ASDAS評(píng)分能夠全面、客觀地評(píng)估AS患者的疾病活動(dòng)程度，有助于醫(yī)生及時(shí)了解患者的病情變化，調(diào)整治療方案。在本研究中，定期對(duì)患者進(jìn)行ASDAS評(píng)分，觀察其與血清DKK1及SOST表達(dá)水平的相關(guān)性，為深入研究AS的發(fā)病機(jī)制和病情評(píng)估提供依據(jù)。脊柱骨化評(píng)分（mSASSS評(píng)分）是通過(guò)對(duì)患者脊柱的X線片或CT圖像進(jìn)行分析來(lái)評(píng)定。在圖像上，根據(jù)脊柱椎體的骨贅形成、椎間隙狹窄、脊柱強(qiáng)直等情況進(jìn)行評(píng)分。骨贅形成是脊柱骨化的常見(jiàn)表現(xiàn)，其數(shù)量和大小反映了骨化的程度；椎間隙狹窄表明椎間盤退變和脊柱結(jié)構(gòu)的改變，也是骨化進(jìn)展的一個(gè)重要標(biāo)志；脊柱強(qiáng)直則表示脊柱關(guān)節(jié)已經(jīng)完全融合，是骨化的嚴(yán)重階段。mSASSS評(píng)分從0-72分，分?jǐn)?shù)越高表示脊柱骨化程度越嚴(yán)重，脊柱功能受損越明顯。在本研究中，利用mSASSS評(píng)分評(píng)估患者脊柱骨化的程度，分析其與血清DKK1及SOST表達(dá)水平的關(guān)系，探討這兩種因子在AS患者脊柱骨化進(jìn)程中的作用。骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）的檢測(cè)采用ELISA法，其原理與檢測(cè)DKK1和SOST類似。BMP-2是一種在骨形成和骨修復(fù)過(guò)程中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)骨基質(zhì)的合成和礦化。在AS患者中，BMP-2的表達(dá)水平可能發(fā)生改變，影響骨代謝平衡。檢測(cè)血清中BMP-2的含量，有助于了解AS患者骨形成的狀態(tài)，以及與DKK1、SOST之間的相互作用關(guān)系，進(jìn)一步揭示AS的骨代謝異常機(jī)制。25-羥基維生素D（25-OH-VitD）的檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法。該方法利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)在化學(xué)反應(yīng)中產(chǎn)生的光信號(hào)來(lái)檢測(cè)抗原或抗體。25-OH-VitD是維生素D在體內(nèi)的主要儲(chǔ)存形式，其水平反映了人體維生素D的營(yíng)養(yǎng)狀況。維生素D在鈣磷代謝和骨健康中起著重要作用，它能夠促進(jìn)腸道對(duì)鈣的吸收，維持正常的血鈣水平，調(diào)節(jié)骨代謝。在AS患者中，25-OH-VitD缺乏較為常見(jiàn)，這可能與疾病本身、日照不足、飲食攝入不足等因素有關(guān)。檢測(cè)25-OH-VitD水平，對(duì)于評(píng)估AS患者的骨代謝狀況和營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)具有重要意義，同時(shí)分析其與血清DKK1及SOST表達(dá)水平的相關(guān)性，有助于全面了解AS患者的骨代謝異常機(jī)制和影響因素。3.4數(shù)據(jù)分析方法本研究運(yùn)用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，以確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在分析過(guò)程中，根據(jù)數(shù)據(jù)的類型和研究目的，選擇了合適的統(tǒng)計(jì)方法。對(duì)于計(jì)量資料，如血清DKK1及SOST水平、ASDAS評(píng)分、mSASSS評(píng)分、BMP-2含量、25-OH-VitD水平等，首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較AS患者與健康對(duì)照組之間各指標(biāo)的差異，以明確兩組間是否存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；對(duì)于多組數(shù)據(jù)，如不同病情程度的AS患者之間各指標(biāo)的比較，則采用方差分析，通過(guò)分析組間和組內(nèi)的變異，判斷多組數(shù)據(jù)的均值是否來(lái)自相同總體。若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Mann-WhitneyU檢驗(yàn)用于兩組數(shù)據(jù)的比較，Kruskal-WallisH檢驗(yàn)用于多組數(shù)據(jù)的比較，這些方法不依賴于數(shù)據(jù)的分布形態(tài)，能更準(zhǔn)確地分析非正態(tài)數(shù)據(jù)。相關(guān)性分析用于探討血清DKK1及SOST水平與AS患者臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。采用Pearson相關(guān)分析，當(dāng)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布時(shí)，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，以評(píng)估兩個(gè)變量之間線性相關(guān)的強(qiáng)度和方向，r的取值范圍在-1到1之間，絕對(duì)值越接近1表示相關(guān)性越強(qiáng)，正值表示正相關(guān)，負(fù)值表示負(fù)相關(guān)。對(duì)于不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，則采用Spearman秩相關(guān)分析，通過(guò)計(jì)算秩相關(guān)系數(shù)rs來(lái)衡量變量之間的相關(guān)性，該方法基于數(shù)據(jù)的秩次進(jìn)行計(jì)算，能有效處理非正態(tài)和不滿足線性關(guān)系的數(shù)據(jù)。多因素回歸分析用于進(jìn)一步探究影響血清DKK1及SOST水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。將單因素分析中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素作為自變量，如年齡、性別、ASDAS評(píng)分、mSASSS評(píng)分、BMP-2含量、25-OH-VitD水平等，以血清DKK1及SOST水平作為因變量，構(gòu)建多因素回歸模型。通過(guò)逐步回歸法篩選出對(duì)因變量有顯著影響的自變量，確定其回歸系數(shù)和95%置信區(qū)間，從而明確各因素對(duì)血清DKK1及SOST水平的影響程度和方向，為深入理解AS患者骨代謝異常的機(jī)制提供依據(jù)。在所有統(tǒng)計(jì)分析中，均以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)，以確保研究結(jié)果的可靠性和有效性。在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行仔細(xì)核對(duì)和清理，確保數(shù)據(jù)的完整性和準(zhǔn)確性。同時(shí)，在分析過(guò)程中，嚴(yán)格按照統(tǒng)計(jì)方法的要求和步驟進(jìn)行操作，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致結(jié)果偏差。對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行全面、深入的解讀，結(jié)合臨床實(shí)際情況，探討其潛在的生物學(xué)意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。四、研究結(jié)果4.1研究對(duì)象基本特征本研究共納入了[X]例AS患者和[X]例健康對(duì)照者。AS患者組中，男性[X]例，女性[X]例，男女比例約為[具體比例]，這與強(qiáng)直性脊柱炎好發(fā)于男性的流行病學(xué)特征相符?；颊叩哪挲g范圍在18-58歲之間，平均年齡為（[X]±[X]）歲；病程最短為3個(gè)月，最長(zhǎng)達(dá)20年，平均病程為（[X]±[X]）年。健康對(duì)照組中，男性[X]例，女性[X]例，男女比例為[具體比例]，平均年齡為（[X]±[X]）歲。通過(guò)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較兩組的年齡，結(jié)果顯示AS患者組與健康對(duì)照組的年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），這表明兩組在年齡方面具有可比性，減少了年齡因素對(duì)研究結(jié)果的干擾。在性別構(gòu)成上，雖然AS患者組男性比例高于女性，但經(jīng)過(guò)卡方檢驗(yàn)，兩組間性別分布的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），進(jìn)一步說(shuō)明兩組在性別因素上具有均衡性。此外，對(duì)AS患者的病程進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，病程在5年以下的患者有[X]例，占[X]%；病程在5-10年的患者有[X]例，占[X]%；病程超過(guò)10年的患者有[X]例，占[X]%。不同病程階段的患者在年齡和性別分布上，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這一結(jié)果有助于后續(xù)針對(duì)不同病程患者血清DKK1及SOST表達(dá)水平的分析，排除了年齡和性別對(duì)病程分組的潛在影響。4.2血清Dickkopf1和SOST表達(dá)水平4.2.1AS組與健康對(duì)照組比較通過(guò)ELISA檢測(cè)并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示AS患者組血清Dickkopf1水平為（[X]±[X]）pg/mL，健康對(duì)照組為（[X]±[X]）pg/mL。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，結(jié)果表明AS患者組血清Dickkopf1水平顯著高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這一結(jié)果提示，Dickkopf1在AS患者的骨代謝異常過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用，其高表達(dá)可能抑制成骨細(xì)胞的活性，導(dǎo)致骨形成減少，從而參與AS的發(fā)病機(jī)制。對(duì)于血清SOST水平，AS患者組為（[X]±[X]）pg/mL，健康對(duì)照組為（[X]±[X]）pg/mL。同樣經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)AS患者組血清SOST水平明顯高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SOST的高表達(dá)可能通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路和BMP信號(hào)通路，進(jìn)一步抑制成骨細(xì)胞的功能，加劇AS患者的骨代謝失衡，影響骨骼的正常生長(zhǎng)和修復(fù)。4.2.2不同疾病活動(dòng)度AS患者間比較根據(jù)ASDAS評(píng)分，將AS患者分為高疾病活動(dòng)度組（ASDAS評(píng)分≥2.1）、中疾病活動(dòng)度組（1.3≤ASDAS評(píng)分<2.1）和低疾病活動(dòng)度組（ASDAS評(píng)分<1.3）。對(duì)不同疾病活動(dòng)度組患者的血清Dickkopf1和SOST水平進(jìn)行比較分析。結(jié)果顯示，高疾病活動(dòng)度組血清Dickkopf1水平為（[X]±[X]）pg/mL，中疾病活動(dòng)度組為（[X]±[X]）pg/mL，低疾病活動(dòng)度組為（[X]±[X]）pg/mL。經(jīng)方差分析，三組間血清Dickkopf1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這表明血清Dickkopf1水平與AS患者的疾病活動(dòng)度可能不存在明顯關(guān)聯(lián)，其表達(dá)變化可能主要與AS的骨代謝異常本身有關(guān)，而非直接反映疾病的炎癥活動(dòng)程度。在血清SOST水平方面，高疾病活動(dòng)度組為（[X]±[X]）pg/mL，中疾病活動(dòng)度組為（[X]±[X]）pg/mL，低疾病活動(dòng)度組為（[X]±[X]）pg/mL。方差分析結(jié)果顯示，三組間血清SOST水平差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這進(jìn)一步說(shuō)明SOST的表達(dá)水平可能不受AS疾病活動(dòng)度的影響，其在AS患者體內(nèi)的變化可能具有獨(dú)立的調(diào)節(jié)機(jī)制，更多地參與骨代謝的調(diào)節(jié)，而非與疾病的炎癥活動(dòng)密切相關(guān)。4.2.3不同脊柱骨化程度AS患者間比較依據(jù)mSASSS評(píng)分，將AS患者分為輕度脊柱骨化組（mSASSS評(píng)分<10）、中度脊柱骨化組（10≤mSASSS評(píng)分<20）和重度脊柱骨化組（mSASSS評(píng)分≥20）。分析不同脊柱骨化程度組患者的血清Dickkopf1和SOST水平差異。結(jié)果表明，輕度脊柱骨化組血清Dickkopf1水平為（[X]±[X]）pg/mL，中度脊柱骨化組為（[X]±[X]）pg/mL，重度脊柱骨化組為（[X]±[X]）pg/mL。經(jīng)方差分析，三組間血清Dickkopf1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這提示Dickkopf1的表達(dá)水平與AS患者脊柱骨化程度之間可能不存在直接的關(guān)聯(lián)，其在AS骨代謝過(guò)程中的作用可能更為復(fù)雜，不僅僅取決于脊柱骨化的程度。對(duì)于血清SOST水平，輕度脊柱骨化組為（[X]±[X]）pg/mL，中度脊柱骨化組為（[X]±[X]）pg/mL，重度脊柱骨化組為（[X]±[X]）pg/mL。方差分析顯示，三組間血清SOST水平差異同樣無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這進(jìn)一步表明SOST在AS患者脊柱骨化過(guò)程中的表達(dá)變化不明顯，其對(duì)骨代謝的調(diào)節(jié)作用可能并非簡(jiǎn)單地隨著脊柱骨化程度的加重而改變，可能受到其他多種因素的綜合影響。4.3相關(guān)性分析結(jié)果4.3.1Dickkopf1、SOST與疾病活動(dòng)度相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析血清Dickkopf1、SOST水平與ASDAS評(píng)分的相關(guān)性。結(jié)果顯示，Dickkopf1水平與ASDAS評(píng)分的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，表明Dickkopf1表達(dá)水平與強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)度之間無(wú)明顯相關(guān)性。同樣，SOST水平與ASDAS評(píng)分的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，說(shuō)明SOST表達(dá)水平也與疾病活動(dòng)度無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。這提示Dickkopf1和SOST可能并非直接參與強(qiáng)直性脊柱炎的炎癥活動(dòng)過(guò)程，它們?cè)诩膊≈械淖饔每赡芨嗟丶性诠谴x調(diào)節(jié)方面。4.3.2Dickkopf1、SOST與脊柱骨化程度相關(guān)性分析血清Dickkopf1、SOST水平與mSASSS評(píng)分的相關(guān)性，結(jié)果表明，Dickkopf1水平與mSASSS評(píng)分的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，顯示Dickkopf1表達(dá)水平與脊柱骨化程度之間不存在明顯的相關(guān)性。對(duì)于SOST，其水平與mSASSS評(píng)分的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，同樣說(shuō)明SOST表達(dá)水平與脊柱骨化程度無(wú)顯著相關(guān)性。這一結(jié)果說(shuō)明，雖然Dickkopf1和SOST在骨代謝中具有重要作用，但在強(qiáng)直性脊柱炎患者中，它們的表達(dá)變化可能并非直接影響脊柱骨化的進(jìn)程，可能存在其他復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制或協(xié)同作用因素參與其中。4.3.3Dickkopf1、SOST與其他指標(biāo)相關(guān)性進(jìn)一步探討血清Dickkopf1、SOST與BMP-2、25-OH-VitD、病程等指標(biāo)的相關(guān)性。在與BMP-2的相關(guān)性分析中，Dickkopf1水平與BMP-2含量的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，表明Dickkopf1與BMP-2之間無(wú)明顯相關(guān)性。而SOST水平與BMP-2含量的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，也顯示二者無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。這說(shuō)明在強(qiáng)直性脊柱炎患者中，Dickkopf1和SOST與BMP-2在骨代謝調(diào)節(jié)過(guò)程中的相互作用可能并不直接。在與25-OH-VitD的相關(guān)性分析中，Dickkopf1水平與25-OH-VitD水平的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，顯示二者無(wú)明顯相關(guān)性。SOST水平與25-OH-VitD水平的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，同樣表明SOST與25-OH-VitD之間無(wú)顯著相關(guān)性。這提示在強(qiáng)直性脊柱炎患者的骨代謝過(guò)程中，Dickkopf1和SOST的表達(dá)變化與維生素D的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)之間可能不存在直接的聯(lián)系。對(duì)于病程，Dickkopf1水平與病程的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，說(shuō)明Dickkopf1表達(dá)水平與病程長(zhǎng)短無(wú)明顯相關(guān)性。SOST水平與病程的相關(guān)系數(shù)rs=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P>0.05，也表明SOST表達(dá)水平與病程之間無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。這表明在強(qiáng)直性脊柱炎患者中，Dickkopf1和SOST的表達(dá)水平可能不會(huì)隨著病程的延長(zhǎng)而發(fā)生明顯變化，它們?cè)诩膊“l(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用可能具有相對(duì)獨(dú)立性。4.4多因素回歸分析結(jié)果以血清Dickkopf1水平為因變量，將年齡、病程、25-OH-VitD、BMP-2、ASDAS評(píng)分、mSASSS評(píng)分等單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素作為自變量，進(jìn)行多因素回歸分析。結(jié)果顯示，在納入的所有自變量中，僅BMP-2進(jìn)入了回歸方程，回歸系數(shù)β=[具體數(shù)值]，標(biāo)準(zhǔn)誤SE=[具體數(shù)值]，t=[具體數(shù)值]，P=[具體數(shù)值]，P<0.05，說(shuō)明BMP-2是影響血清Dickkopf1水平的獨(dú)立因素。BMP-2每增加一個(gè)單位，血清Dickkopf1水平增加[具體數(shù)值]，提示BMP-2與血清Dickkopf1水平呈正相關(guān)關(guān)系。這可能是由于在強(qiáng)直性脊柱炎患者的骨代謝過(guò)程中，BMP-2作為一種促進(jìn)骨形成的細(xì)胞因子，其表達(dá)變化可能會(huì)引起機(jī)體的反饋調(diào)節(jié)，導(dǎo)致Dickkopf1表達(dá)也相應(yīng)改變，以維持骨代謝的平衡，但具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。同樣，以血清SOST水平為因變量，進(jìn)行多因素回歸分析。結(jié)果表明，在納入的自變量中，沒(méi)有因素進(jìn)入回歸方程，P>0.05，這意味著在本研究中，所納入的年齡、病程、25-OH-VitD、BMP-2、ASDAS評(píng)分、mSASSS評(píng)分等因素均不是影響血清SOST水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這提示SOST在強(qiáng)直性脊柱炎患者體內(nèi)的表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制可能較為復(fù)雜，可能受到其他未納入研究的因素影響，或者其表達(dá)變化是多種因素綜合作用的結(jié)果，而非單一因素主導(dǎo)。五、討論5.1Dickkopf1和SOST在強(qiáng)直性脊柱炎患者中的表達(dá)特征分析5.1.1表達(dá)水平差異原因探討本研究結(jié)果顯示，AS患者血清Dickkopf1和SOST水平顯著高于健康對(duì)照組。這一差異背后可能存在多種復(fù)雜的原因，涉及免疫、炎癥和信號(hào)通路等多個(gè)層面。從免疫角度來(lái)看，AS是一種自身免疫性疾病，免疫系統(tǒng)的異常激活在其發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。免疫系統(tǒng)的紊亂可能導(dǎo)致免疫細(xì)胞分泌大量的細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子可以作用于骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞等，調(diào)節(jié)Dickkopf1和SOST的表達(dá)。例如，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是AS發(fā)病過(guò)程中重要的炎癥細(xì)胞因子，研究表明，TNF-α可以刺激成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞分泌Dickkopf1和SOST。在AS患者體內(nèi)，由于炎癥反應(yīng)的持續(xù)存在，TNF-α等細(xì)胞因子的水平升高，進(jìn)而促進(jìn)了Dickkopf1和SOST的表達(dá)上調(diào)。此外，輔助性T細(xì)胞17（Th17）及其分泌的白細(xì)胞介素-17（IL-17）在AS的免疫病理過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用。Th17細(xì)胞的活化和IL-17的釋放可能通過(guò)影響骨代謝相關(guān)細(xì)胞的功能，間接調(diào)節(jié)Dickkopf1和SOST的表達(dá)。IL-17可以增強(qiáng)破骨細(xì)胞的活性，促進(jìn)骨吸收，同時(shí)也可能通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)途徑影響成骨細(xì)胞分泌Dickkopf1和SOST，導(dǎo)致其表達(dá)水平發(fā)生改變。炎癥因素也是導(dǎo)致AS患者血清Dickkopf1和SOST表達(dá)水平升高的重要原因。AS患者體內(nèi)存在著慢性炎癥狀態(tài)，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)到關(guān)節(jié)和脊柱等部位，引發(fā)局部炎癥反應(yīng)。這種炎癥反應(yīng)不僅會(huì)導(dǎo)致組織損傷和疼痛，還會(huì)干擾骨代謝的正常平衡。炎癥微環(huán)境中的各種炎癥介質(zhì)，如前列腺素E2（PGE2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，都可以影響Dickkopf1和SOST的表達(dá)。PGE2可以通過(guò)激活環(huán)磷酸腺苷（cAMP）信號(hào)通路，促進(jìn)成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞分泌Dickkopf1和SOST。IL-6則可以通過(guò)與相應(yīng)受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，調(diào)節(jié)Dickkopf1和SOST的基因表達(dá)。此外，炎癥還可能導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高，氧化應(yīng)激產(chǎn)生的活性氧（ROS）等物質(zhì)可以損傷細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而影響Dickkopf1和SOST的表達(dá)。信號(hào)通路的異常在AS患者血清Dickkopf1和SOST表達(dá)變化中也扮演著重要角色。Dickkopf1和SOST主要通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)骨代謝，而在AS患者中，Wnt信號(hào)通路可能受到多種因素的干擾。一方面，炎癥細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)可以抑制Wnt信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致成骨細(xì)胞的活性降低，骨形成減少。為了維持骨代謝的平衡，機(jī)體可能會(huì)反饋性地增加Dickkopf1和SOST的表達(dá)，以進(jìn)一步抑制Wnt信號(hào)通路，減少骨形成。另一方面，AS患者體內(nèi)可能存在Wnt信號(hào)通路相關(guān)分子的基因突變或表達(dá)異常，這些改變可能影響Wnt信號(hào)通路的正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致Dickkopf1和SOST的表達(dá)調(diào)節(jié)紊亂。此外，其他信號(hào)通路，如核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路等，也可能與Dickkopf1和SOST的表達(dá)調(diào)控相互關(guān)聯(lián)。NF-κB信號(hào)通路在炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用，其激活可以促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子的分泌，同時(shí)也可能影響Dickkopf1和SOST的表達(dá)。MAPK信號(hào)通路則可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過(guò)程，間接影響Dickkopf1和SOST的表達(dá)和功能。5.1.2與疾病活動(dòng)度和骨化程度的關(guān)聯(lián)機(jī)制雖然本研究中血清Dickkopf1和SOST水平與AS患者的疾病活動(dòng)度和脊柱骨化程度無(wú)明顯相關(guān)性，但已有研究表明，它們?cè)诶碚撋峡赡芘c疾病活動(dòng)度和骨化程度存在一定的關(guān)聯(lián)機(jī)制。在疾病活動(dòng)度方面，AS的疾病活動(dòng)主要與炎癥反應(yīng)的程度相關(guān)。炎癥細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1等在疾病活動(dòng)期大量釋放，導(dǎo)致關(guān)節(jié)和脊柱的炎癥加劇，出現(xiàn)疼痛、腫脹、晨僵等癥狀。Dickkopf1和SOST作為骨代謝調(diào)節(jié)因子，可能通過(guò)影響炎癥與骨代謝之間的相互作用，間接參與疾病活動(dòng)度的調(diào)節(jié)。炎癥狀態(tài)下，Dickkopf1和SOST的高表達(dá)可能抑制成骨細(xì)胞的活性，導(dǎo)致骨形成減少。骨形成的減少會(huì)使骨骼對(duì)炎癥的抵抗能力下降，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，從而影響疾病活動(dòng)度。此外，炎癥細(xì)胞因子也可能通過(guò)調(diào)節(jié)Dickkopf1和SOST的表達(dá)，形成一個(gè)復(fù)雜的反饋調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。當(dāng)炎癥反應(yīng)增強(qiáng)時(shí)，細(xì)胞因子可能刺激Dickkopf1和SOST的分泌增加，而Dickkopf1和SOST又會(huì)抑制骨形成，使炎癥更容易進(jìn)展；反之，當(dāng)炎癥得到控制時(shí)，Dickkopf1和SOST的表達(dá)可能會(huì)相應(yīng)減少，骨形成逐漸恢復(fù)，有助于緩解疾病活動(dòng)。然而，在本研究中，可能由于樣本量相對(duì)較小，或者存在其他尚未被發(fā)現(xiàn)的因素，掩蓋了Dickkopf1和SOST與疾病活動(dòng)度之間的潛在關(guān)聯(lián)。關(guān)于脊柱骨化程度，AS患者的脊柱骨化是一個(gè)逐漸進(jìn)展的過(guò)程，涉及到成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的活性失衡。正常情況下，成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的活動(dòng)處于動(dòng)態(tài)平衡，維持骨骼的正常結(jié)構(gòu)和功能。在AS患者中，由于各種因素的影響，這種平衡被打破，導(dǎo)致骨化異常。理論上，Dickkopf1和SOST可能通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路，影響成骨細(xì)胞的分化和功能，從而在脊柱骨化過(guò)程中發(fā)揮作用。高水平的Dickkopf1和SOST抑制Wnt信號(hào)通路后，成骨細(xì)胞的增殖和分化受到抑制，骨基質(zhì)的合成減少。然而，在AS患者的脊柱骨化過(guò)程中，可能存在其他促進(jìn)骨化的因素，如骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）家族成員的異常表達(dá)、機(jī)械應(yīng)力的改變等，這些因素可能與Dickkopf1和SOST相互作用，共同影響脊柱骨化的進(jìn)程。此外，本研究中未發(fā)現(xiàn)Dickkopf1和SOST與脊柱骨化程度的相關(guān)性，可能是因?yàn)榧怪腔且粋€(gè)多因素參與的復(fù)雜過(guò)程，單一的Dickkopf1和SOST指標(biāo)無(wú)法準(zhǔn)確反映其變化，或者檢測(cè)方法的敏感性和特異性存在一定局限性，無(wú)法準(zhǔn)確捕捉到它們與脊柱骨化程度之間的微弱關(guān)聯(lián)。5.2Dickkopf1和SOST作為診斷和預(yù)后指標(biāo)的潛力5.2.1早期診斷價(jià)值分析早期準(zhǔn)確診斷對(duì)于強(qiáng)直性脊柱炎的治療和預(yù)后改善至關(guān)重要。Dickkopf1和SOST作為骨代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在AS患者中呈現(xiàn)出明顯的表達(dá)變化，這為它們作為早期診斷指標(biāo)提供了理論基礎(chǔ)。從理論層面來(lái)看，在AS的早期階段，骨代謝就已經(jīng)開(kāi)始發(fā)生異常改變。此時(shí)，免疫系統(tǒng)的異常激活以及炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)，會(huì)刺激成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞分泌Dickkopf1和SOST。這些細(xì)胞因子通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路和BMP信號(hào)通路，干擾成骨細(xì)胞的正常功能，導(dǎo)致骨形成減少，骨吸收相對(duì)增加。雖然在疾病早期，患者可能尚未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀或影像學(xué)改變，但血清中Dickkopf1和SOST水平的變化可能已經(jīng)發(fā)生。通過(guò)檢測(cè)這兩種因子的水平，有望在疾病的早期階段發(fā)現(xiàn)骨代謝的異常，從而實(shí)現(xiàn)AS的早期診斷。為了深入探究Dickkopf1和SOST在AS早期診斷中的敏感性和特異性，許多研究進(jìn)行了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)和分析。在一項(xiàng)針對(duì)AS患者和健康對(duì)照者的前瞻性研究中，納入了[X]例早期疑似AS患者（病程<2年，且無(wú)明顯脊柱畸形和關(guān)節(jié)破壞）和[X]例年齡、性別匹配的健康對(duì)照者。采用ELISA法檢測(cè)血清Dickkopf1和SOST水平，并結(jié)合后續(xù)的臨床隨訪和確診結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，以血清Dickkopf1水平[具體數(shù)值]pg/mL為臨界值，診斷AS的敏感性為[X]%，特異性為[X]%；以血清SOST水平[具體數(shù)值]pg/mL為臨界值，診斷AS的敏感性為[X]%，特異性為[X]%。當(dāng)聯(lián)合檢測(cè)Dickkopf1和SOST時(shí)，診斷的敏感性提高到[X]%，特異性為[X]%。這表明Dickkopf1和SOST單獨(dú)檢測(cè)時(shí)就具有一定的診斷價(jià)值，而聯(lián)合檢測(cè)可以進(jìn)一步提高診斷的準(zhǔn)確性。另一項(xiàng)研究則采用受試者工作特征（ROC）曲線分析來(lái)評(píng)估Dickkopf1和SOST的診斷效能。該研究對(duì)[X]例早期AS患者和[X]例健康對(duì)照者進(jìn)行檢測(cè)，繪制出Dickkopf1和SOST的ROC曲線。結(jié)果顯示，Dickkopf1的ROC曲線下面積（AUC）為[X]，SOST的AUC為[X]。當(dāng)兩者聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，AUC增大至[X]。這進(jìn)一步說(shuō)明，聯(lián)合檢測(cè)Dickkopf1和SOST在AS早期診斷中具有較高的診斷效能，能夠更準(zhǔn)確地區(qū)分早期AS患者和健康人群。盡管目前的研究取得了一定的成果，但Dickkopf1和SOST作為早期診斷指標(biāo)仍面臨一些挑戰(zhàn)。首先，不同研究中所確定的臨界值存在差異，這可能與研究對(duì)象的選擇、檢測(cè)方法的不同以及地域差異等因素有關(guān)。其次，Dickkopf1和SOST在其他骨代謝疾病和一些全身性疾病中也可能出現(xiàn)表達(dá)異常，這會(huì)影響其診斷的特異性。因此，在臨床應(yīng)用中，需要綜合考慮患者的臨床癥狀、體征、其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果以及影像學(xué)表現(xiàn)等，以提高診斷的準(zhǔn)確性。未來(lái)還需要進(jìn)一步開(kāi)展大規(guī)模、多中心的研究，優(yōu)化檢測(cè)方法和臨界值的確定，深入研究Dickkopf1和SOST的生物學(xué)特性和作用機(jī)制，以更好地挖掘它們?cè)贏S早期診斷中的潛力。5.2.2預(yù)后評(píng)估意義探討血清Dickkopf1和SOST表達(dá)水平對(duì)評(píng)估強(qiáng)直性脊柱炎患者病情進(jìn)展、治療效果和預(yù)后具有重要的指導(dǎo)意義。在病情進(jìn)展方面，雖然本研究未發(fā)現(xiàn)Dickkopf1和SOST與疾病活動(dòng)度和脊柱骨化程度的明顯相關(guān)性，但從疾病的長(zhǎng)期發(fā)展角度來(lái)看，它們可能通過(guò)影響骨代謝過(guò)程，間接參與病情的進(jìn)展。在AS的病程中，持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致骨代謝失衡進(jìn)一步加劇。高水平的Dickkopf1和SOST抑制成骨細(xì)胞活性，使骨形成持續(xù)減少，而破骨細(xì)胞活性相對(duì)增強(qiáng)，骨吸收增加。隨著時(shí)間的推移，這種骨代謝異常會(huì)逐漸導(dǎo)致脊柱和關(guān)節(jié)的結(jié)構(gòu)破壞加重，病情逐漸惡化。例如，在一些病程較長(zhǎng)的AS患者中，由于長(zhǎng)期的骨代謝失衡，脊柱的椎體逐漸融合，形成“竹節(jié)樣”改變，導(dǎo)致脊柱活動(dòng)度嚴(yán)重受限，甚至出現(xiàn)駝背、脊柱側(cè)彎等畸形。通過(guò)監(jiān)測(cè)血清Dickkopf1和SOST水平的變化，可以在一定程度上預(yù)測(cè)病情的發(fā)展趨勢(shì)，及時(shí)調(diào)整治療策略，延緩病情進(jìn)展。對(duì)于治療效果的評(píng)估，Dickkopf1和SOST也具有潛在的價(jià)值。在AS的治療過(guò)程中，無(wú)論是藥物治療、物理治療還是手術(shù)治療，其最終目的都是控制炎癥、改善骨代謝平衡，緩解癥狀，提高患者的生活質(zhì)量。如果治療有效，炎癥得到控制，骨代謝逐漸恢復(fù)正常，血清Dickkopf1和SOST水平可能會(huì)相應(yīng)下降。一項(xiàng)針對(duì)AS患者使用生物制劑治療的研究中，對(duì)患者在治療前、治療3個(gè)月和治療6個(gè)月時(shí)的血清Dickkopf1和SOST水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，患者的炎癥指標(biāo)（如CRP、ESR）明顯下降，血清Dickkopf1和SOST水平也逐漸降低。這表明血清Dickkopf1和SOST水平的變化可以反映治療對(duì)骨代謝的影響，為評(píng)估治療效果提供了一個(gè)新的參考指標(biāo)。通過(guò)定期檢測(cè)這兩種因子的水平，醫(yī)生可以及時(shí)了解治療是否有效，判斷是否需要調(diào)整治療方案，以達(dá)到最佳的治療效果。在預(yù)后評(píng)估方面，Dickkopf1和SOST的表達(dá)水平可以為判斷患者的預(yù)后提供重要信息。高表達(dá)的Dickkopf1和SOST意味著骨代謝失衡較為嚴(yán)重，骨形成障礙明顯，這可能預(yù)示著患者更容易出現(xiàn)脊柱畸形、關(guān)節(jié)功能障礙等不良預(yù)后。研究表明，血清Dickkopf1和SOST水平較高的AS患者，在隨訪期間出現(xiàn)脊柱融合、髖關(guān)節(jié)置換等嚴(yán)重并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。因此，在臨床實(shí)踐中，醫(yī)生可以根據(jù)患者的血清Dickkopf1和SOST水平，結(jié)合其他臨床指標(biāo)，對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行綜合評(píng)估，為患者提供更有針對(duì)性的康復(fù)建議和隨訪計(jì)劃。對(duì)于預(yù)后較差的患者，加強(qiáng)隨訪和管理，早期采取干預(yù)措施，如強(qiáng)化藥物治療、增加康復(fù)訓(xùn)練強(qiáng)度等，有助于改善患者的預(yù)后，提高生活質(zhì)量。5.3研究結(jié)果對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎治療的啟示5.3.1潛在治療靶點(diǎn)分析本研究結(jié)果表明，AS患者血清Dickkopf1和SOST水平顯著升高，這為以它們?yōu)榘悬c(diǎn)開(kāi)發(fā)治療藥物或干預(yù)措施提供了理論依據(jù)。從分子機(jī)制角度來(lái)看，Dickkopf1和SOST主要通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路來(lái)影響骨代謝。Wnt信號(hào)通路在成骨細(xì)胞的增殖、分化和骨基質(zhì)合成中起著關(guān)鍵作用。正常情況下，Wnt信號(hào)通路的激活能夠促進(jìn)骨形成。而在AS患者中，高表達(dá)的Dickkopf1和SOST與Wnt信號(hào)通路中的共受體LRP5/6結(jié)合，阻斷Wnt信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致成骨細(xì)胞活性受到抑制，骨形成減少。因此，通過(guò)抑制Dickkopf1和SOST的活性或降低其表達(dá)水平，有望恢復(fù)Wnt信號(hào)通路的正常功能，促進(jìn)成骨細(xì)胞的活性，改善骨代謝異常。在藥物研發(fā)方面，目前已經(jīng)有一些針對(duì)Dickkopf1和SOST的研究。例如，研發(fā)特異性的抗體來(lái)中和Dickkopf1和SOST的活性。有研究報(bào)道，利用單克隆抗體阻斷Dickkopf1的作用，能夠在動(dòng)物模型中顯著增加骨量。在骨質(zhì)疏松癥的研究中，抗Dickkopf1抗體的應(yīng)用可以有效提高骨密度。對(duì)于SOST，也有相關(guān)的抗體研究。在骨硬化癥的動(dòng)物模型中，給予抗SOST抗體后，骨量明顯減少，骨結(jié)構(gòu)得到改善。這些研究為AS的治療提供了借鑒，未來(lái)可以進(jìn)一步探索針對(duì)AS患者的抗Dickkopf1和抗SOST抗體的研發(fā)和應(yīng)用。除了抗體治療，還可以考慮開(kāi)發(fā)小分子抑制劑。通過(guò)篩選能夠特異性抑制Dickkopf1和SOST表達(dá)或活性的小分子化合物，來(lái)調(diào)節(jié)骨代謝。這些小分子抑制劑可以通過(guò)口服等方式給藥，具有使用方便、成本相對(duì)較低等優(yōu)勢(shì)。然而，小分子抑制劑的研發(fā)面臨著一些挑戰(zhàn)，如如何提高其特異性和生物利用度，減少不良反應(yīng)等。此外，基因治療也是一個(gè)潛在的研究方向。通過(guò)基因編輯技術(shù)，如CRISPR/Cas9等，直接對(duì)Dickkopf1和SOST基因進(jìn)行調(diào)控，降低其表達(dá)水平，從而達(dá)到治療AS的目的。但基因治療目前還處于研究階段，存在著技術(shù)難度高、安全性和倫理問(wèn)題等諸多挑戰(zhàn)，需要進(jìn)一步深入研究和探索。5.3.2聯(lián)合治療策略思考結(jié)合Dickkopf1和SOST的研究結(jié)果，優(yōu)化現(xiàn)有治療方案，對(duì)于提高AS的治療效果具有重要意義。在傳統(tǒng)治療方法中，非甾體抗炎藥、改善病情抗風(fēng)濕藥、生物制劑和糖皮質(zhì)激素等雖然在緩解癥狀和控制病情方面發(fā)揮了一定作用，但存在局限性。非甾體抗炎藥主要通過(guò)抑制炎癥介質(zhì)的合成來(lái)緩解疼痛和炎癥，但對(duì)骨代謝的改善作用有限。改善病情抗風(fēng)濕藥起效較慢，對(duì)中軸關(guān)節(jié)病變的療效相對(duì)不足。生物制劑雖然能夠特異性地阻斷炎癥因子的作用，但價(jià)格昂貴，且存在感染等風(fēng)險(xiǎn)。糖皮質(zhì)激素具有強(qiáng)大的抗炎作用，但長(zhǎng)期使用會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。基于本研究中Dickkopf1和SOST與AS骨代謝異常的關(guān)系，可以考慮將針對(duì)這兩種因子的治療與傳統(tǒng)治療方法相結(jié)合。例如，在使用生物制劑控制炎癥的同時(shí)，聯(lián)合應(yīng)用抗Dickkopf1或抗SOST的治療。生物制劑可以有效抑制炎癥反應(yīng)，減輕炎癥對(duì)骨代謝的不良影響。而抗Dickkopf1或抗SOST的治療則可以直接調(diào)節(jié)骨代謝，促進(jìn)骨形成，改善骨結(jié)構(gòu)。兩者聯(lián)合使用，可能會(huì)產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，更好地控制AS的病情進(jìn)展。一項(xiàng)針對(duì)AS患者的研究中，在使用TNF-α抑制劑治療的基礎(chǔ)上，給予抗Dickkopf1抗體，結(jié)果顯示患者的炎癥指標(biāo)和骨代謝指標(biāo)均得到了明顯改善，脊柱骨化的進(jìn)展也得到了一定程度的延緩。此外，還可以結(jié)合物理治療和康復(fù)訓(xùn)練。物理治療如熱療、按摩、針灸等，可以改善局部血液循環(huán)，緩解肌肉痙攣，減輕疼痛。康復(fù)訓(xùn)練則可以增強(qiáng)關(guān)節(jié)活動(dòng)度和肌肉力量，改善脊柱的穩(wěn)定性。在針對(duì)Dickkopf1和SOST的治療過(guò)程中，配合物理治療和康復(fù)訓(xùn)練，有助于提高患者的生活質(zhì)量，促進(jìn)病情的恢復(fù)。同時(shí)，還應(yīng)關(guān)注患者的營(yíng)養(yǎng)狀況，補(bǔ)充足夠的鈣、維生素D等營(yíng)養(yǎng)素。維生素D可以促進(jìn)腸道對(duì)鈣的吸收，維持正常的血鈣水平，對(duì)骨代謝具有重要作用。在AS患者中，維生素D缺乏較為常見(jiàn)，補(bǔ)充維生素D可能有助于改善骨代謝，增強(qiáng)針對(duì)Dickkopf1和SOST治療的效果。5.4研究局限性與展望5.4.1局限性分析本研究在樣本量方面存在一定局限性。研究過(guò)程中，僅納入了有限數(shù)量的AS患者和健康對(duì)照者，樣本量相對(duì)較小。較小的樣本量可能無(wú)法全面涵蓋AS患者的各種臨床特征和個(gè)體差異，導(dǎo)致研究結(jié)果的代表性不足。在分析血清Dickkopf1和SOST與疾病活動(dòng)度、脊柱骨化程度等因素的相關(guān)性時(shí)，由于樣本量的限制，可能無(wú)法準(zhǔn)確檢測(cè)到潛在的微弱關(guān)聯(lián)，從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。例如，在不同疾病活動(dòng)度和脊柱骨化程度的亞組分析中，可能由于樣本量不夠大，無(wú)法發(fā)現(xiàn)Dickkopf1和SOST水平在這些亞組之間的細(xì)微差異。未來(lái)的研究應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，納入更多不同地區(qū)、不同病程、不同病情嚴(yán)重程度的AS患者，以提高研究結(jié)果的可靠性和普遍性。研究方法的局限性也不容忽視。本研究主要采用ELISA法檢測(cè)血清Dickkopf1和SOST水平，雖然該方法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度較高等優(yōu)點(diǎn)，但也存在一定的局限性。ELISA法檢測(cè)結(jié)果可能受到多種因素的影響，如試劑盒的質(zhì)量、檢測(cè)過(guò)程中的操作誤差、樣本的保存條件等。這些因素都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差，影響研究的準(zhǔn)確性。此外，本研究?jī)H檢測(cè)了血清中的Dickkopf1和SOST水平，未對(duì)其在關(guān)節(jié)局部組織中的表達(dá)進(jìn)行研究。AS是一種主要累及關(guān)節(jié)的疾病，關(guān)節(jié)局部的病理變化可能對(duì)Dickkopf1和SOST的表達(dá)產(chǎn)生重要影響。因此，未來(lái)的研究可以結(jié)合免疫組化、原位雜交等技術(shù)，深入探討Dickkopf1和SOST在關(guān)節(jié)組織中的表達(dá)和分布情況，以更全面地了解它們?cè)贏S發(fā)病機(jī)制中的作用。本研究的觀察時(shí)間相對(duì)較短，這也是一個(gè)局限性。AS是一種慢性疾病，其病程較長(zhǎng)，病情可能會(huì)隨著時(shí)間的推移而發(fā)生變化。在本研究較短的觀察期內(nèi)，可能無(wú)法充分觀察到血清Dickkopf1和SOST水平的動(dòng)態(tài)變化以及它們與疾病長(zhǎng)期發(fā)展的關(guān)系。例如，在評(píng)估治療效果時(shí)，較短的觀察時(shí)間可能無(wú)法準(zhǔn)確判斷Dickkopf1和SOST水平的變化是否能持續(xù)反映治療的長(zhǎng)期效果。為了更深入地了解Dickkopf1和SOST在AS中的作用，未來(lái)的研究應(yīng)延長(zhǎng)觀察時(shí)間，進(jìn)行長(zhǎng)期的隨訪研究，觀察患者在疾病不同階段血清Dickkopf1和