ICS65.020.20CCSB35DB43DB43/T1936—2020飼料中黃曲霉毒素B1快速檢測超導(dǎo)量點免疫熒光法DetectionofaflatoxinB1infeedRapidquantitativemethodofsuperconductingdotsimmunofluorescencetechnique2020-12-29發(fā)布2021-03-29實施湖南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布 DB43/T1936—2020I前言 Ⅲ 12規(guī)范性引用文件 1 14試劑與材料 15儀器與設(shè)備 16樣品制備 27上機(jī)測定 28結(jié)果表述 29重復(fù)性 2附錄A（規(guī)范性）超導(dǎo)量點免疫熒光快速定量檢測卡性能評價要求 3DB43/T1936—2020本文件按照GB/T1.1—2020給出的規(guī)則起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：湖南省獸藥飼料監(jiān)察所、湖南九鼎科技（集團(tuán)）有限公司、湖南省飼料工業(yè)協(xié)會。本文件主要起草人：黃勇、李裕、李艷平、劉芬、張敏、雷加、周燦、曹霞。DB43/T1936—20201飼料中黃曲霉毒素B1快速檢測超導(dǎo)量點免疫熒光法本文件規(guī)定了飼料中黃曲霉毒素B1的超導(dǎo)量點免疫熒光測定方法的原理、試劑與材料、儀器與設(shè)備、樣品制備、上機(jī)測定與結(jié)果表述。本文件適用于我省植物性飼料原料、配合飼料、濃縮飼料中黃曲霉毒素B1的快速檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動物飼料試樣的制備3原理本方法基于超導(dǎo)量點標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)，采用熒光側(cè)向免疫層析方法學(xué)原理。試樣提取液中的黃曲霉毒素B1與檢測卡上標(biāo)記的抗體相結(jié)合并發(fā)出熒光，熒光強(qiáng)度與試樣中黃曲霉毒素B1含量相關(guān)。層析結(jié)束后，用免疫熒光分析儀測定檢測卡上的檢測線和控制線的熒光強(qiáng)度，儀器根據(jù)內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線自動算出試樣中黃曲霉毒素B1的含量。4試劑與材料4.1除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗室用水應(yīng)符合GB/T6682中三級水的要求。4.2稀釋緩沖液：由超導(dǎo)量點免疫熒光定量檢測卡配套提供，或根據(jù)產(chǎn)品使用說明書配制。4.3提取液：量取550mL甲醇加入450mL水中，混勻。5儀器與設(shè)備5.1天平：感量0.01g。5.2粉碎機(jī)：粉碎后全部通過20目分析篩。5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。5.4渦旋振蕩器。5.5檢測卡：儲存條件參照使用說明；技術(shù)指標(biāo)應(yīng)符合附錄A要求。5.6免疫熒光分析儀：可測定并顯示檢測卡的測定結(jié)果。2DB43/T1936—20205.7濾紙：采用中速定量濾紙。5.8計時器。6樣品制備6.1采樣按GB/T14699.1的規(guī)定執(zhí)行。6.2樣品處理6.2.1試樣制備按GB/T20195的規(guī)定執(zhí)行。用粉碎機(jī)（5.2）粉碎至全部通過20目分析篩。6.2.2稱取5g（精確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入25.0mL試樣提取液（4.3用渦旋振蕩器（5.4）振蕩10min；靜置后用濾紙（5.7）過濾，或取1.0mL～1.5mL混合液于離心管中，經(jīng)離心機(jī)（5.3）以4000r/min離心3～5min。取濾液或離心后的上清液100μL于另一潔凈離心管中，加入400μL稀釋緩沖液（4.2充分混勻待測。7上機(jī)測定7.1開啟免疫熒光分析儀（5.6）。7.2將檢測卡（5.5）取出，加樣孔朝上平放。7.3準(zhǔn)確移取75μL待測液（6.2.2加入檢測卡加樣孔中。7.4檢測卡加樣后，水平靜置15min反應(yīng)（5.8然后在3min內(nèi)（5.8）將檢測卡插入免疫熒光分析儀（5.6儀器將自動進(jìn)行檢測。7.5結(jié)果讀取7.5.1熒光分析儀（5.6）將在13秒內(nèi)完成數(shù)據(jù)讀取、分析，免疫熒光分析儀自動顯示試樣中黃曲霉毒素B1的含量并保存檢測結(jié)果。7.5.2異常結(jié)果處理若免疫熒光分析儀的顯示值>50μg/kg，需移取100μL濾液或上清液，加入300μL試樣提取液（4.3充分混勻后取100μL至一潔凈的離心管中，加入400μL稀釋緩沖液（4.2充分混勻，按照7.2～7.5進(jìn)行測定。7.6本方法檢出限為0.5μg/kg。8結(jié)果表述試樣中黃曲霉毒素B1的含量由免疫熒光分析儀自動計算并顯示，單位為μg/kg。9重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的20％。 DB43/T1936—20203超導(dǎo)量點免疫熒光快速定量檢測卡性能評價要求本附錄規(guī)定了飼料中黃曲霉毒素B1超導(dǎo)量點免疫熒光快速定量檢測卡的技術(shù)性能要求，用于對飼料中黃曲霉毒素B1超導(dǎo)量點快速定量檢測類產(chǎn)品的技術(shù)性能進(jìn)行驗證，以確保其適用于本方法。A.1準(zhǔn)確性評價每個濃度平行測定不低于6次。計算檢測卡檢測結(jié)果與實物標(biāo)準(zhǔn)樣品的相對偏差，4個濃度的相對偏差均應(yīng)控制在-20+20％之間。A.2精密度評價采用10μg/kg黃曲霉毒素B1的實物標(biāo)準(zhǔn)樣品，平行測定不低于6次，計算檢測卡批內(nèi)變異系數(shù)，變異系數(shù)應(yīng)≤20％。A.3批間穩(wěn)定性評價采用10μg/kg黃曲霉毒素B1的實物標(biāo)準(zhǔn)樣品，隨機(jī)選取至少6個批次產(chǎn)品，每