2025年病理技師題庫及答案1.常規(guī)石蠟切片制作中，乙醇脫水時為何需從低濃度到高濃度遞增？答：乙醇脫水需從低濃度（如70%→80%→95%→100%）遞增，主要因組織內水分與乙醇的親和力隨濃度變化。低濃度乙醇可緩慢滲透組織，避免高濃度乙醇快速吸收水分導致組織劇烈收縮、細胞變形或破裂。逐步遞增濃度能使水分被均勻置換，保持組織原有結構和細胞形態(tài)的完整性，為后續(xù)透明、包埋步驟提供良好基礎。若直接使用高濃度乙醇，易造成組織硬化、切片困難，影響病理診斷準確性。2.簡述HE染色中伊紅染液pH值對染色效果的影響及調整方法。答：伊紅（Eosin）為酸性染料，主要與細胞質、膠原纖維等堿性物質結合。染液pH值過低（偏酸）時，伊紅解離減少，與組織結合力下降，導致細胞質染色過淺；pH值過高（偏堿）時，伊紅解離增加，可能與細胞核（含酸性物質）非特異性結合，造成核質界限模糊。常規(guī)伊紅染液pH應控制在4.6-5.0，可通過添加冰醋酸（0.5%-1%）或稀鹽酸微調，使細胞質呈鮮明粉紅色，細胞核與細胞質對比清晰。3.免疫組化染色中，非特異性背景染色過深的常見原因及解決措施有哪些？答：常見原因包括：①一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長；②封閉不充分（未使用血清或BSA封閉）；③二抗與組織內源性生物素/Fc受體結合；④切片脫蠟不徹底，導致試劑殘留；⑤孵育溫度過高（如37℃以上）加速非特異性反應。解決措施：①優(yōu)化一抗?jié)舛龋ㄍㄟ^預實驗滴定），縮短孵育時間（4℃過夜或37℃1小時）；②使用與二抗同源的正常血清（5%-10%）或1%BSA封閉15-30分鐘；③對富含內源性生物素的組織（如肝、腎），使用生物素阻斷劑預處理；④延長脫蠟時間（二甲苯Ⅰ10分鐘、Ⅱ10分鐘），確保石蠟完全溶解；⑤控制孵育溫度（推薦37℃或4℃），避免高溫加速非特異性結合。4.簡述冰凍切片的質量控制要點及常見問題的處理方法。答：質量控制要點：①組織取材厚度≤3mm，避免過厚導致冷凍不全；②冷凍溫度控制（-20℃至-25℃），溫度過高（＞-18℃）易導致切片松散，過低（＜-30℃）則組織脆硬、易碎裂；③切片厚度4-6μm，過薄易皺縮，過厚細胞重疊；④固定液選擇（95%乙醇或Carnoy液），避免使用含醛類固定液影響酶活性（如用于酶組織化學染色時）。常見問題處理：①切片皺縮：調整切片刀角度（15°-20°），降低冷凍溫度或縮短冷凍時間；②組織斷裂：檢查組織是否有鈣化或過硬區(qū)域（如骨組織需脫鈣），延長冷凍前平衡時間（30秒-1分鐘）；③染色模糊：固定時間不足（延長至5-10分鐘），或水洗不充分（PBS漂洗3次×5分鐘）。5.分子病理實驗室中，提取組織DNA時，福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）標本與新鮮組織標本的主要差異及處理要點。答：主要差異：FFPE標本因甲醛交聯(lián)導致DNA斷裂（片段長度＜200bp）、脫嘌呤修飾及胞嘧啶甲基化，提取效率低且質量差；新鮮組織DNA完整（片段長度＞10kb），無化學修飾，提取純度高。處理要點：FFPE標本需：①增加脫石蠟步驟（二甲苯脫蠟2次×10分鐘，無水乙醇洗2次×5分鐘）；②延長蛋白酶K消化時間（56℃過夜），破壞甲醛交聯(lián)；③采用專用FFPEDNA提取試劑盒（含脫交聯(lián)緩沖液）；④定量時使用qPCR法（避免紫外分光光度法因碎片干擾導致的高估）。新鮮組織需：①取材后30分鐘內冷凍（-80℃）或保存于DNA保存液；②勻漿時避免機械剪切（使用溫和勻漿器）；③提取后立即檢測或-20℃短期保存（避免反復凍融）。6.簡述病理實驗室生物安全三級（BSL-3）操作的核心要求。答：核心要求包括：①實驗室分區(qū)：嚴格劃分清潔區(qū)、半污染區(qū)、污染區(qū)，各區(qū)之間設置緩沖間（帶互鎖門）；②氣流控制：定向負壓（污染區(qū)＜-50Pa，半污染區(qū)＜-30Pa），空氣經高效過濾器（HEPA）過濾后排出，不得循環(huán)使用；③個人防護：穿戴正壓供氣式防護面罩（PAPR）、雙層手套、防護服（一次性防滲透），操作后經淋浴方可離開污染區(qū)；④標本處理：所有操作在生物安全柜（Ⅱ級B2型）內進行，離心需使用密封轉頭；⑤廢棄物管理：感染性廢物經121℃高壓蒸汽滅菌（30分鐘）或化學消毒（2%戊二醛浸泡2小時）后按醫(yī)療廢物處理；⑥人員培訓：定期進行生物安全培訓（每年至少1次），考核合格后方可上崗，接種相關疫苗（如結核菌素）。7.簡述特殊染色中Masson三色法的原理及結果判讀標準。答：原理：基于組織成分對不同染料的親和力差異，通過分步染色顯示膠原纖維、肌纖維及細胞核。步驟為：①Weigert鐵蘇木精染核（藍黑色）；②Biebrich猩紅-酸性品紅染胞質及肌纖維（紅色）；③磷鉬酸/磷鎢酸分化（使肌纖維保留紅色，膠原纖維脫色）；④苯胺藍或亮綠染膠原纖維（藍色或綠色）。結果判讀：細胞核藍黑色，骨骼肌、心肌纖維及紅細胞紅色，膠原纖維藍色（或綠色），黏液呈淡藍色，鈣鹽不著色。臨床用于鑒別腫瘤來源（如纖維肉瘤膠原纖維豐富）、評估組織纖維化程度（如肝/肺纖維化分期）。8.簡述病理診斷報告的書寫規(guī)范及“未明確診斷（ND）”的使用場景。答：書寫規(guī)范：①基本信息完整（患者姓名、ID、標本類型、送檢科室）；②標本描述客觀（大小、數(shù)目、顏色、質地、切面特征）；③鏡下描述重點突出（細胞形態(tài)、排列方式、浸潤深度、特殊結構）；④診斷術語規(guī)范（使用WHO分類標準，避免模糊表述）；⑤簽名雙人審核（初級技師+主治醫(yī)師以上）?！拔疵鞔_診斷（ND）”使用場景：①標本不足（如穿刺組織破碎、僅見壞死）；②病變不典型（如交界性腫瘤需結合免疫組化或分子檢測）；③需補充檢查（如需加做特殊染色或基因檢測）；④疑難病例（需會診或隨訪）。此時應注明“建議：①補取標本；②加做××染色；③外院會診”，避免給出確定性診斷。9.簡述細胞病理學中液基薄層制片（TCT）與傳統(tǒng)涂片的主要區(qū)別及優(yōu)勢。答：主要區(qū)別：①標本處理：傳統(tǒng)涂片直接涂抹，細胞重疊、雜質多；TCT通過液基保存液（如ThinPrep）勻漿、過濾，去除血液、黏液等干擾成分；②制片方式：傳統(tǒng)涂片人工操作，厚度不均；TCT通過離心+負壓吸引制片，細胞均勻分布于載玻片（直徑20mm圓形區(qū)域）；③診斷效率：傳統(tǒng)涂片漏診率約20%-30%，TCT漏診率＜5%。優(yōu)勢：①背景清晰（無紅細胞、炎細胞干擾），提高異常細胞檢出率；②保存液可用于HPV檢測、免疫細胞化學等后續(xù)檢測；③制片標準化（減少人為誤差），適合大規(guī)模篩查（如宮頸癌篩查）。10.簡述病理實驗室質量控制（QC）的關鍵環(huán)節(jié)及失控處理流程。答：關鍵環(huán)節(jié)：①標本接收：核對信息（姓名、ID、標本類型），記錄接收時間，拒收不合格標本（如固定不充分、標識錯誤）；②試劑管理：定期檢測試劑效期（開啟后標注日期），保存條件（4℃試劑避免反復凍融，-20℃試劑分裝使用）；③設備校準：切片機每月校準厚度（誤差≤0.5μm），烤箱溫度每日記錄（±2℃內），生物安全柜每6個月檢測風速（0.38-0.5m/s）；④染色質量：每日設置陽性對照（如HE染色用已知正常組織），記錄染色評分（胞核藍染率＞90%，胞質紅染率＞80%）；⑤報告審核：雙人核對（診斷醫(yī)師+技術主管），疑難病例提交科室討論。失控處理流程：①立即停止相關操作（如染色失控時暫停批量制片）；②排查原因（試劑失效、設備故障、操作失誤）；③記錄失控事件（時間、環(huán)節(jié)、責任人、處理措施）；④糾正后重新檢測（使用平行對照驗證）；⑤分析總結（制定預防措施，如加強試劑驗收、增加設備巡檢頻率）。11.簡述電鏡標本固定的常用試劑及戊二醛固定的注意事項。答：常用固定試劑：①醛類固定劑（2.5%戊二醛、4%多聚甲醛）：保存細胞超微結構（膜系統(tǒng)、細胞器）；②鋨酸（1%-2%）：增強電子密度（染色脂類、膜結構），常作為后固定劑；③混合固定劑（如Karnovsky液：2%多聚甲醛+2.5%戊二醛）：兼顧超微結構保存與抗原性保留（用于免疫電鏡）。戊二醛固定注意事項：①pH值7.2-7.4（使用0.1M磷酸緩沖液配制），避免酸性環(huán)境導致蛋白質變性；②滲透壓300-400mOsm（過低導致細胞腫脹，過高導致皺縮）；③固定時間2-4小時（4℃），過長（＞6小時）可能導致交聯(lián)過度，影響鋨酸滲透；④取材厚度≤1mm3（確保固定液快速滲透，避免中心區(qū)域自溶）；⑤避免與含胺類溶液（如Tris緩沖液）混合（易發(fā)生Schiff反應，產生沉淀）。12.簡述術中快速冰凍病理診斷的適用范圍及禁忌證。答：適用范圍：①確定病變性質（良惡性鑒別）；②判斷腫瘤浸潤范圍（如切緣是否陽性）；③識別淋巴結轉移（指導手術方式）；④明確組織來源（如疑難腫瘤分型）；⑤評估移植器官質量（如腎移植時檢測缺血損傷）。禁忌證：①標本過?。ㄈ绱┐探M織＜2mm）或無法制片（如脂肪組織、骨組織）；②已知為淋巴瘤、神經內分泌腫瘤（需結合免疫組化或分子檢測）；③交界性腫瘤（如甲狀腺濾泡性腫瘤）；④傳染性標本（如HIV、結核）未提前告知（需特殊防護）；⑤患者為妊娠期（冰凍制片可能延遲手術，增加風險）。13.簡述PCR技術中引物設計的基本原則及避免非特異性擴增的方法。答：引物設計原則：①長度18-25bp（過短特異性差，過長擴增效率低）；②GC含量40%-60%（避免連續(xù)G/C＞4個，防止形成發(fā)夾結構）；③退火溫度（Tm）55-65℃（上下游引物Tm差≤2℃）；④避免3’端互補（防止引物二聚體）；⑤特異性：通過BLAST比對，確保與基因組無同源序列。避免非特異性擴增方法：①優(yōu)化退火溫度（使用梯度PCR確定最佳Tm）；②降低引物濃度（0.1-0.5μM）；③減少循環(huán)數(shù)（≤35次）；④使用熱啟動Taq酶（避免低溫下非特異性引物結合）；⑤添加增強劑（如5%DMSO或10%甘油），降低模板二級結構影響；⑥嚴格分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、標本處理區(qū)、擴增區(qū)），避免交叉污染。14.簡述病理檔案管理的規(guī)范要求及電子檔案的保存要點。答：規(guī)范要求：①紙質檔案：病理報告、申請單、切片、蠟塊需按年、月、科室分類歸檔，保存期限≥15年（蠟塊≥10年，切片≥15年，特殊病例永久保存）；②標識清晰：切片/蠟塊標簽包含患者姓名、ID、標本編號、取材日期；③環(huán)境控制：檔案柜防潮（濕度40%-60%）、防蛀（放置樟腦丸）、避光（避免紫外線導致切片褪色）；④借閱登記：外借需經科主任批準，記錄借用人、時間、歸還日期，逾期未還需追蹤。電子檔案保存要點：①格式標準化（使用DICOM或TIFF格式，分辨率≥40倍物鏡掃描）；②雙備份存儲（本地硬盤+云端服務器），定期檢測備份有效性（每6個月1次）；③訪問權限：設置分級密碼（技師可查看圖像，醫(yī)師可修改報告）；④數(shù)據安全：加密傳輸（SSL協(xié)議），防止泄露（患者隱私信息脫敏處理）。15.簡述脫落細胞檢查中“核異質細胞”的定義及臨床意義。答：定義：核異質細胞指形態(tài)介于正常細胞與癌細胞之間的異型細胞，表現(xiàn)為核增大（核直徑為正常細胞1.5-3倍）、核質比增高（接近1:1）、核染色質增粗（分布不均）、核膜增厚（不規(guī)則），但無明確惡性特征（如核分裂象、病理性核仁）。臨床意義：①輕度核異質：多由炎癥或理化刺激引起（如宮頸炎、吸煙），建議3-6個月復查；②重度核異質：可能為癌前病變（如宮頸上皮內瘤變CINⅡ-Ⅲ）或早期癌（如原位癌），需結合活檢或HPV檢測明確診斷；③動態(tài)觀察：連續(xù)涂片顯示核異質細胞數(shù)量增加或異型性加重，提示惡性傾向，需及時干預。16.簡述組織芯片（TMA）制作的關鍵步驟及應用價值。答：關鍵步驟：①供體蠟塊選擇：標記目標區(qū)域（如腫瘤、正常對照），記錄坐標；②取材：使用組織芯針（直徑0.6-2mm）從供體蠟塊提取組織芯（深度2-3mm）；③受體蠟塊制備：在空白蠟塊上打孔（與組織芯直徑匹配），將組織芯插入孔內，60℃溫箱融化石蠟固定；④切片：連續(xù)切片（4-5μm），確保每個組織芯完整轉移至載玻片。應用價值：①高通量檢測：單張切片可同時檢測數(shù)十至數(shù)百個樣本（如藥物靶點表達、預后標志物篩選）；②一致性控制：同一實驗條件下處理所有樣本，減少批間誤差；③資源節(jié)約：減少蠟塊消耗（傳統(tǒng)方法需為每個樣本單獨切片）；④隨訪研究：長期保存組織芯片，便于回顧性分析（如不同治療方案的療效對比）。17.簡述病理實驗室危急值報告的內容及流程。答：內容：①術中冰凍提示惡性腫瘤（如乳腺癌、胃癌）且切緣陽性；②細胞學檢查發(fā)現(xiàn)癌細胞（如胸腹水查到轉移性腺癌）；③組織學檢查提示急性感染（如壞死性筋膜炎、氣性壞疽）；④特殊病例（如惡性黑色素瘤、淋巴瘤）需立即干預；⑤傳染病相關（如結核、炭疽）需啟動疫情上報。流程：①檢測者發(fā)現(xiàn)危急值后10分鐘內通知經治醫(yī)師（電話+書面記錄）；②記錄內容：患者姓名、ID、危急值項目、通知時間、接電話醫(yī)師姓名；③醫(yī)師確認后，30分鐘內反饋處理措施（如擴大切除、抗感染治療）；④科室登記本備案（保存≥5年），每月匯總分析（評估危急值發(fā)生率及處理時效性）。18.簡述免疫熒光染色中熒光淬滅的原因及預防措施。答：原因：①光照（尤其是紫外線）導致熒光分子氧化；②染色后未及時封片（空氣中氧氣加速淬滅）；③熒光抗體濃度過高（分子間碰撞加劇淬滅）；④pH值異常（過酸或過堿破壞熒光基團）；⑤保存溫度不當（4℃以上加速降解）。預防措施：①暗室操作（使用紅色濾光片），染色后立即封片（用含抗淬滅劑的封片劑，如DABCO或ProLongGold）；②優(yōu)化抗體濃度（通過滴定實驗確定最低有效濃度）；③調整緩沖液pH（7.2-7.4），避免使用含氧化劑的試劑（如疊氮鈉）；④染色片4℃避光保存（短期）或-20℃冷凍（長期，避免反復凍融）；⑤顯微鏡觀察時縮短光照時間（使用汞燈需預熱，避免頻繁開關）。19.簡述流式細胞術在病理診斷中的應用及樣本制備要點。答：應用：①白血病/淋巴瘤分型（CD系列標記