2026年生物醫(yī)藥研究員職稱晉升實驗技術考核題集一、選擇題（每題2分，共20題）1.在進行細胞培養(yǎng)時，若發(fā)現細胞貼壁不良，可能的原因是（）。A.培養(yǎng)基pH值不適宜B.細胞密度過高C.培養(yǎng)基中缺乏必需的生長因子D.細胞接種操作不當2.高效液相色譜（HPLC）中，用于分離非極性化合物的色譜柱通常是（）。A.反相硅膠柱B.正相硅膠柱C.離子交換柱D.大孔樹脂柱3.在蛋白質印跡（WesternBlot）實驗中，封閉非特異性結合位點常用的試劑是（）。A.甲醛溶液B.牛血清白蛋白（BSA）C.封閉緩沖液（含甘氨酸）D.山羊抗兔IgG抗體4.RNA干擾（RNAi）技術中，用于沉默特定基因的分子是（）。A.siRNAB.miRNAC.lncRNAD.circRNA5.在動物實驗中，用于評估藥物對神經系統(tǒng)影響的模型是（）。A.腫瘤生長模型B.腦卒中模型C.心臟缺血模型D.腎功能衰竭模型6.流式細胞術（FlowCytometry）中，用于測量細胞凋亡的常用標記物是（）。A.CD3B.AnnexinV-FITCC.CD45D.Ki-677.在基因編輯技術中，CRISPR-Cas9系統(tǒng)的核心元件是（）。A.gRNAB.Cas9蛋白C.dCas9蛋白D.PAM序列8.甲基化特異性PCR（MSP）實驗中，用于檢測DNA甲基化的引物設計原則是（）。A.引物需與甲基化DNA序列互補B.引物需與非甲基化DNA序列互補C.引物需與全甲基化DNA序列互補D.引物需與半甲基化DNA序列互補9.在藥物代謝研究中，用于檢測藥物代謝產物的技術是（）。A.GC-MSB.LC-MS/MSC.HPLCD.CE-MS10.在體外診斷（IVD）試劑開發(fā)中，用于評估檢測靈敏度的指標是（）。A.ROC曲線B.特異度C.檢出限（LOD）D.精密度二、填空題（每空1分，共10空）1.細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基中通常需要添加______和______以維持細胞正常生長。2.WesternBlot實驗中，蛋白質轉移至PVDF膜的常用方法有______和______。3.RNA干擾技術中，siRNA的長度通常為______nt，且雙鏈結構具有______的莖環(huán)結構。4.在動物實驗中，SPF級動物房應保持______和______，以避免微生物污染。5.流式細胞術的熒光標記物可分為______和______兩大類。6.CRISPR-Cas9系統(tǒng)中，gRNA的靶向序列需與基因組DNA的______區(qū)域互補。7.甲基化特異性PCR實驗中，非甲基化DNA模板因引物無法結合，擴增產物在凝膠電泳中表現為______。8.藥物代謝研究中，LC-MS/MS的離子源類型有______和______。9.體外診斷試劑開發(fā)中，評估檢測準確性的指標包括______和______。10.細胞凋亡的形態(tài)學特征包括______和______。三、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述細胞培養(yǎng)過程中常見的污染類型及其防治措施。2.解釋高效液相色譜（HPLC）中反相和正相色譜的分離原理及適用范圍。3.描述RNA干擾（RNAi）技術的原理及其在基因功能研究中的應用。4.闡述動物實驗中SPF級動物房的管理要點及其對實驗結果的影響。四、實驗設計題（每題10分，共2題）1.設計一個實驗方案，用于評估某藥物對細胞凋亡的影響。實驗需包括實驗分組、主要試劑、檢測指標及數據分析方法。2.設計一個實驗方案，用于檢測某基因的甲基化水平。實驗需包括樣本處理、PCR反應條件、凝膠電泳及結果判讀方法。五、論述題（每題15分，共2題）1.論述CRISPR-Cas9技術在生物醫(yī)藥研究中的應用前景及其面臨的挑戰(zhàn)。2.論述藥物代謝研究中LC-MS/MS技術的優(yōu)勢及其在臨床藥物監(jiān)測中的應用價值。答案與解析一、選擇題答案與解析1.C-解析：細胞培養(yǎng)時貼壁不良通常因培養(yǎng)基中缺乏必需的生長因子，如血清或特定生長因子。pH值不適宜或接種操作不當也可能導致貼壁不良，但生長因子缺乏是最常見的原因。2.A-解析：反相硅膠柱通過疏水相互作用分離非極性化合物，適用于分離脂溶性分子；正相硅膠柱適用于極性化合物；離子交換柱基于電荷相互作用；大孔樹脂柱用于吸附性分離。3.B-解析：WesternBlot實驗中，封閉非特異性結合位點常用BSA或脫脂奶粉，以覆蓋膜表面未被抗體結合的位點。甲醛溶液用于固定；封閉緩沖液輔助封閉；山羊抗兔IgG是二抗。4.A-解析：siRNA是雙鏈RNA分子（21-23nt），通過序列互補沉默特定基因；miRNA是單鏈RNA，通過不完全互補調控基因表達；lncRNA和circRNA是其他非編碼RNA類型。5.B-解析：腦卒中模型常用于評估藥物對神經系統(tǒng)的影響，如腦缺血或腦出血模型；腫瘤、心臟缺血和腎功能衰竭模型分別用于其他疾病研究。6.B-解析：AnnexinV-FITC是凋亡早期標志物，與磷脂酰絲氨酸結合；CD3是T細胞標志物；CD45是造血細胞標志物；Ki-67是增殖細胞標志物。7.A-解析：gRNA（guideRNA）是靶向序列，與Cas9蛋白結合識別基因組位點；Cas9是核酸酶；dCas9是脫活版本；PAM序列是Cas9識別的序列依賴性元件。8.A-解析：MSP引物設計需與甲基化DNA序列互補，以特異性擴增甲基化位點。非甲基化DNA因堿基不匹配無法擴增。9.B-解析：LC-MS/MS結合液相色譜的高效分離和質譜的高靈敏度，適用于復雜混合物中藥物代謝產物的檢測；GC-MS適用于揮發(fā)性化合物；HPLC單獨檢測能力有限；CE-MS適用于高靈敏度檢測。10.C-解析：檢出限（LOD）是檢測方法能可靠檢測的最低濃度，是評估靈敏度的關鍵指標；ROC曲線和特異度用于評估診斷準確性；精密度反映重復實驗結果的一致性。二、填空題答案與解析1.血清，生長因子-解析：細胞培養(yǎng)需添加血清提供必需的激素和生長因子，以及非必需氨基酸等。2.電流法，半干法-解析：WesternBlot中蛋白質轉移至PVDF膜常用電流法（濕轉）或半干法，后者更快但需優(yōu)化條件。3.21-23，發(fā)夾-解析：siRNA長度通常21-23nt，雙鏈結構形成發(fā)夾結構，增強RISC活性。4.無菌，恒溫恒濕-解析：SPF級動物房需保持無菌環(huán)境（嚴格消毒和過濾），并維持恒溫恒濕以模擬自然條件。5.苂光蛋白，熒光染料-解析：流式細胞術標記物包括熒光蛋白（如GFP）和熒光染料（如PI）。6.染料-解析：gRNA靶向序列需與基因組DNA的染色質區(qū)域互補，以引導Cas9進行切割。7.條帶消失-解析：非甲基化DNA因引物無法結合，在凝膠電泳中無擴增條帶。8.電噴霧，大氣壓化學電離-解析：LC-MS/MS離子源類型包括ESI和APCI，前者適用于極性分子，后者適用于非極性分子。9.靈敏度，特異性-解析：體外診斷試劑需高靈敏度和特異性，以準確檢測目標分子。10.細胞膜破裂，細胞核固縮-解析：凋亡細胞形態(tài)學特征包括膜完整但內容物泄露，以及核固縮和DNA片段化。三、簡答題答案與解析1.細胞培養(yǎng)常見污染類型及其防治措施-污染類型：-細菌污染：表現為培養(yǎng)基渾濁、有氣泡，需使用抗生素處理。-真菌污染：表現為培養(yǎng)基表面有絲狀物，需嚴格滅菌和過濾。-支原體污染：難以檢測，需定期PCR檢測，使用支原體清除劑處理。-防治措施：-嚴格無菌操作，超凈工作臺消毒；-培養(yǎng)基和耗材高壓滅菌；-定期監(jiān)測污染情況，及時處理。2.HPLC反相和正相色譜的分離原理及適用范圍-反相色譜：基于疏水相互作用，固定相為非極性（如C18），流動相為極性（如水-甲醇混合液）。適用于分離非極性化合物，如脂溶性藥物。-正相色譜：基于極性相互作用，固定相為極性（如硅膠），流動相為非極性。適用于分離極性化合物，如糖類和氨基酸。3.RNA干擾技術原理及其應用-原理：siRNA通過序列互補結合靶mRNA，導致其降解，從而沉默特定基因。-應用：基因功能研究、疾病治療（如抗病毒藥物開發(fā)）。4.SPF級動物房管理要點及其影響-管理要點：-嚴格消毒和過濾系統(tǒng)；-動物飼料和飲水滅菌；-操作人員需穿戴防護服和手套。-影響：確保實驗結果可靠，避免微生物干擾。四、實驗設計題答案與解析1.評估藥物對細胞凋亡影響的實驗方案-實驗分組：-對照組（空白培養(yǎng)基）；-實驗組（藥物處理）；-陽性對照組（凋亡誘導劑）。-主要試劑：AnnexinV-FITC/PI，流式細胞儀。-檢測指標：凋亡率（AnnexinV陽性細胞比例）。-數據分析：t檢驗比較各組凋亡率差異。2.檢測基因甲基化水平的實驗方案-樣本處理：DNA提取，亞硫酸氫鹽修飾。-PCR反應條件：MSP引物，熱循環(huán)（變性-退火-延伸）。-凝膠電泳：觀察擴增產物條帶（甲基化DNA擴增，